Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của lá cây dâu tằm ( morus alba l )

Phương pháp chiết xuất, phân lập và nhận dạng cấu trúc một số hợp chất có trong lá dâu tằm .... Ngày nay, khi y học đã có những tiến bộ vượt bậc, tây y cũng không thể thay thế hoàn toàn

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

1 TS VŨ ĐỨC LỢI

2 PGS.TS.NGUYỄN TIẾN VỮNG

Hà Nội - 2017

LỜI CẢM ƠN

Tôi xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi - Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, PGS.TS Nguyễn Tiến Vững - Viện Pháp y Quốc gia, đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi để tôi có thể nghiên cứu và hoàn thành khóa luận này

Tôi xin chân thành cảm ơn các giảng viên, các anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội

đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình thực hiện khóa luận, cũng như xin gửi lời cảm ơn đến tất cả quý thầy cô trong trường đã dạy dỗ, trang bị kiến thức cho tôi trong suốt 5 năm theo học tại trường

Tôi cũng xin cảm ơn gia đình, bạn bè đã luôn theo sát động viên, quan tâm

và tạo điều kiện giúp tôi có thể hoàn thành khóa luận này

Xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội ngày 07 tháng 6 năm 2017 Sinh viên

Đỗ Thị Nghĩa Tình

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

14 UV- VIS : Phổ tử ngoại- khả kiến

15 YMC : Sắc ký cột pha đảo

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình vẽ,

Hình 1.1 Cấu trúc một số chất nhóm flavanoid 4 Hình 1.2 Cấu trúc một số chất thuộc nhóm flavon 5

Hình 1.3

Các cấu trúc hóa học của các hợp chất cô lập

linoleiyl diglycosid (1) , morusflavonyl palmitate (2) và morusflavone (3)

6

Hình 1.4 Cấu trúc của 1-deoxynojirimycin (DNJ) 7

Hình 1.7 Cấu trúc của hai dẫn xuất chalcone 8 Hình 1.8 Cấu trúc của các hợp chất hóa học 8

Hình 3.1 Một số hình ảnh về cây Dâu tằm 20 Hình 3.2 Đặc điểm vi phẫu thân cây Dâu tằm 21 Hình 3.3 Đặc điểm vi phẫu cuống lá cây Dâu tằm 22 Hình 3.4 Đặc điểm vi phẫu gân lá cây Dâu tằm 22 Hình 3.5 Đặc điểm vi phẫu bột lá cây Dâu tằm 23

Hình 3.7 Sơ đồ phân lập các chất trong cắn ethuylaceta 32 Hình 3.8 Sơ đồ phân lập các chất trong cắn nước 33

Hình 3.9 Cấu trúc hóa học của hợp chất DB1 35

Hình 3.10 Cấu trúc hóa học của hợp chất LC1 37

MỤC LỤC TRANG

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN 2

1.1 Vị trí phân loại chi Morus 2

1.2 Đặc điểm thực vật, phân bố của chi Morus 2

1.2.1 Đặc điểm thực vật 2

1.2.2 Phân bố và sinh thái 3

1.3 Thành phần hóa học của chi Morus 3

1.3.1 Flavonoid 3

1.3.2 Alcaloid 6

1.3.3 Các thành phần khác 7

1.4 Tác dụng dược lý của chi Morus 10

1.4.1 Tác dụng chống oxy hóa 10

1.4.2 Tác dụng chống viêm 10

1.4.3 Tác dụng làm trắng da 12

1.4.4 Các tác dụng khác 13

1.5 Tác dụng và công dụng theo y học cổ truyền 14

1.5.1 Tang diệp (lá cây dâu) 14

1.5.2 Tang bạch bì (vỏ rễ cây dâu) 14

1.5.3 Tang thầm (quả dâu chín) 15

1.5.4 Tang chi (cành dâu non) 15

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16

2.1 Nguyên liệu và thiết bị 16

2.1.1 Nguyên liệu 16

2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị 16

2.2 Phương pháp nghiên cứu 17

2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật của lá cây Dâu tằm 17

2.2.2 Định tính các nhóm chất hữu cơ có trong lá cây Dâu tằm 17

2.2.3 Phương pháp giám định tên khoa học 18

2.2.4 Phương pháp chiết xuất, phân lập và nhận dạng cấu trúc một số hợp chất có trong lá dâu tằm 18

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 20

3.1 Kết quả nghiên cứu về đặc điểm thực vật 20

3.1.1 Mô tả đặc điểm hình thái thực vật 20

3.1.2 Mô tả kèm hình ảnh đặc điểm vi phẫu 20

3.1.3.Kết quả tiêu bản bột lá dâu tằm 23

3.1.4 Xác định tên khoa học 23

3.2 Kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học 23

3.3 Phân lập một số hợp chất trong lá Dâu tằm 29

3.3.1 Chiết các phân đoạn từ lá Dâu tằm 29

3.3.2 Phân tích các chất bằng sắc ký cột 31

3.3.3 Xác định cấu trúc của các hợp chất phân lập được 33

3.4 Bàn luận 39

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

1

MỞ ĐẦU

Từ xa xưa, con người đã biết sử dụng các bộ phận của cây cỏ để làm ra những bài thuốc phòng và chữa bệnh dưới dạng thuốc sắc, thuốc viên Ngày nay, khi y học đã có những tiến bộ vượt bậc, tây y cũng không thể thay thế hoàn toàn được các vị thuốc của tự nhiên, vì trong bản thân từng cây, từng vị thuốc đã tồn tại đồng thời các chất hỗ trợ nhau trong việc chữa bệnh cũng như làm giảm tối đa các tác dụng phụ nếu có Tuy đó là thế mạnh của y học cổ truyền nhưng cũng cần có những nghiên cứu cụ thể về thành phần hóa học, tiến hành những thử nghiệm sinh học trên tế bào và cơ thể sống để làm sáng tỏ, kiểm chứng các tác dụng, góp phần tạo sự tiến bộ trong y học

