Nghiên cứu đặc điểm sinh học và thành phần hóa học của một số loài của chi mần tưới (eupatorium l ) họ cúc (asteraceae) ở việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN --- Phạm Thị Vân Anh NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI CỦA CHI MẦN TƯỚI EUPATORIUM L... ĐẠI H

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

-

Phạm Thị Vân Anh

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ

THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI

CỦA CHI MẦN TƯỚI (EUPATORIUM L.) - HỌ CÚC

(ASTERACEAE) Ở VIỆT NAM

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

Hà Nội – 2017

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

-

Phạm Thị Vân Anh

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ

THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI CỦA

CHI MẦN TƯỚI (EUPATORIUM L.) - HỌ CÚC

(ASTERACEAE) Ở VIỆT NAM

Chuyên ngành: Thực vật học

Mã số: 60420111

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Trung Thành PGS.TS Phan Minh Giang

Hà Nội – 2017

LỜI CẢM ƠN

Để có được kết quả này, tôi xin được bày tỏ sự biết ơn sâu sắc tới PGS TS

Nguyễn Trung Thành và PGS TS Phan Minh Giang đã tận tình hướng dẫn và

giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn này

Tôi xin trân trọng cảm ơn sự dìu dắt nhiệt tình, tận tụy của các thầy cô trong khoa Sinh học, đặc biệt là các thầy cô trong Bộ môn Thực vật học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN trong suốt thời gian tôi học tập và nghiên cứu tại bộ môn và khoa

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn Phòng thí nghiệm Hóa học Hợp chất thiên nhiên, Bộ môn Hóa hữu cơ, Khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN luôn giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhất cho tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn này

Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô Bảo tàng Thực vật học, phòng thí nghiệm Tế bào học, Khoa Sinh học, Trường ĐH Khoa học Tự nhiên, Bảo tàng Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật, Viện Hàn lâm và Khoa học Công nghệ Việt Nam, phòng tiêu bản Khoa Tài nguyên dược liệu, Viện Dược liệu đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong quá trình thực hiện luận văn này

Cuối cùng, tôi xin cảm ơn gia đình và bạn bè đã luôn ở bên, động viên và giúp

đỡ tôi trong suốt quá trình học cũng như hoàn thành luận văn này!

Hà Nội, ngày tháng năm 2017

Học viên

Phạm Thị Vân Anh

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU 1

Chương 1 - TỔNG QUAN 2

1.1 Tổng quan về nghiên cứu phân loại và đặc điểm sinh học chi Mần tưới (Eupatorium L.) 2

1.1.1 Các nghiên cứu phân loại chi Mần tưới (Eupatorium L.) 2

1.1.2 Các nghiên cứu về giải phẫu chi Mần tưới (Eupatorium L.) 7

1.1.3 Giá trị sử dụng của một số loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium L.) 8

1.2 Các nghiên cứu về thành phần hóa học chi Mần tưới (Eupatorium L.) 9

1.2.1 Loài Mần tưới (Eupatorium fortunei Turcz.) 9

1.2.2 Loài Yên bạch Nhật (Eupatorium japonicum Thunb.) 12

1.2.3 Loài Ba dót (Eupatorium triplinerve Vahl.) 12

Chương 2 - ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

2.1 Đối tượng nghiên cứu 15

2.2 Nội dung nghiên cứu 15

2.3 Phương pháp nghiên cứu thực vật 15

2.3.1 Phương pháp kế thừa tài liệu 15

2.3.2 Phương pháp nghiên cứu phân loại 15

2.3.3 Phương pháp nghiên cứu giải phẫu 16

2.4 Các phương pháp nghiên cứu hóa học 17

2.4.1 Phương pháp phân tách các dịch chiết 17

2.4.2 Các phương pháp phân tích, phân tách hỗn hợp và phân lập các hợp chất 18

2.4.3 Các phương pháp xác định cấu trúc các hợp chất hữu cơ 19

Chương 3 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 20

3.1 Đặc điểm sinh học của một số loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium L.) ở Việt Nam 20

3.1.1 Đặc điểm hình thái chi Mần tưới (Eupatorium L.) 20

3.1.2 Đặc điểm sinh học của 3 loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium L.) 20

3.2 Thành phần hóa học của một số loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium L.)

39

3.2.1 Điều chế các phần chiết từ lá cây loài E japonicum và E triplinerve 39 3.2.2 Eupatorium japonicum Thunb 39 3.2.3 Eupatorium triplinerve Vahl 46

TÀI LIỆU THAM KHẢO 53

Danh mục các ký hiệu và chữ viết tắt

Kí hiệu các phòng tiêu bản

BM British Museum, Koeningin-Luise-Strasse, Berlin, Germany

C Botanical Musem and Herbarium, Copenhagen, Denmark

HN Hanoi Herbarium, Institute of Ecology and Biological Resources,

Hanoi, Vietnam HNU Herbarium, VNU National University, Hanoi, Vietnam

LE Botanical Institute Komarov, Leningrad (St Peterbourgh), RFR

(USSR) NIMM Herbarium of the National Institute of Medicinal Materials, Vietnam

TI Botanical Institute, Faculty of Science, University of Tokyo, Hongo,

Japan

Ký hiệu, chữ viết tắt dùng trong phân loại thực vật

! [kí hiệu phòng tiêu bản bảo quản mẫu vật]: Tiêu bản liên quan đến typ danh

pháp đã quan sát Gen.: Genus (chi)

Loc class.: Locus classicus (địa điểm thu mẫu chuẩn)

Subfam.: Subfamily (Phân họ)

Synonym: Tên đồng nghĩa

Trib.: Tribe (Tông)

Typus: Mẫu, mẫu danh pháp

1H-NMR (Proton Magnetic Resonance Spectroscopy): Phổ cộng hưởng từ proton

13C-NMR (Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy): Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon-13

