Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm

Glucosamin là một hoạt chất quý được sản xuất từ vỏ tôm thông qua nguyên liệu trung gian là chitin hoặc chitosan. Glucosamin chủ yếu được sử dụng trong y học chữa bệnh thoái hoá khớp. Ở người già, chức năng cũng như cấu tạo của khớp có nhiều thay đổi, các tế bào của khớp thoái hoá, trở nên kém linh động. Gân và dây chằng phân đoạn, đóng vôi, khô cằn, trở nên kém bền bỉ, kém co dãn, không chịu được căng lực và dễ bị tổn thương. Sụn trở nên đục màu, xơ hóa, gai xương, khô nước, rạn nứt với nhiều tinh thể canxi làm khớp đau. Khớp co duỗi khó khăn vì màng hoạt dịch mỏng và khô dần

Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Nguyễn Đức Duy ………………………………………………………………………… Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm ĐẶT VẤN ĐỀ Giáp xác nguồn nguyên liệu thủy sản dồi chiếm 1/3 tổng sản lượng nguyên liệu thủy sản Việt Nam Trong công nghiệp chế biến thủy sản xuất khẩu, tỷ lệ cấu mặt hàng đông lạnh giáp xác chiếm từ 70 - 80% công suất chế biến Hàng năm nhà máy chế biến thải bỏ lượng phế liệu giáp xác lớn khoảng 70.000 tấn/năm [3] Nguồn phế liệu nguyên liệu quan trọng cho công nghiệp sản xuất chitin 1, chitosan 2, glucosamin sản phẩm có giá trị khác Do việc nghiên cứu phát triển sản xuất sản phẩm từ vỏ tôm quan trọng, để nâng cao giá trị sử dụng phế liệu làm môi trường Sản phẩm chitin - chitosan có nhiều công trình nghiên cứu ứng dụng thực tế Chitin có ứng dụng làm da nhân tạo nguyên liệu trung gian cho chất quan trọng chitosan, glucosamin chất có giá trị khác Chitosan có nhiều ứng dụng ngành công nghiệp, nông nghiệp, y dược bảo vệ môi trường như: sản xuất glucosamin, khâu phẫu thuật, thuốc kem, vải, sơn, chất bảo vệ hoa quả, bảo vệ môi trường…Với khả ứng dụng rộng rãi chitin – chitosan mà nhiều nước giới Việt Nam nghiên cứu sản xuất sản phẩm Glucosamin hoạt chất quý sản xuất từ vỏ tôm thông qua nguyên liệu trung gian chitin chitosan Glucosamin chủ yếu sử dụng y học chữa bệnh thoái hoá khớp Ở người già, chức cấu tạo khớp có nhiều thay đổi, tế bào khớp thoái hoá, trở nên linh động Gân dây chằng phân đoạn, đóng vôi, khô cằn, trở nên bền bỉ, co dãn, không chịu căng lực dễ bị tổn thương Sụn trở nên đục màu, xơ hóa, gai xương, khô nước, rạn nứt với nhiều tinh thể canxi làm khớp đau Khớp co duỗi khó khăn màng hoạt dịch mỏng khô dần [1] Trước đây, điều trị bệnh thoái hóa khớp người ta thường dùng thuốc thuộc nhóm corticoid nhóm kháng viêm giảm đau không steroid NSAID (Non - Steroidal Anti - Inflammatory Drugs), thuốc thuộc Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm nhóm điều trị triệu chứng có nhiều tác dụng phụ Với thuốc thuộc nhóm corticoid thường gây nên tác dụng phụ: loãng xương, viêm loét dày, giảm miễn dịch… Đối với NSAID gây viêm loét dày…[12] Từ thập kỷ 90 người ta phát glucosamin phục hồi sụn khớp, tức chữa nguyên bệnh viêm, thoái hoá khớp [2] Đã có nhiều công trình nghiên cứu với nhiều thử nghiệm lâm sàng chứng minh tác dụng điều trị tận gốc bệnh thoái hoá khớp