Cây dâu tằm (Morus alba L.) trong sách cổ của Trung Quốc được coi là

loài cây quý, bởi nó có rất nhiều công dụng quý đối với con người, vừa có thể làm thuốc trị bệnh, vừa có thể làm thực phẩm bồi bổ cơ thể Trong đó, lá dâu tằm không chỉ được dùng để chữa các bệnh như đái tháo đường, huyết áp cao, rối loạn lipid máu, viêm đường hô hấp, nhức đầu, mờ mắt mà còn được dùng với công dụng làm đẹp da, trắng da [3, 6] Ngày nay, cùng với sự phát triển của xã hội, nhu cầu làm đẹp của con người tăng lên, đồng thời con người ngày càng có

xu hướng tìm về với tự nhiên để tìm kiếm giải pháp làm đẹp an toàn, hiệu quả

Lá dâu được coi là một trong những nguồn nguyên liệu tự nhiên quý trong việc làm đẹp da, loại bỏ vết thâm nám, tàn nhang trên da Cho đến nay, các công trình nghiên cứu đã công bố về thành phần hóa học cũng như tác dụng sinh học của lá cây dâu ở Việt Nam còn rất ít Để góp phần cung cấp những cơ sở tiền đề cho việc ứng dụng nguyên liệu lá Dâu tằm trong chăm sóc sức khỏe, chúng tôi đã lựa chọn và tiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu thành phần hóa học của lá cây

dâu tằm ( Morus alba L.)” với những mục tiêu sau:

1 Nghiên cứu được đặc điểm về thực vật cây Dâu tằm

2 Định tính được các nhóm chất trong lá cây Dâu tằm

3 Chiết xuất, phân lập và xác định được cấu trúc một số chất từ lá cây Dâu

CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN

1.1 Vị trí phân loại chi Morus

Theo tài liệu [1], vị trí phân loại của chi Morus là:

bọc lấy chồi, rụng sớm và để lại sẹo dạng nhẫn trên thân (Ficus) hoặc là hai lá

kèm rụng sớm để lại hai vết sẹo trên thân Hoa nhỏ, đơn tính cùng gốc hay khác gốc hợp thành cụm hoa chùm, bông, tán, đầu hoặc các hoa cái phủ toàn

bộ mặt trong của một đế cụm hoa lõm hình quả gioi Hoa đực có bốn lá đài, không có cánh hoa, bốn nhị đứng đối diện với lá đài Bộ nhụy của hoa cái có

2 lá noãn, bầu trên hoặc dưới 1 ô, đựng 1 noãn Quả kép [2]

Chi Morus có đặc điểm cây gỗ nhỏ, lá hình tim hay 3 thùy, mép khía

răng Cây trồng lấy lá nuôi tằm, ăn quả Các bộ phận : quả, lá, vỏ rễ, tầm gửi (tang ký sinh), tổ bọ ngựa trên cây (tang phiêu diêu) đều dùng làm thuốc [2]

Cây dâu có thể cao tới 15m, nhưng thường do trồng để hái lá nên chỉ cao 2-3m Lá mọc so le, hình bầu dục, nguyên hoặc chia thành 3 thùy, có lá kèm đầu lá nhọn hoặc hơi tù, phía cuống hơi tròn hoặc hơi bằng, mép có răng cưa to Từ cuống lá tỏ ra 3 gân rõ rệt Quả bế bao bọc trong các lá đài, mọng

nước thành một quả phức (quả kép) màu đỏ, sau đen sẫm Quả có thể ăn được

và làm thuốc (tang thẩm) [3]

1.2.2 Phân bố và sinh thái

Cây dâu tằm có nguồn gốc Trung Quốc Đã được đi vào Việt Nam từ lâu, hiện nay được trồng ở khắp nơi để lấy lá nuôi tằm, một số bộ phận được khai thác dùng làm thuốc [3]

Việc phân loại các loài cây trong chi dâu tằm rất phức tạp và có rất nhiều bàn cãi Có trên 150 tên loài nhưng chỉ có 10-16 tên là được chấp nhận Dưới đây là tên một số loài thường gặp và khu vực phân bố:

• Morus alba L (Dâu trắng – White Mulberry; vùng Đông Á)

• Morus australis (Chinese Mulberry; vùng Nam Á)

• Morus celtidifolia (Mexico)

• Morus insignis (Nam Mỹ)

• Morus mesozygia (African Mulberry; vùng Nam và Trung Phi)

• Morus microphylla (Texas Mulberry; vùng Nam và Bắc Mỹ)

• Morus nigra (Dâu đen – Black Mulberry; vùng Tây Nam Á)

• Morus rubra (Dâu đỏ– Red Mulberry; vùng Đông Bắc Mỹ) [6]

Ở Việt Nam chỉ có loài dâu trắng tên khoa học là Morus alba L [15]

1.3 Thành phần hóa học của chi Morus

1.3.1 Flavonoid

Flavonoid là nhóm thường xuyên có mặt trong chi Morus.Trong lá dâu

có các flavonoid như quercetin, quercitrin (hình 1.1), moracetin, isoquercitrin, astragalin, quercetin3-O-(6’’-O-acetyl)-β-D-glucopyranosid,quercetin-3,7-di-O-β-D-glucopyranosid, kaempferol 3-O-β-D-glucopyranosid, kaempferol 3-O-(6’’-acetyl)-β-D-gluco-pyranosid, roseosid, và các dẫn chất prenylflavan [5]

Ba glycosides flavonol [quercetin 3-(6-malonylglucosid), rutin (quercetin-3-rutinosid) (hình 1.1) và isoquercitrin (quercetin-3-glucosid)]

được xác định là các hợp chất chống oxy hóa LDL lớn bằng LC-MS và NMR Những glycosides flavonol trong lá dâu tằm và trà lá dâu được xác định bằng HPLC Kết quả của chúng tôi cho thấy quercetin 3- (6-malonylglucosid) và rutin ,các glycosides flavonol chiếm ưu thế trong lá dâu tằm [25]

Một flavonoid prenylated, moralbanon, cùng với bảy hợp chất được biết đến (kuwanon S, mulberrosid C, cyclomorusin, eudraflavone B hydroperoxid, oxydihydromorusin, leachianon G và α-acetyl-amyrin) được phân lập từ vỏ rễ

của Morus alba L Leachianon G cho thấy hoạt tính kháng virus mạnh (IC 50 = 1,6 mg / ml), trong khi mulberrosid C cho thấy hoạt động yếu

(IC 50 = 75,4 mg / ml) với herpes simplex loại 1 virus (HSV-1) Cấu trúc của chúng đã được làm sáng tỏ bằng phương pháp quang phổ (Hình 1.1) [14]

