Ảnh hưởng của hormone kích thích sinh sản lên đặc tính lý hóa sinh, hoạt lực và cấu trúc tinh trùng cá chẽm mõm nhọn psammoperca waigirnsis (cuvier và valenciennes, 1828)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VÕ THỊ THU HIỀN ẢNH HƯỞNG CỦA HORMONE KÍCH THÍCH SINH SẢN LÊN ĐẶC TÍNH LÝ HÓA SINH, HOẠT LỰC VÀ CẤU TRÚC TINH TRÙNG CÁ CHẼM MÕM NHỌN Psammoperca waigiensis (Cuvier Valenciennes, 1828) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHÁNH HÒA – 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VÕ THỊ THU HIỀN ẢNH HƯỞNG CỦA HORMONE KÍCH THÍCH SINH SẢN LÊN ĐẶC TÍNH LÝ HÓA SINH, HOẠT LỰC VÀ CẤU TRÚC TINH TRÙNG CÁ CHẼM MÕM NHỌN Psammoperca waigiensis (Cuvier Valenciennes, 1828) LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Nuôi trồng thủy sản Mã số: 60620301 Quyết định giao đề tài: 1238/QĐ-ĐHNT ngày 30/12/2015 Quyết định thành lập HĐ: 232/QĐ-ĐHNT ngày 24/02/2017 Ngày bảo vệ: 22/3/2017 Người hướng dẫn khoa học: TS LÊ MINH HOÀNG Chủ tịch Hội đồng: PGS.TS PHẠM QUỐC HÙNG Khoa sau đại học: KHÁNH HÒA – 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết luận văn “Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên đặc tính lý hóa sinh, hoạt lực cấu trúc tinh trùng cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis (Cuvier Valenciennes, 1828)” phần nội dung thuộc đề tài “Đánh giá chất lượng tinh trùng cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis (Cuvier Valenciennes, 1828) thông qua thời điểm thu mẫu, tiêm hormone bảo quản lạnh” với mã số 106-NN.02-2013.69 tài trợ Quỹ khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) - TS Lê Minh Hoàng - trường Đại học Nha Trang chủ nhiệm, thực từ tháng 03 năm 2014 đến tháng 03 năm 2017 xác Các số liệu, kết trình bày luận văn hoàn toàn trung thực chưa khác công bố công trình khoa học khác tới thời điểm Tác giả luận văn Võ Thị Thu Hiền i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực đề tài, nhận giúp đỡ quý thầy cô trường Đại học Nha Trang nói chung Viện Nuôi trồng thuỷ sản nói riêng; đặc biệt hướng dẫn trực tiếp tận tình TS Lê Minh Hoàng giúp hoàn thành tốt đề tài Qua đây, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến giúp đỡ Tôi xin cảm ơn cán bộ, công nhân bè nuôi cá Vũng Ngán – Nha Trang – Khánh Hòa giúp đỡ khâu nuôi vỗ thành thục cá Tôi xin cảm ơn thầy TS Ngô Văn Mạnh giúp đỡ hỗ trợ kỹ thuật tiêm hormone Tôi xin cảm ơn Quỹ phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) hỗ trợ kinh phí đề tài (106-NN.02-2013.69) giúp hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành đến tất quý thầy, cô giáo Viện Nuôi trồng thuỷ sản – Trường Đại học Nha Trang truyền đạt cho kiến thức làm sở tảng cho thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình tất bạn bè giúp đỡ động viên suốt trình học tập thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn! Nha Trang, ngày 23 tháng năm 2017 Người thực Võ Thị Thu Hiền ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN .ix MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Một số đặc điểm sinh học cá chẽm mõm