glucosamin, dạng phối hợp với dược liệu thiên nhiên Trên thực tế glucosamin thường sử dụng dạng: glucosamin hydroclorua 4, glucosamin sulfat 5, N - Acetyl glucosamin Hiện thuốc chứa glucosamin lưu hành 70 quốc gia Tại Việt Nam, glucosamin thành phẩm từ glucosamin chủ yếu nhập xu sử dụng ngày nhiều Trong nguồn nguyên liệu (vỏ giáp xác) chủ yếu để điều chế glucosamin dồi Để tận dụng nguồn nguyên liệu phế thải, tạo nguồn nguyên liệu cho việc sản xuất thuốc chữa bệnh thoái hoá khớp nguyên liệu cho việc nghiên cứu ứng dụng khác glucosamin đặt vấn đề tiến hành đề tài “Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm” Mục tiêu đề tài nhằm giải vấn đề sau : Phân lập chitin – chitosan từ vỏ tôm phế thải Điều chế glucosamin hydroclorua từ chitin chitosan Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm Chương I: TỔNG QUAN 1.1 Nguồn gốc tồn chitin - chitosan tự nhiên Chitin - chitosan polysacharit tồn tự nhiên với sản lượng lớn (đứng thứ hai sau xellulose) Trong tự nhiên chitin tồn động vật thực vật Trong động vật, chitin thành phần cấu trúc quan trọng vỏ số động vật không xương sống như: côn trùng, nhuyễn thể, giáp xác giun tròn Trong động vật bậc cao monome chitin thành phần chủ yếu mô da giúp cho tái tạo gắn liền vết thương da Trong thực vật chitin có thành tế bào nấm họ zygenmyctes, sinh khối nấm mốc, số loại tảo [13] Chitin - chitosan polysacharit có đạm không độc, có khối lượng phân tử lớn Cấu trúc chitin tập hợp monosacharit (N-acetyl-β-D-glucosamine) liên kết với cầu nối glucozit hình thành mạng sợi có tổ chức Hơn chitin tồn trạng thái tự luôn nối cầu nối đẳng trị (coralente) với protein, CaCO hợp chất hữu khác Hình : Chitin vỏ tôm Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm Trong loài thủy sản đặc biệt vỏ tôm, cua, ghẹ, hàm lượng chitin - chitosan chiếm cao đao động từ 14 - 35% so với trọng lượng khô [5] Vì vỏ tôm, cua, ghẹ nguồn nguyên liệu để sản xuất chitin - chitosan Về mặt lịch sử, chitin Braconnot phát vào năm 1821, cặn dịch chiết từ loại nấm Ông đặt tên cho chất “Fungine” để ghi nhớ nguồn gốc Năm 1823 Odier phân lập chất từ bọ cánh cứng mà ông gọi chitin hay “chiton”, tiếng Hy lạp có nghĩa vỏ giáp, ông không phát có mặt nitơ Cuối Odier Braconnot đến kết luận chitin có dạng công thức giống với xellulose CH2OH O 1) O CH2OH O O OH NHCOCH3 CH2OH O 2) O NHCOCH3 CH2OH O O OH NH2 CH2OH O O CH2OH O O OH O OH NH2 3) O OH O OH OH OH H× nh :1) Chitin; 2) Chitosan; 3) Xellulose 1.2 Cấu trúc hoá học, tính chất lý hoá chitin 1.2.1 Cấu trúc hoá học chitin Chitin có cấu trúc tinh thể chặt chẽ đặn Bằng phương pháp nhiễu xạ tia X Người ta chứng minh chitin tồn ba dạng cấu hình :α, β, γ - chitin [15] Các dạng chitin xếp khác hướng mắt xích (N-acetyl-D-glucosamin) mạch Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm Có thể biểu diễn mắt xích mũi tên cho phần đầu mũi tên nhóm –CH2OH, phần đuôi nhóm –NHCOCH 3, cấu trúc α, β, γchitin mô tả sau: α - Chitin β - Chitin γ - Chitin α - chitin có cấu trúc mạch xếp ngược chiều đặn, nên liên