1 2

3 4

1 Quercetin 2 Quercitrin 3.Rutin

4.Moralbanon

Hình 1.1: Cấu trúc của một số chất nhóm flavanoid

Nhiều flavonoid và các dẫn xuất phenolic cô lập từ vỏ rễ M.alba

(albanol B, C kuwanon, morusin, mulberrofuran G, sanggenon B, và sanggenon D) có tác dụng chống vi khuẩn, gây độc tế bào Một số stilbenes

cũng được phân lập từ cây này Oxyresveratrol từ cành cây của M alba cho

thấy tác động ức chế tyrosinase Mulberroside A, một dạng glycosyl hóa của oxyresveratrol là một hợp chất chính được tìm thấy trong các phần nước,

không cho thấy tác dụng ức chế tyrosinase trừ khi glucoside được thủy phân [21]

-Flavon:

Trong vỏ rễ cây dâu có hợp chất của flavon gồm mulberrin, mullberrochromen, xyclomulberrin, xyclomulberrochromen (hình 1.2)

Hình 1.2: Cấu trúc một số chất thuộc nhóm flavon

Một guibourtinidol glycosid, (2R, 3S) - (1→6)-O-β-d-glucopyranosid, và ba hợp chất được biết đến, đó là: quercetin-7-O- β-d-glucopyranoside, syringaresinol-4-O-β-d-glucopyranosid và rượu dehydrodiconiferyl 4,9'-di-O-β-d-glucopyranosid, được phân lập từ vỏ rễ của

guibourtinidol-3-α-d-apiofuranosyl-Morus alba L [23]

Nghiên cứu hiện tại được thiết kế để phân lập cấu trúc

phytoconstituents từ vỏ thân của M alba Phương pháp được sử dụng trong nghiên cứu là: Các dịch chiết methanol của vỏ thân của M alba đã thu được

bằng quá trình chiết xuất nóng liên tục Sự phân lập phytoconstituents được thực hiện bằng sắc ký cột silicagel Phương pháp sắc ký lớp mỏng phân tích được sử dụng để kiểm tra sự đồng nhất của các phân đoạn Cấu trúc của phytoconstituents cô lập được thành lập trên cơ sở phương pháp quang phổ và phản ứng hóa học Kết quả đã phân lập được 3 hợp chất

Hợp chất 1, có tên là linoleiyl diglycosid, đã thu được dưới dạng bột vô định

màu vàng nhạt từ dung môi chloroform-methanol (97:3)

Hợp chất 2 , được gọi là morusflavonyl palmitate, đã thu được dưới dạng một

khối màu nâu từ dung môi cloroform-methanol (19: 1) Nó đã phản ứng tích

cực với thử nghiệm Shinoda và ferric chloride và cho thấy độ hấp thụ tia cực tím ở mức 269 và 314 nm đặc biệt đối với flavones

Hợp chất 3 , được gọi là morusflavone, đã thu được dưới dạng một tinh thể

màu vàng nhạt từ dung môi clo-metanol (19: 1) Nó phản ứng tích cực với thử nghiệm Shinoda của flavonoids Phổ UV cho thấy sự hấp thụ tối đa ở các bước sóng 264 và 310 nm của dẫn xuất flavone [14]

Hình 1.3: Các cấu trúc hóa học của các hợp chất linoleiyl diglycosid (1),

morusflavonyl palmitate (2) và morusflavone (3)

1.3.2 Alcaloid

Trong số các hợp chất alcaloid có trong lá dâu tằm thì deoxynojirimycin (DNJ) có hàm lượng cao nhất và đây cũng là hợp chất quan trọng trong phòng ngừa và điều trị bệnh đái tháo đường

1-Hình 1.4: Cấu trúc của 1-deoxynojirimycin (DNJ)

Alcaloids sugar-mimic và alcaloids polyhydroxylated từ chiết xuất

nước của rễ và lá M alba cho thấy một hoạt động ức chế glucosidase từ yếu

đến trung bình [21]

1.3.3 Các thành phần khác

Mười ba acid béo đã được định lượng trong dịch chiết thu được bằng cách phân tích GC-FID Tỷ lệ phần trăm của họ dao động từ 0,33% acid palmitoleic (C16: 1) đến 37,57% đối với acid α-linolenic (C18: 3 n3) Các acid béo chủ yếu là acid palmitic (C16: 0) (26,38 và 25,99%), acid α-linolenic (C18: 3 n3) (34,97 và 37,57%) và acid linoleic (C18: 2 n6c) (14,76 và 16,05%).Tổng số phenolic và flavonoid được xác định bằng phương pháp trắc quang, trong khi phenolic được xác định bằng phân tích HPLC-DAD Các hoạt động chống oxy hóa và gây độc tế bào cũng được xác định Hợp chất phenolic chính là acid caffeic Rutin, các dẫn xuất của acid caffeic và quercetin cũng đã được trình bày với số lượng cao [18]

Trong lá dâu có chứa có chất cao su, chất caroten, tanin, rất ít tinh dầu, vitamin C, colin (cholin), adenin, trigonenlin (trigonellin) Ngoài ra còn có pentozan, đường , canxi malat và canxi cacbonat Trong lá dâu có ecdysteron

và inokosteron là những chất nội tiết cần cho sự đổi lốt của côn trùng [3]

Hình 1.5: Cấu trúc của Caroten

Hình 1.6: Cấu trúc của vitamin C

Quả dâu có chứa 84,71% nước; 9,19% đường; 1,80% acid; 0,36% protit, tanin, vitamin C, caroten Trong acid có acid malic, acid suxinic Trong đường có glucoza, fructoza [3]

Hai dẫn xuất chalcone mới có tên morachalcones B và C (1 và 2) được

phân lập từ lá của Morus alba L [28]

Hình 1.7: Cấu trúc của hai dẫn xuất chalcone

+ Moracin M(1), Steppogenin-4'-O-β-D-glucosiade (2), Mullberrosid A

(3) được phân lập từ vỏ rễ của Morus alba L và xác định bằng các chứng cứ

phổ Các hợp chất 1, 2 và 3 đã được nghiên cứu trong tác dụng hạ đường huyết trên chuột alloxan đái tháo đường Kết quả cho thấy các hợp chất 1, 2

và 3 tác dụng hạ đường huyết [19]