DEPT (Distortionless Enhancement by Polarization Transfer): Phổ DEPT

GC-MS (Gas chromatography - Mass Spectrometry): Sắc kí khí ghép khối phổ

Danh mục các bảng

Bảng 1.1: Sự phân chia chi Mần tưới (Eupatorium) qua các thời kì 6

Bảng 1.2: Cấu trúc và hoạt tính sinh học của các hợp chất loài E triplinerve 14

Bảng 3.1: Sự khác biệt về các đặc điểm hình thái giữa 3 loài 36

Bảng 3.2: Đặc điểm vòi nhụy và lông ở 2 loài E fortunei và E japonicum 37

Bảng 3.3: Sự khác biệt về các đặc điểm giải phẫu giữa 3 loài 38

Bảng 3.4: Phân tích TLC phần chiết n-hexan (EJLH) loài E japonicum 40

Bảng 3.5: Phân tích TLC phần chiết diclometan (EJLD) loài E japonicum 41

Bảng 3.6: Phân tích TLC phần chiết n-hexan (ETLH) loài E triplinerve 47

Bảng 3.7: Phân tích TLC phần chiết diclometan (ETLD) loài E triplinerve 48

Danh mục các hình

Hình 1.1: Các hợp chất được phân lập từ loài E fortunei 12

Hình 1.2: Các hợp chất được phân lập từ loài E japonicum 13

Hình 1.2: Các hợp chất được phân lập từ loài E triplinerve 15

Hình 3.1: Eupatorium fortunei Turcz 22

Hình 3.2: Cơ quan sinh sản loài Eupatorium fortunei Turcz 23

Hình 3.3: Lát cắt ngang loài Eupatorium fortunei Turcz 25

Hình 3.4: Eupatorium japonicum Thunb 27

Hình 3.5: Cơ quan sinh sản loài Eupatorium japonicum Thunb 28

Hình 3.6: Lát cắt ngang qua thân, rễ loài Eupatorium japonicum Thunb 29

Hình 3.7: Lát cắt ngang qua lá loài Eupatorium japonicum Thunb 30

Hình 3.8: Eupatorium triplinerve Vahl 32

Hình 3.9: Lát cắt ngang qua thân, rễ loài Eupatorium triplinerve Vahl 34

Hình 3.10: Lát cắt ngang qua lá loài Eupatorium triplinerve Vahl 35

Phụ lục 14: Quy trình chung điều chế các phần chiết

Phụ lục 15: Quy trình phân tách phần chiết diclometan loài E japonicum Phụ lục 16: Quy trình phân tách phần chiết gộp n-hexan và diclometan loài

E japonicum

Phụ lục 17: Quy trình phân tách phần chiết diclometan loài E triplinerve Phụ lục 18: Quy trình phân tách phần chiết n-hexan loài E triplinerve

MỞ ĐẦU

Nước ta nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa ẩm nên hệ thực vật vô cùng phong phú và đa dạng Theo thống kê “Tiếp cận các nguồn gen và chia sẻ lợi ích” (thuộc IUCN) thì tại Việt Nam hiện có gần 12.000 loài thực vật bậc cao có mạch thuộc hơn 2.256 chi, 305 họ; 69 loài thực vật hạt trần; 2.200 loài nấm; 2.176 loài tảo;

481 loài rêu; 691 loài dương xỉ; 368 loài vi khuẩn lam; 100 loài khác [59] Đáng chú

ý là nhóm cây thuốc, nhóm cây trực tiếp phục vụ nhu cầu chữa bệnh của con người Theo theo Võ Văn Chi (2012) nước ta có khoảng 3.200 loài có giá trị làm thuốc, theo điều tra của Viện Dược liệu (2016), ở nước ta hiện biết 5.117 loài cây thuốc [5, 6] Tuy nhiên, phần lớn các cây thuốc ở Việt Nam hiện còn chưa được nghiên cứu một cách đầy đủ, nhất là về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học do đó chưa đủ cơ sở khoa học để tạo được các sản phẩm ứng dụng mới trong các lĩnh vực dược phẩm, thực phẩm và nông nghiệp Hơn nữa, các loài cây thuốc trong cùng một chi có những đặc điểm hình thái khá giống nhau nên dễ gây nhầm lẫn cho người sử dụng

Các loài trong chi Mần tưới (Eupatorium L.) thuộc họ Cúc (Asteraceae) được

nhân dân sử dụng phổ biến trong các bài thuốc dân gian để chữa một số bệnh như đột

quỵ, sốt, phù thũng,… Trong số đó, 3 loài: loài Ba dót (Eupatoirum triplineve Vahl.) giúp kích thích hoạt động của tim, chống bệnh Scobut; loài Yên bạch nhật (Eupatorium japonicum Thunb.) giúp bảo quản nông sản; loài Mần tưới (Eupatorium

fortunei Turcz.) vừa làm rau gia vị vừa để chữa ứ huyết, mụn nhọn đồng thời kích

thích ngon miệng [4, 5, 6] Tuy nhiên, chúng ta chỉ sử dụng chúng theo kinh nghiệm dân gian mà chưa dựa trên cơ sở khoa học nào chứng minh giá trị chữa bệnh của

chúng

Vì vậy, chúng tôi lựa chọn đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm sinh học và thành

phần hóa học của một số loài của chi Mần tưới (Eupatorium L.) - họ Cúc

(Asteraceae) ở Việt Nam” nhằm góp phần cung cấp thêm cơ sở khoa học về đặc

điểm hình thái, giải phẫu, cấu trúc các hợp chất hóa học trong thành phần chính của các loài giúp cho việc sử dụng và khai thác có hiệu quả nguồn dược liệu trong nước

Chương 1 - TỔNG QUAN

1.1 Tổng quan về nghiên cứu phân loại và đặc điểm sinh học chi Mần

tưới (Eupatorium L.)

1.1.1 Các nghiên cứu phân loại chi Mần tưới (Eupatorium L.)

Trên thế giới, họ Cúc (Asteraceae) là họ lớn nhất trong lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), có vùng phân bố gần như toàn thế giới Họ Cúc (Asteraceae) gồm

30 tông, có khoảng 1600 chi và khoảng 23000 loài, mang các đặc điểm hình thái rất

đa dạng và phức tạp Chúng thường sống ở vùng đồng cỏ, trong rừng và thảm thực

vật trên núi, ít gặp ở vùng rừng nhiệt đới ẩm và độ cao thấp [25]

Chi Mần tưới (Eupatorium) được ghi nhận lần đầu tiên qua loài Eupatorium

cannabinum L bắt đầu từ hình vẽ của Tounefort (1700) Đến năm 1753, chi Mần tưới

(Eupatorium) được C Linnaei công bố hữu hiệu trong công trình “Species Plantarum”, với 14 loài được mô tả chi tiết, trong đó loài Eupatorium cannabinum L

được coi là mẫu chuẩn của chi Khi đó, tác giả phân chia các loài trong chi thành 6 nhóm dựa trên số lượng hoa và đặc điểm của hoa bao gồm [24, 50]:

- Cụm hoa đầu có 4 hoa: E hysscopifolia, E scandens, E hoystonianum

- Cụm hoa đầu có 5 hoa: E xeylanitum, E sessilifolium, E chinese, E

rotundifolium, E altissimum, E trifoliatum, E cannabium

- Cụm hoa đầu có 8 hoa: E purpurecum

- Cụm hoa đầu gồm nhiều hoa: E colestinum

- Cụm hoa đầu có 15 hoa, hoa nhỏ: E perfoliatum

- Cụm hoa đầu có 20 hoa, hoa sắp xếp sát nhau và hoa nhỏ: E aromaticum

Năm 1836, khi nghiên cứu họ Cúc D.A Candolle đã bổ sung thêm 280 loài so

với Linnnaei C., đồng thời tác giả chia chi Mần tưới (Eupatorium) thành 3 loạt:

Imbricata, Subimbricata và Eximbricata

- Loạt Imbricata gồm 4 nhóm nhỏ: Cylindrocephala, Pteropoda, Sessilifolia

và Verticillata

- Loạt Subimbricata, tác giả phân chia thành 7 nhóm dựa trên số lượng hoa

và cách mọc của lá

- Loạt Eximbricata gồm 9 nhóm được phân chia dựa vào số lượng hoa, cách

mọc của lá, hình dạng lá [48]

