Đặc tính sinh hóa và MT chromagar phát hiện bacillus cereus

Môn: Phân tích nhanh thực phẩm Đặc tính sinh hóa MT Chromagar phát Bacillus cereus SVTH : Lê Thị Duyên - 20149592 Nguyễn Thị Minh Thảo - 20133623 Nguyễn Thị Thảo – 20133620 Nguyễn Thị Lan - 20132184 GVHD : TS Lê Quang Hòa Đặc điểm vi khuẩn Bacillus cereus Là vi khuẩn hình que Trực khuẩn Gram dương Tạo bào tử Nhiệt độ: 5-50℃, tối ưu 35-40℃ PH: 4,9-9,3; thích hợp: 7-7,2 Một số đặc tính sinh hóa vi khuẩn Bacillus cereus • Lên men đường Glucose Do enzyme phân giải đường, tạo axit hữu cơ, làm PH môi trường nuôi cấy giảm => làm thị màu phenol đỏ chuyển từ đỏ sang vàng • Khả khử nitrat thành nitrit Enzyme Nitratreductase Nitrat Nitrit  Môi trường có màu đỏ tím • Phản ứng VP (+) Xuất màu hồng đến màu đỏ tươi vòng 15 phút bề mặt môi trường 2 Một số đặc tính sinh hóa vi khuẩn Bacillus cereus • Phản ứng Catalaza Hiện tượng: hình thành bọt khí • Khả sử dụng Citrat Khi sử dụng citrat làm PH môi trường tăng lên  nhận biết thị Bromothymol blue, chuyển từ màu lục sang màu xanh dương Các đặc tính sinh hóa Bacillus Loài Đặc tính B.cereus B.thuringiensis B.mycoides B.anthracis B.megaterium Gram + + + + + Catalase + + + + + Di động +/- +/- - - +/- Khử nitrate + + + + - Phân hủy tyrosine + + +/- - +/- Kháng lysozyme + + + + - Phản ứng với lòng đỏ trứng + + + + - Lên men glucose + + + + - Phản ứng VP + + + + - Sinh acid từ manitol - - - - + Tan máu (cừu) + + + - - Các thử nghiệm phân biệt loài Bacillus nhóm  Thử nghiệm tính di động: hầu hết chủng B.cereus; B.thuringgiensis di động, B.anthracis, B.mycoides không di động  Sự hình thành rễ giả: B.cereus không tạo cấu trúc rễ giả, B.mycoides tạo cấu trúc rễ giả  Thử nghiệm làm tan máu: B.cereus làm tan máu mạnh, tạo vùng tan máu hoàn toàn (β) 2-4µm, B.thuringiensis B.mycoides làm tan máu, B.anthracis thường không làm tan máu 24h  Sự tạo độc tố protein dạng tinh thể:B.thuringiensis tạo tinh thể độc tố, B.cereus Bacillus khác không tạo tinh thể độc tố 3.Quy trình phát Bacillus cereus môi trường tạo màu Bacillus cereus Chromogenic MSP111 Quy trình: Chuẩn bị mẫu Tăng sinh sơ (môi trường không chọn lọc) 24h-48h 3-4 ngày Cấy trang cấy ria vào đĩa môi trường tạo màu nuôi cấy 300 C 18-24h Quan sát màu khuẩn lạc tạo thành Kết luận Hồi phục Bacillus cereus bị tổn thưởng tăng số lượng Salmonella Tạo điều kiện cho Bacillus cereus phát triển nhuộm màu Các loại vi khuẩn khác nhuộm màu khác bị kìm hãm phát triển Môi trường phát phân lập nhóm Bacillus cereus Chromogenic mix: 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-choline phosphate 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-myo-inositol-1-phosphate Thành phần Casein Digest Lab Lemco Powder Soytone Sodium pyruvate Tween 80 Sodium chloride Manganese chloride Bovine serum 82-067 tetrahydrate Cycloheximide Lithium chloride Ceftazidime pentahydrate Polymyxin B sulfate Agar 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-cholinephosphate 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl myoinositol-l-phosphate Tác dụng Là môi trường dinh dưỡng thúc đẩy phát triển Tạo thuận lợi cho việc sửa chữa tế bào bị thương Thúc đẩy tạo biểu vòng trắng Thúc đẩy biểu enzyme (PCPLC PI-PLC) Ức chế phát triển nấm mem nấm mốc Ngăn chặn phát triển loài vi khuẩn khác chất kết đông Cơ chất tạo màu 3.Quy trình phát Bacillus cereus môi trường tạo màu Bacillus cereus Chromogenic MSP111 Enzyme phosphatidylcholine-specific phospholipase C (PC-PLC) phosphatidylcholine -specific phospholipase C (PC-PLC) 3.Quy trình phát Bacillus cereus môi trường tạo màu Bacillus cereus Chromogenic MSP111 Enzyme phosphatidylinositol phospholipace C (PI-PLC) phosphatidylinositol phospholipace C (PIPLC) Hình thái khuẩn lạc số vi sinh vật tiêu biểu • Bacillus cereus → Màu xanh với viền trắng • Các loài Bacillus khác → Màu xanh không màu bị ức chế • Vi khuẩn gram âm → Bị ức chế • Nấm men nấm mốc → Bị ức chế Hiệu suất môi trường: • Kết nhanh chóng sau 24h; • Sau ủ 24h, khuẩn lạc màu xanh phát triển mạnh cho phép nhận biết rõ ràng so với môi trường Mannitol base agar (khuẩn lạc màu đỏ môi trường màu hồng) • Đơn giản: Không cần phải bổ sung Egg York môi trường MYP Mossel agar • Độ nhạy độ đặc hiệu cao với nhóm B.Cereus so với môi trường truyền thống (MYP Mossel) • Môi trường MYP Mossel dựa vào khả không sử dụng Mannitol B.cereus, dẫn đến việc đọc kết khó nhóm vi khuẩn khác • Khả chọn lọc cao • Các đĩa đổ sẵn có thời gian dài so với môi trường MYP Mossel agar Tài liệu tham khảo • http://www.oxoid.com/UK/blue/prod_detail/prod_ detail.asp?pr=CM1036 • Chromogenic plating medium for the rapid presumptive identification of Bacillus anthracis, Bacillus cereus, and Bacillus thuringiesis US 20040005652 A1 ...1 Đặc điểm vi khuẩn Bacillus cereus Là vi khuẩn hình que Trực khuẩn Gram dương Tạo bào tử Nhiệt độ: 5-50℃, tối ưu 35-40℃ PH: 4,9-9,3; thích hợp: 7-7,2 Một số đặc tính sinh hóa vi khuẩn Bacillus. .. nhận biết thị Bromothymol blue, chuyển từ màu lục sang màu xanh dương Các đặc tính sinh hóa Bacillus Loài Đặc tính B .cereus B.thuringiensis B.mycoides B.anthracis B.megaterium Gram + + + + +... thể độc tố, B .cereus Bacillus khác không tạo tinh thể độc tố 3.Quy trình phát Bacillus cereus môi trường tạo màu Bacillus cereus Chromogenic MSP111 Quy trình: Chuẩn bị mẫu Tăng sinh sơ (môi trường