Hình 1.8: Cấu trúc của các hợp chất hóa học

Một thành phần có hoạt tính sinh học trong một chiết xuất ethanol từ

vỏ của cây dâu tằm được phân lập bằng cách sử dụng cột nhựa macroporous Các thành phần chính, được tinh chế bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao với máy

dò diode array (HPLC-DAD), được xác định là mulberroside A (MA) Kết quả nghiên cứu này cung cấp thông tin quan trọng liên quan đến các cơ chế ức chế của MA trên sự tổng hợp melanin, được sử dụng rộng rãi trong mỹ phẩm làm trắng [26]

Hình 1.9: Công thức cấu tạo của MA

Chi này chứa nhiều hợp chất phenolic bao gồm flavonoid isoprenylated, 2-arylbenzopyrans, stilbenes, coumarin, và hợp chất Diels-Alder adduct [30]

Các lá tươi có chứa chất dưỡng ẩm 71,13-76,68%, protein 4,72-9,96%, chất béo 0,64-1,51% và carbohydrate 8,01-13,42% Trong khi ở lá dâu khô độ

ẩm giảm và nó dao động từ 5,11-7,24%, 15,31-30,91% protein, 2,09-4,93% cho chất béo và 9,70-29,64% carbohydrat, acid ascorbic được dao động khoảng 160-280 mg / 100g lá dâu tươi Trong khi sấy khô lá số lượng của nó giảm và dao động khoảng 100-200 mg / 100 g Tương tự như vậy trong lá tươi β-caroten được tìm thấy trong khoảng 10,00-14,688 mg / 100 g, trong khi bột lá khô số lượng của nó cũng dao động trong khoảng 8,438-13,125 mg /

100 g Các hàm lượng chất khoáng cũng khác nhau trong lá tươi và khô Thành phần của chúng được tóm tắt trong bảng sau:

Bảng 1.1 Hàm lượng khoáng chất có trong lá dâu tươi và khô [26].

Lá dâu tằm có chứa một lượng đáng kể protein dễ tiêu hóa, carbohydrat, vi sinh và chất dinh dưỡng, polyphenol, acid amin tự do, các acid hữu cơ Sự đa dạng của các hoạt động sinh dược quan trọng của dung dịch nước và các chiết xuất dung môi hữu cơ phân cực từ lá dâu tằm - bao gồm đái tháo đường, kháng khuẩn, chống ung thư, tim mạch, hypolipidemic, chống oxy hóa, antiatherogenic, và chống viêm - đã được thảo luận nghiêm túc Mục tiêu chính là để chứng minh các kết quả của nghiên cứu mới đây được công bố về các hoạt động sinh học của các chất trong lá dâu tằm ở các bệnh nhân có bệnh lý và sức khỏe khác nhau [7]

1.4 Tác dụng dược lý của chi Morus

Hầu như tất cả các bộ phận của M alba L đã được sử dụng như y học

cổ truyền Trung Quốc, vỏ rễ được gọi là "Sang-Bai-Pi" ở Trung Quốc, từ lâu

đã được sử dụng để loại bỏ nhiệt từ phổi, làm giảm hen suyễn, và gây

dieresis Các loài khác của Morus đã được báo cáo là có tác dụng kháng

khuẩn, chống oxy hóa, hạ huyết áp, hạ đường máu, hạ lipid máu và ức chế enzym aromatase [30]

1.4.1 Tác dụng chống oxy hóa

Lá dâu tằm (Morus alba L.) chứa hàm lượng tương đối cao của các

hợp chất chống oxy hóa như quercetin Hợp chất chính đóng vai trò trung tâm trong các hoạt động chống oxy hóa trong lá dâu tằm là quercetin glycosides

và acid chlorogenic [15]

Chi Morus chứa nhiều các dẫn chất flavonoid có khả năng hủy các gốc

tự do như HO-, ROO- Các gốc này sinh ra trong tế bào bởi nhiều nguyên nhân và khi sinh ra cạnh ADN, các chất béo màng tế bào… sẽ gây ra những ảnh hưởng nguy hại như gây biến dị, hủy hoại tế bào, gây ung thư và tăng nhanh sự lão hóa Flavonoid cùng với acid ascorbic tham gia trong quá trình hoạt động của enzym oxy hóa – khử [5]

1.4.2 Tác dụng chống viêm

Tác dụng chống viêm của nhiều flavonoid thuộc các nhóm flavon, flavanon, dihydroflavonol, anthocyanin, flavan-3-ol, chalcon, isoflavon, biflavon, 4-aryl courmarin, 4-aryl chromanđều được chứng minh bằng thực

nghiệm do các flavonoid này ức chế con đường sinh tổng hợp prostaglandin [5]

Với chất flavonoid như là thành phần chủ yếu, lá dâu tằm có hoạt tính sinh học khác nhau, bao gồm chất chống oxy hóa, kháng khuẩn, da trắng, gây độc tế bào, chống đái tháo đường, ức chế glucosidase, chống hyperlipidemic, chống xơ vữa động mạch, chống béo phì, tim mạch, và các hoạt động nâng cao nhận thức Giàu anthocyanins và ancaloit, trái cây dâu tằm có tính chất dược lý, chẳng hạn như chất chống oxy hóa, chống tiểu đường, chống xơ vữa động mạch, chống béo phì, và các hoạt động hepatoprotective Các vỏ rễ dâu tằm, có chứa flavonoid, alcaloid và stilbenoids, có tính kháng khuẩn, da trắng, gây độc tế bào, chống viêm, và chống hyperlipidemic Tính chất dược lý khác

của M alba bao gồm chống tiểu cầu, giải lo âu, chống hen suyễn, thuốc trừ

giun sán, chống trầm cảm, bảo vệ tim mạch, và các hoạt động điều hòa miễn

dịch Thử nghiệm lâm sàng về hiệu quả của chiết xuất M abla trong việc

giảm đường huyết, cholesterol và tăng cường khả năng nhận thức đã được tiến hành [11]

Hoạt động kháng khuẩn của 18 flavonoids prenylated, được tinh chế từ năm nhà máy dược khác nhau, đã được đánh giá bằng cách xác định MIC bằng cách sử dụng các phương pháp pha loãng chống lại bốn khuẩn và hai vi

sinh vật nấm (Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Escherichia

coli, Salmonella typhimurium, lớp biểu bì Staphylococcus và S.aureus)