kết hydro lớp hệ chuỗi, có liên kết hydro lớp chuỗi thuộc lớp kề nên bền vững Do mắt xích xếp đảo chiều, xen kẽ thuận lợi mặt không gian lượng Đây dạng phổ biến tự nhiên β, γ - chitin mắt xích ghép với theo kiểu song song (β - chitin) hai song song ngược chiều (γ - chitin), lớp loại liên kết hydro Dạng β - chitin chuyển sang dạng α - chitin nhờ trình axetyl hóa cho cấu trúc tinh thể bền vững Qua nghiên cứu thủy phân chitin enzym hay axit HCl đậm đặc người ta thấy chitin có cấu trúc polyme tạo thành từ đơn vị N-Acetyl-β-D-glucosamine liên kết với liên kết β-(1-4) glucozit Công thức cấu tạo chitin: O OH NHCH2CH3 O O HO NHCCH3 O O O O HO OH O HO NHCH2CH3 OH O Tên gọi : Poly(1-4)-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucose; Poly(1-4)-2acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranose Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm Công thức phân tử: [C8H13O5N]n Phân tử lượng : Mchitin = (203,09)n 1.2.2 Tính chất lý hoá chitin [3] Chitin có màu trắng hay màu trắng phớt hồng, dạng vảy dạng bột, không mùi, không vị, không tan nước, môi trường kiềm, axit loãng dung môi hữu ete, rượu …Nhưng tan dung dịch đặc nóng muối thioxianat liti (LiSCN) thioxianat canxi (Ca(SCN) 2) tạo thành dung dịch keo, tan hệ dimetylacetamid - LiCl 8% [4], tan hexafluoroisopropyl alcohol (CF3CHOHCF3) hexafluoracetone sesquihydrate (CF3COCF3.H2O) [16] Chitin có khả hấp thu tia hồng ngoại có bước sóng 884 - 890cm-1 Chitin ổn định với chất oxy hoá mạnh thuốc tím (KMnO 4); oxy già (H2O2); nước javen (NaOCl - NaCl)…, lợi dụng tính chất mà người ta sử dụng chất oxy hoá để khử màu cho chitin Khi đun nóng dung dịch NaOH đậm đặc (40 - 50%), nhiệt độ cao chitin bị gốc acetyl tạo thành chitosan: Chitn CH2OH OH NHCOCH3 NaOH 40-50% T0cao CH2OH Chitosan OH NH2 Khi đun nóng axit HCl đậm đặc, nhiệt độ cao chitin bị cắt mạch thu glucosamin: CH2OH Chitn OH NHCOCH3 HCl 36% T0cao CH2OH Glucosamin OH NH2 Phản ứng este hóa : - Chitin tác dụng với HNO3 đậm đặc cho sản phẩm chitin nitrat - Chitin tác dụng với anhydrit sunfuric pyridin, dioxan N,N-dimetylanilin cho sản phẩm chitin sunfonat 1.3 Cấu trúc hoá học, tính chất lý hoá sinh độc tính chitosan Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm 1.3.1 Cấu trúc hoá học chitosan [3] Trong số dẫn xuất chitin chitosan dẫn xuất quan trọng có hoạt tính sinh học cao có nhiều ứng dụng thực tế Việc sản xuất chitosan tương đối đơn giản, không cần dung môi, hóa chất độc hại, đắt tiền Chitosan thu phản ứng deacetyl hóa chitin, biến đổi nhóm N-acetyl thành nhóm amin vị trí C2 Do trình khử acetyl xảy không hoàn toàn nên người ta qui ước độ deacetyl hóa (degree of deacetylation) DD > 50% gọi chitosan, DD < 50% gọi chitin [13] Chitosan có cấu trúc tuyến tính từ đơn vị 2-amino-2-deoxy-β-Dglucosamine liên kết với liên kết β-(1-4) glucozit Công thức cấu tạo chitosan: OH O O HO NH2 O O O HO OH NH2 O HO NH2 OH Tên gọi khoa học: Poly(1-4)-2-amino-2-deoxy-β-D-glucose; poly(1-4)-2amino-2-deoxy-β-D-glucopyranose Công thức phân