Sau đó, G Bentham (1873) căn cứ vào hình dạng cụm hoa đầu, đặc điểm của

lá bắc và đặc điểm của đế hoa đã thay đổi giới hạn của chi Mần tưới (Eupatorium)

Một vài chi trong hệ thống phân loại của D.A Candolle được coi là các nhánh của chi

Mần tưới (Eupatorium) Lúc này, tác giả phân chia thành 9 nhánh, trong đó một số nhánh là chi trong hệ thống của D.A.Candolle: Osmia Sch Bip., Kyrstenia Neck.,

Chromolaena DC., Praxelis Cass., Campuloclinium DC., Bulbostyles, Gyptis Cass., Disynaphia DC., Coleosanthus Cass [46]

Năm 1876, J.G Baker kế thừa nghiên cứu của G Bentham chia chi Mần tưới

(Eupatorium) thành 2 loạt với 9 nhánh Loạt I: lá bắc ở tổng bao có kích thước khác

nhau, lá bắc bên ngoài ngắn hơn lá bắc bên trong, có hình trứng – tam giác cân; gồm

5 nhánh Loạt II: lá bắc ở tổng bao có kích thước gần như nhau, dạng hình đường hoặc hình mũi mác; gồm 4 nhánh Tổng sổ loài trong chi là 153 loài [47]

- Loạt I gồm 5 nhánh: Osmia Benth., Chromolaena Benth., Heterolepis Baker., Praxelis Benth., Hebeclinium Benth

- Loạt II gồm 4 nhánh: Homolepis Baker., Campuloclinium Benth.,

Conoclinium Benth., Urolepsis Baker

Năm 1890, O Hoffmann dựa trên hệ thống phân loại của D.A Candolle để

phân chia chi Mần tưới (Eupatorium) thành các nhánh Khi đó, chi Mần tưới (Eupatorium) được chia thành 8 nhánh, trong đó 3 nhánh là 3 loạt trong hệ thống của Candolle D.A: Imbriacata DC., Subimbricata DC., Eximbricata DC và 5 nhánh còn lại là 5 chi cũng trong hệ thống của D.A Candolle: Chromolaena DC.,

Campuloclinium DC., Conoclinium DC., Praxelis Cass., Hebeclinium DC [44]

Đến năm 1970, R M King và H Robinson khi nghiên cứu sâu về chi Mần

tưới (Eupatorium) đã bổ sung thêm các một số đặc điểm hiển vi của hoa và quả như

hầu hết có tuyến nhỏ và lông cứng, không có khí khổng ở mặt lưng của ống tràng,

vòng đai của bao phấn không có, có lông trên gốc vòi nhụy, thùy của vòi nhụy có nhiều tế bào hình mụt, tế bào đỉnh của mào lông hình tù, không có cuống bầu riêng

biệt Do đó, tác giả đã nâng một số nhánh trong chi Eupatorium lên thành chi bao gồm: Praxelis, Chromolaena Đồng thời chuyển một số loài sang chi Ayapana và các

chi khác (King R M & Robinson H., 1970) do đó, giới hạn của chi bị thu hẹp đáng

kể [21, 22, 23, 24] Sự phân chia chi Mần tưới (Eupatorium) qua các thời kì được

Đối với các nước, một số công trình nghiên cứu về chi Mần tưới (Eupatorium

L.) mang tính chất thống kê như một danh lục và đáng lưu ý là một số công trình sau

Fujibakama Zoku khi nghiên cứu về chi Mần tưới (Eupatorium) ở Nhật Bản (1965)

đã ghi nhận được 5 loài bao gồm: E chinense, E lindleyanum, E fortunei, E

variabile, E yakushimense [17] Thực vật chí Hong Kong ghi nhận được 4 loài thuộc

chi bao gồm: E odoratum, E lindleyanum, E chinese, E japonicum Trong khi loài

E odoratum, hầu hết các tác giả đều chuyển sang chi Chromolaena [38] Năm 2011,

Chen Yilin khi nghiên cứu hệ thực vật Trung Hoa ghi nhận được 14 loài: E amabile,

E cannabinum, E chinense, E fortunei, E formosanum, E japonicum, E

heterophyllum, E hualienense, E lindleyanum, E luchuense, E nanchuanense, E omeiense, E tashiroi, E shimadae [37]

Bên cạnh đó, Địa lý thực vật của chi cũng được tiến hành nghiên cứu chi tiết Năm 1998, K Watanabe và cộng sự nghiên cứu về phát sinh chủng loại và địa lý phát

sinh của chi Mần tưới (Eupatorium) bao gồm 23 loài Đông Nam của Bắc Mỹ, 25 loài

Đông Á và 1 loài châu Âu Sự phân bố này được nối với kiểu phân chia của các loài

và các chi nhiệt đới như các yếu tố ở kỷ Đệ Tam ở Bắc bán cầu Một giả thiết kiểu phân bố này cho rằng có một loài thực vật cổ xưa quanh cực đã di cư trong suốt quá trình biến đổi khí hậu ở kỉ Đệ Tam Dựa trên các dữ liệu về sinh học phân tử và tế

bào học đã cung cấp bằng chứng về nguồn gốc phát sinh chi Mần tưới (Eupatorium)

ở Bắc Mỹ Chi đã phân tách ra 3 nhóm loài hình thái gồm: nhóm Uncasia (lá mọc đối chữ thập), nhóm Eutrochium (lá mọc vòng, gốc vòi nhụy mở rộng, có khí khổng trên thùy ống tràng, hoa màu đỏ tím), nhóm Traganthes (lá mọc cách hoặc mọc đối chữ thập) Sau đó, chúng di cư đến Đông Á và châu Âu Trong đó, nhóm loài châu Á là nhóm đơn nguyên và được tiến hóa từ loài có lá mọc đối chữ thập Nhóm loài châu

Âu có nguồn gốc từ loài có lá mọc đối chữ thập hoặc có tổ tiên chung với dòng châu

Á [41]

Ở Việt Nam, các công trình nghiên cứu về chi Mần tưới (Eupatorium) đầu tiên

phải kể đến công trình của Loureiro D J., khi nghiên cứu hệ thực vật miền Nam Việt

Nam (1790) đã mô tả 2 loài: E purpureum và E Sinuatum [51] Sau đó, Gagnepain

F (1922) khi nghiên cứu hệ thực vật Đông Dương, đã mô tả 6 loài loài trong chi Mần

tưới (Eupatorium): E odoratum L., E ayapana Vent., E staechadosmum Hance., E

reevesii Wall, E nodiflorum, E quaternum DC [55]

Năm 2003, Nguyễn Tiến Bân đã ghi nhận 10 loài trong chi Mần tưới

(Eupatorium) bao gồm: E cannabium L., E capillifolium (Lamk.) Small, E chinense L., E coelestinum L., E fortunei Turcz., E heterophyllum DC., E japonicum Thunb.,