Papyriflavonol A, kuraridin, sophoraflavanon D và sophoraisoflavanon Một hoạt tính kháng nấm tốt với hoạt tính kháng khuẩn mạnh Kuwanon C, mullberrofuran G, albanol B, kenusanon C và sophoraflavanone G cho thấy

hoạt tính kháng khuẩn mạnh mẽ với 5-30 mcg/ml MIC Morusin, Sanggenon

B và D, kazinol B, kurarinon, kenusanon C và isosophoranon có hiệu quả các

vi khuẩn gram dương, và broussochalcon A là hiệu quả để C albicans

IC50 giá trị của papyriflavonol A, kuraridin, sophoraflavanon D,

sophoraisoflavanon A và broussochalcon A trong tế bào HepG2 là 20,9, 37,8,

39,1, 22,1 và 22,0 mg / ml, tương ứng Những kết quả này hỗ trợ việc sử dụng

các chất flavonoid prenylated trong y học truyền thống châu Á để điều trị

nhiễm vi sinh vật và cho thấy một tiềm năng lớn về chất flavonoid prenylated như tác nhân kháng khuẩn cũng như các chất chống viêm [22]

Các đặc tính chống viêm của polyphenol được lấy từ thân cây Morus

alba (dâu tằm), thường xuyên được nghiên cứu vì nó vốn được sử dụng

truyền thống trong y học châu Á và sự phong phú của nó trong các loại khác nhau của các polyphenol, một số trong đó được biết đến là phytoalexin Một coumarin glycosid mới, isoscopoletin 6-(6-O-β-apiofuranosyl-β-glucopyranosid) đã được phân lập chủ yếu bởi CPC (sắc ký phân vùng ly tâm) từ nhà máy này, cùng với bảy polyphenol được biết đến [9]

1.4.3 Tác dụng làm trắng da

Dịch chiết lá dâu có tác dụng ức chế enzyme tyrosinase Một trong những chất có tác dụng được biết đến là mullberrosid F Chất này cũng có tác dụng chống oxy hóa trên gốc tự do superoxide [5]

Chiết xuất từ rễ cây Morus australis chứa chủ yếu một chất ức chế

tyrosinase đã biết, oxyresveratrol, trong khi chiết xuất rễ và cành có thể chứa

một số chất ức chế tyrosinase tiềm năng chưa được biết Các chiết xuất từ rễ

của Morus australis được tiếp tục tìm hiểu trong nghiên cứu này Một hợp

chất mới, austraone A, cùng với 21 hợp chất được biết đến, được phân lập và cấu trúc của chúng đã được xác định bằng cách giải thích dữ liệu MS và

NMR Trong các thử nghiệm ức chế tyrosinase, một số trong số chúng, chẳng

hạn như oxyresveratrol, moracenin D, sanggenon T, và kuwanon O, trưng bày các hoạt động ức chế tyrosinase mạnh hơn so với acid kojic Những kết quả này gợi ý rằng chiết xuất từ rễ Morus australis như là một nguồn cung cấp chất ức chế tyrosinase tự nhiên có tiềm năng lớn để được sử dụng trong thực phẩm như chất chống nâu và trong mỹ phẩm như chất da làm trắng [31]

Tyrosinase là một enzyme quan trọng trong sự tổng hợp melanin Chất

ức chế của nó có thể được sử dụng để điều trị hiệu quả tăng sắc tố và áp dụng rộng rãi trong các sản phẩm mỹ phẩm và thực phẩm bổ sung Trong nghiên cứu này, một thử nghiệm mới dựa trên siêu lọc hiệu suất cao sắc ký lỏng kết hợp với máy dò diode array và khối phổ (HPLC-DAD-MS) đã được phát triển cho việc kiểm tra nhanh chóng và xác định các phối tử cho tyrosinase Mười

hai hợp chất có hoạt tính ức chế tyrosinase đã được tìm thấy trong dịch chiết

lá dâu tằm Bản chất của các hợp chất này được đặc trưng bởi

HPLC-DAD-MS n Đặc biệt, hai hợp chất ức chế tyrosinase mới đã được xác định là quercetin-3-O-(6-O-malonyl) -β- d-glucopyranosid và kaempferol-3-O-(6-O-malonyl) -β- d -glucopyranosid Các kết quả kiểm tra đã được xác nhận bằng xét nghiệm ức chế tyrosinase [29]

1.4.4 Các tác dụng khác

Một flavanone C-glycosid, sáu prenylated dẫn xuất 2- arylbenzofuran

và hai acid phenolic được phân lập từ vỏ rễ của Morus alba L để đánh giá về

tác dụng bảo vệ chống lại bệnh cơ tim do xorubicin gây ra trong tế bào H9c2 [27]

Anthocyanin trong quả dâu tằm (MAE) có những lợi ích tiềm năng về bảo vệ tế bào gan chống lại stress oxy hóa trong quá trình tăng đường huyết trong các tế bào HepG2 và cải thiện rối loạn chức năng ở chuột bị tiểu đường thông qua quy định của AMPK/ ACC / mTOR [12]

Tiến hành nghiên cứu tác dụng bảo vệ của mulberry digest (MBD) đối với stress gây oxy hóa do acrylamid gây ra Phân tích thành phần của MBD

cho thấy nó chứa 6 hợp chất phenolic chính (quercetin-3-O-rutinosid,

quercetin hexosid, quercetin rhamnosylhexosid hexosid, kaempferol

rhamnosylhexosid, cyanidin-3-O-glucosid và cyanidin-3-O-rutinosid Trong các in vitro , hàm lượng của hai anthocyanins giảm đáng kể, trong khi hàm

lượng của bốn flavonoid glycosids tăng lên Ngoài ra, MBD đã được tìm thấy thành công để ngăn chặn sự sản sinh ra ROC của acrylamide gây ra, khôi phục tiềm năng màng ty thể, và ức chế lipid peroxidation ty thể và sự suy giảm glutathion Thú vị hơn, hiệu quả bảo vệ của MBD chống lại tác hại oxy hóa bởi acrylamide đã được tăng cường so với các trái dâu không bị tiêu hóa (MBE) Nghiên cứu sâu hơn cho thấy rằng MBD tăng khả năng kháng tế bào đối với stress gây oxy hóa do acrylamide gây ra chứ không phải phản ứng trực tiếp với acrylamid Nhìn chung, kết quả của chúng tôi chỉ ra rằng MBD cung cấp một sự bảo vệ mạnh mẽ chống lại acrylamid gây ra stress oxy hóa [17]

