Xác định thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của lá cây vú bò (ficus hirta vahl ) phân bố tại huyện bắc sơn tỉnh lạng sơn (luận văn thạc sĩ hóa học)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TÔ THANH ĐẠM XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LÁ CÂY VÚ BÒ FICUS HIRTA VAHL... Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô gi

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM

TÔ THANH ĐẠM

XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH

SINH HỌC CỦA LÁ CÂY VÚ BÒ (FICUS HIRTA VAHL.)

PHÂN BỐ TẠI HUYỆN BẮC SƠN - TỈNH LẠNG SƠN

LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC

THÁI NGUYÊN - 2020

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM

TÔ THANH ĐẠM

XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH

SINH HỌC CỦA LÁ CÂY VÚ BÒ (FICUS HIRTA VAHL.)

PHÂN BỐ TẠI HUYỆN BẮC SƠN-TỈNH LẠNG SƠN

Ngành: Hóa hữu cơ

Mã số: 8440114

LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC

Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Thanh Hương

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan các số liệu, kết quả trong luận văn là hoàn toàn trung thực chưa từng được công bố trong một công trình khoa học nào khác

Thái Nguyên, tháng 9 năm 2020

Tác giả luận văn

TÔ THANH ĐẠM

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên, Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Thanh Hương đã giao đề tài, tận tình hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi nhất để tôi có thể hoàn thành luận văn này

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, cán bộ phòng thí nghiệm Khoa Hóa học trường ĐHSP Thái Nguyên, Ban giám hiệu cùng các Phòng, Ban của Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên, Phòng nghiên cứu hoạt tính Sinh học

- Viện Công nghệ Sinh học; Phòng Hóa sinh ứng dụng - Viện Hàn lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam đã giúp đỡ, tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài

Cuối cùng tôi xin chân thành cảm ơn tới lãnh đạo cơ quan công tác; gia đình; bạn bè; đồng nghiệp đã giúp đỡ, cổ vũ động viên, tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện luận văn

Học viên

Tô Thanh Đạm

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN i

LỜI CẢM ƠN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT v

DANH MỤC CÁC BẢNG vi

DANH MỤC CÁC HÌNH vii

MỞ ĐẦU 1

1 Tính cấp thiết của đề tài 1

2 Mục tiêu của đề tài 2

Chương 1: TỔNG QUAN 3

1.1 Tổng quan về chi Ficus 3

1.1.1 Giới thiệu chung về chi Ficus (Họ Moraceae) 3

1.1.2 Đặc điểm thực vật về loài Ficus hirta Vahl 3

1.1.3 Đặc điểm thực vật về loài Ficus microcarpa 5

1.1.4 Đặc điểm thực vật về loài Ficus racemosa L 7

1.1.5 Đặc điểm thực vật về loài Ficus hispida L.f 9

1.2 Tình hình nghiên cứu , thành phần hóa học và hoạt tính sinh học 10

1.2.1 Các nghiên cứu quốc tế 10

1.2.2 Các nghiên cứu trong nước 24

1.2.3 Hoạt tính sinh học 27

1.2.4 Thành phần hóa học loài Ficus hirta Vahl 27

Chương 2: THỰC NGHIỆM 29

2.1 Đối tượng nghiên cứu 29

2.2 Hóa chất, thiết bị 29

2.2.1 Hóa chất 29

2.2.2 Thiết bị 30

2.3 Phương pháp xử lý mẫu thực vật, chiết tách và xác định cấu trúc các

chất phân lập được 31

2.3.1 Xử lý mẫu thực vật 31

2.3.2 Chiết tách các chất 31

2.3.3 Xác định cấu trúc các chất 31

2.4 Phương pháp xác định hoạt tính sinh học 32

2.4.1 Phương pháp xác định hoạt tính ức chế Nitric oxide (NOs inhibition) 32

2.4.2 Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh 32

2.5 Thực nghiệm 32

2.5.1 Quá trình phân lập các chất từ mẫu lá Vú Bò (khô) 32

2.5.2 Dữ kiện phổ của các chất phân lập được 35

2.5.3 Xác định khả năng ức chế Nitric oxide 35

2.5.4 Phương pháp xác định hoạt tính kháng vi sinh 37

2.6 Phương pháp xử lý số liệu 38

Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 39

3.1 Phân lập các chất từ cặn chiết ethyl acetate mẫu lá khô của loài F hirta Vahl 39

3.2 Xác định cấu trúc chất tách được 39

3.2.1 Chất VB1: 3β-acetoxyurs-12-en-11-one 39

3.2.2 Chất VB2: Psoralene 47

3.3 Kết quả thử hoạt tính sinh học từ dịch chiết nước mẫu lá của loài F hirta Vahl 53

3.3.1 Kết quả nghiên cứu khả năng ức chế Nitric Oxide (NOs Iinhibtion) từ dịch chiết nước mẫu lá của loài F hirta Vahl 53

3.3.2 Kết quả nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh của dịch chiết nước mẫu lá (khô) của loài F hirta Vahl 55