E lindleyyanum DC., E odoratum L., E triplinerve Vahl [2]

Năm 2003, Phạm Hoàng Hộ bổ sung thêm 2 loài: E quaternum DC và E

reesesii Wall, đồng thời mô tả 12 loài này [9]

Bảng 1.1: Hệ thống phân loại của chi Mần tưới (Eupatorium) qua các thời kì

Hình dạng cụm hoa đầu, đặc điểm lá bắc và đế hoa

Hình dạng, kích thước lá bắc

Đặc điểm đế hoa

và lá bắc

Đặc điểm các tế bào trên hoa và quả

7 Praxelis Cass

8 Hebeclinium DC

Thu hẹp giới hạn chi Mần tưới

(Eupatorium)

còn lại 37 loài Chuyển một số loài sang chi khác, đồng thời

nhánh lên thành chi

Năm 2007, trong công trình “Thực vật chí Việt Nam” Lê Kim Biên đã đưa ra

hệ thống phân loại chính thức cho họ Cúc (Asteraceae) với 2 phân họ, 12 tông, 122 chi

Subfam 1: Carduoideae Kitam – Phân họ hoa ống

Trib 1: Vernonieae Cass – Tông Cúc bạc đầu Trib 2: Eupartorieae Cass – Tông Mần tưới Trib 3: Astereae Cass – Tông Cúc sao Trib 4: Inuleae Cass – Tông Mộc hương nam Trib 5: Heliantheae Cass – Tông Hướng dương Trib 6: Helenieae Cass – Tông Cúc vạn thọ Trib 7: Anthemideae Cass – Tông Cải cúc Trib 8: Senecioneae Cass – Tông Cúc hoàng tràng Trib 9: Calenduleae Cass – Tông Hoa xu xi

Trib 10: Cynareae Less – Tông Thanh mộc hương Trib 11: Mutisieae Cass – Tông Cúc ánh lệ

Subfam 2: Cichorioideae Kitam – Phân họ hoa lưỡi nhỏ

Trib 12: Lactuceae Cass – Tông rau diếp Trong đó, chi Mần tưới gồm 9 loài nằm trong tông Mần tưới (Eupatorieae),

riêng loài E odoratum L đã được chuyển sang chi Cỏ lào (Chromolena DC.) [3]

Trib 2: Eupartorieae Cass – Tông Mần tưới

Gen Adenostemma J R & G Forst – Cúc dính Gen Ageratum L – Cỏ hôi

Gen Stevia Cav – Cỏ ngọt Gen Chromolaena DC – Cỏ lào Gen Eupatorium L – Mần tưới Gen Mikania Willd – Mỹ đằng

1.1.2 Các nghiên cứu về giải phẫu chi Mần tưới (Eupatorium L.)

Hiện nay, các nghiên cứu về giải phẫu chi Mần tưới (Eupatorium) còn khá hạn

chế Năm 1950, C.R Metcalfe chỉ ra đặc điểm giải phẫu chung của họ Cúc

(Asteraceae), trong đó, một số đặc điểm của chi Mần tưới (Eupatorium) cũng được

tác giả đề cập đến Các đặc điểm đã nghiên cứu như: lông đơn bào – đa bào, lông tuyến cũng đơn bào hoặc đa bào thường nằm ở mặt dưới của lá, đôi khi hình thành dạng hạt nổi rõ Các ống tiết ở lớp vỏ, vùng nội bì ở thân, trong một số loài có thể mở rộng trong cuống lá đến phiến lá [29]

Năm 1965, C Sherwin đã nghiên cứu chi tiết giải phẫu gỗ các loài thuộc tông Eupatorieae, một số loài thuộc chi Mần tưới cũng được tiến hành nghiên cứu Tác giả quan sát lượng lớn nhựa cây chứa trong các yếu tố mạch mà quan sát được ở chi

Eupatorium (E morifolium, E odoratum, E sordiulum, E theaefolium) Còn các loài

khác thì giọt nhựa cây được quan sát ở tế bào mô mềm (E billbergianum, E

celtidifolium, E oerstedtianum, E pittieri) hoặc có ở tế bào sợi và tế bào mô mềm (

E portoricensis) Tinh thể có ở tế bào lỗ pith của loài E sordidum Các yếu tố mạch

dài là đặc điểm của chi Mần tưới (Eupatorium) Bản thủng lỗ hình thang cũng được quan sát thấy: E billbergianum, E sordidum, E theaefolium Sợi có vách ngăn ngang xuất hiện ở các loài: E dalea, E daleoides, E hiemale, E morifolium, E pittieri, E

portoricensis, E sordidum [35]

Gần đây, M.I.S Nery cùng cộng sự (2014) đã nghiên cứu giải phẫu thân cây

của loài Euparorium triplinerve Vahl (synonym: Ayapana triplinervis (Vahl) King

& Rob.) để xác định kiểu hình thái cho loài Ở đây, nhóm tác giả đã xác định được 2

kiểu hình thái cho loài E triplinerve Đồng thời, nghiên cứu sự khác biệt giữa 2 kiểu của loài A triplinerve trắng và tím [32]

Ở nước ta, hiện nay, vẫn chưa có nghiên cứu chuyên sâu về giải phẫu của 3

loài E fortunei, E japonicum và E triplinerve

1.1.3 Giá trị sử dụng của một số loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium L.)

Trên thế giới, nhiều loài trong chi đã được người dân sử dụng làm thuốc Loài

E perfoliatum được người Mỹ dùng để chữa trị một số bệnh thường gặp như sốt, cảm

lạnh, ho, thấp khớp; ngoài ra họ còn sử dụng chúng như trà giúp hệ thống tiêu hóa tốt

hơn (nhuận tràng) E cannabium được dùng để giải nhiệt, lợi tiểu và thanh lọc máu,

rễ chữa trị bệnh gan; người Hà Lan còn dùng lá của loài này phủ lên trên bánh mì

tránh bị mốc E chinense là loài chứa chất độc (đặc biệt lá của chúng) nhưng loài này chữa mụn nhọt lớn, vết rắn cắn, ghẻ Loài E triplinerve được người bản địa ở Mỹ

nấu nước uống thay trà với công dụng nhuận tràng, tiêu sưng, chống viêm, trị cảm sốt Ở Ấn Độ, loài này dùng cầm máu và làm thuốc bổ do có lượng vitamin C khá cao, lá và rễ khô sắc uống kích thích hoạt động của tim [13, 57, 58]

Theo Y học cổ truyền Trung Quốc, loài Mần tưới (E fortunei) có vị đắng, cay

được sử dụng chữa đột quỵ, đau đầu, sốt, kích thích sự bài tiết mồ hôi Ở Nhật Bản, nước sắc của rễ để giải rượu, điều hòa kinh nguyệt [14]

Ở vùng Nam Trung Hoa, loài Yên bạch Nhật (E japonicum) được dùng để

giảm bớt triệu chứng đau đầu, mệt mỏi, cảm giác đầy bụng, chán ăn, buồn nôn và tiêu chảy [14]

Ở Ấn Độ, loài Ba dót (E triplinerve) được dùng để kích thích hoạt động tim,

nhuận tràng, gây nôn, long đờm Chữa các bệnh sốt rét, khó tiêu, cầm máu Lá của loài này có chứa ayapanin và ayapin có đặc tính cầm máu [13] Theo Võ Văn Chi

(2012), loài E triplinerve được sử dụng toàn thân khi chưa có hoa Lá có vị đắng,

mùi thơm nhẹ Với liều nhỏ cây có tác dụng kích thích và bổ đắng, với liều cao, có tác dụng nhuận tràng và xổ Nhân dân nhiều vùng nhiệt đới dùng cành lá nấu lấy nước uống thay trà sau bữa ăn Nó vừa có thể làm tiêu sưng, tiêu viêm, lại trị được cảm sốt, chấn thương, mụn nhọt [6]

1.2 Các nghiên cứu về thành phần hóa học chi Mần tưới (Eupatorium

L.)