tử: [C6H11O4N]n Phân tử lượng: Mchitosan = (161,07)n Qua cấu trúc chitin - chitosan ta thấy chitin có nhóm chức hoạt động -OH (H nhóm hydroxyl bậc linh động H nhóm hydroxyl bậc vòng cạnh) chitosan có nhóm chức hoạt động -OH, -NH 2, chitosan dễ dàng tham gia phản ứng hóa học chitin Trong thực tế mạch chitin - chitosan đan xen nhau, tạo nhiều sản phẩm đồng thời, việc tách phân tích chúng phức tạp Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm 1.3.2 Tính chất lý hoá chitosan [3] Chitosan có màu trắng ngà màu vàng nhạt, tồn dạng bột dạng vảy, không mùi, không vị, nhiệt độ nóng chảy 309 - 3110C Chitosan có tính kiềm nhẹ, không tan nước, kiềm hoà tan dung dịch axit hữu loãng như: axit acetic, axit fomic, axit lactic…, tạo thành dung dịch keo nhớt suốt Chitosan hoà tan dung dịch axit acetic - 1.5% Độ nhớt chitosan dung dịch axit loãng liên quan đến kích thước khối lượng phân tử trung bình chitosan (đây tính chất chung tất dung dịch polyme) [6] Chitosan kết hợp với aldehit điều kiện thích hợp để hình thành gel, sở để bẫy tế bào, enzym Chitosan phản ứng với axit đậm đặc, tạo muối khó tan Chitosan tác dụng với iod môi trường H2SO4 cho phản ứng lên màu tím Một số dẫn xuất chitosan [26]: OH OH O O O HO + NH Chitosan salts O HO O Na+ -O O HO O HN O NH Crosslinked Chitosan OCH2CH2SO3O O O HO + NH3 Sulfoethylchitosan OCH2COOH O O O HO NHCH2COOH N,O-carboxymethylchitosan OCH2CH2CN O O O HO NHAc Cyanoethylchitin OCS2-Na+ O O O HO NHAc Chitin xanthogenate OH O OH O O O HO O N=CHR Schiff base OH O O HO OH O O O HO NH2 Chitosan NHR N-alkylchitosan O OH O HO O O NHCH2COOH N-carboxymethylchitosan OH O HO OCH2CHOHR O O O HO NHAc Hydroxyalkylchitin O O NHAc Chitin O-Na+ O O NHAc Alkalichitin O RH2CO OCH2R O O NHAc OCH2COOH O O O HO NHAc Carboxmethylchitin Alkylchitin Hình : Sơ đồ dẫn xuất từ chitin, chitosan Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm 1.3.3 Tính chất sinh học chitosan [5] Chitosan không độc, dùng an toàn cho người [18] Chúng có tính hoà hợp sinh học cao với thể [19], có khả tự phân huỷ sinh học [20] Chitosan có nhiều tác dụng sinh học đa dạng như: tính kháng nấm, tính kháng khuẩn với nhiều chủng loại khác nhau, kích thích phát triển tăng sinh tế bào, có khả nuôi dưỡng tế bào điều kiện nghèo dinh dưỡng, tác dụng cầm máu, chống sưng u [21] Ngoài ra, chitosan có tác dụng làm giảm cholesterol lipid máu, hạ huyết áp [22], điều trị thận mãn tính, chống rối loạn nội tiết [23] Với khả thúc đẩy hoạt động peptit - insulin, kích thích việc tiết insulin tuyến tụy nên chitosan dùng để điều trị bệnh tiểu đường Nhiều công trình công bố khả kháng đột biến, kích thích làm tăng cường hệ thống miễn dịch thể, khôi phục bạch cầu, hạn chế phát triển tế bào u, ung thư, HIV/AIDS, chống tia tử ngoại, chống ngứa… chitosan [24] 1.3.4 Độc tính chitosan [5] Vào năm 1968, K Arai cộng xác định chitosan không độc, số LD50 = 16g/kg cân nặng thể, không gây độc súc vật thực nghiệm người, không gây độc tính trường diễn [25] Nghiên cứu tiêm chitosan theo đường tĩnh