Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của một số loài nấm ở việt nam (tt)

B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM H NI BI TH THU HIN Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số loài nấm Việt Nam Chuyờn ngnh: Húa hu c Mó s: 62.44.01.14 TểM TT LUN N TIN S HểA HC H NI - 2017 CễNG TRèNH C HON THNH TI TRNG I HC S PHM H NI Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS NG NGC QUANG TS LU VN HUYN Phn bin 1: GS.TSKH Trn Vn Sung Vin Húa hc, Vin Hn lõm KHCN VN Phn bin 2: PGS.TS Trn Th Thu Hng Trng i hc Bỏch khoa H Ni Phn bin 3: PGS.TS V Quc Trung Trng HSP H Ni Lun ỏn s c bo v trc Hi ng chm lun ỏn cp Trng, hp ti Trng i hc S phm H Ni Vo hi gi, ngy thỏng nm 2017 Cú th tỡm hiu lun ỏn ti: Th vin Quc gia, Th vin Trng i hc S phm H Ni v Phũng T liu khoa Húa hc, Trng i hc S phm H Ni I GII THIU LUN N t Ngy nay, i sng ngy cng c nõng cao thỡ ngi quan tõm nhiu hn n sc khe Cỏc cn bnh nan y nh: bnh ung th, HIV-AIDS v sc kho cng ng l nhng ngy cng c quan tõm hu ht cỏc quc gia trờn th gii Theo c tớnh v thng kờ ca T chc y t th gii (WHO) thỡ hng nm trờn ton cu cú khong 9-10 triu ngi mi mc bnh ung th v mt na s ú cht vỡ cn bnh ny Cỏc phng phỏp iu tr hin nh húa tr, x tr, phu thut, dựng thuc tng hp lm cho ngi bnh suy kit v cú nhiu tỏc dng ph Vỡ vy xu hng tr v thiờn nhiờn nhm s dng cỏc hp cht thiờn nhiờn lm thuc cha bnh ó v ang c nhiu nh khoa hc quan tõm Thỏch thc t cho cỏc nh khoa hc nghiờn cu cỏc uy trỡnh phõn tỏch hiu u cỏc hp cht thiờn nhiờn t cỏc ngun th c vt, vi nm, inh vt bi n v th c hin cỏc chuy n húa húa hc to cỏc n ut mi cú tỏc ng vic phũng v cha bnh Vit Nam nm vựng khớ hu nhit i giú mựa, cú mt thm th c vt vụ cựng phong phỳ v a ng vi hn 12.000 loi th c vt bc cao khỏc Trong ú nm núi chung c bit n cú nhiu tỏc dng vic cha bnh, c bit l bnh ung th Theo c tớnh, trờn th gii cú khong 1.5 triu loi nm Tuy nhiờn, chỳng ta mi ch phỏt hin v mụ t c khong 5% (75000 loi) Nm cú rt nhiu loi c liu uý nh nm linh chi Ganoderma lucidum, nm Võn chi Trametes versicolor, nm ụng trựng h tho (Cordyceps sinensis) Vit Nam cú khong 22000 loi nm, ú nm linh chi cú khong 60 loi Cú rt ớt cỏc cụng trỡnh nghiờn cu v húa hc ca nm c cụng b, c bit l Vit Nam v ch yu d ng li vic phõn loi Do ú, vic khai thỏc kho tng quớ y tim nng t cỏc loi nm nc ta khỏm phỏ nhiu loi thuc mi vi hiu l c cao phũng v cha bnh gúp phn nõng cao bo v sc kho ngi l hng i ỳng n v phỏt tri n bn vng Sau bo v thnh cụng lun ỏn Thc v Húa hc ca nm Vit Nam, tụi thy õy l hng i mi, cú nhiu tim nng nghiờn cu nhm tỡm cỏc hp cht cú hot tớnh sinh hc uý giỏ cng nh lm ỏng t kh nng cha bnh ca mt s loi nm cỏc bi thuc c truyn Do ú chỳng tụi chn ti Nghiờn cu thnh phn húa hc v hot tớnh sinh hc ca mt s loi nm Vit Nam Mc tiờu nghiờn cu Tỏch chit, tinh ch, ỏc nh cu trỳc húa hc v ỏnh giỏ hot tớnh sinh hc cỏc cht phõn lp t loi nm Vit Nam: Tomophagus cattienensis, Ganoderma mirabile, Ganoderma neo-japonicum, Kretzschmaria sandvicensis, Daldinia eschscholzii Ni dung nghiờn cu Nghiờn cu quy trỡnh tỏch chit phõn lp cỏc hp cht t loi nm Vit Nam Xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht phõn lp c bng cỏch kt hp cỏc phng phỏp ph ỏnh giỏ hot tớnh sinh hc ca cỏc hp cht phõn lp c i tng nghiờn cu i tng nghiờn cu ca lun ỏn l loi nm Vit Nam H Ganodermataceae: Tomophagus cattienensis, Ganoderma mirabile v Ganoderma neo-japonicum H Xylariaceae: Kretzschmaria sandvicensis v Daldinia eschscholzii Nhng úng gúp mi ca lun ỏn õy l cụng trỡnh nghiờn cu v thnh phn húa hc v hot tớnh sinh hc ca mt s cht phõn lp c t nm linh chi vng (Tomophagus cattienensis), nm linh chi (Ganoderma mirabile), nm linh chi tớm (Ganoderma neo-japonicum), nm Kretzschmaria sandvicensis, nm Daldinia eschscholzii Cỏc loi nm ny ln u tiờn c nghiờn cu ti Vit Nam, c bit nm linh chi vng (Tomophagus cattienensis) l loi nm mi c phỏt hin quc gia Cỏt Tiờn, Lõm ng T cn chit ca cỏc loi nm ny ó phõn lp c 20 hp cht, ú cú hp cht cú cu trỳc húa hc mi: cattienoid A (H2), cattienoid B (H3), cattienoid C (H4) Tin hnh th nghim hot tớnh khỏng t bo ung th bi u mụ v hot tớnh khỏng sinh ca cỏc cht sch cho kt qu: - c t bo: Cỏc hp cht sau cú hot tớnh: Schisanlactone A (H1) (IC50 = 30,4 àg/ml), cattienoid B (H3) (IC50 = 31,04 àg/ml), axit ganoderic Y (H7) (IC50 =77,65 àg/ml), ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-on (H9) (IC50 =12,68 àg/ml), ergosterol (H11) (IC50 =10,72 àg/ml), ergosta-7,22-ien3-ol (H12) (IC50 = 87,95 àg/ml), orthosporin (H14) (IC50 =78,75 àg/ml) - Hot tớnh khỏng sinh: tin hnh th hot tớnh khỏng sinh ca cỏc cht H1, H2, H3, H4, H16, H17, H18 Tuy nhiờn cỏc cht ny khụng cú hot tớnh B cc lun ỏn Lun ỏn bao gm 138 trang vi 27 bng s liu, 18 hỡnh, Kt cu ca lun ỏn gm: m u (5 trang), tng uan (30 