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57

TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

1 13C-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân của nguyên tử 13C

2 1D-, 2D-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều và hai chiều

3 1H-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân của nguyên tử 1H

5 ALDH Acetaldehyde dehydrogenase

6 ATCC 10231 Candida albicans: là nấm men

7 ATCC 13709 Staphylococcus aureus : cầu khu n gram ( )

8 ATCC 15442 Pseudomonas aeruginosa: vi khu n gram (-),

9 ATCC 25922 Escherichia coli: vi khu n gram (-)

10 ATCC 6633 Bacillus subtilis :là trực khu n gram ( )

11 DMSO Dimetylsulfoside

12 EI-, ESI-, HR-MS Phổ khối

13 FBS Huyết thanh phôi bò

14 FT-IR Phổ hồng ngoại

15 Hep G2 Tế bào ung thư gan

16 IC50 Nồng độ gây ra tác động sinh học cho 50% mẫu thử

nghiệm

19 MBC Minimum bactericidal concentration - nồng độ tối

thiểu diệt khu n

20 MCF-7 Tế bào ung thư vú

21 MDA Malonyl diandehit

22 MIC Minimum inhibitor concentration - nồng độ tối thiểu

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1: Cấu trúc hóa học của các hợp chất 1-4 11

Bảng 1.2: Các hợp chất (6-11) phân lập từ quả của một số loài thuộc chi Ficus 12

Bảng 1.3: Các hợp chất (12-21) phân lập từ quả loài F Hirta 13

Bảng 1.4: Các hợp chất (22-25) phân lập từ quả của loài F Indica 14

Bảng 1.5: Một số hợp chất (26-27) cumarin phân lập từ lá của một số loài thuộc chi Ficus 14

Bảng 1.6: Một số hợp chất (28-31) flavonoid phân lập từ lá của một số loài thuộc chi Ficus 15

Bảng 1.7: Các hợp chất terpenoid, sterol và một số chất khác (32-37) 16

Bảng 1.8: Một số hợp chất (38-51) flavonoid phân lập từ thân của một số loài thuộc chi Ficus 17

Bảng 1.9: Hợp chất (52) phân lập từ nhựa của loài F glabrata thuộc chi Ficus 19

Bảng 1.10: Một số hợp chất (53-85) phân lập từ rễ của một số loài thuộc chi Ficus 20

Bảng 1.11: Một số hợp chất (97-101) phân lập từ loài F hirta Vahl 28

Bảng 3.1: Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): chất VB1 42

Bảng 3.2: Số liệu phổ 13C-NMR chất VB1 46

Bảng 3.3: Số liệu phổ 1H-NMR của chất VB2 48

Bảng 3.4: Số liệu phổ 13C-NMR của chất VB2 50

Bảng 3.5: So sánh phổ 1H-NMR, 13C-NMR của chất VB2 và hợp chất tham khảo 51

Bảng 3.6: Khả năng ức chế sản sinh NO của các mẫu nghiên cứu 54

Bảng 3.7: Kết quả thử hoạt tính kháng sinh vật kiển định 56

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1: Thân và quả của loài Ficus hirta Vahl 4

Hình 1.2: Lá của loàiFicus hirta Vahl 4

Hình 1.3: Quả của loàiFicus hirta Vahl 4

Hình 1.4: Hình vẽ mô tả của loài Ficus hirta Vahl 4

Hình 1.5: Hình vẽ mô tả của loài Ficus microcarpa 6

Hình 1.6: Lá và quả chín của loài Ficus microcarpa 6

Hình 1.7: Gốc và rễ của loài Ficus microcarpa 6

Hình 1.8: Lá của loài F racemosa L 8

Hình 1.9: Quả của loài F racemosa L 8

Hình 1.10: Thân của loài F racemosa L 8

Hình 1.11: Hình vẽ mô tả của loàiF racemosa L 8

Hình 1.12: Thân, lá và quả của loài F hispida L.f 9

Hình 1.13: Hình vẽ mô tả của loài F hispida L.f 9

Hình 2.1: Sơ đồ chiết, tách các chất từ mẫu lá khô của loài F hirta Vahl 34

Hình 3.1: Phổ 1H-NMR của chất VB1 40

Hình 3.2: Phổ 1H-NMR của chất VB1 41

Hình 3.3: Phổ 1H-NMR của chất VB1 41

Hình 3.4: Phổ 13C-NMR của chất VB1 43

Hình 3.5: Phổ 13C-NMR của chất VB1 43

Hình 3.6: Phổ HSQC của chất VB1 44

Hình 3.7: Phổ HMBC của chất VB1 45

Hình 3.8: Công thức cấu tạo của chất VB1 47

Hình 3.9: Phổ 1H-NMR của chất VB2 47

Hình 3.10: Phổ 1H-NMR của chất VB2 48

Hình 3.11: Phổ 13C-NMR của chất VB2 49

Hình 3.12: Phổ 13C-NMR của chất VB2 49

Hình 3.13: Phổ HSQC của chất VB2 50 Hình 3.14: Công thức cấu tạo chất VB2: 7H-furo[3,2-g]chromen-7-one

(Psoralene) 52 Hình 3.15: Đường chu n NaNO2 54

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Hiện nay các hợp chất hữu cơ từ nguồn gốc thiên nhiên có hoạt tính sinh học cao là một trong lĩnh vực nghiên cứu đang được các nhà khoa học quan tâm Từ thuở sơ khai, con người đã biết sử dụng các loài thực vật xung quanh vào mục đích chữa bệnh Do vậy việc nghiên cứu, khai thác các chất có hoạt tính sinh học trong tự nhiên là vấn đề quan tâm chung của xã hội