mạch thỏ, tác giả kết luận: chitosan vật liệu hoà hợp sinh học cao, chất mang lý tưởng hệ thống vận tải thuốc, sử dụng cho đường uống, tiêm tĩnh mạch, tiêm bắp, tiêm da, mà sử dụng an toàn ghép mô [25] Dùng chitosan loại trọng lượng phân tử trung bình thấp để tiêm tĩnh mạch, không thấy có tích luỹ gan Loại chitosan có DD ≈ 50%, có khả phân huỷ sinh học cao, sau tiêm vào ổ bụng chuột, thải trừ dễ dàng, nhanh chóng qua thận nước tiểu, chitosan không phân bố tới gan lách Nhiều tác giả rõ lợi điểm chitosan: tính chất học tốt, không độc, dễ tạo màng, tự phân hủy sinh học, hòa hợp sinh học động vật mà mô thực vật, vật liệu y sinh tốt làm mau liền vết thương [27] Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 10 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm Hình 11 : Phổ 13C-NMR – glucosamin hydroclorua Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 38 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm 3.6 Khảo sát ảnh hưởng thời gian đến hiệu suất điều chế glu.HCl từ chitin Tiến hành phản ứng mục 3.4.1 làm bình cầu 250ml (5 lần) với lần 5g chitin, 40ml HCl 36%, nhiệt độ phản ứng 90 - 95 0C thực với điều kiện thời gian khác nhau: • Lần 1: thời gian phản ứng 1giờ • Lần 2: thời gian phản ứng • Lần 3: thời gian phản ứng • Lần 4: thời gian phản ứng • Lần 5: thời gian phản ứng Kết thu được trình bày bảng 3.5: Bảng 3.5: Ảnh hưởng thời gian đến hiệu suất phản ứng: Ts (h) Chitin(g) Glu.HCl(g) 2,93 2,97 3,05 3,14 5 3,11 H(%) 58,6 59,4 61,0 62,8 62,2 3.7 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất điều chế glu.HCl từ chitin Tiến hành phản ứng mục 3.4.1 làm bình cầu 250ml (3 lần) với lần 5g chitin, 40ml HCl 36%, thời gian phản ứng thực với điều kiện khoảng nhiệt độ khác • Lần 1: khoảng nhiệt độ 25 - 300C (nhiệt độ phòng) • Lần 2: khoảng nhiệt độ 55 - 600C • Lần 3: khoảng nhiệt độ 90 - 950C Kết thu được trình bày bảng 3.6: Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 39 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm Bảng 3.6 : Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất phản ứng: T0 (0C) 25 - 30 Chitin(g) Glu.HCl(g) Hiệu suất (%) - : không xác định 55 - 60 1,83 36,6 90 - 95 3,14 62,8 3.8 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ axit HCl đến hiệu suất điều chế glu.HCl từ chitin Tiến hành phản ứng mục 3.4.1 làm bình cầu 250ml (3 lần) với lần 5g chitin, thời gian phản ứng 4giờ, nhiệt độ phản ứng 90 - 950C thực điều kiện nồng độ axit hydrocloric khác nhau: • Lần 1: Nồng độ axit HCl 10% • Lần 2: Nồng độ axit HCl 20% • Lần 3: Nồng độ axit HCl 36% Kết thu được trình bày bảng 3.7: Bảng 3.7.