trang), phng phỏp nghiờn cu v th c nghim (30 trang), kt qu v tho lun (59 trang), kt lun (2 trang), danh mc cỏc cụng trỡnh cụng b (1 trang), ti liu tham kho (11 trang) II NI DUNG LUN N M U Phn m u cp ý ngha khoa hc v th c tin ca lun ỏn CHNG 1: TNG QUAN 1.1 Gii thiu chung v gii nm 1.2 H nm Xylariaceae 1.2.1 Gii thiu chung v h nm Xylariaceae Xylariaceae l h cú s lng loi ln nht b Nm tỳi Xylariales thuc lp Nm tỳi Ascomycetes ngnh Nm tỳi Ascomycota Hin nay, trờn th gii ó ỏc nh c khong 85 chi v ớt nht 1.340 loi Vit Nam cú 82 loi vi 13 chi thuc h Xylariaceae ó c cụng b, õy l mt nhng h nm thng gp ca ngnh Nm tỳi Ascomyccota nc ta 1.2.2 Thnh phn húa hc h nm Xylariaceae D a theo cỏc loi nhúm cht, chia cỏc hp cht nm Xylariaceae thnh loi: dn xut ca Cytochalasin, dn xut azaphilone, dn xut ca naphtalen, cỏc hp cht khỏc 1.3 Nm linh chi 1.3.1 Gii thiu chung v nm linh chi Nm linh chi l mt loi nm thuc h a khng, thng mc trờn nhng cõy mc Nm linh chi chun cú tờn khoa hc l Ganoderma lucidum Hin ó ỏc nh c khong 286 loi nm linh chi khỏc thuc h nm g (Gano ermataceae) 1.3.2 Tỏc dng ca linh chi 1.3.2.1 Tỏc dng dc lý ca linh chi Linh chi cú tỏc dng chng ung th v chng u, chng vi khun, chng nm, chng viru (c bit i vi herpes v HIV), chng viờm hoc iu hũa dch 1.3.2.2 ng dng lõm sng 1.3.3 Thnh phn húa hc ca nm linh chi Nm núi chung cú ti 90% trng lng l nc Ngoi ra, chỳng cú u hng l mt ngun cung cp protein (10-40% trng lng khụng nc) carbohydrate (328%), cht (3-32%) v au ú cỏc vitamin thit yu, cht khoỏng Cỏc cht nm linh chi c chia lm loi ln: cỏc cht hu c v cỏc cht vụ c 1.3.4 Nghiờn cu nm ca Vit Nam CHNG PHNG PHP NGHIấN CU V THC NGHIM 2.1 Phng phỏp nghiờn cu 2.1.1 Phng phỏp ly mu Mu ti: Mu nm c thu hỏi, sch tin hnh ngõm chit dung mụi Mu khụ: Mu nm c thu hỏi vo thi i m thớch hp ca nm Mu ti sau ly v c sch, ni thoỏng mỏt hoc sy khụ 40-60oC Bo qun iu kin thớch hp ựng thớ nghim 2.1.2 Phng phỏp chit xut, phõn lp, xỏc nh cu trỳc cỏc cht phõn lp c phõn tớch v phõn tỏch cng nh phõn lp cỏc hp cht, s s dng cỏc phng phỏp c ký nh: Sc ký lp mng (TLC), sc ký ct thng (CC), sc ký lng iu ch (prep.HPLC) v cỏc phng phỏp kt tinh 2.1.3 Phng phỏp kho sỏt cu trỳc cỏc hp cht Cu trỳc cỏc hp cht c kho sỏt nh s kt hp cỏc phng phỏp ph: Ph t ngoi (UV), ph hng ngoi (IR), ph lng (EI-MS, ESI-MS, HR-ESI-MS, FT-ICR-MS), sc kớ khớ ph liờn hp (GC-MS) Ph cng hng t ht nhõn (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC) Cu trỳc lp th ca cỏc hp cht ny c ỏc nh bng cỏc phng phỏp ph 2D NMR vi cỏc k thut ROESY 2.1.4 Phng phỏp th hot tớnh sinh hc Phng phỏp th hot tớnh sinh hc c th c hin ti phũng Sinh hc th c nghim, Vin Húa hc, Vin Hn lõm Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam 2.2 Húa cht v thit b 2.2.1 Húa cht: Cỏc dung mụi s dng: metanol, n-hexan, clorofom, etyl axetat, axeton, H2O 2.2.2 Thit b 2.2.3 Dng c 2.3 Thc nghim 2.3.1 Nghiờn cu cỏc hp cht t nm Tomophagus cattienensis 2.3.1.1 Mu nm 2.3.1.2 Phõn lp cỏc hp cht t cn chit etylaxetat ca nm Linh chi vng S 2.1: S phõn lp cỏc hp cht H1- H4 Tomophagus cattienensis Mu khụ (110 g) Bó Cn etyl axetat (4,3 g) Ct sephadex, CHCl3:CH3OH=1:1 BTH1B (1700 mg) BTH1A (2500 mg) BTH1C (50 mg) CC/ H:A= 10:1- 1:1 B1 79mg B2 590mg B3 23mg B4 159mg B5 200mg B6 174mg B7 275mg H2O:CH3OH=17:83 H2O, CH3OH HPLC/RP-18 CC/RP-18 B7A B3A B3B B3C 10mg 2mg 10mg H3 B8 170 H1 B8A 75mg g H2O:CH3OH= 25:75 HPLC/RP-18 B7A11 B8A2 60mg 5mg 5mg H2 H4 2.3.1.3 Th hot tớnh sinh hc ca cỏc cht phõn lp c 2.3.1.4 Hng s vt lớ ca cỏc hp cht 2.3.2 Nghiờn cu cỏc hp cht nm Ganoderma mirabile 2.3.2.1.Mu nm 2.3.2.2 Phõn lp cỏc hp cht t cn chit etyl axetat ca nm Linh chi (Ganoderma mirabile): S 2.2: S phõn lp cỏc cht H5, H6, H7, H8 Nm linh chi (Ganoderma mirabile) Sy khụ, nghin nh Mu khụ 400g Cn etyl axetat 5,667g Bó Ct sephadex CHCl3: CH3OH =1:1 NHP1.A 200 mg NHP1.B 4836 mg NHP1.D 30 mg NHP1.C 417 mg CC/H:E B1 27 mg B2 30 mg B3 69 mg CHCl3 : CH3OH B5 =1:1 B6 B4 246 mg 59 mg 409 mg CC/ H : E = 5:1 B6.A 10 mg H8 B6.B 89 mg H5 B9.I 17 mg B8 312 mg B9 645 mg B10 139 mg CC/ H : E B9.II 136 mg B9.III 78 mg HPLC/ H : E =2:3 B9.IV.D 10 mg H6 B7 200 mg B9.IV 96 mg B9.V 58 mg B9.VI 175 mg CC/ H:E = 3:2 B9 27 mg H7 2.3.2.3 Th hot tớnh sinh hc ca cỏc cht phõn lp c 2.3.2.4 Hng s vt lớ ca cỏc hp cht 2.3.3 Nghiờn cu cỏc hp cht nm Linh chi tớm (Ganoderma neo-japonicum) 2.3.3.1 Mu nm 2.3.3.2 Phõn lp cỏc hp cht t nm Ganoderma neo-japonicum S 2.3: S phõn lp cỏc hp cht H9, H10, H11, H12 Nm linh chi tớm (Ganoderma neo-japonicum) Mu khụ 62g Cn etyl axetat 1,835 g Bó Ct epha e CHCl3 : CH3OH =1:2 THU.A 504 mg THU.B 834 mg THU.C 487 mg CC/H:E=8:1-0:100 B1 111 mg B2 227 mg B3 53 mg B4 12 mg B5 12 mg B6 13 mg B7 26 mg B8 102 mg B9 260 mg HPLC/ H:E=7:1 THUB1.3 mg H9 2B1 mg 2B2 