Nghiên cứu thành phần hóa học cây màn màn hoa tím (cleome chelidonii l f ) và màn màn hoa vàng (TT)

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ …… ….***………… PHAN NHẬT MINH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY MÀN MÀN HOA TÍM (Cleome chelidonii L.f.) VÀ MÀN MÀN HOA VÀNG (Cleome viscosa L.) Chuyên ngành: Hóa học hợp chất thiên nhiên Mã số: 62.44.01.17 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Tp Hồ Chí Minh – 2016 Công trình hoàn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Hướng dẫn khoa học 1: TS Mai Đình Trị Hướng dẫn khoa học 2: PGS TS Mai Thanh Phong Phản biện 1: … Phản biện 2: … Phản biện 3: … Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi … , ngày … tháng … năm 201… Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam I GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Việt Nam có nguồn tài nguyên thực vật vô phong phú đa dạng Theo Phạm Hoàng Hộ, thực vật Việt Nam khoảng 12.000 loài có mạch, không kể rong, rêu nấm[6] Số loài thuốc thống kê Việt Nam 3948 loài thuộc 307 họ thực vật nấm, chiếm 37,6 % số loài tự nhiên Thông qua việc khảo sát đặc điểm hóa thực vật, dược tính… thuốc, bước lý giải thích việc trị bệnh thảo dược, đồng thời tiêu chuẩn hoá thuốc cổ truyền nhằm sử dụng cách hợp lý, có hiệu đồng thời góp phần bảo tồn thuốc dân tộc Chính vậy, việc nghiên cứu hóa học hợp chất thiên nhiên định hướng vào hoạt tính sinh học ngày trọng Màn hoa tím (Cleome chelidonii L.f.) Màn hoa vàng (Cleome viscosa L.) mọc hoang khắp Việt Nam Trong dân gian, Màn hoa tím dùng chữa chứng cảm cúm nóng lạnh, nhức đầu, ho hen, chữa rắn cắn, dùng chữa viêm đau thận Toàn Màn hoa vàng nấu nước xông chữa nhức đầu Rễ có tính kích thích chống bệnh hoại huyết, bệnh chảy máu chân Quả non ăn kích thích tiêu hoá Hạt làm thuốc xoa bóp chữa tê thấp dùng trị giun Trên giới Việt Nam, có số công trình nghiên cứu phục vụ y học đa số dừng lại mức độ khảo sát hoạt tính sinh học dịch chiết, công trình nghiên cứu chi tiết thành phần hóa học hợp chất có hai loài Trên sở đó, tiến hành khảo sát thành phần hóa học hai loài Màn hoa tím (Cleome chelidonii L.f.) Màn hoa vàng (Cleome viscosa L.), xác định hoạt tính sinh học hoạt chất phân lập cao chiết làm sở khoa học cho việc sử dụng dược liệu phát hoạt tính mới, góp phần nâng cao giá trị loại dược liệu Việt Nam Luận án giới thiệu kết nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài Màn hoa tím (Cleome chelidonii L.f.) Màn hoa vàng (Cleome vicosa L.) Đối tượng nghiên cứu nội dung luận án Đối tượng nghiên cứu luận án 02 loài Màn hoa tím (Cleome chelidonii L.f.) Màn hoa vàng (Cleome vicosa L.) Nội dung luận án: ● Phân lập hợp chất tinh khiết từ hai loài Màn hoa tím Màn hoa vàng ● Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập ● Thử nghiệm hoạt tính bảo vệ gan cao chiết hợp chất phân lập Những đóng góp luận án ● Lần nghiên cứu hóa học hai loài Màn màn: Cleome chelidonii L.f Cleome vicosa L phân lập 25 hợp chất, có 20 hợp chất biết là: Quercitrin, isoquercitrin, quercetin-7-O-α-L-rhamnopyranoside, quercetin-3-O-β-Dglucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside, quercetin-3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→2)]-α-Lrhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside, quercetin-3-O-[2"-O-(6'''-p-coumaroyl)-β-Dglucopyranosyl]-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside, kaempferol-3-O-methyl ether, kaempferol-3,4'-O-dimethylether, kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside, kaempferol-3-O(4-O-acetyl-α-L-rhamnopyranoside), kaempferol-7-O-α-L-rhamnopyranoside, kaempferol-3-O(2,4-O-diacetyl-α-L-rhamnopyranoside), kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-Lrhamnopyranoside, kaempferol-3,7-O-α-L-dirhamnopyranoside, kaempferol-3-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranoside, glycerol