Cây bọt ếch (Glochidion obliquum Decne.) là loài cây phổ biến ở các nước Việt Nam, Trung Quốc và được dùng làm thuốc chữa bệnh, đồ gỗ ….nhưng chưa được nghiên cứu nhiều về thành phần hóa học. Đã tiến hành sử dụng các phương pháp phổ hiện đại: phổ tử ngoại (UV), phổ hồng ngoại (IR), phổ khối lượng va chạm electron (EIMS), phổ khối lượng phun mù (ESI MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H NMR, 13C NMR, DEPT, HMBC, HSQC và COSY để xác định cấu trúc các hợp chất tách được. Các kết quả phổ đã cho phép khẳng định chất 85 là taraxerol, 86 là axit rotundic, 87 là pedunculoside.
1 Mở đầu Lý chọn đề tài Nớc ta có diện tích khoảng 330.000 km2, nằm trung tâm Đông Nam châu trải dài 15o độ vĩ (1650 km), có khí hậu nhiệt đới gió mùa, nhiệt độ trung bình hàng năm cao (trên 22oC), lợng ma hàng năm lớn (trung bình 1200-2800 mm), độ ẩm tơng đối cao (trên 80%) Những đặc thù môi trờng nh tạo cho nớc ta hệ thực vật phong phú đa dạng Theo số liệu thống kê gần hệ thực vật Việt Nam có 10.000 loài [7], có khoảng 3.200 loài đợc sử dụng y học dân tộc 600 loài cho tinh dầu [3] Đây nguồn tài nguyên thiên nhiên quý báu đất nớc Tác dụng chữa bệnh cỏ hợp chất tự nhiên có chứa chúng định Nói đến nguồn tài nguyên thực vật làm thuốc phong phú đất nớc ta nói đến khả sinh tổng hợp, chuyển hoá tích luỹ hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học nguồn gen thực vật Chúng tiến hành nghiên cứu bọt ếch (Glochidion obliquum) loài phổ biến nớc Việt Nam, Trung Quốc đợc dùng làm thuốc chữa bệnh, đồ gỗ nhng cha đợc nghiên cứu nhiều thành phần hoá học Chính chọn đề tài Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ bọt ếch (Glochidion obliquum) Nghệ An từ góp phần xác định thành phần hoá học bọt ếch tìm nguồn nguyên liệu cho ngành dợc liệu, hơng liệu Nhiệm vụ nghiên cứu Trong đề tài này, có nhiệm vụ: - Chiết chọn lọc với dung môi thích hợp để thu đợc hỗn hợp hợp chất cây bọt ếch - Sử dụng phơng pháp sắc ký kết tinh phân đoạn để phân lập hợp chất - Sử dụng phơng pháp phổ để xác định cấu trúc hợp chất thu đợc Đối tợng nghiên cứu Đối tợng nghiên cứu bọt ếch (Glochidion obliquum) thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) Việt Nam Chơng Tổng quan 1.1 Chi Glochidion 1.1.1 Đặc điểm thực vật phân loại Glochidion l chi tơng đối lớn thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae), với gần 300 loài phân bố từ Madagascar đến đảo thuộc Thái Bình Dơng phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới châu Hơn 20 loài thuộc chi đợc tìm thấy Việt Nam đợc dùng làm thuốc chữa bệnh cúm, lỵ, sốt rét, thấp khớp khó tiêu [1], [2] Bảng 1.1: Phân bố loài thuộc chi Glochidion Việt Nam TT Tên khoa học Tên Việt Glochidion Nam Bọt ếch annamensis Beille Glochidion trung Sóc mền arnottianum Muell.- Phân bố Đà Nẵng, Khánh Hòa, Ninh Thuận Ninh Bình, ấn Độ, Trung Quốc Arg Glochidion Sóc assam assamicum (Muell.- Quảng Ninh, ấn Độ, Mianma, Thái Lan Arg.) Hook.f Glochidion Bọt ếch Bạch Mã bachmaensis Thin Glochidion cuống Bọt ếch Hà Tây balansae Beille Glochidion to Bọt ếch đỏ Nam Bộ (ven sông Mê coccineum (Buch.- Kông), Mianma, Lào, Thái Ham.) Muell.-Arg Glochidion daltonii Bọt ếch Lan, Campuchia Lạng Sơn, Bắc (Muell.