Ảnh hưởng nồng độ axit HCl đến hiệu suất phản ứng HCl (%) Chitin (g) Glu.HCl (g) Hiệu suất (%) - : không xác định Nguyễn Đức Duy 10 - 20 - Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 36 3,14 62,8 40 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm Chương IV : KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 4.1 Điều chế chitin từ vỏ tôm 4.1.1 Quá trình khử khoáng Trong vỏ tôm, thành phần khoáng chủ yếu muối CaCO 3, MgCO3 Ca3(PO4)2 Nên người ta thường dùng loại axit HCl, H 2SO4… để khử khoáng Khi khử khoáng, dùng HCl cho hiệu cao Nếu dùng H2SO4 tạo muối khó tan nên sử dụng Phản ứng HCl để khử khoáng sau: MgCO3 + 2HCl = MgCl2 + CO2 + H2O CaCO3 + 2HCl = CaCl2 + CO2 + H2O Ca3(PO4)2 + 6HCl = 3CaCl2 + 2H3PO4 Trong trình rửa muối Cl- tạo thành rửa trôi, nồng độ axit HCl có ảnh hưởng lớn đến chất lượng chitosan thành phẩm, đồng thời ảnh hưởng lớn tới thời gian hiệu khử khoáng Nếu nồng độ HCl cao rút ngắn thời gian khử khoáng làm cắt mạch có tượng thủy phân liên kết β-(1-4) glucozit để tạo polyme có trọng lượng phân tử trung bình thấp, có bị thủy phân triệt để đến glucosamin Ngược lại nồng độ HCl thấp trình khử khoáng không triệt để thời gian xử lý kéo dài ảnh hưởng tới chất lượng sản phẩm Tỷ lệ nguyên liệu dung dịch axit HCl ảnh hưởng tới hiệu khử khoáng Vì vậy, chọn dung dịch HCl 10% với tỷ lệ chitin/HCl w/v = 1/5 thời gian khử khoáng 12 (qua đêm) để đảm bảo trình khử khoáng xảy hoàn toàn Sau khử khoáng tiến hành rửa trung tính, công đoạn có tác dụng rửa trôi hết muối, axit dư tan nước Quá trình rửa kết thúc dịch rửa cho pH=7 4.1.2 Quá trình loại bỏ protein Sau có vỏ tôm loại khoáng, tiến hành loại bỏ hoàn toàn protein dung dịch NaOH 3%, protein bị kiềm thủy phân thành amin tự Nguyễn Đức Duy Lớp CN Hoá Dược Hoá Chất BVTV K47 41 Đồ Án Tốt Nghiệp Nghiên cứu điều chế glucosamin từ vỏ tôm tan loại theo quy trình rửa trôi Lượng NaOH 3% cho vào đến ngập toàn vỏ tôm kiểm tra pH = 11 - 12 để đảm bảo việc loại bỏ protein hoàn toàn Đun nhiệt độ 90 - 95 0C khoảng 3,5 - (trong trình đun lưu ý vấn đề trào dung môi tạo bọt nhiều mùi bay khó chịu) Sản phẩm sau đun rửa nước thường nước cất đến pH = Tiếp tiến hành rửa trung tính, nhằm mục đích rửa trôi hết muối natri, amin tự NaOH dư Sấy khô 600C, thu chitin thô 4.1.3 Quá trình tẩy màu (loại bỏ astaxanthin) Chitin thô thu có màu hồng nhạt sắc tố astaxanthin Do chitin ổn định với chất oxy hoá thuốc tím (KMnO 4), oxy già (H2O2), nước javen (NaOCl+NaCl), Na2S2O3, CH3COCH3,…lợi dụng tính chất sử dụng KMnO4, H2O2 để khử màu cho chitin • Cách 1: Dùng hỗn hợp KMnO4 1% + C2H2O4 1% để tẩy màu Trước tiên cho chitin thô (phân lập từ 40g vỏ tôm) vào cốc thuỷ tinh, sau cho dung dịch KMnO4 1% (10ml) vào, khuấy đảo cho toàn chitin ngấm dung dịch KMnO4 1%, để nhiệt độ phòng thời gian Hỗn hợp rửa sạch, sản phẩm chitin lúc có màu tím KMnO Để loại màu tím sử dụng 50ml axit oxalic 1% ((COOH) 2), để tăng nhanh khả tẩy màu đun nóng hỗn hợp dung dịch nhiệt độ 50 - 60 0C đến chitin có màu trắng hoàn toàn Theo cách số tác giả sản phẩm phản ứng có tạo Mn 2+, mà chitin - chitosan có nhóm –NHCOCH nhóm –NH2, nhóm tạo phức với Mn2+ gây tượng khâu mạch làm ảnh hưởng đến phản ứng chuyển hoá • Cách 2: Dùng H2O2 1% để tẩy màu Chitin thô (phân lập từ 40g vỏ tôm) cho vào cốc thuỷ tinh, sau cho 60ml dung dịch H 2O2 1% vào ngập toàn chitin, để qua đêm nhiệt độ phòng Chitin thu có màu trắng phớt hồng Chúng dùng H2O2 với nồng độ