monostearate, ethyl α-galacto pyranoside, 5-(hydroxymethyl)-2-furaldehyde, emodin-8-O-β-D-glucopyranoside adenine ● Lần phân lập hợp chất thuộc dạng khung flavonol từ hai loài nghiên cứu: - Cleomeside A, cleomeside B cleomeside C loài màn hoa tím - Visconoside A visconoside B loài màn hoa vàng ● Lần thử nghiệm hoạt tính độc tế bào tác dụng bảo vệ tế bào gan cao chiết phân đoạn hợp chất phân lập - Các cao chiết từ thân, hai loài hoạt tính độc tế bào, thể tác dụng tác dụng kích thích tăng trưởng tế bào khoảng 20 % - 30 % sau 72 - Tất hợp chất cleomeside A, cleomeside B, cleomeside C, visconoside A, visconoside B, quercetin-3-O-[β-Dquercetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside, glucopyranosyl-(1→2)]-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside, kaempferol-3O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside hoạt tính độc tế bào - Hợp chất cleomeside C làm tăng tỷ lệ tế bào sống 100% nồng độ 25µM - Các hợp chất cleomeside B, visconoside A, visconoside B kaempferol-3-O-β-Dglucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside thể tác dụng bảo vệ tế bào gan HepG2 phòng ngừa ức chế tăng trưởng tế bào CCl4 mM gây sau 24 tiếp xúc nồng độ 100 µM hợp chất visconoside A, visconoside B kaempferol-3-O-β-Dglucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside thể tác dụng bảo vệ tế bào gan tốt với tỷ lệ phòng ngừa từ 65% đến 75% Bố cục luận án Luận án gồm 89 trang với sơ đồ, 30 bảng số liệu, 27 hình, 108 tài liệu tham khảo Bố cục luận án: Mở đầu (1 trang), Chương 1: Tổng quan tài liệu (13 trang), Chương 2: Thực nghiệm (7 trang), Chương 4: Kết biện luận (55 trang), Kết luận Kiến nghị (2 trang), Tài liệu tham khảo (10 trang), Các công trình công bố (1 trang) Phụ lục phổ (92 trang) 3 II NỘI DUNG LUẬN ÁN Mở đầu: Phần mở đầu đề cập đến ý nghĩa khoa học, tính thực tiễn, đối tượng, mục tiêu nhiệm vụ nghiên cứu luận án CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN Phần tổng quan tập hợp nghiên cứu nước quốc tế vấn đề: 1.1 Giới thiệu chung chi màn 1.2 Mô tả thực vật 02 loài màn hoa tím màn hoa vàng 1.3 Vùng phân bố, thu hái chế biến 1.4 Thành phần hóa học 02 loài Màn 1.5 Những nghiên cứu dược tính 02 loài Màn 1.6 Bệnh gan thuốc bảo vệ gan 1.7 Dòng tế bào HepG2 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Mẫu thực vật Mẫu thực vật thân Màn hoa tím (Cleome chelidonii L.f.) Màn hoa vàng (Cleome viscosa L.) thu hái huyện Bến Cát, tỉnh Bình Dương vào tháng 10 năm 2012 Mẫu TS Võ Văn Chi giám định tên khoa học 2.2 Hóa chất thiết bị Các hóa chất thiết bị cần thiết để phân lập xác định cấu trúc hoá học hợp chất sử dụng luận án 2.3 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học Khảo sát khả gây độc tế bào tác dụng bảo vệ tế bào gan cao chiết hoạt chất dòng tế bào HepG2 xác định theo phương pháp MTT 2.4 Phân lập hợp chất Phần trình bày cụ thể cách thức phân lập hợp chất từ Màn hoa tím Màn hoa vàng Việc phân tách hợp chất nêu tóm tắt sơ đồ 1, 2, 4 Sơ đồ 1: Phân lập hợp chất từ Màn hoa tím Sơ đồ 2: Phân lập hợp chất từ thân Màn hoa tím Sơ đồ 3: Phân lập hợp chất từ Màn hoa vàng Sơ đồ 4: Phân lập hợp chất từ thân Màn hoa vàng CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Cấu trúc hợp chất phân lập Phần trình bày chi tiết kết phân tích phổ xác định cấu trúc 25 hợp chất phân lập từ hai loài Màn hoa tím Màn hoa vàng, có hợp chất 20 hợp chất biết 3.1.1 Hợp chất 1: Quercetin-7-O-α-L-rhamnopyranoside Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 471,0885 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,72 (1H, d;2,5; H-2'); 7,58 (1H, dd; 8,5 2,5; H-6'); 