-Arg.) Kurz kiếm Ninh Bình, Thanh Hóa, Giang, Kon Tum, Đắc Lắc, Lâm Đồng, Đồng Nai ấn Độ, Himalaya, Mianma, Lào, Glochidion Bọt ếch Campuchia, Thái Lan Lào Cai, Quảng Ninh, eriocarpun Champ lông Tuyên Quang, Ninh Bình, Kon Tum Mianma, Thái Lan, đông ấn Độ, Trung Quốc, Glochidion Sóc đẻ fagifolium Miq Lào, Nhật Bản Cao Bằng, Ninh Thuận, Campuchia, Khánh Bà Hòa, Rịa - Vũng Tàu ấn Độ, Mianma, 10 Glochidion gamblei Sóc Trung Quốc, Thái Lan Cao Bằng, Lạng Sơn, Hòa Hook.f gamblei Bình, Hà Tây, Ninh Bình, Thanh Hóa ấn Độ, 11 12 13 14 Glochidion Sóc chụm Thái Lan Khắp Việt Nam ấn Độ, glomerulatum Mianma, (Miq.) Boerl Glochidion Malayxia, Indonexia Khắp Việt Nam Sóc lông Thái Lan, hirsutum (Roxb.) Himalaya, ấn Độ, Trung Voigt Quốc, Đài Loan, Lào, Campuchia, Thái Lan, Glochidion Sóc hồng Indonexia Thái Nguyên, Lâm Đồng hongkongensis kông Lào, Campuchia, Thái Lan, Muell.-Arg Glochidion Bọt ếch Đài Loan, Nhật Bản Lạng Sơn, Phú Thọ, Vĩnh lanceolarium mác Phúc, (Roxb.) Voigt Nguyên, Bắc Cạn, Nghệ An, Thái Kon Tum, Gia Lai, Tây Ninh, Kiên Giang ấn Độ, Trung Quốc, 15 Glochidion littorale Blume Trâm bột Lào, Campuchia, Thái Lan Quảng Ninh, Hòa Bình, Hà Nội, TP Hồ Chí Minh, Bà Rịa Vũng Tàu ấn Độ, Mianma, Xri Lanka, Trung 16 Glochidion Quốc, Lào, Campuchia, Thái Lan, Malayxia, Indonexia, Philippin Bọt ếch lng Lạng Sơn, Bắc Cạn, Thái lutescens Blume bạc Nguyên, Phú Thọ, Vĩnh Phúc, Hòa Bình, Ninh Bình, Thanh Hóa, Thừa Thiên-Huế, Đà Nẵng, Khánh Hòa, Ninh Thuận Thái Lan, Mianma, Trung Quốc, 17 Glochidion Bòn bọt opbliquin Decne Malayxia, Indonexia, New Ghine Lạng Sơn, Phú Thọ, Vĩnh Phúc, Nghệ An, Thanh Hóa, Tây Ninh, Đồng Nai, Kiên 18 Glochidion Sóc che obscurum (Roxb ex 19 Himalaya, Campuchia, Indonexia Cao Bằng ấn Độ, Mianma, Trung Quốc, Willd.) Blume Glochidion pilosum Bọt ếch Đà Nẵng, Quảng (Lour.) Merr trung Kon Tum, Gia Lai, Khánh Sóc cứng Hòa, Ninh Thuận Nam Bộ Việt Nam ấn Độ, Sóc đỏ Xri Lanka Khắp Việt Nam ấn Độ, 20 Glochidion rigidum 21 Muell.-Arg Glochidion rubrum Blume Glochidion Nam, Mianma, Lào, Campuchia, Thái 22 Giang Lan, Malayxia, Indonexia, Philippin Sóc tròn Lạng Sơn đến Thanh sphaeroginum Hóa Himalaya, ấn Độ, (Muell.-Arg.) Kurz Mianma, Lào, Campuchia 23 Glochidion Bọt ếch Nam Bộ 24 talmyanum Beille Glochidion nam Bọt ếch ba Ninh Bình 25 triloculare Merr Glochidion ô Sóc lông Quảng Ninh, Hải Dơng, velutinum Wigh Phú Thọ, Hà Tây, Ninh Bình, Lâm Đồng ấn Độ, Mianma, Lào, Campuchia, 26 Glochidion Sóc tích Thái Lan Cao Bằng, Lạng Sơn, Hà zeylanicum A Juss lan Nam, Ninh Bình, Bình Dơng ấn Độ, Himalaya, Xri Lanka, Lào, Malayxia 1.1.2 Thành phần hoá học Những loài chứa loại hợp chất bao gồm sesquiterpenoit [13], [14], triterpenoit, [15-19], steroit [20], flavanoit [21], alkaloidal glucosit [22] lignan [23], [24] O O O O O H HO O HO (1) Glochidiolide Phyllanthurinolactone OGlc (2) O O O O O O OGlc OGlc OGlc (3) Glochidionolactone A Glochidionolactone C (4) Glochidionolactone B (5) O O O OGlc-O O CO HO OH OGlc OH (6) Glochidionolactone D O (7) Glochidionolactone E O O OGlc-O O CO HO OH OH OGlc (8) Glochidionolactone F Dihydroglochidionolactone E (9) O O OGlc O O O H (10) Isoglochidiolide (11) Acumiaminoside OH Glc(OAc)4 O H2N O H2N HO HO O H2N O (12) Acuminaminoside tetraacetate pentaacetate O (13)Acuminaminoside Glc(OAc)4 O OGlc AcHN CH2COOCH3 O (14) Acuminaminoside aglycone Glochidacuminoside A HO OGlc CH2COOH (15) O OH OH (16) 2-O--glucopyranoside, Glochidacuminoside B O H2C COOH2C OH (17) CH2COOH 10 2-hydroxyphenylacetic axit HO OCOCH2 H2C COOH2C OH O OH OH OH (18) Glochidacuminoside C CH2OH O OH OH CN O O CO O CH2OH OH OH HO OH O RO OH (19) Glochidacuminoside D (20) Glochierioside A (R= -Dglucopyranosyl-(13)--Larabinopyranoside) (21) Glochierioside B (R= -Dglucopyranosyl-(13)- -D -xylopyranoside) H H O H HO HO 71 Hình 4.32: Phổ MS hợp chất 83 Hình 4.33: Phổ 1H-NMR hợp chất 83 72 Hình 4.34: Phổ 1H-NMR hợp chất 83 Hình 4.35: Phổ 1H-NMR hợp chất 83 73 Hình 4.36: Phổ 13 Hình 4.37: Phổ 13 C-NMR hợp chất 83 C-NMR hợp chất 83 74 Hình 4.38: Phổ DEPT hợp chất 83 Hình 4.39: Phổ DEPT hợp chất 83 75 Hình 4.29: Phổ HMBC hợp chất 83 76 Hình 4.29: Phổ HMQC hợp chất 83 77 Hình 4.29: Phổ HSQC hợp chất 83 78 79 Hình 4.29: Phổ HSQC hợp chất 83 Hình 4.29: Phổ COSY hợp chất 83 80 Kết luận Nghiên cứu thành phần hoá học bọt ếch Việt Nam thu đợc số kết nh sau: - Bằng phơng pháp ngâm chiết với dung môi chọn lọc cất thu hồi dung môi thu đợc cao tơng ứng cao hexan (11g) etylaxetat (129g), cao butanol (143g), pha nớc - Phân lập hợp chất từ cao etyl axetat việc sử dụng phơng pháp sắc ký silicagel kết tinh phân đoạn thu đợc chất 81, 82 83 - Đã tiến hành sử dụng phơng pháp phổ đại: phổ tử ngoại (UV), phổ hồng ngoại, phổ khối lợng va chạm electron (EI-MS), phổ khối lợng phun mù (ESI-MS), phổ cộng hởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC COSY để xác định cấu trúc hợp chất tách đợc Các kết phổ cho phép khẳng định chất 81 taraxerol, 82 rotundic, 83 pedunculoside 81 Tài liệu tham khảo Tiếng Việt Nguyễn Tiến Bân (Chủ biên) (2003), Danh lục loài thực vật Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Vũ Văn Chuyên, Lê Trần Chấn, Trần Hợp (1987), Địa lý họ Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Thợng Dong ngời khác (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dợc, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Trần Đình Đại (1998), Khái quát hệ thực vật Việt Nam Hội thảo Việt-Đức Hoá học hợp chất thiên nhiên, Hà Nội, 16-18 April, tr 17-27 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phơng pháp nghiên cứu hoá học thuốc, Nhà xuất Y học, Hà Nội Phạm Hoàng Hộ (1992), Cây cỏ Việt Nam, Montreal Trần Văn Sung (2002) Phổ cộng hởng từ hạt nhân hoá hữu Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Ngha Thìn (2004), Họ Thầu dầu 82 (Euphorbiaceae), Thực vật chí Việt Nam, Flora of Vietnam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Đình Triệu (1999), Các phơng pháp vật lý ứng dụng hoá học, Nhà xuất Đại học quốc gia Hà 10 Nội Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng, Trần Thị Mỹ Linh, Phạm Hùng Việt (1985), Các phơng pháp sắc ký, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Tiếng Anh 11 Delectis Florae Reipublicae Popularis Sinicae Edita, MFlora Reipublicae Popularis Sinicae N, Beijing Science 12 Press, 1999, Vol 44, p 63 Nguyen Tien Ban, Ed Checklist of plant species of 13 Vietnam, Agricultural Publishing House, 2003, Hanoi H T Xiao, X Y Hao, X W Yang, Y H Wang,Y Lu, Y Zhang, S Gao, H P He, X J Hao (2007), Bisabolanetype sesquiterpenoids from the rhizomes of Glochidion 14 coccineum, Helv Chim Acta, 90, 164170 H T Xiao , H P He, J Peng, Y H Wang, X W Yang, X J Hu, X Y Hao, X J Hao (2008), Two new norbisabolane sesquiterpenoid 15 glycosides from Glochidion coccineum, J Asian Nat Prod Res., 10, 15 Ganguly A K., Govindachari T R., Mohamed P A., Rahimtulla A D and Viswanathan N (1966), Chemical constituents of