1.5 Tác dụng và công dụng theo y học cổ truyền

1.5.1 Tang diệp (lá cây dâu)

Tính hàn, vị ngọt, đắng Quy kinh: can, phế, thận [4]

Tác dụng, công dụng :

- Giải cảm nhiệt, dùng đối bệnh nhân cảm nhiệt, biểu hiện miệng khát, sốt cao, đau đầu, ho khan, có thể dung với các vị khác; trong bài tang cúc ẩm như : tang diệp 2g, liên kiều 12g, bạc hà 4g, cam thảo 4g, hạnh nhân 12g, cát cánh 8g, lô căn 20g, sắc uống [4]

- Thanh can sáng mắt: dung khi kinh can bị phong nhiệt mắt đỏ sung đau, viêm màng kết mạc, hoa mắt, chảy nhiều nước mắt [4]

1.5.2 Tang bạch bì (vỏ rễ cây dâu)

Tính hàn, vị ngọt Quy kinh : phế [4]

Tác dụng, công dụng:

- Thanh phế, chỉ khái : dung trong trị phế nhiệt đàm nhiệt, bình suyễn, dung để trị hen suyễn còn có thể dùng phối hợp vị thuốc khác để chữa viêm màng phổi: tang bạch bì 12g, cỏ chỉ thiên, rễ cây lức, uất kim, mỗi thứ 12g, lá tre 20g, thanh bì, chỉ xác, hồng hoa, đào nhân mỗi thứ 8g Có thể chữa ho có sốt, miệng khát, dùng tang bạch bì, tỳ bà diệp, mỗi thứ 12g, sắc uống [4]

- Lợi niệu, tiêu phù : dùng khi thủy thũng, tiểu tiện khó khăn (dùng trong bài ngũ bì ẩm); hoặc dùng tang bạch bì 20g, đậu đỏ 40g [4]

1.5.3 Tang thầm (quả dâu chín)

Tính ấm, vị ngọt, chua Quy kinh : can, thận [4]

- Nhuận tràng, dùng trong các trường hợp đại tiện bí táo [4]

1.5.4 Tang chi (cành dâu non)

- Hạ áp: dùng khi bị cao huyết áp Có thể nấu nước tang chi, ngâm chân

20 phút trước khi đi ngủ [4]

CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu và thiết bị

2.1.1 Nguyên liệu

Mẫu cây dâu tằm được thu hái vào tháng 6 năm 2016 tại huyện Phổ Yên, tỉnh Thái Nguyên Mẫu thực vật đã được Thạc sĩ Bùi Hồng Quang và Thạc sĩ Đỗ Văn Hải giám định tên khoa học tại Viện Sinh thái và Tài nguyên

sinh vật là: Morus alba L., họ dâu tằm Moraceae, mẫu được lưu giữ tại Khoa

Y Dược, ĐHQGHN

Lá cây dâu tằm được rửa sạch, làm khô và xay thành bột mịn, bảo quản

để nghiên cứu về thực vật, thành phần hóa học và chiết xuất, phân lập

2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân: NMR được ghi trên máy Bruker Avance

500MHz tại Viện Hóa học, Viện Hàn lâmKhoa học và Công nghệ Việt Nam

- Phổ khối ESI-MS: đo trên máy AGILENT 1260 Series LC-MS ion Trap

(Agilent Technologies, Hoa Kỳ)

- Nhiệt độ nóng chảy: đo trên máy SMP10 BioCote, Khoa Y Dược,

ĐHQGHN

- Góc quay cực riêng: đo trên máy PLR-4, MRC scientific instruments, Khoa

Y Dược, ĐHQGHN

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật của lá cây Dâu tằm

2.2.1.1 Phương pháp nghiên cứu về đặc điểm thực vật

 -Vi phẫu: gồm các bước:

+ Chọn mẫu thích hợp

+ Cắt tiêu bản bằng dụng cụ cắt vi phẫu cầm tay

+ Xử lý lát cắt: Lựa chọn những lát cắt mỏng, tẩy bằng dung dịch javen, rửa sạch bằng nước cất, ngâm trong acid acetic 5%, rửa bằng nước cất Sau đó tiến hành nhuộm kép với xanh methylen và đỏ carmin

+ Quan sát, mô tả và chụp ảnh: Lên tiêu bản bằng dung dịch nước rồi quan sát dưới kính hiển vi, mô tả đặc điểm giải phẫu, chụp ảnh bằng máy ảnh qua kính hiển vi

 Soi bột dược liệu:

+ Mẫu nghiên cứu được sấy khô, nghiền thành bột

+ Quan sát trực tiếp, nếm, ngửi, để xác định màu, mùi, vị

+ Lên tiêu bản bột dược liệu bằng nước cất, quan sát, mô tả và chụp ảnh đặc điểm của bột qua kính hiển vi có kết hợp máy ảnh để lưu mẫu

2.2.2 Định tính các nhóm chất hữu cơ có trong lá cây Dâu tằm

Định tính sơ bộ một số nhóm chất hữu cơ trong dược liệu bằng các phản ứng hóa học đặc trưng Chiết xuất lấy dịch chiết bằng các dung môi có

độ phân cực khác nhau (nước, ethanol, ether) để định tính các nhóm chất bằng phản ứng hóa học

5%, gelatin 1% và chì acetat 10% Định tính acid hữu cơ bằng phản ứng với

Na2CO3 Định tính acid amin bằng phản ứng với thuốc thử Ninhydrin Định tính đường khử bằng phản ứng với thuốc thử Fehling

- Chiết xuất dịch chiết n-hexan để làm các phản ứng định tính sterol, chất béo, caroten

2.2.3 Phương pháp giám định tên khoa học

- Phân tích hình thái thực vật: mô tả đặc điểm hình thái theo phương pháp mô tả phân tích