1.2.1 Loài Mần tưới (Eupatorium fortunei Turcz.)

Sesquiterpen và monoterpen là các chất chuyển hóa đặc trưng của chi Mần

tưới (Eupatorium) Các kiểu sesquiterpen từ chi Mần tưới (Eupatorium) bao gồm:

guaian, germacran và cadinan; monoterpen bao gồm các dẫn xuất thymol [15] Năm 1986, M Haruna và cộng sự đã xác định được cấu trúc của các hợp chất thuộc

khung sesquiterpen lacton eupafortunin (1) và eupatoriopicrin (2) (Hình 1.1) [19]

Năm 1992, K Liu và cộng sự đã phân lập được 3 alkaloid pyrrolizidin, supinin

(3), rinderin (4) và 7-O-acetylrinderin (5) (Hình 1.1) [26]

Năm 2006, H X Jiang và cộng sự đã công bố sự phân lập các terpenoid mới:

rel-(1R,2S,3R,4R,6S)-p-menthan-1,2,3,6-tetrol (6),

rel-(1R,2R,3R,4S,6S)-p-menthan-1,2,3,6-tetrol (7), 9-hydroxythymol 3-O-angelat (8),

(3𝛽,20R)-20-hydroxylanost-25-en-3-yl-palmitat (9) cùng với 14 hợp chất đã biết và 2 monoterpenoid khác là aceton

thymol-8,9-diyl ketal và 8-methoxy-9-hydroxythymol 3-O-angelat (Hình 1.1) Bốn

chất mới được nhóm tác giả thử nghiệm thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư gan, tế bào bạch cầu và tế bào gan người [20]

Năm 2013, Y J Chen và cộng sự nghiên cứu dịch chiết MeOH toàn cây Mần

tưới (E fortunei) và phân lập được 1 hợp chất triterpen mới kiểu 30-norursan:

3β-hydroxy-30-nor-urs-21-en-20-one (10) và 7 hợp chất đã biết bao gồm 2 sesquiterpen

eudesman: (1β,7α)-eudesm-4(14)-en-1,7-diol (11) và 6α-epieudesm-4(14)-en-6-ol (12), 4 monoterpen: (1S,2S,4R,5S)-2,5-dihydroxy-p-menthan, (1R,2S,4S,5R)-2,5-

dihydroxy-p-menthan, (1S,2R,4S,5S)-2,5-dihydroxy-p-menthan, thymol glucopyranosid, p-cymen-7-yl-β-D-glucopyranosid (Hình 1.1) [15]

3-O-β-D-Năm 2014, khi nghiên cứu thành phần hóa học của loài E fortunei, Y Wang

và cộng sự đã phát hiện 2 dẫn xuất thymol mới, 9-angeloyloxythymol (13),

8-hydroxyl-9-angeloyxythymol và 5 dẫn xuất thymol đã biết,

5α-hydroxy-2-oxo-p-menth-6(1)-en, eupatobenzofuran (14), O-angeloyl-8,10-dehydrothymol (15) và

9-hydroxythymol Các dẫn xuất thymol này có ức chế sự sản sinh nitric oxit (NO) gây bởi lypopolysaccharide (LPS) Eupatobenzofuran (14) và 9-O-angeloyl-8,10-

dehydrothymol (15) ức chế đáng kể NO nhưng không gây độc cho tế bào (Hình 1.1)

𝛽-isobutyryloxy-8,10-dihydroxythymol, 9-angeloyloxy-8,10-dihydroxythymol [31]

1

O O

O H

OH OH

2

O HO

Me HO H

N

H H

Me Me

3

O O

HO

Me HO

HO

Me HO H

N AcO H

1.2.2 Loài Yên bạch Nhật (Eupatorium japonicum Thunb.)

Các nghiên cứu về thành phần hóa học của loài E japonicum còn rất hạn chế

Năm 1980, S Nakajima và K Kawazu nghiên cứu dịch chiết lá và phân lập được 2

nhóm hợp chất courmarin (16) và euponin (17) (Hình 1.2) Hai hợp chất này có khả

năng ức chế sinh trưởng của trứng và ấu trùng loài Drosophila melanogaster [30]

Năm 1993, H J Woerdenbag đề cập tới thành phần hóa học của loài này bao

gồm các chất: triperpen alcohol, epoxylupeol, β-amyrin, salrigenin, sakuranetin,

isosakieranetis, kaempferid, betulenol, 3,5,7,3’-tetra-O-methylquercetagetin,

tamarixetin và các flavonoid glycoside sakuranetin và isosakuranetin, chất sequiterpen euparol và eupaten, chất chalcon odortin, sitosterol, ceryl alcohol và acid

p-anisic [14]

Hình 1.2: Các hợp chất được phân lập từ loài E japonicum

1.2.3 Loài Ba dót (Eupatorium triplinerve Vahl.)

Năm 2009, G B Anne và M Claude đã phân tích loài E triplinerve ở 2 giai

đoạn sinh trưởng: khi loài ra hoa và khi loài sinh trưởng bình thường Trong dịch chiết của cả 2 giai đoạn này có chứa 39 chất, trong đó thymohydroquinon dimethyl

ether (18) chiếm 89,9-92,8% [12]

Năm 2012, T A Enos và cộng sự đã phân lập được 7-methoxycoumarin (19)

từ dịch chiết MeOH lá E triplinerve Hợp chất này có hoạt tính ức chế sự hình thành

sắc tố melanin ở da ở tế bào B16 bằng cách tác động lên hoạt động của enzym tyrosinase [16]

Năm 2013, G Selvamangai và B Anusha đã phân tích bằng phương pháp

GC-MS được 10 chất từ dịch chiết MeOH lá E triplinerve: acid tetradecanoic (20)

(14,65%), 2,6,10-trimethyl,14-ethylennyl-14-pentadeen (21) (9,84%),

7-butyl-bicyclo[4.1.0] heptan (22) (2,38%), acid decanoic 8-methyl-methyl ester (23) (3,86%), 1-undecanol (24) (7,82%), acid hexadecanoic (25) (14,65%), 1-hexyl-1- nitrocyclohexan (26) (2,09%), 1,14-tetradecanediol (27) (6,78%), acid octadecanoic, 2-hydroxy-1,3-propandiyl ester (29) (Bảng 1.2) [33]