Glochidion hohenackeri, Tetrahedron, 16 22 (4) 1513-1519 Srivastava R., Dinesh K K (1986), Glochidioside, a triterpene glycoside from Glochidion heyneanum, 83 17 Phytochemistry, 25 (11) 2672-2674 Srivastava R., Dinesh K K (1988), Triterpenoids from Glochidion heyneanum, Phytochemistry, 27 (11) 3575- 18 3578 Puapairoj P., Naengchomnong W., Kijjoa A., Pinto M M., Pedro M., Nascimento M S., Silva A M., Herz W (2005), Cytotoxic activity of lupane-type triterpenes from Glochidion sphaerogynum and Glochidion eriocarpum two of which induce apoptosis, Planta Med., 71(3) 208- 19 213 Kiem P V., Thu V K., Yen P H., Nhiem N X, Tung N H., Cuong N X., Minh C V., H T., Hyun J H., Kang H K and Kim Y H., (2009), New triterpenoid saponins from Glochidion eriocarpum and their cytotoxic activity, 20 Chem Pharm Bull., 57, 102-105 Hui W H., Lee W K., Ng K K., Chan C K (1970), The occurrence of triterpenoids and steroids in three 21 Glochidion species, Phytochemistry, (5) 1099-1102 Otsuka H., Hirata I., Shinzato T., Takeda Y (2001), Glochiflavanosides A-D: flavanol glucosides from the leaves of Glochidion zeylanicum (Gaertn) A Juss., 22 Chem Pharm Bull., 49(7) 921-923 Otsuka H, Takeda Y, Hirata E, Shinzato T, Bando M (2004), Glochidiolide, isoglochidiolide, acuminaminoside, and glochidacuminosides A-D from the leaves of Glochidion acuminatum Muell, Chem 23 Pharm Bull., 52(5) 591-596 Takeda Y., Mima C., Masuda T, Hirata E., Takushi A., Otsuka H (1998), Glochidioboside, a glucoside of (7S,8R)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol from leaves 84 of Glochidion obovatum, Phytochemistry, 49 (7) 213724 2139 Otsuka H., Hirata E., Shinzato T., Takeda Y (2000), Isolation of lignan glucosides and neolignan sulfate from the leaves of Glochidion zeylanicum (Gaertn) A 25 Juss., Chem Pharm Bull., 48(7) 1084-1086 Tanaka R., Kinouchi Y., Wada S I., Tokuda H (2004), Potential Anti-tumor promoting activity of lupane-type triterpenoids from the stem bark of Glochidion zeylanicum and Phyllanthus flexuosus, Planta Med., 70, 26 1234-1236 Puapairoj P., Naengchomnong W., Kijjoa A., Pinto M M., Pedro M., Nascimento M S J., Silva A M S., Herz W (2005), Cytotoxic Activity of Lupane-Type Triterpenes from Glochidion sphaerogynum and Glochidion eriocarpum Two of which Induce Apoptosis, Planta Med 27 71, 208-213 Sakurai N., Y Yaguchi, and Inoue T., (1987), Triterpenoids from Myrica rubra Phytochemistry, 26(1), 28 217-219 Saimaru H., Orihara Y., Tansakul P., Kang Y.H., Shibuya M., Ebizuka Y (2007), Production of triterpenea cids by cell suspension cultures of Olea europaea, Chem 29 Pharm Bull., 55, 784-788 Wu Z.J., Ouyang M.A., Wang C.Z., Zhang Z.K., Shen J.G (2007), Anti-tobacco mosaic virus (TMV) triterpenoid saponins from the leaves of Ilex oblonga, J Agric Food 30 Chem., 55(5) 1712-1717 Kiem P.V., Minh C.V., Dat N.T., Cai X.F., Lee J.J., Kim Y.H 85 (2003), Two new phenylpropanoid glycosides from the stem bark of Acanthopanax trifoliatus, Arch Pharm 31 Res., 26(12) 1014-1017 M Taneyama, S Yoshida, M Kobayashi, M Hasegawa, 32 Phytochemistry, 1983, 22, 1053 Lin Y., Kuo Y., Shiao M., Chen C., and Ou J., (2000), Flavonoid glycosides from Terminalia catappa L., J 33 Chin Chem Soc., 47(1) pp 253-256 H Y Kuo, M H Yeh (1997), J Chin Chem Soc., 44, 34 379383 Dictionary of Natural product on CD-Rom, Chapman and Hall-CRC (2005)