N1 đặc tính sinh hóa STEC và môi trường chromagar phát hiện stec

Phân tích nhanh chất lượng thực phẩm Đặc tính sinh hóa môi trường CHROMagar phát STEC (ShigaToxin producing E coli) Nhóm SV : Nguyễn Thị Vân Cúc 20130461 Trương Thị Thu 20133826 Mạc Thị Lâm 20132202 Hồ Thị Lan 20132181 Đặc tính sinh hóa E.coli     Gram (-), không tạo bào tử   Chịu nhiệt, nhiệt độ thích hợp 42-44°C Trực khuẩn đường ruột  Yếm khí không bắt buộc  Bền với phenol 0,085%  Lên men lactoza, sinh khí  Khử Nitrat → Nitrit  pH 7-7,2 Sinh indol 42-44°C Tạo độc tố mạnh Có thể di động không di động Đặc tính sinh hóa E.coli  Được thải môi trường theo phân, chiếm tới 80% VK hiếu khí ruột giữ cân sinh thái nên E.coli chọn làm VSV thị ô nhiễm => dùng để đánh giá mức độ vệ sinh nhà xưởng STEC ( Shiga-Toxin producing E.coli)  EHEC áp dụng vi khuẩn Verotoxigenic E.coli (VTEC)  Độc tố tạo verotoxin (Shiga like toxin), có loại: • VT-1: Shiga like toxin (SLT1) • VT-2: Shiga like toxin (SLT2) STEC ( Shiga-Toxin producing E.coli)  STEC gây số bệnh tiêu chảy, xuất huyết, viêm đại tràng, tượng tán huyết Ure  Có 60 chủng STEC gây tiêu chảy, chủng O157:H7 chủng nguy hiểm nhất, có chủng O26, O103, O111, O145… Đặc tính sinh hóa STEC Ecoli STEC Coliform Proteus / Morganella E.Coli thường Gram + & Providencia spp ß-Glucosidase - + + - +/- α- Galactosidase + +/- - + +/- STEC ( Shiga-Toxin producing E.coli)  Quá trình phát STEC: B1: Tiêm mẫu: Cho mẫu thực phẩm môi trường cần phân tích vào môi trường có chứa tellurit chất tạo màu B2: Nuôi cấy điều kiện thích hợp: 37°C 18-24h B3: Quan sát khuẩn lạc xác định STEC Môi trường Chromagar phân tích STEC Thành phần Lượng Thạch 15g Pepton cao nấm men 8g Muối (NaCl) 5g Mag-alpha-galactoside 0,01g / L X-glucoside 0,01g / L Tellurite 0,0025 g / l Natri deoxycholate 1g/l pH: 6,9 ± 0,2 Thành phần Tác dụng Thạch Làm rắn môi trường Pepton Là nguồn cung cấp dinh dưỡng axit amin cho sinh trưởng phát triển VSV Cao nấm men Chứa hỗn hợp amino axit, peptit, vitamin tan nước cacbohydrat, nguồn dinh dưỡng cho vi khuẩn Muối (NaCl) Làm tăng khả thẩm thấu màng tế bào Kali tellurit (K2TeO3) Ức chế số vi khuẩn gram – (một số loại Coliforms, E.coli thường, Proteus spp, Morganella morganii…) Natri deoxycholate Ức chế loại vi khuẩn gram + Thành phần Tác dụng X-glucoside Là chất tạo màu (5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucopyranoside) Nhận biết vi khuẩn khác STEC không bị ức chế môi trường tạo khuẩn lạc màu xanh Mag-alpha-galactoside Là chất tạo màu (5-Bromo-6-chloro-3-indoxyl-alpha-D-galactopyranoside) Nhận biết vi khuẩn STEC tạo màu magenta Cơ chế tạo màu Cơ chất thí nghiệm là: 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucopyranoside (X-glucoside) 5-Bromo-6-chloro-3-indoxyl-alpha-D-galactopyranoside (Mag-alpha-galactoside)  Dưới tác dụng enzyme β-Glucosidase, X-glucoside bị thủy phân Màu xanh  Dưới tác dụng enzyme α-Galactosidase, mag-α-glucoside bị thủy phân Màu magenta Cơ chế tạo màu Phát STEC Phần lớn nhóm E.coli sản sinh Shiga like toxin có khuẩn lạc màu tím hoa cà Các nhóm Enterobacteriacae khác tạo khuẩn lạc không màu, màu xanh bị ức chế Các vi khuẩn Gram dương bị ức chế Vi khuẩn Màu khuẩn lạc E. coli  O157 H7 Tím E coli  O26 Tím E. coil  O103 Tím E. coli O111 Tím Klebsiella Xanh da trời Proteus AR3919 Xanh Enterobacter — E. coli AR3740* — cloacae ND36* Bị ức chế Proteus AR5075 Nâu