Hệ thực vật Việt Nam cũng được biết đến rất đa dạng và phong phú, tính tới đầu thế kỷ XXI có đến 12.000 loài thực vật dùng làm dược liệu Việc sử dụng những kinh nghiệm dân gian có truyền thống lâu đời và nghiên cứu thực vật học của 54 dân tộc ở Việt Nam, kết hợp việc nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng dược lý một cách khoa học, toàn diện để có thể quy hoạch, bảo tồn các loài cây thuốc quý hiếm Sử dụng các hợp chất có hoạt tính sinh học từ

tự nhiên là xu hướng của y học hiện đại kết hợp với y học cổ truyền với mục đích tạo ra những dược ph m, thực ph m có tác dụng chữa bệnh và mang lại hiệu quả cao kể cả về mặt kinh tế

Loài F hirta Vahl (Vú bò) có tên khoa học là Ficus heterophyllus L thuộc họ Dâu tằm (Moraceae), là loại cây mọc hoang ở các vùng đồi núi Việt

Nam Người dân vẫn dùng lá cây làm thức ăn cho gia súc và chữa bệnh cho

con người Loài F hirta Vahl là cây thuốc được sử dụng trong Đông y để

điều trị bệnh phong thấp tê bại, hay ra mồ hôi trộm, chân tay mệt mỏi không có lực, ho do phế lao, ăn ít bụng trướng, thuỷ thũng, sản hậu không có sữa, bệnh

viêm gan, bạch đới Người dân từ lâu đã sử dụng nhựa mủ trắng của loài F

hirta Vahl để trị tắc tia sữa, phong thấp Rễ cây này thường gọi là Hoàng kỳ

nam dùng thay thế Hoàng kỳ và còn dùng chữa ho, phong thấp[5]

Loài F hirta Vahl từ trước tới nay người dân vẫn sử dụng theo thói quen để

chữa các bệnh, nhưng chưa có cơ sở khoa học về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học Đó chính là lý do để chúng tôi thực hiện đề tài:

“Xác định thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của lá cây Vú bò (Ficus hirta Vahl.) phân bố tại huyện Bắc Sơn-tỉnh Lạng Sơn”

2 Mục tiêu của đề tài

1 Phân lập các hợp chất hữu cơ từ dịch chiết Ethyl acetate mẫu lá (khô) của

loài F hirta Vahl mọc tại địa bàn huyện Bắc Sơn, tỉnh Lạng Sơn

2 Xác định cấu trúc hóa học của các chất chính từ dịch chiết

3 Đánh giá hoạt tính sinh học của dịch chiết thu được

Chương 1: TỔNG QUAN

1.1 Tổng quan về chi Ficus

1.1.1 Giới thiệu chung về chi Ficus (Họ Moraceae)

Chi Sung (Ficus L.) là một chi lớn trong họ Dâu tằm (Moraceae), gồm các

cây gỗ lớn, gỗ nhỏ, bụi và cả dây leo, phân bố rộng rãi khắp các vùng nhiệt đới Người ta ước tính có khoảng hơn 1000 loài thuộc chi này phân bố ở các nơi trên thế giới Các nước vùng Đông Nam và Nam châu Á là nơi tập trung nhiều

loài nhất Ở Việt Nam hiện chưa có nghiên cứu đầy đủ về chi Sung (Ficus L.)

Theo tham khảo các tài liệu đã nghiên cứu và mô tả thì 75 loài, 2 phân loài và

46 thứ [3] Những nghiên cứu năm 2003 – 2004 thì chi này có thể có từ 100 đến 200 loài ở Việt Nam [1]

Các loài thuộc chi Sung (Ficus L.) đều có mủ, đây là nguồn nguyên liệu làm thuốc có giá trị[6] Nhựa của của nhiều loài Ficus đã được dân địa phương

ở nhiều nơi sử dụng để điều trị vết thương, chỗ bầm giập, mụn nhọt, chữa viêm thấp khớp, chữa ho và tiêu chảy Vỏ của các loài cây này thường được dùng trong y học cổ truyền để điều trị bệnh tiểu đường, rối loạn tiêu hóa và kháng viêm cũng như chữa lỵ[6]

Theo kết quả khảo sát, tại địa bàn huyện Bắc Sơn, tỉnh Lạng Sơn có 04 loài

thuộc chi Ficus như sau: Ficus hirta Vahl., Ficus microcarpa, Ficus racemosa

L., Ficus hispida L.f và F benghalensis

1.1.2 Đặc điểm thực vật về loài Ficus hirta Vahl

1.1.2.1 Tên khoa học

Tên khoa học: Ficus hirta Vahl

Tên tiếng Việt: Cây vú bò, ngải phún, vú lợn, vú bò sẻ, vú chó…

Tên tiếng Tày: Mác đưa khốn, Mác đưa hóm

1.1.2.2 Đặc điểm về thực vật và phân bố tự nhiên

 Đặc điểm thực vật

Loài F hirta Vahl là một cây nhỏ thân thảo cao 1 - 2 m, sống lâu năm,

răng cưa Mặt lá nháp, gân nổi rõ Hoa mọc ở nách lá “Quả” thực ra là cụm hoa đặc biệt, gồm đế cụm hoa lõm hình cái chén gần kín miệng, ở trong chứa hoa Quả thật thuộc loại quả hạch con, chứa trong đế cụm hoa (mà ta vẫn gọi nhầm là hạt), hình cầu, đường kính 10 mm, đầu quả có một núm nhỏ màu đỏ

Toàn cây có nhựa mủ trắng

Hình 1.1: Thân và quả của loài

Ficus hirta Vahl

Hình 1.2: Lá của loài

Ficus hirta Vahl

 Phân bố

Các loài Ficus hirta Vahl phân bố rải rác khắp các châu lục, nhưng chủ

yếu là các khu vực nhiệt đới, nóng m như miền Nam Trung Quốc, Việt Nam, Campuchia, Thái Lan