6,89 (1H, d; 8,5; H-5'); 6,78 (1H, d; 2,0; H-8); 6,41 (1H, d; 2,0; H-6); 5,54 (1H, d; 1,0; H-1''); 3,85 (1H, br s, H-2''); 3,64 (1H, dd; 8,5 2,5; H-3''); 3,42 - 3,48 (1H, m, H-5''); 3,32 (1H, m, H-4'') 1,13 (3H, d; 6,0; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 176,0 (C-4); 161,4 (C-7); 160,3 (C-5); 155,7 (C-9); 147,9 (C-4'); 147,5 (C-2); 145,0 (C-3'); 136,1 (C-3); 121,8 (C-1'); 120,1 (C-6'); 115,6 (C-5'); 115,2 (C-2'); 104,6 (C-10); 98,8 (C-6); 98,4 (C-1''); 94,1 (C-8); 71,6 (C-4''); 70,2 (C-3''); 70,0 (C-5''); 69,8 (C-2'') 17,9 (C-6'') 3.1.2 Hợp chất 2: Quercitrin Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,29 (1H, d; 2,0; H-2'); 7,25 (1H, dd; 8,5 2,0; H-6'); 6,86 (1H, d; 8,0; H-5'); 6,38 (1H, d; 2,0; H-8); 6,20 (1H, d; 2,0; H-6); 5,25 (1H, br s, H-1''); 3,97 (1H, d; 1,0; H-2''); 3,49 (1H, dd; 9,5 3,5; H-3''); 3,19 - 3,24 (1H, m, H-4''); 3,12 - 3,17 (1H, m, H-5'') 0,81 (3H, d; 6,5; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,7 (C-4); 164,3 (C-7); 161,2 (C-5); 157,2 (C-2); 156,4 (C-9); 148,4 (C-4'); 145,2 (C-3'); 134,2 (C-3); 121,0 (C-6'); 120,7 (C-1'); 115,6 (C-2'); 115,4 (C-5'); 104,0 (C-10); 101,8 (C-1''); 98,7 (C-6); 93,6 (C-8); 71,1 (C-4''); 70,5 (C-3''); 70,3 (C-2''); 70,0 (C-5'') 17,4 (C-6'') 6 3.1.3 Hợp chất 3: Isoquercitrin Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,59 (1H, s, H-6'); 7,58 (1H, d; 7,0; H-2'); 6,84 (1H, d; 9,0; H-5'); 6,39 (1H, s, H-8); 6,19 (1H, s, H-6); 5,46 (1H, d; 7,0; H-1''); 3,56 (1H, d; 11,5; H-6a''); 3,35 (1H, m, H-6b''); 3,17 - 3,25 (2H, m, H-2'' H-3'') 3,09 (2H, d; 4,0; H-4'' H-5'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,3 (C-4); 165,5 (C-7); 161,2 (C-5); 156,3 (C-9); 156,1 (C-2); 148,5 (C-3'); 144,8 (C-4'); 133,3 (C-3); 121,6 (C-6'); 121,1 (C-1'); 116,1 (C-2'); 115,2 (C-5'); 103,8 (C-10); 100,9 (C-1''); 98,7 (C-6); 93,5 (C-8); 77,5 (C-5''); 76,5 (C-3''); 74,1 (C-2''); 69,9 (C-4'') 60,9 (C-6'') 3.1.4 Hợp chất 4: Quercetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 633,1441 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,61 (1H, d; 9,0, H-6'); 7,60 (1H, d; 2,0; H-2'); 6,85 (1H, d; 9,0; H-5'); 6,79 (1H, d; 2,0; H-8); 6,43 (1H, d; 2,0; H-6); 5,55 (1H, br s, H-1'''); 5,48 (1H, d; 7,5; H-1''); 3,84 (1H, br s, H-5'''); 3,64 (1H, dd; 9,0 3,0; H-3'''); 3,58 (1H, d; 11,5; H-6a''); 3,42 - 3,45 (1H, m, H-2'''); 3,32 (1H, m, H-2''); 3,32 - 3,33 (1H, m, H-6b''); 3,30 (1H, m, H-4'''); 3,22 - 3,24 (1H, m, H-5''); 3,09 - 3,10 (2H, m, H-3'' H-4''') 1,12 (3H, d; 6,0; H-6''') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,6 (C-4); 161,6 (C-7); 160,9 (C-5); 156,7 (C-2); 155,9 (C-9); 148,7 (C-4'); 144,8 (C-3'); 133,6 (C-3); 121,7 (C-1'); 121,0 (C-6'); 116,3 (C-5'); 115,2 (C-2'); 105,6 (C-10); 100,7 (C-1''); 99,4 (C-6); 98,4 (C-1'''); 94,3 (C-8); 77,6 (C-3''); 76,5 (C-5''); 74,1 (C-4'''); 71,6 (C-2''); 70,2 (C-3'''); 70,0 (C-2'''); 69,9 (C-4''); 69,8 (C-5'''); 61,0 (C-6'') 17,9 (C-6''') 3.1.5 Hợp chất 5: Quercetin-3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→2)]-α-L-rhamnopyranoside-7-Oα-L-rhamnopyranoside Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 779,2027 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,39 (1H, d; 2,0; H-2'); 7,31 (1H, dd; 8,5 2,0; H-6'); 6,89 (1H, d; 8,5; H-5'); 6,75 (1H, d; 2,0; H-8); 6,43 (1H, d; 2,0; H-6); 5,53 (1H, d; 1,0; H-1""); 5,47 (1H, br s, H-1"); 4,22 (1H, d; 8,0; H-1'"); 4,12 (1H, d; 2,5; H-2"); 3,83 (1H, t; 4,5 3,0; H-2""); 3,59 - 3,63 (2H, m, H-3" H-4'"); 3,52 - 3,56 (1H, m, H-5"); 3,40 3,47 (3H, m, H-6a'", H-3"" H-5""); 3,33 (1H, br s, H-4""); 3,27 (1H, br s, H-6b'"); 3,11 - 3,16 (3H, m, H-4", H-3'" H-5'"); 2,95 - 2,99 (1H, m, H-2'"); 1,11 (3H, d; 6,0; H-6"") 0,89 (3H, d; 