33 mg 2B3 65 mg HPLC/ H:E=6:1 THU2B2A mg H11 THU2B2B mg H12 2B4 53 mg 2B5 24 mg THUB3.1 mg H10 2.3.3.3.Th hot tớnh sinh hc ca cỏc cht phõn lp c 2.3.3.4 Hng s vt lớ 2.3.4 Nghiờn cu cỏc hp cht nm Kretzschmaria sandvicensis 2.3.4.1 Mu nm S 2.4: S phõn lp cỏc hp cht H13, H14, H15 Kretzschmaria sandvicensis 212,232g Cn chit metanol 7,695g CC/ H:E A 0.285 g B 0.039 g C 0.094 g D 0.051 g E 0.060 g G F 0.391 g Sephadex LH-20 CHCl3: CH3OH= 1:1 F2 0.230 g C3 0.010 g CC/H:E C3d mg H13 F2k 0.023 g F2f 0.032 g HPLC/RP-18 H:E =1:3 F2k2 mg H15 F2f11 10 mg H14 2.3.4.3 Hng s vt lớ 2.3.5 Nghiờn cu cỏc hp cht nm Daldinia eschscholzii 2.3.5.1.Mu nm 2.3.5.2 Phõn lp cỏc hp cht t cn chit etyl axetat ca nm Daldinia eschscholzii S 2.5: S thu nhn cỏc cn chit t nm Daldinia eschscholzii Daldinia schscholzii (320 g) Cao tng (36.411 g) Hũa cn 300 ml nc Chit nhiu ln bng n- hexan Dch n- hexan Dch chit B Chit bng etyl axetat Ct ỏp sut thp Cn chit nhexan(1,418 g) Dch chit C Dch etyl axetat Chit bng butanol Dch butanol Ct ỏp sut thp Cn chit butanol (3,091 g) Dch chit D Ct ỏp sut thp Cn chit etylaxetat Dng du (4,052 g) 11 3.1.3.1 Cht H1 (BTH1B3C) Ph lng phõn gii cao FT-ICR-MS cú pic ion phõn t ti m/z 487.2810, ng vi cụng thc phõn t C30H40O4Na (tớnh toỏn cho C30H40O4Na l 487.2824), t ú uy cụng thc phõn t hp cht H1 l C30H40O4 Ph 1H NMR gm cỏc võn ph sau: bn tớn hiu ca H ớnh vi cacbon mang liờn kt ụi 6.24 ( ), 5.80 ( , J = 1Hz) v 6.68 ( , J= 12 Hz) v 6.62 (br ) Nh vy tớn hiu H (5.80) v H (6.68) l hai tớn hiu H ớnh vi hai nguyờn t cacbon khụng no ng cnh Mt H ớnh vi cacbon gn vi oxi 4.51 ppm Bn nhúm metyl ớnh vi C bc 3, mt nhúm metyl ớnh vi C bc v mt nhúm metyl ớnh vi cacbon khụng no (1.93, s) Ph 13C NMR gm cỏc tớn hiu sau: hai nhúm cacbonyl 166.5 v 167.3 ppm, bn liờn kt ụi C=C (8 tớn hiu t 117.6 n 151.1 ppm) Hai cacbon ớnh vi oxi 80.4 v 80.1 ppm Ph HMBC cú cỏc tớn hiu tng uan ca nhúm cacbonyl (167.3 ppm) vi hai H (5.80 v 6.68) t ú cho thy C=O v trớ liờn hp vi C=C, qui kt H (5.80 v 6.68) l tớn hiu ca H-1, H-2 V trớ 6.24 l tớn hiu ca H-19, 6.62 (H-24) Ngoi cũn cú tớn hiu H (1.93) ca nhúm metyl ớnh vi liờn kt ụi tng uan vi nhúm cacbonyl th (166.5 ppm) So sỏnh cỏc tớn hiu NMR ca hp cht H1 vi ti liu tham kho chỳng tụi thy hon ton phự hp, nh vy hp cht H1 l Schisanlactone A Schisanlactone A (H1) 3.1.3.2 Cht H2 (BTH1B7A11) (cht mi) Ph phõn gii cao ca hp cht H2 cú pic ion gi phõn t m/z 407.2187 tng ng vi cụng thc C24H32O4Na (tớnh toỏn cho C24H32O4Na l 407.2198), t ú suy cụng thc phõn t ca hp cht ny l C24H32O4 Ph 1H NMR cú ba tớn hiu proton ớnh vi Csp2 Trong ú cú hai tớn hiu ụi 6.67 v 5.83 Mt tớn hiu n 6.23 tng t nh hp cht H1 Ngoi cũn cú mt tớn hiu ca proton ớnh vi cacbon liờn kt vi oxi 4.14 (d, 6.5) Hp cht ny ch cú nhúm metyl ( inglet), ú cú nhúm metyl trng yu (2.27 ppm) Ph 13C NMR cho thy tớn hiu ca 24 nguyờn t cacbon, cú nhúm xeton no (208.5 ppm), nhúm cacbonyl (167.0 ppm) v liờn kt ụi (120-150) Bờn cnh ú cũn cú tớn hiu cacbon ớnh vi oxi (80.5 v 77.0) Qua cỏc kt qu ph NMR cú th d oỏn H2 l mt dn xut ca hp cht H1 Ph HMBC chỳng tụi thy cú cỏc tng uan ca nhúm metyl (2.27 ppm) vi nhúm xeton vỡ th s cú mnh CH3-CO- Hai proton doublet 5.83 v 6.67 cú tng uan vi nhúm cacbonyl 167.0 ppm, vy chỳng tụi quy kt l H-1 v H-2 Cũn proton cũn li 6.23 l H-19 Kt hp vi ph HSQC ỏc nh c v trớ 144.0 (C-1), 118.2 (C-2), 142.7 (C-19) V trớ ca OH v trớ C-15 o cú tng tỏc ca H-16, H-24 vi C-15 ỏc nh húa hc lp th ca H2, chỳng tụi o ph ROESY, cỏc tớn hiu 12 quan trng l H-1 vi H-2 v H-19 giỳp khng nh cu to ca hai vũng A v B; H-5 v H-23 giỳp ch H-5 v H-23 cựng phớa, H-15 vi H-17 v H-24 giỳp ch H15, H-17, H-24 nm cựng phớa 18 H H 11 H 13 19 O O 10 O 22 H 17 14 15 20 21 H 24 H OH 23 Bng 3.3: Bng s liu ph NMR ca cht H2 (CDCl3) 13 STT H NMR (ppm), J (Hz) C NMR (ppm) 6.67 d (12.5) 144.0 5.83 d (12.5) 118.2 167.0 80.5 2.56 dd (5.5, 13.5) 49.2 2.41 m 35.5 2.31 m v 2.15 m 26.9 147.1 129.5 10 139.4 11 2.40 m v 2.20 m 27.7 12 2.10 m v 1.84 dd (9.0, 31.0 13 12.0) 56.4 14 45.3 15 77.0 16 4.14 d (6.5) 35.5 17 2.35 m 58.8 18 2.87 t (8.5) 19.1 19 0.99 s 142.7 20 6.23 s 208.5 21 31.3 22 2.27 s 29.0 23 1.41 s 26.4 24 1.55 s 26.6 1.01 s Chỳng tụi ki m tra cu trỳc ca cht ny bng Scifinder ngy 15/07/2013 thỡ thy rng hp cht H2 l mt cht mi, t tờn l cattienoid A 3.1.3.3 Hp cht H3 (BTH1B3A, Cht mi) Ph FT-ICR-MS ca hp cht H3 cú tớn hiu m/z 363.9335 (tớnh toỏn cho C22H28O3Na l 363.1936), tng ng vi cụng thc phõn t C22H28O3Na Nh vy, hp cht H3 cú cụng thc phõn t l C22H28O3 Ph 1H NMR, 13C NMR cú cỏc tớn hiu tng t hp cht H2, ch khỏc l 13 hp cht H3 cú bn nhúm metyl ớnh vi C bc v khụng cú proton ớnh vi cacbon liờn kt vi o i Nh vy cú th suy rng, hp cht ny cng cú cu trỳc vũng lacton cnh nh cỏc hp cht