nhọn 1.1.1 Hệ thống phân loại 1.1.2 Phân bố .3 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Đặc điểm sinh trưởng 1.1.5 Đặc điểm sinh sản 1.2 Đại cương tinh trùng cá 1.2.1 Quá trình tạo tinh 1.2.2 Cấu trúc tinh trùng cá 1.2.3 Đặc điểm lý học tinh dịch cá .10 1.2.4 Đặc tính sinh hoá dịch tương 13 1.2.5 Hoạt lực tinh trùng 18 1.2.6 Yếu tố ảnh hưởng đến trình thu mẫu 20 1.3 1.3.1 Tình hình nghiên cứu ảnh hưởng hormone lên chất lượng tinh trùng cá .21 Trên giới .21 iii 1.3.2 1.4 Ở Việt Nam 25 Tình hình nghiên cứu tinh trùng cá Việt Nam 28 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Thời gian, địa điểm, đối tượng nghiên cứu 32 2.2 Phương pháp nghiên cứu bố trí thí nghiệm 32 2.2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 32 2.2.2 Cá đực thu tinh 33 2.2.3 Hormone liều lượng sử dụng 33 2.2.4 Xác định đặc tính lý học tinh dịch cá chẽm mõm nhọn 34 2.2.5 Xác định đặc tính sinh hoá dịch tương 35 2.2.6 Xác định hoạt lực tinh trùng cá chẽm mõm nhọn .36 2.2.7 Xác định cấu trúc tinh trùng cá chẽm mõm nhọn 36 2.3 Phương pháp lưu trữ xử lý số liệu 37 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên đặc tính lý học tinh dịch cá chẽm mõm nhọn 38 3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên đặc tính sinh hoá dịch tương cá chẽm mõm nhọn 42 3.3 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên hoạt lực tinh trùng cá chẽm mõm nhọn 49 3.4 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên cấu trúc tinh trùng cá chẽm mõm nhọn 52 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 55 4.1 Kết luận .55 iv 4.1 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản đến đăc tính lý hóa tinh dịch cá chẽm mõm nhọn 55 4.1 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên đặc tính sinh hóa tinh dịch cá chẽm mõm nhọn 55 4.1 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên hoạt lực tinh trùng cá chẽm mõm nhọn 55 4.1 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên cấu trúc tinh trùng cá chẽm mõm nhọn 55 4.2 Kiến nghị .55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 566 PHỤ LỤC v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các thông số lý học tinh dịch số loài cá 12 Bảng 1.2 Các thông số sinh hóa dịch tương số loài cá 17 Bảng 1.3 Một số loại hormone áp dụng số loài cá giới 24 Bảng 1.4 Một số loại hormone áp dụng số loài cá Việt Nam 27 Bảng 2.1 Kích cỡ cá đực sử dụng cho thí nghiệm (n=4) 33 Bảng 3.1 Nồng độ ion Na+ (mmol/l)trong dịch tương cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 45 Bảng 3.2 Nồng độ ion K+ (mmol/l) dịch tương cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 45 Bảng 3.3 Nồng độ ion Cl- (mmol/l) dịch tương cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 46 Bảng 3.4 Nồng độ ion Mg2+ (mmol/l) dịch tương cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 46 Bảng 3.5 Nồng độ ion Ca2+ (mmol/l) dịch tương cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 47 Bảng 3.6 Protein tổng số (g/l) dịch tương cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 47 Bảng 3.7 Nồng độ thẩm thấu (mOsm/kg) dịch tương cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 48 Bảng 3.8 pH dịch tương cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 48 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình thái cá chẽm mõm nhọn [93] Hình 1.2 Vùng phân bố cá chẽm mõm nhọn giới [45] Hình 1.3 Sơ đồ tạo tinh trùng cá [65] Hình 1.4 Cấu tạo tinh trùng cá [112] Hình 1.5 Mặt cắt ngang đuôi tinh trùng cá xương kiểu “9+2” [112] 10 Hình 1.6 Sơ đồ biểu diễn số kiểu chuyển động tinh trùng cá [104] 19 Hình 2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu .32 Hình 2.2 Sơ đồ xác định đặc tính lý học tinh trùng cá 35 Hình 2.3 Sơ đồ đánh giá cấu trúc tinh trùng quy trình TEM 37 Hình 3.1 Thể tích tinh dịch cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 39 Hình 3.2 Mật độ tinh trùng cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 39 Hình 3.3 Độ quánh tinh dịch cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 40 Hình 3.4 Tổng số tinh trùng cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 40 Hình 3.5 Phần trăm hoạt lực tinh trùng cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác .50 Hình 3.6 Thời gian hoạt lực tinh trùng cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác .50 Hình 3.7 Vận tốc tinh trùng cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 51 Hình 3.8 Cấu trúc tinh trùng cá chẽm mõm nhọn Psammoperca waigiensis thí nghiệm kích thích hormone khác 53 vii KÝ HIỆU VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ mOsm Mili osmolality SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn SE Standard Eror Sai số chuẩn VCL Curvilinear velocity Vận tốc chuyển động cong VSL Straight line velocity Vận tốc chuyển động thẳng VAP Average path velocity Vận tốc trung bình HCG Human chorionic gonadotropin LHRHa Luteinizing hormone releasing hormone analog DOM Domperidone Tiếng Việt (nếu có) KDT Kích dục tố CASA Computer – Aided sperm analysis GnRH Gonadotropin releasing hormone Hormone phóng thích kích dục tố Nước muối sinh lý NMSL T4 Thyoxin GSI Gonadosomatic index SVSI Semainal vesicle-somatic index GTTB ppt Hormone tương tự LHRH Hệ số thành thục sinh dục Giá trị trung bình Parts per thousand NĐTT Phần nghìn Nồng độ thẩm thấu GRIF Gonadotropin Release Inhibiting Factor Yếu tố ức chế phóng thích KDT cPG Carp pituitary gland Tuyến yên cá chép CPE Carp pituitary extract Dịch chiết tuyến yên cá chép W Weight Khối lượng L Length Chiều dài Khối lượng KL viii 48H-LHRHA50 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed 6.7500 114 Ca Duncan Subset for alpha = 0.05 NGHIEMTHUC N 24H-LHRHA80 12.9500 24H-DOM20 13.1500 48H-LHRHA80 13.1500 0H-HCG1500 13.1750 72H-DOM20 13.2000 0H-LHRHA80 13.2000 24H-SALINE 13.2500 72H-LHRHA80 13.2500 0H-SALINE 13.2750 0H-HCG500 13.3000 0H-DOM20 13.3250 24H-HCG1500 13.3500 24H-LHRHA20 13.4000 72H-LHRHA20 13.4000 24H-HCG500 13.4250 48H-DOM20 13.4250 48H-SALINE 13.4500 0H-HCG1000 13.5000 72H-SALINE 13.5000 48H-LHRHA20 13.5250 72H-HCG500 13.5500 0H-LHRHA20 13.6750 48H-HCG500 13.6750 24H-HCG1000 13.7250 48H-HCG1500 