6,5; H-6") Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 178,0 (C-4); 161,7 (C-7); 160,9 (C-5); 157,5 (C-2); 156,0 (C-9); 148,8 (C-4'); 145,2 (C-3'); 134,8 (C-3); 121,1 (C-6'); 120,4 (C-1'); 115,6 (C-2'); 115,5 (C-5'); 106,2 (C-1'"); 105,7 (C-10); 101,0 (C-1"); 99,4 (C-6); 98,4 (C-1""); 94,5 (C-8); 81,4 (C-2"); 76,5 (C-5'"); 76,2 (C-3'"); 73,9 (C-2'"); 71,7 (C-4"); 71,6 (C-4""); 70,4 (C-5"); 70,2 (C-3"); 70,1 (C-3""); 70,0 (C-5""); 69,8 (C-2""); 69,0 (C-4'"); 60,2 (C-6'"); 17,9 (C-6"") 17,4 (C-6") 3.1.6 Hợp chất 6: Cleomeside A (Mới) Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 797,2136 [M-H]- Độ quay cực [α]D25 -0,25 (c 0,01; MeOH) Phổ IR νmax (MeOH): 3317, 2943, 2831, 1449, 1414, 1114 1022 cm-1 Phổ UV (MeOH) λmax: 204, 257 350 nm Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,40 (1H, d; 2,0; H-2'); 7,33 (1H, dd; 8,5 2,0; H-6'); 6,89 (1H, d; 8,5; H-5'); 6,81 (1H, d; 2,0; H-8); 6,48 (1H, d; 2,0; H-6); 5,62 (1H, d; 1,0; H-1""); 5,49 (1H, br s, H-1"); 4,88 (1H, t; 10,0; H-4""); 4,23 (1H, d; 8,0; H-1'"); 4,13 (1H, d; 2,0; H-2"); 3,91 (1H, s, H-3"); 3,85 - 3,87 (1H, m, H-3""); 3,60 - 3,64 (2H, m, H-5" H-5""); 3,52 - 3,55 (1H, m, H-4'"); 3,43 - 3,48 (1H, m, H-6a'"); 3,34 (1H, d; 10,0; H-6b'"); 3,12 - 3,16 (3H, m, H-4", H-5'" H-2""); 2,97 - 3,00 (2H, m, H-2'" H-3'"); 2,04 (3H, s, H-8""); 1,03 (3H, m, H-6"") 0,90 (3H, d; 6,0; H-6") Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 178,0 (C-4); 170,0 (C-7""); 161,3 (C-7); 160,9 (C-5); 157,5 (C-2); 156,0 (C-9); 148,9 (C-4'); 145,3 (C-3'); 134,9 (C-3); 121,1 (C-6'); 120,4 (C-1'); 115,6 (C-2'); 115,5 (C-5'); 106,2 (C-1'"); 105,9 (C-10); 101,1 (C-1"); 99,5 (C-6); 98,0 (C-1""); 94,6 (C-8); 81,4 (C-2"); 76,5 (C-5'"); 76,2 (C-3'"); 73,9 (C-2'"); 73,3 (C-4""); 71,8 (C-4"); 70,4 (C-5"); 70,2 (C-3"); 69,7 (C-2""); 69,1 (C-4'"); 67,8 (C-3""); 67,5 (C-5""); 60,3 (C-6'"); 20,9 (C-8""); 17,5 (C-6"") 17,4 (C-6") 3.1.7 Hợp chất 7: Quercetin 3-O-[2"-O-(6'''-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranosyl]-α-Lrhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 925,2378 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,43 (1H, d; 16,0; H-3a); 7,39 (2H, d; 8,5; H-5a H-9a); 7,35 (1H, d; 2,0; H-2'); 7,26 (1H, dd; 8,0 2,0; H-6'); 6,89 (1H, d; 8,0; H-5'); 6,68 (2H, d; 8,5; H-6a H-8a); 6,65 (1H, d; 2,0; H-8); 6,39 (1H, d; 2,0; H-6); 6,23 (1H, d; 16,0; H-2a); 5,54 (1H, br s, H-1''); 5,50 (1H, br s, H-1''''); 4,29 (1H, d; 8,0; H-1'''); 4,17 (1H, d; 3,5; H-2''); 4,17 (1H, dd; 12,0 2,5; H-6b'''); 4,07 - 4,13 (1H, m, H-6a'''); 3,83 (1H, s, H-3''); 3,64 - 3,73 (1H, m, H-5''); 3,58 - 3,64 (1H, m, H-3''''); 3,53 - 3,57 (2H, m, H-4''' H-2''''); 3,41 3,47 (1H, m, H-4''''); 3,29 - 3,35 (1H, m, H-4''); 3,26 - 3,29 (1H, m, H-2'''); 3,17 - 3,20 (1H, m, H-5''''); 3,11 - 3,209 (1H, m, H-3'''); 3,02 - 3,05 (1H, m, H-5'''); 1,12 (3H, d; 6,5; H-6'''') 0,94 (3H, d; 6,5; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,9 (C-4); 166,3 (C-1a); 161,6 (C-2); 161,6 (C-7); 159,7 (C-7a); 157,2 (C-1'); 155,9 (C-9); 148,7 (C-4'); 145,3 (C-3'); 144,6 (C-3a); 134,6 (C-3); 130,1 (C-5a C-9a); 124,9 (C-4a); 120,9 (C-5); 120,6 (C-6'); 115,6 (C-6a C-8a); 115,5 (C-2'); 113,9 (C-2a); 107,1 (C-1'''); 105,6 (C-10); 102,6 (C-1''); 100,7 (C-5'); 99,8 (C-1''''); 99,3 (C-6); 94,4 (C-8); 81,7 (C-2''); 75,9 (C-3'''); 73,6 (C-4'''); 73,5 (C-5'' C-5'''); 71,7 (C-2'''); 71,6 (C-4''); 70,4 (C-4''''); 70,2 (C-2''''); 70,0 (C-3''''); 69,8 (C-3'' C-5''''); 64,5 (C-6'''); 17,9 (C-6'''') 17,7 (C-6'') 3.1.8 Hợp chất 8: Cleomeside B (Mới) Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 945,2664 [M+H]+ Độ quay cực [α]D25 -0,20 (c 0,01; MeOH) Phổ IR νmax (MeOH): 3317, 2943, 2831, 1449, 1414, 1114 1022 cm-1 Phổ UV (MeOH) λmax: 208, 