H1 v H2 Ph 13C NMR cú tớn hiu xeton no 218.5 ppm V trớ nhúm eton ny c ỏc nh C-17 cú tớn hiu tng tỏc ca H-18 vi C-17 ph HMBC Phõn tớch ph HMBC chỳng tụi suy cu trỳc ca hp cht H3 nh au: 18 O 11 13 19 O 10 O 20 17 14 15 22 21 Cattienoid B (H3) Kt qu ki m tra bng Scifinder ngy 15/07/2013 thỡ thy rng hp cht H3 l mt cht mi, c t tờn l cattienoid B Bng 3.4: Bng s liu ph NMR ca cht H3 (CDCl3) 13 STT H NMR (ppm), J (Hz) C NMR (ppm) 6.70 d (12.0) 143.3 5.85 d (12.0) 118.3 167.0 80.3 2.46 m 49.3 2.42 m v 2.30 m 39.2 2.21 m v 2.00 m 26.9 148.3 130.2 10 140.2 11 2.25 m 25.8 12 1.89 m v 1.68 m 23.0 13 51.9 14 46.7 15 2.08 m v 1.81 m 28.0 16 2.55 dd (6.5, 19.5) 34.3 17 218.5 18 0.92 s 18.6 19 6.26 s 142.6 20 1.41 s 29.3 21 1.55 s 26.2 22 1.13 s 28.1 3.1.3.4 Xỏc nh cu trỳc hp cht H4 (BTH1B8A2) - Ph phõn gii cao FT-ICR-MS (hỡnh 3.12) ca hp cht H4 cú pic ion gi phõn t m/z 423.21444, tng ng vi cụng thc phõn t C24H32O5Na (tớnh toỏn cho C24H32O5Na l 423.2147) Nh vy, hp cht H4 cú cụng thc phõn t l C24H32O5 nhiu hn hp cht H2 mt nguyờn t oxi 14 - Ph 1H NMR,13C NMR v HMBC ca hp cht H4 hon ton tng t nh ca hp cht H2 Ch cú i m khỏc nht l tớn hiu H-5 bin mt, thay vo ú l C-5 cng hng trng yu hn (92.8 ppm) T ú gi ý rng nhúm OH th ớnh vi C-5 V trớ nhúm OH th nht cng ớnh vi C-15 ging nh hp cht H2 Nh vy cu trỳc ca H4 c ỏc nh nh au 18 11 O 10 O 22 13 19 OH 20 21 17 14 15 O 24 HO 23 Cattienoid C (H4) Chỳng tụi cng ki m tra cu trỳc ca cht ny bng Scifinder ngy 15/07/2013 thỡ thy rng nú l mt cht mi v t tờn l cattienoid C Bng 3.5: Bng s liu ph NMR ca cht H4 (CDCl3) 13 STT H-NMR(ppm), J (Hz) C-NMR (ppm) 6.93 d (9.5) 148.0 5.88 d (9.5) 116.7 164.3 77.7 92.8 2.45 m v 2.34 m 43.9 2.32 m 28.3 150.2 127.3 10 133.2 11 2.48 m v 2.17 m 27.2 12 1.82 ddd (4.4, 5.0, 12.5) v 2.10 m 30.9 13 56.6 14 45.3 15 4.13 brd (6.0) 77.0 16 2.35 m 35.6 17 2.85 t (8.5) 59.2 18 1.03 s 19.2 19 6.22 s 139.3 20 208.3 21 2.16 s 31.2 22 1.15 s 24.8 23 1.25 s 24.5 24 0.94 24.6 3.1.4 Hot tớnh sinh hc ca cỏc cht H1- H4 - Cn chit etyl axetat ca nm linh chi vng c th kh nng khỏng t bo ung th bi u mụ KB Kt qu cho thy cn chit cú hot tớnh, vi giỏ tr IC50 = 31.58 g/ml 15 - Sau nhn thy cn chit nm linh chi vng cú hot tớnh khỏng t bo ung th bi u mụ KB Chỳng tụi tin hnh th kh nng khỏng ũng t bo ny ca cht sch Kt qu c mụ t bng 3.6 Bng 3.6 Hot tớnh khỏng t bo ung th bi u mụ ca H1-H4 Cht H1 H2 H3 H4 63.3 >128 91.2 >128 IC50 (g/ml) Nh vy, hp cht H1 v H3 cú hot tớnh c ch s phỏt tri n ca t bo ung th bi u mụ Cũn hp cht H2 v H4 thỡ khụng cú hot tớnh Ngoi chỳng tụi cũn th hot tớnh khỏng sinh ca c bn cht ny trờn chng vi sinh vt ki m nh Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Lactobacillus fermentum, Salmonella enterica, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Candida albican Tuy nhiờn c cht ny u cho kt qu õm tớnh [IC50 (g/ml) >128 mg/ml] Bn hp cht ny (H1-H4) cng c ỏnh giỏ kh nng c ch tyrosinase, nhiờn chỳng khụng cú hot tớnh 3.2 Nm Linh Chi Ganoderma mirabile 3.2.1 Mu nm Nm Linh chi (Ganoderma mirabile) c thu hỏi Lo Cai vo thỏng 2012 v c PGS.TS Lờ Xuõn Thỏm ỏc nh tờn khoa hc 3.2.2 Phõn lp cỏc hp cht 3.2.3 Xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht 3.2.3.1 Hp cht H5 Hp cht H5 l cht bt mu trng, i m núng chy 165-1670C Ph 1H-NMR cho thy tớn hiu ca nhúm metyl, mt tớn hiu ca proton ớnh vi cacbon cú nhúm hydroxyl 3.63 (1H, m) v tớn hiu ca proton olefinic Ph 13C-NMR cho thy tớn hiu ca 28 nguyờn t cacbon gm nguyờn t cacbon ca liờn kt ụi C 141.20; 139.80; 135.49; 131.90; 119.46; 116.21 v tớn hiu cacbon liờn kt vi oxy 70.10 ppm T d liu ph 1H-NMR v 13C-NMR so sỏnh vi ti liu tham kho cho phộp ỏc nh hp cht H5 l ergosterol 28 21 18 12 19 11 20 24 26 23 27 13 17 15 10 HO Ergosterol (H5) 3.2.3.2 Hp cht H6 Hp cht H6 thu c i dng tinh th hỡnh kim khụng mu, i m núng chy 176-1780C - Ph 1H NMR s cú mt ca hai nhúm metyl gn vi cacbon bc bn c nhn bit l hai singlet ti H 0.83 (s, H-18) v 0.88 (s, H-19), bn nhúm metyl gn vi cabon bc ba, bn proton ca hai ni ụi cng c ỏc nh ti v mt proton oxymetyl ti 3.96 (m, H-3) 16 - Trờn ph 13C NMR xut hin tớn hiu ca 28 nguyờn t cacbon Trong ú cú tớn hiu 4C ni ụi, hai nguyờn t cacbon ni vi nguyờn t oxi ti C 82.16 (C-5), 79.42 (C-8) cựng vi hai tớn hiu ca ni ụi ti C-6/C-7 rt c trng cho to thnh liờn kt peroxit ti C-6, C-7 Ngoi cng trờn ph 13C NMR cũn xut hin tớn hiu ca mt cacbon cha nhúm hydroxyl ti 66.42 (C-3) v sỏu nhúm CH3 Cỏc d liu ph ca cht H6 v so sỏnh vi cỏc d liu ph tng ng ca ergosterol peroxide cho kt qu phự hp T ú, chỳng tụi kt lun hp cht l ergosterol peroxide Ergosterol peroxide (H6) 3.2.3.3 Hp cht H7 - Ph 1H NMR cú tớn hiu ca proton ni ụi 6.82, 5.48, 5.32 Tớn hiu ca proton ca nhúm metyl ti cỏc v trớ H 1.83, 1.00, 0.99, 0.93, 0.57 ppm - Ph 13C NMR cho thy tớn hiu ca 30 nguyờn t cacbon ú cú tớn hiu ca cacbon nhúm cacbonyl axit C=O (C 171.1 ppm), tớn hiu ca cacbon cú liờn kt ụi C (tớn hiu t 116.2ppm n 146.0ppm) Ph 13C-NMR cũn cho thy tớn hiu ca nguyờn t C ớnh vi O C 79.0, tớn hiu ca C nhúm metyl C (tớn hiu t 12.2 n 28.1 ppm) T õy, oỏn H7 l mt steroit - Ph HMBC cú tng tỏc ca H (6.82 ppm)/C-26 cho thy liờn kt ụi v trớ liờn hp vi nhúm C=O ca nhúm COOH tc l v trớ ni ụi gia C24 v C25, v trớ H (6.82 ppm) l tớn hiu proton ca H-24 Trờn ph xut hin s tng tỏc gia C (ớnh vi nhúm OH)/ H-28, H-29 o ú ỏc nh c v trớ ca C-OH ti v trớ C-3 Trờn ph HMBC xut hin tng tỏc H-30/C-7, C-8; H-19/C-9, cỏc tng tỏc ny cho bit v trớ ca liờn kt ụi cũn li Tng hp d liu cỏc ph kt hp vi so sỏnh vi ti liu tham kho ỏc nh c cu trỳc hp cht H7 nh au: 21 24 18 12 19 11 COOH 26 20 27 13 17 15 10 30 HO 29 28 Axit ganoderic Y (H7) 3.2.3.4 Hp cht H8 -Ph GC-MS ca cht H8 cho bit cụng thc phõn t ca cht H8 l C16H32O2 -Ph 1H NMR (CDCl3, 500Hz, , ppm) cú cỏc tớn hiu H: 0.86 (3H, t, J = 6.5; 13.5 Hz, H-16); 1.25 (24H, m, H-4 ữ H-15); 1.63 (2H, quint, J = 7.5Hz, H-3); 2.34 (2H, t, J = 7Hz, H-2) 17 T vic phõn tớch hai loi ph GC-MS v 1H-NMR, chỳng tụi ỏc nh cu trỳc ca cht H8: O 10 12 11 OH 13 14 15 16 Axit panmitic (H8) 3.2.4 Hot tớnh sinh hc Chỳng tụi tin hnh th kh nng ũng t bo ny ca cht H7 (axit ganoderic Y), vi kt qu hot tớnh khỏng t bo ung th bi u mụ IC50 = 77.65 àg/ml Ngoi cht H6 (ergosterol peroxide) cng cho kt qu hot tớnh khỏng t bo ung th bi u mụ vi IC50 = 23.5 àg/ml iu ny m tri n vng ng dng cỏc loi nm, c bit l nm linh chi phõn b khp lónh th Vit Nam cho vic h tr iu tr cỏc bnh ung th 3.3 Nm Linh chi Ganoderma neo-japonicum 3.3.1 Mu nm Nm linh chi (Ganoderma neo-japonicum) c thu hỏi Lo Cai vo thỏng - 2013 v c PGS.TS Lờ Xuõn Thỏm ỏc nh tờn khoa hc 3.3.2 Phõn lp cỏc hp cht 3.3.3 Xỏc nh cu trỳc hp cht 3.3.3.1 Hp cht H9 Hp cht ng u, mu vng nht, tan tt clorofom, etyl a etat, metanol; cú Rf = 0,56 Ph 1H NMR: D a trờn hỡnh ng v kin ph cho thy H t n ppm cú nhiu nhúm CH3, t ppm cú nhiu nhúm CH v CH2, vựng ppm cú ớt liờn kt CH= nờn oỏn hp cht ny cú khung steroit T vic o ỏnh ta cú th quy kt nh au: Trờn ph 1H NMR cho thy phõn t cha cỏc proton olefin vi khong chuy n ch húa hc t - 6.5 ppm -Ph 13C NMR cho thy cht H9 cú 30 nguyờn t C gm nguyờn t cacbon olefin (120 140 ppm), 1C nhúm cacbonyl C = O liờn hp (199.5 ppm) Kt u phõn tớch trờn ph kt hp vi vic o ỏnh vi cỏc liu v hỡnh ng ph ca cỏc teroi phõn lp t nhúm Ganoderma cho phộp ỏc nh cụng thc hp cht H9 l ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one Hp cht ny cng c chỳng tụi tinh ch c cỏc loi nm h Xylariaceae nh Xylaria atrosphaerica v Xylaria sp (cụng b s 1) 28 21 18 26 20 23 19 13 11 14 17 25 27 15 O Ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-on (H9) 18 3.3.3.3 Hp cht H10 Hp cht H10 l cht kt tinh mu trng, tan tt ung mụi clorofom, etyl axetat, metanol; cú Rf = 0.67 h H:E = 4:1 Ph 1H NMR cho thy cú tớn hiu ca nhúm -CH3 khong 0.5 1.7 ppm Ngoi cũn cú tớn hiu ca -CH= (anken) ln lt l 5.47 (1H, , J=5.5 Hz), 5.40 (1H, t, J=7.0 Hz), 5.32 (1H, d, J = 6.0 Hz) ỏng lu ý l tớn hiu c trng ca >CH-OH cú H = 3.25 ppm, dd, J = 3.5 Hz, 11.5 Hz v H = 4.00 ppm ( ) t ú ta cú th oỏn cht H10 cú nhúm OH Trờn ph 13C NMR cho thy cht H10 cú 30 nguyờn t C Trong ú cú nguyờn t C khụng no (60 80 ppm), C ca C-OH cú C 78.9, 69.1 ppm Trờn ph HSQC ch tng tỏc tr c tip gia nguyờn t C gn vi H cho phộp ỏc nh c v trớ ca nguyờn t C cha H tng ng cú C: 127.0 & 120.3 ppm (C-24 v C-7), 116.3 ppm (C-11), 13.65 ppm (C-27), 15.69 ppm (C-18), 18.43 ppm (C-21), 22.76 ppm (C-19), 15.80 ppm (C-30), 27.85 ppm (C-29) Trờn ph HMBC ta thy cú tng tỏc mnh ca C-24, C-25, C-27 vi nguyờn t H ca nhúm OH nờn ta cú th uy kt mt nhúm OH ca cht H10 v trớ 26 Bng vic ột tng tỏc a gia cỏc nguyờn t C v H ua 2-3 liờn kt (ph HMBC) cú th uy kt c chuy n ch ca cỏc proton v cỏc nguyờn t cacbon tng ng Chỳng tụi a cụng thc cho cht H10 l ganodermadiol 21 24 26 18 12 19 11 20 OH 27 13 17 15 10 30 HO 29 28 Ganodermadiol (H10) 3.3.3.4 Cht H11 Qua vic phõn tớch cỏc liu ph, ỏc nh hp cht H11 l ergosterol ging vi hp cht H5 3.3.3.5 Cht H12 Hp cht H12 l cht rn, mu trng, tan tt ung mụi clorofom, etyl axetat, metanol; cú Rf = 0,33 h H:E = 6:1 H NMR: D a trờn hỡnh ng v kin ph cho thy H = 0ữ2 ppm cú nhiu nhúm CH3, t 2ữ3 ppm nhiu nhúm CH v CH2, vựng 5ữ6 ppm cú ớt liờn kt CH= nờn cht H12 cú khung steroit khỏ uen thuc ging cht H9 T vic o ỏnh ta cú th uy kt nh au: Trờn ph 1H NMR cho thy hp cht H12 cha cỏc proton olefin vi khong chuy n ch húa hc t 5ữ6.5 ppm, ỏng chỳ ý l tớn hiu ca H ớnh vi cacbon mang liờn kt ụi 5.17 ppm, ( ) cú th uy kt cho proton ny l H-22, tip theo l proton vi = 5.15 ppm, m Tip theo l tớn