Hình 1.3: Quả của loài

Ficus hirta Vahl

Hình 1.4: Hình vẽ mô tả của loài

Ficus hirta Vahl

1.1.2.3 Công dụng và liều dùng của loài Ficus hirta Vahl

Chữa ngã bị ứ huyết, ngực bụng, đau nhức, hòn cục: Toàn loài Ficus hirta

Vahl giã nát, thêm rượu và ít muối, sao nóng đắp lên nơi đau

Chữa bế kinh, sau khi đẻ ứ huyết đau bụng: 30 - 60 g, thêm ít rượu

để uống

Bạch đới: Lá Ficus hirta Vahl khô 60 g Sắc uống

Chữa phong thấp: Lá Ficus hirta Vahl 60 g, móng giò lợn 250 g, rượu

trắng 60 g Cho nước, sắc lấy 1 bát, chia uống 2 lần trong ngày

Chữa sa dạ dày, sa trực tràng, sa tử cung: Ficus hirta Vahl 30 g, tô

mộc 12 g, hồi đầu thảo 12 g, ngưu tất 12 g, mộc thông 12 g Sắc uống Uống 2 - 3 tháng.[5]

Chữa ứ máu tím bầm do ngã hay bị thương: Lá hay quả giã nát, chưng với

rượu, đắp hay chườm

Kiện tỳ hoá thấp: Các chứng viêm gan mạn, xơ gan, phù do suy dinh

dưỡng: F hirta Vahl 20 g, diệp hạ châu 16 g, nhân trần 12 g, rau má 16 g

Khứ đờm giảm ho (viêm phế quản, ho có đờm): Ficus hirta Vahl 20 g,

mạch môn 12 g, diếp cá 20 g, lá táo 16 g Sắc uống

Chữa đau dạ dày, viêm tinh hoàn, lòi dom, sa tử cung: Ficus hirta Vahl

30 g; Tô mộc, Hồi đầu thảo, Ngưu tất, Mộc thông mỗi vị 12 g Sắc uống [2]

1.1.3 Đặc điểm thực vật về loài Ficus microcarpa

1.1.3.1 Tên khoa học

Tên khoa học: Ficus microcarpa

Tên Việt Nam: cây Gừa, cây Si

Tên tiếng Anh: Chinese Banyan, Malayan Banyan, Indian Laurel, Curtain fig

1.1.3.2 Đặc điểm thực vật và phân bố trong tự nhiên

Hình 1.7: Gốc và rễ của loài Ficus microcarpa

Đây là loài có thân gỗ, cao 15-20 m, có rễ phụ mọc ra từ thân và các cành trên cao Lá mọc so le, dày láng, dài 10-15 cm, rộng 5–6 cm, chóp nhọn hoặc tròn, cuống lá dài 1,5-3,5 cm; lá kèm có lông trắng lúc non Quả loại sung ở nách lá, đường kính khoảng 1 cm, không cuống, khi chín màu vàng có sọc đỏ Mùa hoa quả tháng 5 – 6 hàng năm

 Phân bố

Loài Ficus microcarpa có nguồn gốc ở Đông Nam Châu Á, từ Ấn Độ,

Lào, Campuchia, Xri Lanka, Malaysia, đến Indonesia Ở Việt Nam, loài này

thường gặp mọc hoang ở vùng có thủy triều, mọc dựa bờ sông suối, kênh rạch

Loài Ficus microcarpa cũng được trồng làm cây cảnh

1.1.3.3 Công dụng và liều dùng của Ficus microcarpa

- Dự phòng cúm: Lá Gừa, lá Bạch đàn, đều 30g, sắc uống

- Viêm ruột cấp, lỵ: Lá Gừa tươi 500g, sắc nước, chia 2 lần uống trong ngày

- Viêm khí quản mạn: Lá Gừa tươi 75g, vỏ Quýt 18g, sắc nước, chia 3 lần uống sáng, trưa, chiều Liên tục trong 10 ngày [25]

1.1.4 Đặc điểm thực vật về loài Ficus racemosa L

Tên tiếng Việt: Cây sung

Tên tiếng Tày: Mác đưa kiếng

1.1.4.2 Đặc điểm về thực vật và phân bố trong tự nhiên

Loài F racemosa L là cây thân gỗ cao tới 25 - 30 m, đường kính thân cây

tới 60-90 cm, hoa đơn tính cùng gốc Vỏ thân cây màu nâu ánh xám, nhẵn Cành nhỏ màu nâu Lá kèm hình trứng hoặc mũi mác, dài từ 1,5 - 2 cm Lá đơn, mọc so le, có màng và lông tơ, sớm rụng Cuống lá dài 2 - 3 cm, gốc lá hình nêm hơi cùn, mép lá nguyên, nhọn đỉnh tới hơi cùn Hoa đực, các lỗ chân lông cận đỉnh, không cuống, thùy của đài hoa 3, nhị 2 Ra hoa trong khoảng tháng 5 tới tháng 7 Quả mọc thành chùm hình quả lê, đường kính 2 – 2.5 cm trên thân cây, các cành nhỏ, đôi khi ở nách lá hoặc trên các cành nhỏ không lá