262 317 nm Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,40 (1H, d; 16,0; H-3a); 7,35 (1H, d; 2,0; H-2'); 7,24 (1H, dd; 8,0 2,0; H-6'); 7,20 (2H, d; 8,5; H-5a H-9a); 6,92 (1H, d; 8,0; H-5'); 6,66 (2H, d; 8,5; H-6a H-8a); 6,48 (1H, d; 2,0; H-8); 6,40 (1H, d; 2,0; H-6); 6,02 (1H, d; 16,0; H-2a); 5,75 (1H, br s, H-1''); 5,54 (1H, br s, H-1''''); 5,05 (1H, t; 10,0; H-4''''); 4,53 (1H, dd; 12,0 2,5; H-6b'''); 4,44 (1H, d; 7,5; H-1'''); 4,38 (1H, d; 2,0; H-2''); 4,07 - 4,11 (2H, m, H-2'''' H-6a'''); 4,01 (1H, dd; 10,0 3,0; H-3''''); 3,91 (1H, dd; 10,0 3,0; H-3''); 3,75 - 3,79 (2H, m, H-5'' H-5''''); 3,38 - 3,46 (3H, m, H-3''', H-4'' H-5'''); 3,32 - 3,33 (2H, m, H-2''' H-4'''); 2,13 (3H, s, H-8''''); 1,16 (3H, d; 6,5; H-6'''') 1,11 (3H, d; 4,0; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 179,8 (C-4); 172,5 (C-7''''); 168,8 (C-1a); 163,2 (C-7); 162,9 (C-5); 161,0 (C-7a); 158,9 (C-2); 157,8 (C-9); 149,9 (C-4'); 146,5 (C-3'); 146,3 (C-3a); 137,1 (C-3); 131,0 (C-5a C-9a); 126,9 (C-4a); 123,0 (C-6'); 122,7 (C-1'); 117,1 (C-2'); 116,6 (C-6a C-8a); 116,4 (C-5'); 114,8 (C-2a); 107,7 (C-10); 107,1 (C-1'''); 102,6 (C-1''); 100,5 (C-6); 99,8 (C-1''''); 95,6 (C-8); 83,6 (C-2''); 77,6 (C-3'''); 75,3 (C-5'''); 75,1 (C-2''' C-4''''); 73,6 (C-4''); 72,1 (C-5''); 72,0 (C-4'''); 71,7 (C-3'' C-2''''); 70,1 (C-3''''); 69,1 (C-5''''); 64,5 (C-6'''); 21,0 (C-8''''); 17,9 (C-6'''') 17,7 (C-6'') 3.1.9 Hợp chất 9: Visconoside A (Mới) Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 821,2116 [M+Na]+ Độ quay cực [α]D25 -0,94 (c 0,01; MeOH) Phổ IR νmax (MeOH): 3317, 2943, 2831, 1449, 1417, 1114 1022 cm-1 Phổ UV (MeOH) λmax: 257 348 nm Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,31 (1H, dd; 8,5 2,0; H-6'); 7,30 (1H, d; 2,0; H-2'); 6,93 (1H, d; 8,5; H-5'); 6,76 (1H, d; 2,0; H-6); 6,45 (1H, d; 2,0; H-8); 5,54 (1H, d; 1,0, H-1''''); 5,36 (1H, s, H-1''); 4,82 (1H, t; 10,0; H-4''); 4,27 (1H, d; 8,0; H-1'''); 4,20 (1H, s, H-2''); 3,87 (1H, d; 2,5; H-3''); 3,84 (1H, br s; H-2''''); 3,72 (1H, dd; 11,5 1,5; H-6a'''); 3,63 (1H, dd; 9,5 3,5; H-3''''); 3,54 (1H, dd; 11,5 9,0; H-6b'''); 3,44 (1H, dd; 6,0 3,5; H-5''''); 3,37 (1H, dd; 10,0 6,5; H-5''); 3,31 (1H, t; 9,5; H-4''''); 3,22 (1H, m, H-5'''); 3,17 (1H, dd; 9,0 8,5; H-3'''); 3,10 (1H, t; 9,0; H-4'''); 2,99 (1H, t; 8,5; H-2'''); 1,96 (3H, s, H-8''); 1,11 (3H, d; 6,0; H-6'''') 0,74 (3H, d; 6,5; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 178,0 (C-4); 170,2 (C-7''); 161,9 (C-7); 161,1 (C-5); 158,2 (C-2); 156,3 (C-9); 149,1 (C-4'); 145,5 (C-3'); 133,9 (C-3); 121,6 (C-6'); 120,4 (C-1'); 115,8 (C-2' C-5'); 105,9 (C-10); 104,8 (C-1'''); 101,2 (C-1''); 99,8 (C-6); 98,6 (C-1''''); 94,8 (C-8); 77,0 (C-3'''); 76,9 (C-3''); 76,6 (C-5'''); 73,4 (C-2'''); 71,8 (C-4''''); 71,5 (C-4''); 70,4 (C-3''''); 70,3 (C-5''''); 70,1 (C-4'''); 70,0 (C-2''''); 69,7 (C-2''); 68,5 (C-5''); 61,2 (C-6'''); 21,0 (C-8''); 18,1 (C-6'''') 17,3 (C-6'') 3.1.10 Hợp chất 10: Visconoside B (Mới) Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 1027,2680 [M+Na]+ Độ quay cực [α]D25 -1,23 (c 0,01; MeOH) Phổ IR νmax (MeOH): 3317, 2943, 2831, 1449, 1416, 1115 1022 cm-1 Phổ UV (MeOH) λmax: 249 336 nm Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,41 (1H, d; 15,5; H-3a); 7,33 (1H, dd; 8,0 2,0; H-6'); 7,26 (1H, d; 1,5; H-2'); 6,93 (1H, t; 7,5; H-5'); 6,50 (3H, s, H-8, H-5a H-9a); 6,30 (1H, d; 15,5; H-2a); 6,27 (1H, d; 1,5; H-6); 5,54 (2H, s, H-1'' H-1''''); 4,79 (1H, t; 10,0; H-4''); 4,52 (1H, dd; 11,0 8,5; H-6a'''); 4,32 (1H, d; 7,5; H-1'''); 4,25 (1H, d; 11,0 2,0; H-6b'''); 4,08 (1H, br s, H-2''); 3,89 (1H, d; 2,5; H-2''''); 3,86 (1H, d; 2,5; H-3''); 3,60 - 3,65 (2H, m, H-5''' H-3''''); 3,54 (6H, d; 6,5; -OCH3); 3,40 (1H, dd; 