- Làm tiêu bản mẫu khô theo phương pháp làm khô

- Giám định tên khoa học của mẫu nghiên cứu: đối chiếu đặc điểm mô

tả với đặc điểm thực vật đã được công bố về chi Morus và một số loài thuộc

chi này Bên cạnh đó còn có sự giúp đỡ của chuyên gia phân loại thực vật

2.2.4 Phương pháp chiết xuất, phân lập và nhận dạng cấu trúc một số hợp chất có trong lá dâu tằm

2.2.4.1 Phương pháp xử lý mẫu và chiết xuất

Lá dâu được thu hái, rửa sạch, phơi và sấy khô ở 50o

C, nghiền nhỏ thu được bột thô, đem ngâm chiết kỹ 4 lần bằng dung môi methanol ở nhiệt độ phòng Các dịch chiết được gom lại, lọc qua giấy lọc và cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được cắn chiết methanol

Cắn chiết được phân bố vào nước cất vừa đủ và tiến hành chiết lần lượt với n-hexan, ethylacetat Các dịch chiết n-hexan, ethylacetat và phần nước còn lại được cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm thu được các cắn n-hexan, cắn ethylacetat và cắn nước

2.2.4.2 Phương pháp phân tích, phân tách các hỗn hợp và phân lập các hợp chất

Để phân tích và phân tách các phần chiết của cây cũng như phân lập các hợp chất, các phương pháp sắc ký đã được sử dụng như: sắc ký lớp mỏng (TLC, dùng để khảo sát), sắc ký cột (CC), sắc ký pha đảo

Sắc ký lớp mỏng (TLC): được thực hiện trên bản mỏng đế nhôm Kieselgel 60 F254 (Merck 1,05715), RP18 F254s (Merck) Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 365 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% được phun đều lên bản mỏng, sấy khô rồi hơ nóng trên bếp điện từ từ đến khi hiện màu

Sắc ký cột (CC): được tiến hành với chất hấp phụ là silicagel pha thường và pha đảo Silicagel pha thường có cỡ hạt là 0,040- 0,063 mm (230-

400 mesh, Nacalai Tesque Inc., Kyoto, Nhật Bản), YMC ODS-A (50μm, YMC Co Ltd., Nhật Bản) Silicagel pha đảo TLC Silica gel 60 RP-18 F254S

(Merck, Damstadt, Đức)

 Phương pháp xác định cấu trúc các hợp chất phân lập được

Phương pháp chung để xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất đề cập trong các tài liệu là sự kết hợp giữa việc xác định các thông số vật lý và các phương pháp phổ hiện đại, bao gồm: IR, MS, NMR,…

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết quả nghiên cứu về đặc điểm thực vật

3.1.1 Mô tả đặc điểm hình thái thực vật

Cây cao 2-3 m Thân cành nhiều nhựa không gai, trên thân cành có nhiều mầm, mầm đỉnh, mầm nách Lá mọc so le, nguyên hoặc chia ba thùy Trên các cây già lá dài 8-15cm có hình tim ở gốc lá, nhọn ở chóp lá và có các khía răng cưa ở mép lá từ cuốn lá tỏa ra 3 gân rõ rệt Hoa đơn tính, hoa đực mọc thành bông, có 4 lá đài, có 4 nhị, hoa cái cũng mọc thành bông, hoặc thành hình khối cầu, có 4 lá đài Quả bé bao bọc các đài, mọng nước thành một quả phức (quả kép) Quả có màu từ trắng đến hồng, khi chín có màu tím sẫm

a b

Hình 3.1: Một số hình ảnh về cây dâu tằm

Chú thích: a- Lá dâu; b- Quả dâu

3.1.2 Mô tả kèm hình ảnh đặc điểm vi phẫu

 Vi phẫu thân

Vi phẫu thân hình tròn, có rất nhiều lông che chở Cấu tạo từ ngoài vào trong gồm có: lớp biểu bì là một lớp tế bào ngoài cùng xếp sát nhau, đều đặn, màng ngoài có một lớp cutin bao bọc Tiếp theo là mô mềm vỏ gồm nhiều lớp

tế bào hình nhiều cạnh, có góc tròn, tại các góc có những khoảng gian bào nhỏ, mô dày cấu tạo bảo nhiều lớp tế bào thành dày lên ở các góc, xếp thành

hình vuông khép kín Phần trụ giữa gồm có trụ bì, bó gỗ nằm ngay sát trụ bì Vùng gỗ phát triển nhiều ở góc, xếp thành một vòng liên tục Trong cùng là

mô mềm ruột gồm nhiều tế bào đa giác, gần như tròn, các góc có khoảng gian bào nhỏ

Hình 3.2: Đặc điểm vi phẫu thân cây Dâu tằm

Chú thích: 1-Lông; 2-Biểu bì; 3-Mô mềm vỏ; 4-Mô dày; 5-Trụ bì;

Hình 3.3: Đặc điểm vi phẫu cuống lá cây Dâu tằm

Chú thích: 1-Lông; 2-Biểu bì; 3-Mô mềm vỏ; 4-Trụ bì;

5-Mô mềm ruột; 6- Mô cứng

 Vi phẫu gân lá

Biểu bì trên và dưới là một lớp tế bào mỏng nối tiếp nhau Biểu bì trên

gồm tế bào khá lớn, có lông chứa nang thạch, đơn bào hoặc đa bào Biểu bì

dưới tế bào nhỏ hơn, có ít lông chứa nang thạch, nhưng nhiều lỗ khí hơn

Trong gân chính, dưới biểu bì có 2 đám mô dày, đám dưới dày và rộng hơn

Mô mềm chứa tinh thể calci oxalat hình cầu gai hay hình phiến Giữa gân lá

có 1 hoặc 2 bó libe gỗ, xung quanh libe có sợi Cung libe gỗ hình chữ U, gỗ

phía trên, libe phía dưới, mạch gỗ xếp thành dãy xen kẽ với các dãy mô mềm

gỗ Phiến lá gồm 1 hàng mô giậu, chứa diệp lục, mô khuyết có tế bào hình

tròn hay nhiều cạnh, chứa tinh thể calci oxalat

Hình 3.4: Đặc điểm vi phẫu gân lá cây Dâu tằm

Chú thích: 1-Lông che chở; 2-Biểu bì; 3-Mô mềm vỏ;