13.7500 0H-LHRHA50 13.8500 72H-HCG1500 13.9250 24H-LHRHA50 13.9500 48H-HCG1000 14.0000 72H-LHRHA50 14.1000 48H-LHRHA50 14.1500 72H-HCG1000 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed 14.5000 244 TP Duncan Subset for alpha = 0.05 NGHIEMTHUC N 0H-LHRHA50 9750 0H-HCG1500 9750 0H-LHRHA80 1.0000 0H-HCG500 1.0000 72H-SALINE 1.0000 72H-LHRHA80 1.0000 72H-HCG1500 1.0000 0H-SALINE 1.0250 24H-LHRHA50 1.0250 24H-HCG1500 1.0250 0H-HCG1000 1.0250 48H-SALINE 1.0250 72H-LHRHA50 1.0250 0H-DOM20 1.0500 24H-SALINE 1.0500 24H-LHRHA20 1.0500 24H-LHRHA80 1.0500 24H-HCG1000 1.0500 48H-LHRHA50 1.0500 48H-HCG1500 1.0500 72H-HCG1000 1.0500 0H-LHRHA20 1.0750 24H-DOM20 1.0750 72H-LHRHA20 1.0750 72H-DOM20 1.0750 24H-HCG500 1.1000 48H-LHRHA80 1.1000 48H-HCG1000 1.1000 48H-DOM20 1.1250 72H-HCG500 1.1250 48H-LHRHA20 1.1500 48H-HCG500 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed 1.2000 274 Osm Duncan Subset for alpha = 0.05 NGHIEMTHUC N 72H-DOM20 335.9000 48H-DOM20 336.3750 24H-LHRHA20 336.5250 24H-DOM20 336.8750 72H-SALINE 336.8750 0H-DOM20 337.1500 48H-SALINE 337.3250 72H-HCG1500 337.5250 0H-LHRHA20 337.5250 24H-HCG1500 337.6000 72H-HCG500 337.6750 48H-HCG1500 337.8000 72H-LHRHA80 338.1000 0H-HCG500 338.1250 24H-SALINE 338.1250 24H-HCG500 338.1500 0H-SALINE 338.3000 0H-HCG1500 338.3250 48H-LHRHA80 338.3750 48H-HCG500 338.6500 72H-LHRHA20 338.7000 0H-HCG1000 339.0250 48H-LHRHA20 339.1750 0H-LHRHA50 340.1000 72H-LHRHA50 340.6250 24H-HCG1000 340.8250 24H-LHRHA80 341.5250 0H-LHRHA80 341.6500 48H-LHRHA50 342.3250 24H-LHRHA50 342.5500 72H-HCG1000 343.1500 48H-HCG1000 344.2500 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed .082 pH Duncan Subset for alpha = 0.05 NGHIEMTHUC N 48H-LHRHA20 7.6000 24H-LHRHA20 7.6250 72H-DOM20 7.6250 72H-LHRHA20 7.6250 0H-LHRHA20 7.6500 0H-DOM20 7.7000 0H-LHRHA80 7.7000 48H-DOM20 7.7000 72H-HCG1500 7.7000 72H-SALINE 7.7000 24H-SALINE 7.7250 24H-DOM20 7.7250 24H-LHRHA80 7.7250 72H-LHRHA50 7.7250 72H-LHRHA80 7.7250 72H-HCG500 7.7250 0H-LHRHA50 7.7250 0H-SALINE 7.7500 0H-HCG1000 7.7500 0H-HCG1500 7.7500 48H-SALINE 7.7500 24H-LHRHA50 7.7500 48H-LHRHA50 7.7750 0H-HCG500 7.7750 24H-HCG1500 7.7750 48H-LHRHA80 7.7750 24H-HCG1000 7.8000 48H-HCG1500 7.8000 24H-HCG500 7.8000 72H-HCG1000 7.8250 48H-HCG500 7.8250 48H-HCG1000 Sig 7.8500 103 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên thông số hoạt lực tinh trùng cá chẽm mõm nhọn HOATLUC Duncan Subset for alpha = 0.05 NGHIEMTHUC N 72h-DOM20 81.2500 72h-LRHA20 85.5000 85.5000 72h-LRHA80 85.5000 85.5000 72h-LRHA50 86.5000 86.5000 72h-LRHA-DOM 88.7500 88.7500 72h-HCG500 88.7500 88.7500 72h-HCG1500 88.7500 88.7500 24h-LRHA20 90.2500 90.2500 24h-LRHA80 90.2500 90.2500 48h-HCG1500 90.5000 90.5000 24h-HCG500 90.7500 90.7500 48h-DOM20 90.7500 90.7500 48h-LRHA80 90.7500 90.7500 48h-LRHA20 91.0000 91.0000 48h-LRHA50 91.0000 91.0000 0h-LRHA-DOM 91.2500 91.2500 0h-LRHA20 91.2500 91.2500 0h-LRHA50 91.2500 91.2500 0h-LRHA80 91.2500 91.2500 0h-HCG500 91.2500 91.2500 0h-HCG1000 91.2500 91.2500 0h-HCG1500 91.2500 91.2500 