đã già Khi chín quả có màu cam ánh đỏ

Loài F racemosa L phát triển tại các khu vực m ướt, phân bố ở Trung Quốc,

Ấn Độ, Đông Nam Á, Sri Lanka, Australia Ở Việt Nam và Lào, loài F racemosa

L phân bố rộng khắp ở cả ba miền

1.1.4.3 Công dụng của loài F racemosa L

Loài F racemosa L còn là một vị thuốc dùng trong y học dân tộc Lá F

racemosa L non dùng để ăn, nhựa F racemosa L được người dân coi là một

vị thuốc quý để chữa bệnh ngoài da (chốc, nhọt, đau tụ máu)

Chữa mụn nhọt: Rửa sạch chỗ mụn nhọt, lau khô nước, nhựa F racemosa

L bôi trực tiếp vào chỗ đau, có thể trộn nhựa F racemosa L với lá non, giã nát

rồi đắp lên chỗ đau Nếu mụn chưa có mủ thì đắp kín, nếu đã vỡ mủ rồi, đắp để

hở một chỗ bằng hạt ngô Khi đã có mủ, muốn lấy ngòi ra thì giã thêm một củ

hành với nhựa và lá F racemosa L rồi đắp như trên, để hở miệng[5]

Chữa hen: Nhựa F racemosa L hòa với mật ong uống trước khi ngủ Chữa nhức đầu: Nhựa F racemosa L phết lên giấy bản, dán vào 2 bên

thái dương Có trường hợp, người ta dùng khi bị tê liệt Có khi dùng phối hợp

bôi ngoài với ăn lá non hoặc uống nhựa F racemosa L với 5 ml rượu hòa vào

nước đun sôi để nguội, trước khi đi ngủ [1]

1.1.5 Đặc điểm thực vật về loài Ficus hispida L.f

1.1.5.1 Tên khoa học

Tên khoa học: Ficus hispida L.f

Tiên tiếng Việt: Cây sung ngái

Tên tiếng Tày: Mạy nọt

1.1.5.2 Đặc điểm về thực vật và phân bố tự nhiên

Loài F hispida L.f là cây nhỡ cao 5 - 7 m, cành non có nhiều lông, nhám,

màu nâu xám, cành già nhẵn Lá mọc đối, hình bầu dục hoặc trái xoan, dài 11 -

20 cm, rộng 5 - 12 cm Gốc tròn, đầu tù có mũi nhọn ngắn, mép khía răng, có lông nhám ở cả hai mặt; lá kèm hình tam giác, có lông ngắn Cụm hoa ở gốc thân và cành già gồm hoa đực và hoa cái, hoa đực có nhiều ở đỉnh của cụm hoa,

có 3 lá đài lõm, nhị 1; hoa cái có đài bao bọc lấy bầu, vòi có lông mềm Quả phức, mềm, hình cầu, thót lại ở gốc, đầu bẹt vỏ có lông nhám

Hình 1.12: Thân, lá và quả của

loài F hispida L.f

Hình 1.13: Hình vẽ mô tả của loài F

hispida L.f

1.1.5.3 Công dụng về cây F hispida L.f

Lá: Lá F hispida L.f được thu hái quanh năm Loại bỏ lá sâu, lá úa, rửa

sạch, giã nát, thêm nước sôi để nguội, gạn uống chữa sốt rét Để phòng sốt rét,

có thể lấy lá sao vàng, nấu nước uống hằng ngày [5]

Vỏ thân: Thu hái vào mùa xuân, lúc này vỏ chứa nhiều nhựa dễ bóc, cạo sạch

vỏ ngoài, phơi hoặc sấy khô Khi dùng, lấy vỏ thân F hispida L.f 50 g, ngâm nước vo gạo trong 2 giờ, rồi lấy ra, thái nhỏ, phơi khô, sao vàng, lá F hispida L.f hay quả F Racemose L 30 g, mã đề 30 g, phơi khô, cắt nhỏ, bồ hóng 1 nhúm Tất

cả trộn đều, sắc với 400 ml, uống hai lần trong ngày, chữa phù thũng[5]

Rễ: Thu hái vào mùa thu, chỉ lấy vỏ rễ, rửa sạch, phơi hoặc sấy khô Chữa

đau lưng, nhức xương: rễ F hispida L.f 50 g, rễ cỏ xước 30 g, dây đau xương

30 g, rễ si 30 g, thái nhỏ, sao vàng, sắc uống[5]

Quả: Quả F hispida L.f đốt thành than, ngâm rượu, dùng ngậm hằng ngày,

chữa sâu răng [5]

1.2 Tình hình nghiên cứu , thành phần hóa học và hoạt tính sinh học

1.2.1 Các nghiên cứu quốc tế

1.2.1.1 Thành phần hóa học của quả một số loài thuộc chi Ficus

Quả của các loài thuộc chi Sung (Ficus) thuộc loại quả giả, do đế hoa

tự tạo thành, mặt quả phủ lông mịn, cuống ngắn Quả của các loài thuộc chi

Sung (Ficus) thường có các nhóm hợp chất steroid, flavonoid, các triterpene,

saponin, megastigman, amino acid, các hợp chất phenol và một số hợp chất

dễ bay hơi

Năm 2006 trên tạp chí Food Chem vào, đã công bố các hợp chất

anthocyanin: cyanidin 3-O-rhamnoglucoside (cyanidin 3-O-rutinoside, C3R)

(1); cyanidin 3-O-glucoside (2); cyanidin (3) có hoạt tính chống oxy hóa mạnh

và là thành phần chủ yếu của quả loài F carica [7]

Các anthocyanin (flavonoid) được phát hiện từ loài F carica có khả năng

kháng khu n, do đó quả của loài này rất thích hợp để lên men thành rượu Loài

F carica đã được dùng làm chất nền để cố định nấm men trong quá trình lên

men phân hủy glucose

Năm 1968 lần đầu tiên đã phân lập hợp chất serotonin (4) từ loài F

religiosa [9] Năm 2008 hợp chất serotonin cũng đã phân lập từ quả của loài F capensis có tác dụng chống lại sự suy giảm chức năng trong bệnh thiếu máu hồng

cầu lưỡi liềm [15] Năm 2009, chất serotonin đã phân lập được từ quả của loài F

religiosa có tác dụng điều hòa huyết áp, chống co giật [10; 19; 20; 26;28; 39].