9,0 6,0; H-5''''); 3,31 (1H, t; 9,0; H-4''''); 3,24 (1H, t; 9,0; H-3'''); 3,00 - 3,14 (3H, m, H-5'', H-2''' H-4'''); 1,94 (3H, s, H-8''); 1,15 (3H, d; 6,0; H-6'''') 0,66 (3H, d; 6,5; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,4 (C-4); 169,8 (C-7''); 166,4 (C-1a); 161,7 (C-7); 160,5 (C-5); 156,8 (C-2); 155,6 (C-9); 148,8 (C-4'); 147,3 (C-6a C-8a); 145,4 (C-3'); 145,1 (C-3a); 137,8 (C-7a); 133,2 (C-3); 123,8 (C-4a); 121,5 (C-6'); 120,5 (C-1'); 115,6 (C-2'); 115,2 (C-5'); 114,3 (C-2a); 105,3 (C-10); 105,0 (C-1'''); 104,9 (C-5a C-9a); 99,9 (C-1''); 99,5 (C-6); 98,6 (C-1''''); 93,6 (C-8); 76,7 (C-3'''); 76,4 (C-3''); 74,1 (C-5'''); 73,0 (C-2'''); 71,7 (C-4''''); 71,3 (C-4''); 70,6 (C-4'''); 70,3 (C-3''''); 69,9 (C-5''''); 69,8 (C-2''''); 69,7 (C-2''); 68,4 (C-5''); 63,6 (C-6'''); 55,3 (-OCH3); 20,8 (C-8''); 18,0 (C-6'''') 17,1 (C-6'') 3.1.11 Hợp chất 11: Kaempferol-3-O-methylether Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 323,0520 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,93 (2H, d; 9,0; H-2' H-6'); 6,94 (2H, d; 9,0; H-3' H-5'); 6,44 (1H, d; 2,0; H-8); 6,20 (1H, d; 2,0; H-6) 3,78 (3H, s, -OCH3) Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,9 (C-4); 164,1 (C-7); 161,2 (C-5); 160,1 (C-4'); 156,3 (C-9); 155,6 (C-2); 137,6 (C-3); 130,1 (C-2' C-6'); 120,5 (C-1'); 115,6 (C-3' C-5'); 104,2 (C-10); 98,5 (C-6); 93,7 (C-8) 59,6 (-OCH3) 3.1.12 Hợp chất 12: Kaempferol-3,4'-O-dimethylether Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 337,0675 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 8,02 (2H, d; 9,0; H-2' H-6'); 7,12 (2H, d; 9,0; H-3' H-5'); 6,38 (1H, d; 2,0; H-8); 6,18 (1H, d; 2,0; H-6); 3,85 (3H, s, H-12) 3,78 (3H, s, H-11) 10 Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,9 (C-4); 164,4 (C-7); 161,3 (C-4'); 161,2 (C-5); 156,4 (C-9); 155,1 (C-2); 137,9 (C-3); 129,9 (C-2' C-6'); 122,2 (C-1'); 114,2 (C-3' C-5'); 104,2 (C-10); 98,6 (C-6); 93,7 (C-8); 59,7 (C-11) 55,4 (C-12) 3.1.13 Hợp chất 13: Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ 1H-NMR (500 MHz, MeOD-d4, δH ppm, J = Hz): 8,07 (2H, d; 9,0; H-2' H-6'); 6,91 (2H, d; 9,0; H-3' H-5'); 6,41 (1H, d; 2,0; H-8); 6,22 (1H, d; 2,0; H-6); 5,26 (1H, d; 7,5; H-1''); 3,70 (1H, dd; 12,0 2,5; H-6b''); 3,54 (1H, dd; 12,0 5,0; H-6a''); 3,41 - 3,48 (2H, m, H-2'' H-3''); 3,33 (1H, m, H-4'') 3,23 (1H, m, H-5'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, MeOD-d4, δC ppm): 179,5 (C-4); 166,2 (C-7); 163,1 (C-5); 161,6 (C-4'); 158,6 (C-9);159,1 (C-2); 135,5 (C-3); 132,3 (C-2' C-6'); 122,8 (C-1'); 116,1 (C-3' C-5'); 105,7 (C-10); 104,2 (C-1''); 100,0 (C-6); 94,8 (C-8); 78,4 (C-3''); 78,1 (C-5''); 75,8 (C-2''); 71,4 (C-4'') 62,9 (C-6'') 3.1.14 Hợp chất 14: Kaempferol-7-O-α-L-rhamnopyranoside Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 455,0930 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 8,09 (2H, d; 9,0; H-2' H-6'); 6,92 (2H, d; 9,0; H-3' H-5'); 6,82 (1H, d; 2,0; H-8); 6,42 (1H, d; 2,0; H-6); 5,54 (1H, d; 0,5; H-1''); 3,85 (1H, s, H-2''); 3,62 - 3,66 (1H, m, H-3''); 3,42 - 3,47 (1H, m, H-5''); 3,28 - 3,35 (1H, m, H-4'') 1,12 (3H, d; 6,0; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 176,0 (C-4); 161,4 (C-7); 160,3 (C-5); 159,3 (C-4'); 155,7 (C-9); 147,5 (C-2); 136,0 (C-3); 129,6 (C-2' C-6'); 121,5 (C-1'); 115,4 (C-3' C-5'); 104,7 (C-10); 98,8 (C-6); 98,4 (C-1''); 94,3 (C-8); 71,6 (C-4''); 70,2 (C-3''); 70,0 (C-5''); 69,8 (C-2'') 17,9 (C-6'') 3.1.15 Hợp chất 15: Kaempferol-3-O-(4-O-acetyl-α-L-rhamnopyranoside) Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 497,1046 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,73 (2H, d; 8,5; H-2' H-6'); 6,93 (2H, d; 9,0; H-3' H-5'); 6,44 (1H, d; 1,5; H-8); 