24h-DOM20 91.2500 91.2500 24h-LRHA50 91.2500 91.2500 48h-LRHA-DOM 91.2500 91.2500 24h-HCG1500 91.5000 91.5000 48h-HCG500 91.5000 91.5000 24h-LRHA-DOM 91.7500 91.7500 24h-HCG1000 92.2500 92.2500 0h-DOM20 92.5000 92.5000 72h-HCG1000 94.5000 48h-HCG1000 Sig 95.2500 119 Means for groups in homogeneous subsets are displayed .071 093 TGHL Duncan Subset for alpha = 0.05 NGHIEMTHUC N 72h-DOM20 213.5000 48h-HCG1500 215.5000 215.5000 72h-LRHA-DOM 215.5000 215.5000 72h-HCG1500 216.2500 216.2500 0h-HCG1500 219.7500 219.7500 24h-DOM20 219.7500 219.7500 72h-LRHA80 219.7500 219.7500 48h-DOM20 220.5000 220.5000 0h-DOM20 220.7500 220.7500 0h-HCG500 221.0000 221.0000 24h-HCG1000 221.0000 221.0000 48h-LRHA-DOM 221.2500 221.2500 24h-HCG1500 221.5000 221.5000 72h-LRHA20 221.5000 221.5000 0h-HCG1000 221.7500 221.7500 24h-LRHA-DOM 222.5000 222.5000 72h-HCG500 222.5000 222.5000 0h-LRHA-DOM 223.2500 223.2500 24h-HCG500 223.5000 223.5000 48h-HCG500 225.2500 225.2500 48h-LRHA20 226.7500 226.7500 48h-LRHA80 226.7500 226.7500 72h-LRHA50 227.2500 227.2500 24h-LRHA80 227.5000 227.5000 24h-LRHA20 228.0000 228.0000 0h-LRHA50 228.7500 228.7500 0h-LRHA80 229.2500 229.2500 24h-LRHA50 229.2500 229.2500 48h-LRHA50 229.7500 229.7500 72h-HCG1000 230.2500 230.2500 0h-LRHA20 230.5000 230.5000 48h-HCG1000 Sig 231.2500 053 Means for groups in homogeneous subsets are displayed .073 VANTOC Duncan Subset for alpha = 0.05 NGHIEMTHUC N 72h-DOM20 131.7500 24h-LRHA20 133.5000 133.5000 72h-LRHA80 133.7500 133.7500 48h-HCG1500 134.2500 134.2500 0h-LRHA20 134.5000 134.5000 72h-HCG1500 134.5000 134.5000 72h-LRHA-DOM 134.7500 134.7500 72h-LRHA50 134.7500 134.7500 48h-LRHA80 135.2500 135.2500 0h-LRHA-DOM 135.5000 135.5000 48h-DOM20 135.5000 135.5000 0h-HCG1500 135.7500 135.7500 24h-DOM20 135.7500 135.7500 24h-HCG500 135.7500 135.7500 0h-HCG1000 136.0000 136.0000 24h-LRHA80 136.0000 136.0000 0h-DOM20 136.2500 136.2500 0h-LRHA50 136.2500 136.2500 24h-LRHA-DOM 136.2500 136.2500 24h-HCG1000 136.2500 136.2500 48h-LRHA-DOM 136.2500 136.2500 72h-LRHA20 136.2500 136.2500 24h-LRHA50 136.5000 136.5000 72h-HCG500 136.5000 136.5000 0h-HCG500 136.7500 136.7500 24h-HCG1500 137.0000 137.0000 48h-LRHA50 137.0000 137.0000 0h-LRHA80 137.5000 137.5000 48h-HCG500 137.5000 137.5000 48h-LRHA20 137.7500 137.7500 72h-HCG1000 138.2500 138.2500 48h-HCG1000 Sig 139.7500 093 Means for groups in homogeneous subsets are displayed .106 ... chẽm mõm nhọn 42 3.3 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên hoạt lực tinh trùng cá chẽm mõm nhọn 49 3.4 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên cấu trúc tinh trùng. .. mõm nhọn 55 4.1 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên đặc tính sinh hóa tinh dịch cá chẽm mõm nhọn 55 4.1 Ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên hoạt lực tinh trùng. .. cứu ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên đặc tính lý học tinh dịch cá chẽm mõm nhọn 38 3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng hormone kích thích sinh sản lên đặc tính sinh hoá dịch tương cá chẽm