4-Gỗ; 5- libe; 6- phiến lá

1 2

3.1.3.Kết quả tiêu bản bột lá dâu tằm

Đặc điểm bột lá : Bột mịn, màu lục xám, không vị, thơm mùi đặc trưng

của lá cây Dâu tằm, soi dưới kính hiển vi thấy có các đặc điểm: Bào thạch,

tinh thể calci oxalat, mảnh mạch, lông che chở

Hình 3.5: Đặc điểm bột lá cây Dâu tằm

Chú thích: 1- Bào thạch; 2,3- Tinh thể Calci oxalat ;

Lấy 3g dược liệu, chiết soxhlet với n-hexan 1 giờ Bã dược liệu sấy khô, cho vào bình cầu, đun hồi lưu với ethanol 40% trong 1 giờ Gạn dịch chiết vào cốc

có mỏ, thêm khoảng 3ml chì acetat 30%, khuấy đều Lọc loại tủa, thử dịch lọc vẫn còn tủa với chì acetat, cho thêm 1ml chì acetat nữa vào dịch chiết, khuấy

và lọc lại Tiếp tục thử đến khi dịch chiết không còn tủa với chì acetat Cho toàn bộ dịch lọc vào bình gạn và lắc kỹ với hỗn hợp chloroform : ethanol tỷ lệ 4:1 (3 lần, mỗi lần 5ml), gạn lấy lớp chloroform vào cốc có mỏ khô sạch, loại nước bằng natri sulfat khan Chia dịch chiết vào các ống nghiệm nhỏ, bốc hơi dung môi trên nồi cách thuỷ cho đến khô Cắn còn lại để làm các phản ứng định tính sau:

Phản ứng Legal:

Hòa tan cắn trong 0,5ml ethanol 90% Nhỏ 1 giọt thuốc thử Natrinitroprussiat 1% và 2 giọt dung dịch NaOH 10% Lắc đều, nếu thấy xuất hiện màu đỏ cam thì dương tính

 Định tính alcaloid

Lấy 2g dược liệu đã làm nhỏ, cho vào bình nón dung tích 50ml Thêm 15 ml dung dịch thấm ẩm H2SO4 1N Đun đến sôi, để nguội Lọc dịch lọc vào bình gạn dung tích 100ml

Kiềm hóa dịch lọc bằng dung dịch amoniac 6N đến pH 9-10 Chiết alcaloid base bằng chloroform (chiết 3 lần, mỗi lần 5ml) Gộp các dịch chiết chloroform, loại nước bằng natrisulfat khan Dịch chiết đem lắc với H2SO4 1N

hai lần, mỗi lần 5ml Gộp các dịch chiết nước chia đều vào ống nghiệm nhỏ, mỗi ống 1ml để làm các phản ứng sau:

Phản ứng với thuốc thử Mayer

Thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer, nếu thấy xuất hiện tủa trắng thì phản ứng dương tính

Phản ứng với thuốc thử Bouchardat

Thêm 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat, nếu thấy xuất hiện kết tủa nâu đỏ thì phản ứng dương tính

Phản ứng với thuốc thử Dragendorff

Thêm 2-3 giọt thuốc thử Dragendoff, nếu thấy xuất hiện kết tủa da cam thì phản ứng dương tính

Chuẩn bị:

Lấy dược liệu đã làm nhỏ, cho nước ngập dược liệu (cách bề mặt dược liệu khoảng 2cm), đun sôi trong 30 phút Sau 30 phút, lấy dịch chiết ra, lọc nóng được dịch lọc Dịch lọc lại, đem cô đến cắn (cắn toàn phần)

 Định tính saponin

Quan sát hiện tượng tạo bọt

Hòa tan một ít cắn vào khoảng 5ml nước cất Đun cách thủy 10 phút, lọc qua bông lấy dịch chiết vào ống nghiệm to Thêm nước cất đến khoảng 10ml, bịt ống nghiệm bằng ngón tay cái, lắc mạnh ống nghiệm theo chiều dọc 5 phút,

để yên và quan sát cột bọt thấy cột bọt bền sau 15 phút thì dương tính

 Định tính flavonoid

Hòa tan cắn vào ethanol 90%, lọc qua giấy lọc gấp nếp lấy dịch lọc đem làm các phản ứng:

Phản ứng với hơi amoniac (NH3)

Nhỏ vài giọt dịch lọc lên miếng giấy lọc, để khô rồi hơ lên miệng lọ amoniac đặc, quan sát nếu thấy vết chất chuyển sang màu vàng thì dương tính

Phản ứng với dung dịch kiềm loãng

Cho dịch lọc vào ống nghiệm, nhỏ vài giọt dung dịch NaOH 10% nếu thấy dịch vẩn đục màu vàng thì dương tính

Phản ứng với dung dịch sắt (III) chlorid

Cho khoảng 1ml dịch lọc vào ống nghiệm nhỏ, thêm vài giọt dung dịch FeCl3

5%, lắc đều nếu thấy xuất hiện màu xanh đen thì dương tính

chloroform vào ống nghiệm, cô bớt dung môi còn khoảng 1ml, thêm 1ml NaOH 10% vào, lắc nhẹ, nếu xuất hiện màu đỏ sim thì phản ứng dương tính

 Định tính acid hữu cơ

Hòa tan cắn trong nước nóng, để nguội rồi lọc qua giấy lọc gấp nếp Cho vào ống nghiệm nhỏ khoảng 2ml dịch lọc, thêm một ít tinh thể Na2CO3 nếu thấy

có bọt khí bay lên thì dương tính

 Định tính chất béo

Hòa tan cắn vào 2ml nước nóng, lọc nóng Nhỏ 1 giọt dịch chiết trên lên miếng giấy lọc, hơ nóng cho bay hết hơi dung môi, nếu để lại vết mờ trên giấy lọc thì phản ứng dương tính

 Định tính caroten

Cho vào ống nghiệm nhỏ một ít cắn khô, nhỏ vài giọt H2SO4 đặc vào cắn nếu thấy xuất hiện màu xanh lá thì dương tính

 Định tính sterol

Cho vào ống nghiệm một ít cắn khô, hòa tan trong 2ml chloroform và 1ml anhydrid acetic Để ống nghiệm nghiêng 450, thêm từ từ H2SO4 đậm đặc theo thành ống nghiệm thấy mặt phân cách có vòng tím đỏ, lớp chất lỏng phía trên

có màu xanh lá thì dương tính

Bảng 3.1 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ bằng phản ứng hóa học