Đặc tính sinh hóa của vibro spp và môi trường CHROMagar phát hiện vibrio spp

Phân tích nhanh chất lượng thực phẩm Đặc tính sinh hóa Vibro spp môi trường CHROMagar phát Vibrio spp Đặc điểm chung Vibrio spp Giống Vibrio Bộ Vibrionales Họ Vibrionaceae Lớp Gammaproteobacteria Ngành Proteobacteria Hiện có khoảng 28 loài Vibrio Gram âm, hình que thẳng uốn cong, kích thước 0,3-0,5 x 1,4-2,6 μm; không hình thành bào tử chuyển động nhờ tiên mao nhiều tiên mao mảnh Nhiệt độ pt tối ưu: 35-37 pH: 5-11 Là VK ưa mặn, mt sống yêu cầu có 1-3% NaCl Đặc tính sinh hóa số loài Vibrio Khả gây bệnh số loài Vibrio Ủ bệnh: 6h – ngày Khởi phát: Vài giờ, sôi bụng, đầy bụng, ỉa chảy vài lần Toàn phát: Tiêu chảy, nôn, nước điện giải Catalaza (+); oxydaza (+) glucose (+); gas (-) Lactose (-); manitol (+) Sucrose (+); manose (+) Arabinose (-); H2S (-) Urease (-); lysine ornithine decarboxylase (+) Nuôi cấy: Mọc tốt pH = 8.5 -9 NaCl 3% Sống 16-42 độ, tốt 37 độ C Vibrio Cholerae Sinh độc tố : • Nội độc tố : lipopolysaccharide • Độc tố ruột : cholera toxin Khả gây bệnh số loài Vibrio Nuôi cấy: Phát triển tốt pH = - NaCl 1- 3% Sống 20-45 độ, tốt 30-45 độ C Ưa mặn, có nước biển động vật biển tôm, sò , ốc… Vibrio Parahemolyticus Catalaza (+); oxydaza (+) glucose (+); gas (-) Lactose (-); manitol (+) Saccarose (+); maltose (+) Arabinose (+); H2S (-) Urease (-); Sinh độc tố exopolysaccharides tạo màng bao vệ hệ vi khuẩn bên đường ruột động vật Gây bệnh: Tiêu chảy nước, bụng đau quặn, sốt cảm lạnh Trên tôm thủy sản: Gây hoại tử gan tụy tôm, dẫn tới tôm chết sớm hàng loạt… Khả gây bệnh số loài Vibrio Gây bệnh phân trắng tôm Gây nhiễm trùng người: Đau sưng nhanh, đỏ quanh vết thương, chứa nhiều mủ sưng máu Catalaza (+); oxydaza (+) glucose (+); gas (-) Lactose (-); manitol (+) Sucrose (+); manose (+) Arabinose (-); H2S (-) Urease (-); lysine ornithine decarboxylase (+) Nuôi cấy: Mọc tốt pH = 8.5 -9 NaCl 3% Sống 16-42 độ, tốt 37 độ C Vibrio Vulnificus Khả gây bệnh số loài Vibrio Ủ bệnh: 6h – ngày Khởi phát: Vài giờ, sôi bụng, đầy bụng, ỉa chảy vài lần Toàn phát: Tiêu chảy, nôn, nước điện giải Phát triển môi trường có NaCl, nồng độ tối thiểu 200-260 nM Vibrio alginolyticus - Gây hoại tử biểu mô động vật biển, đỏ dọc thân tôm - Gây bệnh viêm dày ruột bệnh nhiễm trùng đường tiêu hóa cho người Ưu điểm CHV so với TCBS • Phân biệt rõ ràng hai khuẩn lạc V.parahaemolyticus V.vulnificus, khó phân biệt môi trường TCBS • Khả phát Vibrio lớn nhiều so với môi trường TCBS • Ít âm tính giả so với môi trường TCBS Thành phần môi trường CHV • Môi trường dạng bột sử dụng linh hoạt dạng đĩa đổ sẵn • Có thể sử dụng nguyên hộp sử dụng phần trường hợp cần số lượng đĩa • Nếu bảo quản môi trường thích hợp sử dụng tới năm Đặc tính môi trường Agar Một chất giống thạch, thu từ tảo Agar hỗn hợp hai thành phần: agarose polysaccharide tuyến tính hỗn hợp không đồng phân tử nhỏ gọi agaropectin Tác dụng: chất rắn để chứa môi trường nuôi cấy cho nuôi cấy vi sinh vật Peptone Pepton làm cách thủy phân nguyên liệu chứa protein thịt, casein, gelatin sử dụng acid enzymes Pepton nguồn nitơ hữu chứa carbon hydrat vitamin Đặc tính môi trường Yeast extract (Cao nấm men) Chromogenic mix Cao nấm men chiết xuất chủ yếu từ men bánh mì (Saccharomyces cerevisiae) Cao nấm men nguồn giàu axit amin, vitamin, nucleotide yếu tố thiết yếu Chiết xuất nấm men giàu