Bảng 1.2: Cấu trúc và hoạt tính sinh học của các hợp chất từ loài E triplinerve

STT Cấu trúc Hoạt tính sinh học

10

29

Năm 2015, N Sugumar cùng cộng sự đã phân tích được 30 hợp chất trong tinh

dầu phần trên mặt đất E triplinerve chiếm 98,24% hàm lượng tinh dầu, trong số đó 2-tertbutyl-1,4-methoxybenzen chiếm 74,3% và β-selinene chiếm 8,6% Đồng thời,

các tác giả cũng nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh vật của tinh dầu trên cho thấy sự

ức chế vi khuẩn Gram (+), Gram (-) ở mức độ trung bình và kháng nấm mạnh [34]

20 hợp chất trong tinh dầu loài Ba dót (E triplinerve) ở Việt Nam đã được

phân tích bằng GC-MS Thymohydroquinon dimethyl-ether (31) chiếm 73,6% và selina-4,11-dien chiếm 11% hàm lượng tinh dầu, ngoài ra là ayapanin (32), ayapin (33), courmarin (16), thymoquinon (30), thymohydroquinon dimethylether, và

methylthymylether Các dẫn xuất thymol có hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn, do

đó người dân thường sử dụng loài Ba dót để bảo quản ngũ cốc [7]

Hình 1.3: Các hợp chất được phân lập từ loài E triplinerve

Chương 2 - ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng nghiên cứu

Đối tượng nghiên cứu là 3 loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium) gồm: Mần tưới (E fortunei), Yên bạch Nhật (E japonicum), Ba dót (E triplinerve) thông qua

các mẫu tiêu bản khô được lưu trữ tại các phòng tiêu bản và các mẫu tươi thu được

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Xác định vị trí phân loại và tên khoa học của mẫu nghiên cứu

- Nghiên cứu đặc điểm hình thái và giải phẫu mẫu nghiên cứu

- Chiết và phân lập các thành phần hóa học chính của mẫu trong dịch chiết MeOH

- Xác định cấu trúc của các hợp chất được phân lập

2.3 Phương pháp nghiên cứu thực vật

2.3.1 Phương pháp kế thừa tài liệu

Với đề tài luận văn này, chúng tôi tập trung thu thập tài liệu, kế thừa các nghiên

cứu liên quan đến 3 loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium) trên thế giới và ở Việt Nam

về các vấn đề sau:

- Vị trí phân loại và danh pháp của loài

- Nguồn gốc và vùng phân bố của loài

- Đặc điểm hình thái và sinh thái của loài

- Giá trị sử dụng của loài

- Các phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái và giải phẫu

- Thành phần hóa học của loài

2.3.2 Phương pháp nghiên cứu phân loại

Phương pháp xác định tên khoa hoc là phương pháp hình thái so sánh dựa theo Nguyễn Nghĩa Thìn (2007) để xác định tên khoa học cho 3 loài thuộc chi Mần tưới

(Eupatorium) [11] Đây là phương pháp truyền thống và phổ biến nhất trong nghiên

cứu phân loại thực vật từ trước đến nay Phương pháp này không đòi hỏi những thiết

bị phức tạp, dễ tiến hành, đảm bảo độ chính xác và phù hợp với điều kiện nước ta Khi so sánh hình thái, chúng tôi dựa trên nguyên tắc chỉ so sánh cơ quan tương ứng với nhau, đồng thời so sánh chúng trong cùng một giai đoạn phát triển Đặc biệt, chú

ý đến cơ quan sinh sản vì chúng ít biến đổi và ít phụ thuộc vào môi trường Việc

nghiên cứu và phân tích một số loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium) được tiến hành

theo các bước sau:

- Thu thập mẫu vật ngoài thực địa: Các mẫu thu thập được xử lí sơ bộ để đảm bảo mẫu nguyên vẹn và bảo quản trong EtOH 70o Trong quá trình thu hái mẫu, sử dụng máy ảnh để ghi lại hình ảnh của các loài, đồng thời ghi nhận những đặc trưng của sinh cảnh trên địa điểm thu mẫu

- Xử lí mẫu trong phòng thí nghiệm: Đối với mẫu thu thập ngoài thực địa, phân tích chi tiết các đặc điểm mà chưa ghi nhận được ngoài thực địa, sau đó chụp ảnh bằng máy ảnh canon G10 Bên cạnh đó, mẫu tiêu bản được xử lí khô theo phương pháp làm tiêu bản khô của Nguyễn Văn Dưỡng, Trần Hợp (1971), tại phòng tiêu bản Thực vật (HNU), Bảo tàng Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội [8]

- Nghiên cứu và phân tích các mẫu tiêu bản khô được lưu tại các phòng tiêu bản bao gồm: Phòng tiêu bản Thực vật (HNU), Bảo tàng Sinh học, khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội, Phòng tiêu bản của Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật (HN), Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, Phòng tiêu bản Khoa Tài nguyên dược liệu (NIMM), Viện Dược liệu

- Đối chiếu các mẫu vật với mô tả gốc, các bộ Thực vật chí (của Việt Nam và các nước lân cận), các mẫu chuẩn (typus), ảnh mẫu chuẩn thu thập được và tiêu bản được lưu tại các bảo tàng để xác định tên khoa học của mẫu

2.3.3 Phương pháp nghiên cứu giải phẫu

Nghiên cứu về giải phẫu lát cắt ngang thân, rễ, lá của 3 loài: Mần tưới (E

fortunei), Yên bạch Nhật (E japonicum), Ba dót (E triplinerve) Tiến hành nghiên

cứu giải phẫu dựa theo các phương pháp của Nguyễn Bá [1]

 Nguyên liệu: thân, rễ, lá của 3 loài

 Dụng cụ, hóa chất:

- Dụng cụ: Dao cao, kim mũi mác, lam kính, lamen

- Hóa chất: carmin phèn 0,5%, xanh methylene 0,05%, nước Javel, acid acetic 1%, nước cất