Bảng 1.1: Cấu trúc hóa học của các hợp chất 1-4

Năm 2017, phân lập được 5 hợp chất đã từ quả loài F nipponica trong

Bảng 1.3: Các hợp chất (12-21) phân lập từ quả loài F Hirta

Công

thức

R

12 H 13.O

Tên

chất

(19) Pinocembrin 7-O-β-D-glucoside (20) Naringenin 7-O-β-D-glucoside (21) Eriodictyol 7-O-β-D-glucoside

4 hợp chất flavonoid được phân lập từ quả của loài F indica trong đó chất

(+)-taxifolin (23) có hoạt tính bảo vệ tế bào gan chống lại những tổn thương của tế

bào gan do stress và do rượu gây ra [29]

Bảng 1.4: Các hợp chất (22-25) phân lập từ quả của loài F Indica

* Các hợp chất cumarin

Năm 1996, coumarin (26) và warfarin (27) được phân lập từ dịch chiết

nước của lá cây F carica và phát hiện thấy hoạt tính chống u não hiệu quả

* Các hợp chất flavonoid

Trong lá các loài thuộc chi Ficus có chứa ít nhất 4 loại flavonoid

glycoside khác nhau: genistin, rutin, isoquercitrin và kaempferitrin Các

flavonoid trong lá loài Ficus đều có hoạt tính chống oxy hóa

Hợp chất genistin (28), rutin (29), isoquercitrin (30) và kaempferitrin

(31) được phân lập từ loài F cordata [31]

Bảng 1.6: Một số hợp chất (28-31) flavonoid phân lập từ lá của một số loài

thuộc chi Ficus

Công thức

Tên chất

(28) Genistin

3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-

* Các hợp chất terpenoid, sterol và một số chất khác

Năm 1994 các nhà khoa học đã phân lập được α-amyrin acetate,

β-amyrin acetate, β-β-amyrin, β-glutinol (32), taraxerol (33), oleanolic acid (34),

lupeol (35), α- amyrin (36), acid ursolic và acid betulinic (37) cũng đã được

phân lập từ lá loài F thunbergii [11]

1.2.1.3 Thành phần hóa học của thân một số loài thuộc chi Ficus

Các nghiên cứu thân các loài thuộc chi Ficus chứa các hợp chất

polyphenol, bao gồm các hợp chất flavonoid và glycosid của chúng, triterpenoid, coumarin, phytosterol, các acid phenolic và một số thành phần hóa học khác

Năm 2008, hợp chất isoflavonon (38 - 44) được tách từ một số loài thuộc

chi Ficus [31]

Năm 2008, hợp chất alpinum isoflavone (45) được phân lập từ loài F

chlamydocarpa và F cordata (Moraceae) [12] Sau đó một năm hợp chất

luteolin (46) được tách từ loài Ficus ovata [30] Luteolin, 7-methoxycoumarin,

indole-3-carboxaldehyde, lupeol acetate, vitamin K1, lanosterol, stigmasterol

(47- 51) [17]

Bảng 1.8: Một số hợp chất (38-51) flavonoid phân lập từ thân của một số

loài thuộc chi Ficus

Công thức

Tên chất (38)

5,7,2′-trihydroxy-4′-methoxyisoflavone

(39) enyl)biochanin A

1.2.1.4 Thành phần hóa học của nhựa một số loài thuộc chi Ficus

Theo Y học cổ truyền của nhiều nước trên thế giới, nhựa của các loài

thuộc chi Ficus sử dụng điều trị các bệnh ngoài da như: chữa mụn cơm, nhọt và

viêm da, bằng cách đắp lên những chỗ khớp đau của những người bị bệnh thấp khớp, bệnh gout và dùng làm thuốc nhỏ mắt, chữa bọ cạp đốt, bôi lên vết thương do chó cắn, trị sỏi thận, đắp lên những chỗ đau do ngã, bầm tím, chữa sâu răng, chữa bệnh phong, tàn nhang và còn được sử dụng để t m đầu mũi tên của các thợ săn [32]

Oleanane terpenoid và saponin của chúng là chất gây độc tế bào đối với

tế bào ung thư[34] Hợp chất N-acethyl-β-hexosaminidase (52) được phân lập

từ loài F glabrata [17]

Bảng 1.9: Hợp chất (52) phân lập từ nhựa của loài F glabrata

thuộc chi Ficus

Công

thức

Tên

1.2.1.5 Thành phần hóa học của rễ một số loài thuộc chi Ficus

Dịch chiết nước của cây bồ đề F benghalensis có hoạt tính mạnh chống bệnh đái tháo đường Các chất chiết xuất bằng hỗn hợp nước-ethanol của F

deltoidea có hoạt tính chống ung thư đối với dòng tế bào ung thư buồng trứng ở

người A2780 [23]