protein, lên tới 70% nên sử dụng rộng rãi trình lên men vi sinh vật Môi trường nuôi cấy để phát đơn giản nhanh chóng vi khuẩn sử dụng chất nhiễm sắc thể Chất tạo màu: 5-bromo-4chloro-3-indoxyl-beta-Dgalactopyranoside Thành Phần Một số enzyme tạo số vi khuẩn, cắt chất này, dẫn đến màu sắc khác số khuẩn lạc định Đặc tính môi trường Thành phần Hàm lượng Mục đích Agar    15 g Làm đặc môi trường Peptone 15g Nguồn nitơ hữu chứa carbohydrat vitamin Yeast extract 3g Nguồn giàu axit amin, vitamin, nucleotide yếu tố thiết yếu NaCl 10g Tạo nồng độ muối  áp suất thẩm thấu 5-Bromo-6-chloro3-indoxyl-βglucoside 0.1g Chất tạo màu tím hoa cà (mauve)  nhận biết V.parahaemolyticus 5-Bromo-4-chloro3-indoxyl-βgalactoside 0.1g Chất tạo màu xanh (blue)  nhận biết V.cholerae Đặc tính môi trường Thành phần Hàm lượng Mục đích Sucrose 20g bổ sung sucrose nồng độ cao, làm cho hoạt tính βglucosidase V alginolyticus biến mất, đồng thời cho phép tồn V parahaemolyticus Do dễ dàng phân biệt V parahaemolyticus V alginolyticus Glucose 1g Lactose 0.1g Cơ chất cho phản ứng lên men Nguồn dinh dưỡng IPTG 0.04g Isopropyl beta-D-1-thiogalactopyranoside  Tăng biểu enmzym galactosidase Trizma base 5g Đối với đệm Tris, độ pH tăng khoảng 0,03 đơn vị °C giảm nhiệt độ, giảm 0,03-0,05 đơn vị cho pha loãng mười lần  pH môi trường Sodium citrate 10g Sodium thiosulfate 10g Tham gia điều chỉnh môi trường đến pH= 9.0 ±0.2  Chất chọn lọc Sodium cholate 3g  Ức chế vi khuẩn Gram (+) Cơ chế Test khẳng định Hệ vi khuẩn t = 42°C pH=9.0±0.2 Vibrio Khi sucrose nồng độ cao, V.parahaemolyticus V.alginolyticus dương tính với đặc điểm βglucosidase (+) sucrose nồng độ cao β-glucosidase (-) β-galactosidase (+) β-glucosidase (+) β-galactosidase (-) β-glucosidase (-) β-galactosidase (-) V cholerae V parahaemolyticus V alginolyticus 5-Bromo-4-chloro-3indoxyl-β-galactoside Khuẩn lạc xanh (blue) 5-Bromo-6-chloro-3indoxyl-β-glucoside Khuẩn lạc tím hoa cà (mauve) Khuẩn lạc không màu Cơ chế • test oxydase Chuẩn bị môi trường 74,7 g bột khô lít nước Khuấy agar nở Không đun 100◦C Không hấp tiệt trùng 121◦C Làm nguội đến 45-50oC, xoáy khuấy nhẹ nhàng Gia nhiệt đun sôi 100◦C Đổ vào đĩa petri vô trùng để hình thành gel Danh mục tài liệu tham khảo 1) Rambach, VIBRIO BACTERIA DETECTION AND DIFFERENTIATION, United States Patent, Patent N0: US 7,198,907 B2; Date of Patent: Apr 3, 2007 2) Tiffany Williams*, Brett Froelich, and James D Oliver Department of Biology, University of North Carolina at Charlotte; Characterization of Vibrio spp on CPC+, CHROMagar Vibrio, and TCBS, and Proposed CrossPlating Method for Isolation of Vibrio vulnificus from Environmental Samples 3) http:// chromagar.vn/vi-sinh-thuc-pham-va-nuoc/109-chromagar-vibrio.html 4) Một số hình ảnh internet ... V.vulnificus, khó phân biệt môi trường TCBS • Khả phát Vibrio lớn nhiều so với môi trường TCBS • Ít âm tính giả so với môi trường TCBS Thành phần môi trường CHV • Môi trường dạng bột sử dụng linh... sống yêu cầu có 1-3% NaCl Đặc tính sinh hóa số loài Vibrio Khả gây bệnh số loài Vibrio Ủ bệnh: 6h – ngày Khởi phát: Vài giờ, sôi bụng, đầy bụng, ỉa chảy vài lần Toàn phát: Tiêu chảy, nôn, nước... 37 độ C Vibrio Vulnificus Khả gây bệnh số loài Vibrio Ủ bệnh: 6h – ngày Khởi phát: Vài giờ, sôi bụng, đầy bụng, ỉa chảy vài lần Toàn phát: Tiêu chảy, nôn, nước điện giải Phát triển môi trường