hiu vi = 3.60 ppm, t, J = 6.5, 4.5, 4.5 Hz, ta cú th uy kt õy l proton ca nhúm OH Ngoi cũn cỏc tớn hiu ca CH v CH2 nh bng 3.14 19 Trờn ph 13C NMR cho thy cht H12 cú 28 nguyờn t C Vựng t 120140 ppm cú cỏc tớn hiu c trng cho nguyờn t C olefin 71.1 ppm l tớn hiu C c gỏn cho nhúm C-OH Cũn li l C no ca nhúm CH3, >CH2, >CH- Ph DEPT: D a vo kt u o ph DEPT ta thy cht H12 cú nhúm CH3, nhúm CH2, cũn li l 14 CH Trờn ph HSQC ch tng tỏc tr c tip gia nguyờn t C gn vi H cho phộp ỏc nh c v trớ ca nguyờn t C cha H tng ng cú C: 71.1 ppm (C-3), 21.1 ppm (C-21), 17.6 ppm (C-28), 12.1 ppm (C-18), 13.1 ppm (C-19), 20 ppm (C27), 19.7 ppm (C-26) Trờn ph HMBC cho thy tng tỏc giỏn tip gia nguyờn t H vi cỏc nguyờn t C bờn cnh nú Ta thy cú tng tỏc mnh ca C-22, C-23 vi nguyờn t H ca C 21 v 28 nờn ta cú th uy kt v trớ ca liờn kt ụi phõn t cht H12 nm cacbon 22, 23 Tng hp liu ph chỳng tụi a cụng thc cho hp cht H12 l ergosta7,22-ien -3-ol 28 21 27 18 20 13 11 19 14 HO 10 17 22 23 26 15 Ergosta-7,22-ien -3-ol (H12) 3.3.4 Hot tớnh sinh hc Chỳng tụi tin hnh th c t bo ung th bi u mụ (KB) ca H9-H12 Kt qu cho tht cỏc hp cht H9, H11 v H12 cú hot tớnh mnh v trung bỡnh vi IC50 ln lt l 12.68; 10.72 v 87.95 àg/ml Ngoi ra, hp cht H10 khụng cú hot tớnh (IC50 > 100 àg/ml) 3.4 Nm Kretzschmaria sandvicensis 3.4.1 Mu nm Mu nm c thu hỏi ti in Biờn vo thỏng 6/2011 vi lng mu ti l 212.232 (g), o PGS.TS Dng Minh Lam (Khoa Sinh hc, trng i hc phm H Ni) ỏc nh tờn khoa hc 3.4.2 Phõn lp cỏc hp cht 3.4.3 Xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht 3.4.3.1 Cht H13 Ph phõn gii cao FT-ICR-MS ca cht H13 cú pic ion gi phõn t m/z 231.06264, ng vi cụng thc phõn t l C11H12O4Na(tớnh toỏn cho C11H12O4Na l 231.0633) Vy, cụng thc phõn t ca nú l C11H12O4, ng vi bi l Phõn tớch ph 1H NMR ta thy: cú võn ph vi dch chuy n húa hc l H = 7.09 ppm, cú th quy kt l H ca vũng thm Ngoi trờn ph xut hin võn ph ca nhúm metyl khong trng mnh H = 2.20 ppm Trờn ph cú tớn hiu proton ca nhúm metyl proton vi dch chuy n húa hc H = 3.89 ppm, ú l ca proton ca -OCH3 Ph 13C NMR: cho thy cht s 13 cú 11 C Trong ú cú võn ph vựng 20 C t 90 n 170 ppm tng ng vi C vũng benzen Trờn ph cú võn vựng trng mnh ú: nhúm OCH3 (C = 56.12, 59.34), nhúm CH3 (C = 9.61), nhúm CH2 ớnh tr c tip vi nguyờn t O (C = 68.26 ppm) T vic phõn tớch cỏc ph trờn kt hp vi ti liu tham kho, chỳng tụi kt lun cụng thc cu to ca hp cht H13 l o-methylsilvaticol cú cu trỳc nh au: OCH3 H3C 4a O 7a H3CO O 3.4.3.2 Cht H14 Ph phõn gii cao FT-ICR-MS ca hp cht H14 cú pic ion gi phõn t m/z 259.05764 ng vi cụng thc phõn t C12H12O5Na (tớnh toỏn cho C12H12O5Na l 259.0582) Vy cụng thc phõn t ca hp cht ny l C12H12O5, ng vi bi bng Phõn tớch ph 1H NMR ca hp cht H14 cho ta thy: tớn hiu vi dch chuy n húa hc l H = 6.37 (1H, d, J = Hz) v 6.26 (1H, , J = Hz) c d oỏn l nguyờn t H nhõn thm v trớ meta vi l H5 v H-7 tớn hiu cú dch chuy n húa hc l H = 2.59 (2H, m) c d oỏn l proton ca nhúm CH2 Mt võn ph 4.22 ppm (1H, m) d oỏn l proton ca nhúm CH-OH Mt võn 1.28 ppm (3H, d, J = Hz) d oỏn l proton ca nhúm -CH3 võn ph ng dch chuy n l 6.25 (1H, ) ú l proton gn vi C=C Phõn tớch ph 13C NMR: Cú 12 võn ph tung ng vi 12C Trờn ph cú mt võn ph trng yu vi C = 166.5 ppm quy kt cho C ca nhúm C=O, cú võn ph vi dch chuy n khong t 100ppm n 165ppm d oỏn l C ca nhõn thm v C ca liờn kt C=C gn vi O pic ti v trớ C = 65.7 ppm l C ca ớnh vi O, pic cũn li ng vi dch chuy n C = 23.4, 44.1 ppm l 2C ca nhúm CH3, -CH2 T vic phõn tớch cỏc ph trờn v so sỏnh vi ti liu tham kho chỳng tụi kt lun cụng thc cu to ca hp cht H14 l Orthosporin OH O HO 8a 4a O OH 10 11 Orthosporin (H14) 3.4.3.3 Cht H15 Phõn tớch ph phõn gii cao FT-ICR-MS ca hp cht H15 cú pic ion phõn t [M-H] m/z 223.0970 ng vi cụng thc phõn t C12H15O4 (tớnh toỏn cho C12H15O4 l 223.0970) Vy cụng thc ca phõn t ca cht H15 l C12H16O4, ng vi bi bng Phõn tớch ph 1H NMR ca hp cht H15: Mt tớn hiu cú dch chuy n húa hc H = 0.98 (3H, t, J = 7.5 Hz) ú l proton ca nhúm CH3 liờn kt vi nhúm ankyl Mt võn ph cú dch chuy n húa hc H = 7.78 ppm (1H, ) c d oỏn l proton ca nhúm =C-H Mt võn ph cú dch chuy n húa hc H = 4.60 (1H, ,J = 7.5 Hz) c d oỏn l proton ca 21 nhúm CHOH ca vũng no Mt tớn hiu ng vi dch chuy n H = 4.47 ppm (2H, d) proton ca nhúm CH2 liờn kt vi C=C, gn O pic cú dch chuyn húa hc t 1.28 ppm n 2.60 ppm d oỏn l proton ca CH2 Nhn thy cỏc H ca cựng mt nhúm CH2 cú dch chuyờn húa hc khỏc chỳng tụi d oỏn l H ca vũng iclohe an hp cht s cú mt vũng no cnh liờn kt vi vi mt d vũng cnh cha O cú cha liờn kt ụi, mt nhúm C=O Phõn tớch ph 13C NMR ta thy: 12 pic tng ng hp cht cú cha 12C Mt võn ph trng yu cú C = 180.7 ppm d oỏn l nhúm C=O võn ph cú dch chuy n húa hc t 120 ppm n 170 ppm, d oỏn l ca C=C võn ph cú C = 58.2 ppm, 68.7 ppm d oỏn l