 Cách tiến hành vi phẫu

 Tiến hành nhuộm mẫu:

o Cắt những lát cắt mỏng bằng dao cạo qua thân, rễ con, lá của 3 loài

o Tẩy mẫu bằng nước Javen trong khoảng 15 – 20 phút (khi thấy tiêu bản trong suốt) Rửa mẫu lại bằng nước cất 3 – 5 lần

o Ngâm mẫu bằng acid acetic 1% trong 5 phút Rửa mẫu lại bằng nước cất 3 – 5 lần

o Nhuộm mẫu bằng carmin phèn trong 25 – 30 phút Sau đó, rửa lại bằng nước cất 3 – 5 lần, nhuộm tiếp trong xanh methylene trong 1 – 2 phút

o Rửa lại mẫu bằng nước và ngâm vào dung dịch glycerin

2.4 Các phương pháp nghiên cứu hóa học

2.4.1 Phương pháp phân tách các dịch chiết

Nguyên liệu thực vật được nghiền nhỏ, ngâm chiết 3 lần với MeOH ở nhiệt độ phòng Dịch chiết MeOH được cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho phần chiết MeOH tương ứng Phần chiết này sau đó được chiết với các dung môi theo độ phân

cực tăng dần: n-hexan, diclomethan, ethyl acetat cho các phần chiết tương ứng

2.4.2 Các phương pháp phân tích, phân tách hỗn hợp và phân lập các hợp chất

a) Phương pháp chiết hai pha lỏng

Phương pháp dựa trên sự phân bố khác nhau của các chất giữa hai pha lỏng không hòa trộn (một pha nước và một pha dung môi hữu cơ) Các hợp chất hữu cơ sẽ được chuyển từ một pha nước sang một pha hữu cơ còn các chất nền phân cực sẽ ở lại trong pha nước Phần chiết MeOH đó được chiết với các dung môi theo độ phân

cực tăng dần: n-hexan, diclometan cho các phần chiết tương ứng

b) Sắc ký lớp mỏng (TLC)

Sắc ký lớp mỏng là phương pháp phân tích để lựa chọn các hệ dung môi rửa giải cho sắc ký cột Đồng thời, đánh giá định tính số lượng các hợp chất có trong hỗn hợp

Phát hiện vệt chất trên bản mỏng

Bản mỏng được phun vanillin/H2SO4 đặc 1%, sau đó được hơ nóng ở 120C, đánh dấu vệt chất trên bản mỏng, tính giá trị Rf và ghi màu sắc của các vệt chất

c) Sắc ký cột

Nhồi cột sắc ký: Phương pháp nhồi cột ướt

Một lượng silica gel ứng với cột sắc ký có đường kính và chiều cao cột thích

hợp được khuấy đều thành bột nhão trong một lượng vừa đủ n-hexan khan Bột nhão

này được loại hết bọt khí và nhồi vào cột sắc ký Có thể dùng bơm nén hoặc trọng lực

dung môi n-hexan đi qua cột nhiều lần cho đến khi lớp silica gel hoàn toàn ổn định

Đưa mẫu lên cột sắc ký: Phương pháp tẩm mẫu trên silica gel

Mẫu được hòa tan trong một lượng vừa đủ dung môi dễ bay hơi thích hợp Trộn dung dịch thu được với silica gel với tỷ lệ là 1 g chất /1,2 g đến 1,5 g silica gel Hỗn hợp này được làm bay hơi dung môi đến khi khô kiệt thu được bột mịn của mẫu chất hấp phụ trên silica gel Bột này được đưa lên cột sắc ký phía trên lớp chất hấp phụ silica gel

Triển khai sắc ký cột

Mở khóa dưới cột sắc ký để cho dung môi chảy ra khỏi cột sắc ký, cho đến khi

bề mặt dung môi cách bề mặt silica gel khoảng 2 mm Cho từ từ mẫu tẩm trên silica

gel lên cột Khi đưa mẫu lên cột cần phải chú ý đảm bảo cho bề mặt của lớp chất phía trên cột sắc ký tạo thành mặt phẳng ngang Tiến hành rửa giải bằng hệ dung môi được xác định nhờ vào các khảo sát TLC, tốc độ rửa giải 20 giọt/phút, thu các phân đoạn theo thể tích 150 ml, 50 ml và 20 ml (CC) Với cột sắc ký tinh chế (Mini-C) các phân đoạn được thu theo thể tích 3-5 ml

Khảo sát sắc ký các phân đoạn

Tiến hành khảo sát các phân đoạn nhận được bằng TLC, gộp các phân đoạn cho sắc ký đồ TLC giống nhau lại, sau đó cất loại kiệt dung môi để thu được các nhóm phân đoạn Sắc ký cột thường (CC) và sắc kí cột tinh chế (Mini-C) được thực hiện trên silica gel Merck (Merck, Darmstadt, CHLB Đức) với các cỡ hạt tương ứng

là 63-200 m, 40-63 m và 15-40 m

d) Phương pháp kết tinh lại

Phương pháp này chủ yếu được sử dụng để phân lập và tinh chế chất rắn Việc làm sạch chất rắn bằng kết tinh là dựa trên sự khác nhau về độ tan của chất và tạp chất trong dung môi hoặc hệ dung môi đã chọn và độ tan của chất ở các nhiệt độ khác nhau

2.4.3 Các phương pháp xác định cấu trúc các hợp chất hữu cơ

 Phổ khối lượng ion hóa phun bụi điện tử (ESI-MS)

Phổ khối lượng ion hóa phun bụi điện tử được ghi trên thiết bị Agilent Ion

 Phổ hồng ngoại (IR)

Phổ IR cung cấp thông tin về các nhóm chức có mặt trong phân tử hợp chất hữu cơ Phổ IR được đo trên thiết bị Shimadzu FT-IR Affinity-1S

Chương 3 - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

3.1 Đặc điểm sinh học của một số loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium

L.) ở Việt Nam

3.1.1 Đặc điểm hình thái chi Mần tưới (Eupatorium L.)

L 1753 Sp Pl 836, Benth & Hook f 1873 Gen Pl 2: 245; O Hoffm 1890

in Engl & Prantl Nat Pflanzenf 4(5): 138; Gagnep 1924 Fl Gen Indoch 3: 505;

A P De 1836 Prod Syst Nat 5: 141; L K Bien 2007 Fl Vietn 7: 114

Thân cỏ lâu năm hoặc thân bụi Lá mọc đối, lá phía trên gần mọc đối đến mọc cách; mép lá nguyên hoặc có răng cưa, chia thùy nhỏ hoặc phân tách thành các phần nhỏ hơn Cụm hoa đầu kép, thường hợp lại thành dạng tán, ngù ở tận cùng hay nách

lá, trong mỗi cụm hoa có từ 5 đến nhiều hoa Tất cả các hoa lưỡng tính, đồng hình Tổng bao gồm nhiều hàng lá bắc, xếp lợp giảm dần từ trong ra ngoài thành hình trụ hay chuông Đế hoa phẳng hoặc hơi lồi, nhẵn, đôi khi có lông tơ Tràng hoa dạng ống, phía trên hình phễu hoặc hình chuông có 5 thùy ngắn, đỉnh tù, màu trắng, tím nhạt Nhị 5, bao phấn tù ở gốc và đỉnh Thùy vòi nhụy dài vượt ra khỏi ống tràng, núm tù, gốc không có mấu Bầu dưới Quả bế thuôn hẹp, thường có 5 gờ, đầu cụt; mào lông có khoảng 40 lông xù xì, tế bào ở đỉnh tù [3]

Trong quá trình nghiên cứu một số loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium) ở

Việt Nam, chúng tôi dựa vào quan điểm phân loại của tác giả Lê Kim Biên Trên cơ

sở đó, chi gồm 9 loài: E canabium, E chinensis, E capillifolium, E colestinum, E

fortunei, E japonicum, E heterophyllum, E lindleyanum, E triplinerve [3]

Typus: Eupatorium cannabium L

3.1.2 Đặc điểm sinh học của 3 loài thuộc chi Mần tưới (Eupatorium L.)