6,20 (1H, d; 1,5; H-6); 5,27 (1H, d; 1,0; H-1''); 4,69 (1H, t; 10,0; H-4''); 4,01 (1H, br s, H-2''); 3,68 (1H, dd; 9,5 2,5; H-5''); 3,22 (1H, m, H-3''); 1,99 (3H, s, H-8'') 0,69 (3H, d; 6,0; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 169,8 (C-7''); 164,6 (C-7); 177,5 (C-4); 161,1 (C-5); 160,1 (C-4'); 157,3 (C-2); 156,5 (C-9); 133,9 (C-3); 130,5 (C-2' C-6'); 120,3 (C-1'); 115,3 (C-3' C-5'); 103,9 (C-10); 101,3 (C-1''); 98,8 (C-6); 93,8 (C-8); 73,1 (C-4''); 69,9 (C-2''); 67,8 (C-3'' C-5''); 20,8 (C-8'') 16,9 (C-6'') 3.1.16 Hợp chất 16: Kaempferol-3-O-(2,4-O-diacetyl-α-L-rhamnopyranoside) Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 539,1127 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,75 (2H, d; 8,5; H-2' H-6'); 6,94 (2H, d; 8,5; H-3' H-5'); 6,42 (1H, d; 2,0; H-8); 6,22 (1H, d; 2,0; H-6); 5,40 (1H, d; 1,0; H-1''); 11 5,32 (1H, dd; 3,5 1,5; H-2''); 4,61 (1H, t; 6,0; H-4''); 3,87 (1H, m, H-3''); 3,25 (1H, dd; 10,0 6,0; H-5''); 2,05 (3H, s, H-8''); 1,98 (3H, s, H-10'') 0,74 (3H, d; 6,0; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,6 (C-4); 169,7 (C-7''); 169,4 (C-9''); 164,3 (C-7); 161,2 (C-5); 160,2 (C-4'); 157,4 (C-2); 156,5 (C-9); 133,2 (C-3); 130,5 (C-2' C-6'); 120,1 (C-1'); 115,4 (C-3' C-5'); 104,0 (C-10); 97,8 (C-1''); 98,8 (C-6); 93,8 (C-8); 72,9 (C-4''); 71,1 (C-2''); 67,9 (C-5''); 65,8 (C-3''); 20,7 (C-10''); 20,4 (C-8'') 16,9 (C-6'') 3.1.17 Hợp chất 17: Kaempferol-3,7-O-α-L-dirhamnopyranoside Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 601,1525 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,89 (2H, d; 8,5; H-3' H-5'); 6,92 (2H, d; 8,5; H-2' H-6'); 6,78 (1H, d; 1,5; H-8); 6,44 (1H, d; 1,5; H-6); 5,48 (1H, br s, H-1'''); 5,30 (1H, br s, H-1''); 3,99 (1H, br s, H-2''); 3,85 (1H, m, H-2'''); 3,64 (1H, dd; 9,5 3,0; H-3''); 3,48 (1H, dd; 8,5 3,0; H-3'''); 3,42 - 3,45 (2H, m, H-4'' H-5'''); 3,30 (1H, t; 9,5; H-4'''); 3,13 - 3,17 (1H, m, H-5''); 1,13 (3H, d; 8,0; H-6''') 0,81 (3H, d; 6,0; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,9 (C-4); 161,7 (C-7); 160,9 (C-5); 160,2 (C-4'); 157,8 (C-9); 156,1 (C-2); 134,5 (C-3); 130,7 (C-3' C-5'); 120,3 (C-1'); 115,4 (C-2' C-6'); 105,8 (C-10); 101,9 (C-1''); 99,5 (C-6); 98,4 (C-1'''); 94,6 (C-8); 71,6 (C-4'''); 71,1 (C-5''); 70,7 (C-4'' C-5'''); 70,3 (C-3'''); 70,2 (C-3''); 70,1 (C-2''); 69,8 (C-2'''); 17,9 (C-6''') 17,5 (C-6'') 3.1.18 Hợp chất 18: Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 617,1475 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 8,07 (2H, d; 9,0; H-3' H-5'); 6,89 (2H, d; 9,0; H-2' H-6'); 6,82 (1H, br s, H-8); 6,44 (1H, br s, H-6); 5,55 (1H, br s, H-1'''); 5,47 (1H, d; 7,5; H-1''); 3,84 (1H, s, H-2'''); 3,64 (1H, d; 9,0; H-3'''); 3,56 (1H, dd; 11,0 3,5; H-6a''); 3,43 (1H, dd; 9,0 6,0; H-5'''); 3,31 (2H, d; 9,0; H-6b'' H-2''); 3,19 - 3,24 (2H, m, H-5'' H-4'''); 3,09 (2H, m, H-3'' H-4'') 1,12 (3H, d; 6,5; H-6''') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,6 (C-4); 161,6 (C-7); 160,9 (C-5); 160,1 (C-4'); 156,8 (C-2); 156,0 (C-9); 133,5 (C-3); 131,0 (C-2' C-6'); 115,1 (C-3' C-5'); 120,7 (C-1'); 105,7 (C-10); 100,8 (C-1''); 99,4 (C-6); 98,4 (C-1'''); 94,5 (C-8); 77,5 (C-3''); 76,4 (C-5''); 74,2 (C-4'''); 71,6 (C-2''); 70,2 (C-3'''); 70,0 (C-5'''); 69,9 (C-4''); 69,8 (C-2'''); 60,8 (C-6'') 17,9 (C-6''') 3.1.19 Hợp chất 19: Kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranoside Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 617,1475 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, MeOD-d4, δH ppm, J = Hz): 8,02 (2H, d; 9,0; H-2' H-6'); 6,85 (2H, d; 9,0; H-3' H-5'); 6,34 (1H, d; 2,0; H-8); 6,16 (1H, d; 2,0; H-6); 5,08 (1H, d; 7,5; H-1''); 4,47 (1H, d; 1,5; H-1'''); 3,75 (1H, dd; 