C ca nhúm CHOH võn ph cú dch chuy n húa hc t 20 ppm n 42 ppm d oỏn l C ca nhúm CH2 no Mt võn ph cú C = 11.2 d oỏn l C ca nhúm CH3 (C-12) Phõn tớch tng tỏc tr c tip gia C-H qua ph HSQC ta thu c v trớ liờn kt vũng v nhỏnh Phõn tớch tng tỏc gia C-H qua 2-3 liờn kt bng ph HMBC ta thy: Cú cỏc tng tỏc H-12/C-11, C-6; H-11/ C-5, C-6, C-7, C-12 nờn ta cú nhỏnh CH2CH3 liờn kt tr c tip vi C-6 Ngoi cũn cú tng tỏc H-13 (CH2OH) / C-2, C-3, C-4 v C-13/ H-2 nờn nhúm CH2OH ớnh vi C-3 T vic phõn tớch cỏc ph trờn chỳng tụi kt lun cụng thc cu to ca hp cht H15 nh au: O 10 12 OH O 13 OH 11 Diplosporin (H15) 3.5 Nm Daldinia eschscholzii 3.5.1 Mu nm Nm c thu ti tnh Phỳ Th, thỏng nm 2014 bi TS c Qu Tờn nm ó c ỏc nh bi TS c Qu v PGS.TS Dng Minh Lam, Khoa Sinh hc, Trng i Hc S Phm H Ni 3.5.2 Phõn lp cỏc hp cht 3.5.3 Xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht 3.5.3.1 Cht H16 Hp cht H16 c tỏch l mt cht rn vụ nh hỡnh Cụng thc phõn t c xỏc nh l C28H35O4N d a trờn pic ion gi phõn t [M+Na+] vi giỏ tr m/z 472 ph ESI-MS (ph lc 39) Ph 1H NMR cho tớn hiu proton ti v trớ 5.5 ppm (brs) cho thy s xut hin nhúm NH Ngoi trờn ph cũn xut hin tớn hiu exo-metylen ti v trớ 5.1 v 5.28 ppm Ngoi cũn xut hin tớn hiu proton olefin, tớn hiu proton vũng thm Ph 13C NMR cho thy s cú mt ca 28 nguyờn t cacbon Trong ú cú mt nhúm C=O ca xeton liờn hp (198.6 ppm), nhúm C=O ca amit (173.3 ppm), C ca nhúm metyl (13.2 25.9 ppm), C thm, C ớnh vi O (71.6 v 73.0 ppm) T cỏc d liu c phõn tớch t ph NMR ca cht H16 rt ging vi hp cht cytochala in m trc ú ó c phõn lp t khụng ỏc nh Daldinia sp Nht Bn T ú chỳng tụi kt lun c cht H16 l cytochalasin 22 Cytochalasin 3.5.3.2 Hp cht H17 Ph ESI-MS ca hp cht H17 cú pic ion gi phõn t m/z 490.4 [M+Na]+ v m/z 466.5 [M-H]-, nh vy H17 cú lng phõn t l m/z 467, ng vi cụng thc phõn t l C28H37O5N Ph 1H NMR cú tớn hiu proton ca nhúm NH amit (5.76, brs), benzyl [7.30 (t, 2H), 7.24 (m, 1H), 7.09 (d, 2H)], tớn hiu exo-metylen ti v trớ 5.10 v 5.28 ppm, proton olefin 6.09 (dd, J = 10.0, 16.0), 5.33 (ddd, J = 4.5, 11.0, 15.5), tớn hiu proton ca nhúm metyl ti v trớ 1.04 (d, J = Hz), 1.05 (d, J = 6.5 Hz), tớn hiu proton ca nhúm metyl 1.28 (s) gn vi C cú O Ph 13C NMR cho thy s cú mt ca 28 nguyờn t C, ú cú C=O eton (212.3 ppm), nhúm C=O ca amit (173.2 ppm), C olefin (148.5, 114.4, 128.9, 136.0 ppm), C thm [(129.7 (2C), 128.8 (2C), 127.1 (1C)], C cú ớnh O (75.4, 71.5, 71.4 ppm) v cỏc tớn hiu khỏc bng T cỏc d liu ph NMR khng nh hp cht H17 l mt dn xut cytochalasin T d liu ph NMR cho thy hp cht H17 tng t hp cht H16, i m khỏc l hp cht H17 ớt hn cht H16 mt liờn kt ụi, cú thờm nhúm OH Ph HMBC cú tớn hiu tng uan gia H-23 (1.28 ppm)/C-18 (75.4 ppm) v C-19 (71.4), H-20 (4.23 ppm, 1.73 ppm) /C-19 (71.4 ppm) v C-21 (212.3 ppm) iu ny cho thy v trớ gia C-19 v C-20 thay vỡ cú mt liờn kt ụi thỡ v trớ C19 cú nhúm OH ỏc nh c cu trỳc lp th chỳng tụi tin hnh o ph ROESY Tng hp cỏc d liu ph chỳng tụi kt lun hp cht H17 l cytochalasin Cytochalasin (H17) 3.5.3.3 Hp cht H18 Ph ESI-MS ca hp cht H18 cú pic ion gi phõn t m/z 505.4 [M+Na]+ v m/z 480.5 [M-H]-, nh vy H18 cú lng phõn t l m/z 481, ng vi cụng thc phõn t l C29H39O5N D liu ph NMR ging cht H17, ngoi tr s xut hin ca nhúm OCH3 ti v trớ 3.49 (s) ph 1H NMR, 59.0 ppm ph 13C-NMR Kt hp vi ti liu tham kho, chỳng tụi kt lun cht H18 l cytochalasin 23 OH H H MeO H N 19 H O O OH Cytochalasin (H18) 3.5.3.4 Hp cht H19 Qua phõn tớch ph NMR ca hp cht H19 kt lun nú khụng phi l mt cytochalasin Ph 1H NMR: Trong vựng trng yu xut hin tớn hiu ca proton ti 8.10 ppm Ngoi xut hin tớn hiu ca H ớnh vi cacbon liờn kt vi oxi 4.29 ppm Ph 13C-NMR: Xut hin 01 nhúm cacbonyl 166.0 ppm Mt liờn kt ụi C=C c qui kt ti 129.5 v 134.3 ppm Kt qu phõn tớch trờn ph kt hp vi vic so sỏnh vi cỏc s liu v hỡnh dng ph cho phộp xỏc nh cụng thc cu to ca H19 nh au: 3.5.3.5 Hp cht H20 Hp cht H20 thu c i dng kt tinh hỡnh kim mu trng hn hp hexan v etyl axetat Ph MS: T ph ta ỏc nh c lng phõn t ca hp cht H20 l 398, ng vi cụng thc phõn t l C28H46O Ph 1H NMR: Trong vựng trng yu thy xut hin mt tớn hiu ti v trớ 5.16 ppm (1H, m) c quy kt cho proton ca nhúm CH= (H-7) Tớn hiu exo-metylen ti v trớ 4.72 ppm v 4.60 ppm thy xut hin tớn hiu proton ca nhúm CH2= (H-28) Mt tớn hiu ti v trớ dng 3,60 ppm (1H, m) c quy kt cho proton ca nhúm CH liờn kt vi nhúm OH (H-3) T ph 13C NMR thy hp cht H20 cú 28C khụng tng ng Trong ú cú tớn hiu ca C olefin (139.50, 117.50, 117.44, 105.97), tớn hiu C ớnh vi O (71.09 ppm) T 19,04 71,09 ppm c trng cho vựng C no ú v trớ 71,09 ppm c quy kt cho nguyờn t C liờn kt vi nhúm OH (C-3) Kt qu phõn tớch trờn ph kt hp vi vic so sỏnh vi cỏc s liu v hỡnh dng ph ca ergosta-7,24(241)-dien-3-ol phõn lp t Venturia inaequalis cho phộp ỏc nh cụng thc ca