Năm 2008, nhóm chất (53-60) được phân lập và xác định là những chất có

hoạt tính kháng ung thư, kháng viêm từ một số loài thuộc chi Ficus [31]

Năm 2009, Hợp chất hesperidin (17) từ loài Ficus, hesperidin đóng một

vai trò quan trọng trong việc giảm mỡ máu, cholesterol, huyết áp, điều hòa khí

huyết, hesperidin là chất chống phóng xạ trong các tế bào lympho máu ngoại vi của con người.[18]

Naringenin (20) có trong rễ của một số loài thuộc chi Ficus, nó có hoạt

tính ức chế sự truyền tín hiệu thần kinh trong các tế bào thần kinh, ngăn ngừa bệnh hen suyễn Naringenin đào thải các gốc hydrocarbon thông qua việc kích hoạt thụ thể aryl hydrocarbon (AhR)[22]

Năm 2014, 34 hợp chất đã được phân lập từ loài F tsiangii Merr., trong

đó (64, 71, 73, 78-81) là những chất mới tách ra từ thực vật; các chất (63,

65-70, 72, 74-88, 82, 83) là những chất lần đầu tiên tách ra từ thực vật [43, 44] Bảng 1.10: Một số hợp chất (53-85) phân lập từ rễ của một số loài

thuộc chi Ficus

1.2.2 Các nghiên cứu trong nước

Từ rễ cây Vú bò đã phân lập và xác định cấu trúc hóa học của 01 hợp chất

mới, 5-O-[β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl]bergaptol (86), 01

hợp chất lần đầu tiên được phân lập từ thiên nhiên, 6,7-furano-hydrocoumaric

acid methyl ester (87) cùng với 09 hợp chất đã biết gồm 06 phenolic, acetoxyurs-12-en-11-one (88), psoralene (89), umbelliferone (90), 6-carboxy- umbelliferone (91), picraquassioside A (92), rutin (93); 01 nucleoside,

3β-adenosine (94); và 02 saccharide, fructofuranoside (95),

9

10 3a

Tên chất (87) 6,7-furano-hydrocoumaric acid methyl ester

Hiện nay, chưa có nhiều công trình nghiên cứu về thành phần hóa học và

hoạt tính sinh học của các loài thuộc chi Sung (Ficus L.) ở Việt Nam được

công bố Năm 1998, nhóm nghiên cứu của các nhà khoa học thuộc Viện Hóa học công bố sự phân lập và xác định cấu trúc của hai hợp chất triectpen mới là

3-acetyl ursa-14:15- en-16-one và lanosterol-11-one acetate từ loài F fistulosa

thu thập tại Vườn quốc gia Cúc Phương [41] Tiếp theo, một hợp chất sesquitecpen mới là verrucarin L acetate được xác định từ loài này vào năm

2002 Một điều rất đáng quan tâm là hợp chất này có tác dụng kháng ký sinh

trùng sốt rét Plasmodium falciparum rất cao với giá trị IC50 < 1 ng/ml Hoạt tính của hợp chất này cao hơn cả chloroquine, artemisinin và quinine

Gần đây, dịch chiết metanol của lá cây đề F religiosa được chứng minh

có hoạt tính kháng viêm mạnh mẽ Dịch chiết loài này có thể có tác dụng bảo vệ thần kinh chống lại sự viêm, kìm hãm sự sản sinh tác nhân điều tiết viêm như

NO và các cytokine tiền viêm trong tế bào thần kinh đệm (macroglia) chuột hoạt hóa Các kết quả trên gợi mở cho các nghiên cứu phát triển các dược ph m có tác dụng phòng ngừa một số bệnh thoái hóa thần kinh chẳng hạn như bệnh Parkinson [29] Các nghiên cứu về thành phần hóa học cây đề của nhóm các nhà khoa học thuộc Viện Hóa học các Hợp chất Thiên nhiên đã xác định được một số

hợp chất nor-isoprenoid và lignan Trong đó các hợp chất lignan là (+)-pinoresinol

và syringaresinol O-β-D-glucopyranoside thể hiện hoạt tính chống ôxi hóa mạnh

trên hệ DPPH với giá trị ED50 tương ứng là 16,90 và 16,93 µM [4]

1.2.3 Hoạt tính sinh học

Nhựa lá, rễ, vỏ cây gừa được dùng làm thuốc chữa trị đau đầu, đau nhức răng, các chỗ sưng đau Rễ khí sinh dùng sắc uống chữa cảm mạo, viêm amygdal, đau nhức khớp xương, đòn ngã đau Nhựa từ lá và vỏ được dùng làm thuốc chữa bệnh đau viêm gan và tiêu chảy Nước sắc từ lá dùng làm thuốc uống chữa cảm cúm, ho gà, viêm khí quản, viêm ruột cấp, sốt rét [6]

Lá cây Đa búp đỏ thường dùng để giải cảm cho ra mồ hôi Tua rễ lợi tiểu mạnh, thường dùng chữa phù nề, cổ trướng do xơ gan; mủ dùng chữa mụn nhọt [6] Nghiên cứu mới đây cho thấy, nhựa cây đa búp đỏ thể hiện hoạt tính chống sán máng Phân tích GC-MS dầu lá cây Đa búp đỏ trồng ở Nigeria cho thấy các thành phần chính là 6,10,14-trimethyl-2- pentadecanone (25.9%), geranylacetone (9.9%), heneicosene (8.4%) và 1,8-cineole (8.2%) Năm 2012, hai hợp chất ba hợp chất mới là ficusamide, ficusoside và elasticoside đã được phân lập từ vỏ rễ khí sinh cây Đa búp đỏ Kết quả đánh giá hoạt tính cho thấy ficusamide thể hiện hoạt tính gây độc tế bào trung bình trên dòng tế bào ung thư phổi A549 và hoạt tính kháng khu n mạnh trên chủng [23]