3.1.2.1 Eupatorium fortunei Turcz

Turcz 1851 Bull Soc Nat Moscou, 24 (1): 170; Ohwi 1965 Fl Jap 867; Chen Y 2011 Fl China, 20-21: 884 – 886 Phamhh 2003 Illustr Fl Vietn 3: 246;

L K Bien 2007 Fl Vietn 7: 119 – 120

Tên Việt Nam: Mần tưới, Lan thảo, Trạch lan

Synonym: Eupatorium staechadosmum Hance, 1862 Ann Sci Nat (4) 18:

222; Gagnep 1924 Fl Gen Indoch 3: 507

Thân cỏ, hình trụ, không lông, phân nhánh nhiều Lá mọc đối, lá phía trên ngọn thường mọc cách, hình mũi mác, chóp nhọn, mép răng cưa, kích thước (6 – 13)

× (1 – 2) cm; lá đơn nguyên, đôi khi lá xẻ 3 thùy sâu; gân dưới nổi rõ có 3 – 6 cặp gân phụ; lá non màu xanh, lá già màu xanh tím, có lông ở cả 2 mặt, mặt trên lông chỉ

có ở gân; cuống dài 0,5 – 1,2 cm, có lông Cụm hoa đầu hợp thành dạng tán mọc ở đỉnh ngọn, đỉnh cành hoặc nách lá; cuống cụm hoa đầu rất ngắn, lông dày đặc và có

5 hoa Hoa hình ống, lưỡng tính, hữu thụ, dài 0,6 – 0,8 cm Tổng bao gồm 8 – 10 lá bắc xếp 2 hàng, hàng trong dài 5 – 6 mm, hàng ngoài dài 2 – 4 mm, có lông ở mặt lưng, đỉnh tù Đế cụm hoa phẳng Ống tràng màu trắng hơi tím, đỉnh có 5 thùy ngắn Bao phấn có đỉnh tù, không có tai Vòi nhụy dài hơn ống tràng, đầu vòi xẻ 2 thùy sâu, núm nhụy đầu nhọn không lông, sát với vị trí xẻ thùy có lông dày đặc, gốc vòi nhụy

có lông đa bào Quả bế, dài 3 mm, màu nâu đen, vỏ không có tuyến, 5 gờ dọc, trên

gờ có lông cứng ngắn, thưa thớt Mào lông trên đỉnh quả dài 3 – 5 mm, có nhiều gai nhọn trên lôngvà đỉnh lông tù

Typus: Herb Turczaninov (LE)

Sinh học và sinh thái: Cây ra hoa quả vào tháng 10 – 12 Mọc ở những nơi

có độ ẩm cao như ven suối trong rừng, bãi đất ẩm ven rừng , độ cao 100 – 1600

Phân bố: Lào Cai, Sơn La, Cao Bằng, Lạng Sơn, Hà Giang, Phú Thọ, Hà Nội,

Vĩnh Phúc, Đắc Nông

Giá trị sử dụng: Ở nước ta, cây Mần tưới được thu hái toàn cây trước khi cây

ra hoa dùng tươi hoặc phơi khô trong bóng râm Thường dùng để điều trị kinh nguyệt

bế, kinh nguyệt không đều, ứ huyết phù thũng, choáng váng hoa mắt, mụn nhọt, lở ngứa ngoài da, chữa sốt Nhân dân thường dùng lá non để ăn gỏi hoặc nấu canh, đặc biệt chúng được sử dụng để trừ bọ gà, mạt gà, bọ chó Chống mọt các loại đậu xanh, đậu đen

Mẫu nghiên cứu: Cao Bằng, Lê Kim Biên, 11547 (HN), 11546 (HN), 11545

(HN), 11544 (HN), 11543 (HN) – Lào Cai, Lê Kim Biên, 11611 (HN), 11612 (HN),

11613 (HN), 11614 (HN) – Vĩnh Phúc, Thành, 0001413A (NIMM), 0001413B (NIMM) – Hà Nội, Tập, TB-0001989 (NIMM) – Đắc Nông, L Đ Chung, TB-0009789A (NIMM), TB-0009789B (NIMM)

TB-Hình 3.1: Eupatorium fortunei Turcz

a Dạng sống

b Cành mang hoa

c Mặt trên phiến lá

d Mặt dưới phiến lá (Hình a, c, d: Phạm Thị Vân Anh; Hình b: Phan Kế Lộc)

Hình 3.2: Cơ quan sinh sản loài Eupatorium fortunei Turcz

và hình dạng khác nhau, thành tế bào có góc tròn tại các góc này có các khoảng gian bào nhỏ Các bó sợi phloem nằm phía ngoài phloem Trụ dẫn thứ cấp gồm các bó mạch lớn, nhỏ được tách riêng biệt bởi tia tủy Các bó mạch với phloem ở ngoài, tầng sinh mạch gồm 1 – 2 lớp tế bào hình chữ nhật dẹt ở giữa, xylem ở trong tạo nên bó mạch chồng chất hở Trong cùng là tủy gồm những tế bào mô mềm có hình dạng gần tròn, kích thước lớn và có các khoảng gian bào nhỏ giữa các tế bào

b Rễ (Hình 3.3.c)

Biểu bì gồm 1 lớp tế bào hình đa giác xếp sát nhau Vỏ sơ cấp gồm các tế bào

mô mềm vách mỏng với hình dạng, kích thước gần đều nhau xếp lộn xộn phần gần biểu bì có khoảng gian bào khá rộng, càng gần trụ dẫn các tế bào xếp thành các vòng tròn đồng tâm Trụ dẫn với phloem phía ngoài, xylem phía trong và tầng sinh mạch ở giữa tạo thành vòng liên tục và trong cùng là tủy gồm các tế bào mô mềm Nội bì

không biểu hiện

c Lá

Phiến lá (Hình 3.3.e): Biểu bì gồm 1 lớp tế bào, mặt trên các tế bào xếp sát nhau

và có kích thước lớn có phủ cuticul, tế bào biểu bì mặt dưới có các lỗ khí Mô giậu gồm

1 lớp tế bào hình chữ nhật xếp thẳng góc với biểu bì Mô xốp gồm 3 – 4 lớp tế bào tròn hoặc gần tròn xếp lỏng lẻo tạo ra các khoảng gian bào khá rộng

Gân chính (Hình 3.3.d): Phía trên và phía dưới gân lá có 1 lớp tế bào biểu bì xếp

sát nhau Tế bào mô dày dạng góc (mặt trên và mặt dưới của gân chính) Trụ dẫn gồm các bó mạch nhỏ xếp riêng rẽ thành hình vòng cung, xylem phía trên, phloem phía dưới Ngoài ra, các tế bào mô mềm với nhiều hình dạng và kích thước khác nhau, có các khoảng gian bào nhỏ giữa các tế bào