hp cht H20 28 21 27 18 19 HO 11 10 13 14 20 17 25 22 24 26 24 3.5.4 Hot tớnh sinh hc Chỳng tụi tin hnh th kh nng khỏng inh ca ba cht H16, H17 v H18 trờn chng vi sinh vt l Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Lactobacillus fermentum, Salmonella enterica, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Candida albican Tuy nhiờn, c ba hp cht ny u khụng cú hot tớnh khỏng sinh (IC50> 128 g/mL) KT LUN Nghiờn cu thnh phn húa hc v hot tớnh sinh hc ca loi nm Vit Nam: Tomophagus cattienensis, Ganoderma mirabile, Ganoderma neo-japonicum, Kretzschmaria sandvicensis, Daldinia eschscholzii, chỳng tụi ó thu c mt s kt qu nh sau: T dch chit ca loi nm, bng cỏc phng phỏp c kớ nh c kớ ct v sc kớ lng iu ch ó phõn lp c 20 hp cht (H1-H20) Cu trỳc ca chỳng c ỏc nh bng cỏc phng phỏp ph nh MS, 1D v 2D NMR (HSQC, HMBC, ROESY), bao gm: - Schisanlactone A (H1), cattienoid A (H2), cattienoid B (H3), cattienoid C (H4) t nm linh chi vng (Tomophagus cattienensis) - Ergosterol (H5), ergosterol peroxide (H6), axit ganoderic Y (H7) v axit panmitic (H8) t nm linh chi (Ganoderma mirabile) - Ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-on (H9), ganodermadiol (H10), ergosterol (H11), ergosta-7,22-ien -3-ol (H12) t nm linh chi (Ganoderma neo-japonicum) - O-Methylsilvaticol (H13), orthosporin (H14), diplosporin (H15) t nm Kretzschmaria sandvicensis - Cytochalasin (H16), cytochalasin (H17), cytochalasin (H18), bis(2ethylhexyl) terephthalate (H19), Ergosta-7,24(241)-dien-3-ol (H20) t nm Daldinia eschscholzii Trong ú cattienoid A (H2), cattienoid B (H3), cattienoid C (H4) l cỏc hp cht mi 3.Tin hnh th nghim hot tớnh gõy c trờn cỏc dũng t bo ung th bi u mụ v hot tớnh khỏng sinh ca cỏc cht sch cho kt qu: - c t bo: Cỏc hp cht sau cú hot tớnh trờn dũng t bo ung th bi u mụ KB l Schisanlactone A (H1) (IC50 = 30.4 àg/ml), cattienoid B (H3) (IC50 = 31.04 àg/ml), axit ganoderic Y (7) (IC50 =77.65 àg/ml), ergosta-4,6,8(14),22 tetraen-3-on (H9) (IC50 =12.68 àg/ml), ergosterol (H11) (IC50 =10.72 àg/ml), ergosta-7,22-ien 3-ol (H12) (IC50 =87.95 àg/ml) v orthosporin (H14) (IC50 =78.57 àg/ml) Ngoi ra, H5 v H6 cũn khỏng t bo ung th vỳ, gan v phi - Hot tớnh khỏng sinh: Tin hnh th kh nng khỏng inh ca cỏc cht H1, H2, H3, H4, H16, H17 v H18 trờn chng vi sinh vt ki m nh l Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Lactobacillus fermentum, Salmonella enterica, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Candida albican Kt qu cỏc cht ny khụng cú hot tớnh khỏng sinh 25 DANH MC CễNG TRèNH LIấN QUAN N LUN N ng Ngc Quang, Bựi Th Thu Hin, Lờ Cm Tỳ, Phan Vn Li Hot tớnh khỏng t bo ung th ca cỏc hp cht steroit cú mt s loi nm Vit Nam, Journal of science of HNUE, 57, 67-73, 2012 Bui Thi Thu Hien, Le Thi Phuong Hoa, Le Xuan Tham, Dang Ngoc Quang Cattienoids A-C, three novel steroids from the mushroom Tomophagus cattienensis Fitoterapia, 91, 125127, 2013 (SCIE) Ha Thi Nhung, Bui Thi Thu Hien, Luu Van Huyen, Dang Ngoc Quang Cytotoxic constituents of the fungus Kretzschmaria sandvicensis collected in Dien Bien, Vietnam JOURNAL OF SCIENCE OF HNUE, Chemical and Biological Sci., 58, 15-19, 2013 Nguyen Thi Hong Phuc, Bui Thi Thu Hien, Le Thi Phuong Hoa, Dang Ngoc Quang Anticancer constituents from Vietnamese Lingzhi Ganoderma mirabile Tp Khoa hc v Cụng ngh, 52, 309-312, 2014 Dang Ngoc Quang, Bui Thi Thu Hien, Nguyen Quang Tuyen, Vong Anatha Khamko, Pham Huu Dien, Cytotoxic constituents from Vietnamese medicinal plants and fungi Proceeding of Humboldt Kolleg in conjuntion with international conference on natural sciences, pp 31-32, Batu, Malang, Indonesia, 25-28 September 2014 Bui Thi Thu Hien, Nguyen Trang Thu, Nguyen Quang Tuyen, Le Xuan Tham and Dang Ngoc Quang Cytotoxic steroids found in Vietnamese lingzhi Ganoderma neo-japonicum Journal of Science of HNUE, 59, 25-29, 2014 Le Thi Khanh Linh, Ha Thi Nhung, Bui Thi Thu Hien, Do Duc Que, Duong Minh Lam, Le Huong Ly, Nguyen Ngoc Thanh, Nguyen Quang Tung, Dang Ngoc Quang Cytochalasin from Vietnamese Daldinia eschscholzii Journal of Chemistry (Vietnam), 53 (6e1,2), 324-327, 2015 ... chất có hoạt tính sinh học uý làm tỏ khả chữa bệnh số loài nấm thuốc cổ truyền Do chọn đề tài Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số loài nấm Việt Nam Mục tiêu nghiên cứu Tách chiết,... aeruginosa, Candida albican Tuy nhiên, ba hợp chất hoạt tính kháng sinh (IC50> 128 g/mL) KẾT LUẬN Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài nấm Việt Nam: Tomophagus cattienensis, Ganoderma... luận án Đây công trình nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số chất phân lập t nấm linh chi vàng (Tomophagus cattienensis), nấm linh chi (Ganoderma mirabile), nấm linh chi tím (Ganoderma