Staphylococcus saprophyticus, trong khi elasticoside thể hiện hoạt tính

mạnh trên chủng Enterococcus faecalis

1.2.4 Thành phần hóa học loài Ficus hirta Vahl

Loài F hirta Vahl chứa các hợp chất alkaloid, flavonoid, cumarin,

terpenoid, các dẫn xuất của acid benzoic…

Năm 2017, phân lập được 2 hợp chất phenolic mới (97, 98) từ gốc của

loài F hirta [28] và 29 hợp chất là các dẫn xuất phenolic trong đó có 4 chất

mới (99-102) từ loài F hirta Vahl [10, 16]

Bảng 1.11: Một số hợp chất (97-101) phân lập từ loài F hirta Vahl

(100) (Z)-3-[5-(6-methoxy) benzofuranyl] propenoic acid

D-glucopyranoside)-7-(102)

1-O-β-D-glucopyranosyl-2-O-[2-methoxy-4-phenylaldehyde]

Chương 2 THỰC NGHIỆM 2.1 Đối tượng nghiên cứu

Chúng tôi tiến hành khảo sát thực địa, thu thập thông tin, thu hái nguyên liệu

lá của loài Ficus hirta Vahl Được thu hái tại huyện Bắc Sơn- Lạng Sơn vào

tháng 8 năm 2019 do T.S Nguyễn Thế Anh, Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học và công nghệ Việt Nam xác định tên khoa học

2.2 Hóa chất, thiết bị

2.2.1 Hóa chất

2.2.1.1 Hóa chất dùng để phân lập các chất từ mẫu lá của loài F hirta Vahl

Sử dụng dung môi ethyl acetate, n-hexan, methanol ngâm để chiết mẫu

Sắc ký bản mỏng phân tích: sử dụng bản mỏng nhôm tráng sẵn silicagel 60 F254, Merck, có độ dày 0,2 mm

Sắc ký cột thường: sử dụng silicagel cỡ hạt 197-400 mesh (0,040-0,063 mm)

Sắc ký cột nhanh: sử dụng silicagel cỡ hạt 70-200 mesh

Bản mỏng: được kiểm tra bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng ngắn và dài (254; 365 nm), sau đó hiện màu bằng thuốc thử vanillin - H2SO4, hơ nóng trên bếp điện cho đến khi các vệt trên bản mỏng hiện màu rõ nhất

2.2.1.2 Hóa chất dùng để thử hoạt tính ức chế Nitric oxide

- Lipopolysaccharides (LPS) từ Escherichia-coli của Sigma Chemical

Co (St Louis, MO, USA) Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS) were from Life Technologies, Inc., (Gaithersburg,

MD, USA) Sodium nitrite, sulfanilamide, N-1-napthylethylenediamine

dihydrochloride and dimethyl sulphoxide (DMSO) của Sigma Chemical Co (St Louis, MO, USA), các hóa chất cần thiết khác của các hãng Sigma, GIBCO, Invitrogen, Promega v.v

- Dòng tế bào RAW 264.7 do GS TS Domenico Delfino, Đại học Perugia,

2.2.1.3 Hóa chất dùng để xác định hoạt tính kháng vi sinh mẫu lá của loài

F hirta Vahl

- Bacillus subtilis (ATCC 6633): là trực khu n gram ( ), sinh bào tử, thường

không gây bệnh

- Staphylococcus aureus (ATCC 13709): cầu khu n gram ( ), gây mủ các

vết thương, vết bỏng, gây viêm họng, nhiễm trùng có mủ trên da và các cơ quan nội tạng

- Lactobacillus fermentum (N4): vi khu n gram ( ), là loại vi khu n đường

ruột lên men có ích, thường có mặt trong hệ tiêu hóa của người và động vật

- Escherichia coli (ATCC 25922): vi khu n gram (-), gây một số bệnh về

đường tiêu hóa như viêm dạ dày, viêm đại tràng, viêm ruột, viêm lỵ trực khu n

- Pseudomonas aeruginosa (ATCC 15442): vi khu n gram (-), trực khu n

mủ xanh, gây nhiễm trùng huyết, các nhiễm trùng ở da và niêm mạc, gây viêm đường tiết niệu, viêm màng não, màng trong tim, viêm ruột

- Salmonella enterica: vi khu n gram (-), vi khu n gây bệnh thương hàn,

nhiễm trùng đường ruột ở người và động vật

- Candida albicans (ATCC 10231): là nấm men, thường gây bệnh tưa lưỡi

ở trẻ em và các bệnh phụ khoa

MHB (Mueller-Hinton Broth), MHA (Mueller-Hinton Agar); TSB (Tryptic Soy Broth); TSA (Tryptic Soy Agar) cho vi khu n; SDB (Sabourand-2% dextrose broth) và SA (Sabourand - 4% dextrose agar) cho nấm

Đĩa 96 giếng, pipet, eppendorf và các thiết bị phụ trợ khác

Cân phân tích, máy đo OD Microplate Reader

Bộ Griess Reagent System (Promega Coopertion, WI, USA)