11,0 1,0; H-6b''); 3,60 (1H, dd; 3,5 1,5; H-3'''); 3,50 (1H, dd; 1,5 3,5; H-4''); 3,39 (1H, m, H-5'''); 3,38 (1H, dd; 11,0 9,0; H-2''); 3,35 (1H, dd; 12 11,0 9,0; H-5''); 3,32 (1H, dd; 11,0 6,5; H-6a''); 3,28 (1H, m, H-3''); 3,24 (1H, dd; 10,5 5,0; H-4'''); 3,21 (1H, dd; 10,5 5,0; H-2''') 1,09 (1H, d; 7,5; H-6''') Phổ 13C-NMR (125 MHz, MeOD-d4, δC ppm): 179,4 (C-4); 166,4 (C-7); 163,0 (C-5); 161,5 (C-4'); 159,4 (C-2); 158,6 (C-9); 135,6 (C-3); 132,4 (C-2' C-6'); 122,8 (C-1'); 116,2 (C-3' C-5'); 105,6 (C-10); 104,7 (C-1''); 102,5 (C-1'''); 100,1 (C-6); 95,0 (C-8); 78,2 (C-5''); 77,3 (C-3''); 75,8 (C-2''); 74,0 (C-4'''); 72,4 (C-3'''); 72,1 (C-4''); 71,5 (C-2'''); 69,8 (C-5'''); 68,6 (C-6'') 17,9 (C-6''') 3.1.20 Hợp chất 20: Cleomeside C (Mới) Dạng bột, màu vàng nhạt Phổ HR-ESI-MS m/z: 1247,3399 [M+Na]+ Độ quay cực [α]D25 -0,29 (c 0,01; MeOH) Phổ IR νmax (MeOH): 3316, 2943, 2831, 1449, 1417, 1114 1022 cm-1 Phổ UV (MeOH) λmax: 258 356 nm Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,73 (2H, d; 8,5; H-2' H-6'); 7,47 (1H, d; 15,5; H-3a); 7,44 (1H, d; 15,5; H-3b); 7,37 (2H, d; 8,5; H-5b H-9b); 6,91 (3H, d; 8,5; H-3', H-5' H-5a); 6,74 (1H, d; 8,0; H-9a); 6,68 (2H, d; 8,5; H-6b H-8b); 6,53 (1H, d; 2,0; H8); 6,40 (1H, d; 8,0; H-8a); 6,29 (1H, d; 15,5; H-2a); 6,28 (1H, d; 2,0; H-6); 6,22 (1H, d; 15,5; H-2b); 5,76 (1H, br s, H-1''); 5,50 (1H, br s, H-1'''); 4,48 (1H, d; 7,5; H-1''''); 4,42 (1H, d; 7,5; H1'''''); 4,40 (1H, d; 5,5; H-2''); 4,34 (1H, m, H-6a''''); 4,28 (1H, m, H-6a'''''); 4,27 (1H, br s, H6b''''); 4,16 (1H, d; 6,0; H-6b'''''); 3,85 (1H, br s, H-2'''); 3,68 (1H, m, H-3''); 3,67 (1H, m, H-5''''); 3,63 (1H, m, H-3'''); 3,58 (1H, br s, H-5'''''); 3,57 (3H, s, H-10a); 3,45 (1H, dd; 9,0 6,5; H-5'''); 3,37 (1H, m, H-4''); 3,33 (1H, m, H-4'''); 3,32 (1H, m, H-4''''); 3,27 (1H, m, H-3'''''); 3,20 (1H, m, H-3''''); 3,12 (3H, m, H-5''; H-2''''' H-4'''''); 3,03 (1H, t; 7,5; H-2''''); 1,14 (3H, d; 6,0; H-6''') 0,87 (3H, d; 6,0; H-6'') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,4 (C-4); 166,5 (C-1a); 166,4 (C-1b); 161,6 (C-7); 160,7 (C-5); 160,2 (C-4'); 159,7 (C-7b); 156,2 (C-2); 155,7 (C-9); 149,1 (C-7a); 147,4 (C-6a); 145,2 (C-3a); 144,5 (C-3b); 133,6 (C-3); 130,5 (C-2' C-6'); 130,0 (C-5b C-9b); 125,1 (C-4a); 124,9 (C-4b); 122,2 (C-9a); 120,1 (C-1'); 115,6 (C-6b C-8b); 115,3 (C-3' C-5'); 115,0 (C-8a); 113,9 (C-2a); 113,7 (C-2b); 110,6 (C-5a); 105,5 (C-10); 104,9 (C-1'''''); 104,4 (C-1''''); 99,3 (C-6 C-1''); 98,6 (C-1'''); 94,0 (C-8); 80,2 (C-3''); 78,6 (C-2''); 76,5 (C-3''''); 75,9 (C-3'''''); 74,1 (C-5'''''); 73,9 (C-2'''''); 73,7 (C-4''' C-2''''); 71,6 (C-4''''); 70,4 (C-3'''); 70,2 (C-5'''' C-4'''''); 70,0 (C-5'''); 69,8 (C-2'''); 69,7 (C-5''); 69,3 (C-4''); 63,8 (C-6''''); 63,0 (C-6'''''); 55,1 (C-10a); 17,9 (C-6'') 17,4 (C-6''') 3.1.21 Hợp chất 21: Glycerol monostearate Dạng bột màu trắng, tan CHCl3 Phổ HR-ESI-MS m/z: 381,2970 [M+Na]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, δH ppm, J = Hz): 4,13 - 4,22 (2H, m, H-1); 3,92 - 3,95 (1H, m, H-2); 3,58 - 3,72 (2H, m, H-3); 2,33 - 2,36 (2H, t; 15,0 7,5; H-2'); 1,60 - 1,69 (2H, m, H-3'); 1,23 - 1,33 (29H, m, H-4' → H-17') 0,88 (3H, t; 14,0 7,0; H-18') 13 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3, δC ppm): 174,4 (C-1'); 70,3 (C-2); 65,2 (C-1); 63,4 (C-3); 31,2 (C-2'); 24,9 (C-3'); 14,1 (C-18'); 22,7; 29,1 - 29,7 31,9 (C-4' → C-17') 3.1.22 Hợp chất 22: Ethyl α-galactopyranoside Dạng bột, màu trắng Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 4,63 (1H, d; 3,5; H-1); 4,48 (1H, t; 6,0; H-6-OH); 4,45 (1H, d; 5,5; H-3-OH); 4,35 (1H, d; 6,0; H-2-OH); 4,28 (1H, d; 4,5; H-4-OH); 3,68 (1H, t; 3,5; H-4); 3,62 (1H, dd; 10,0 7,0; H-1a'); 3,55 (1H, dd; 10,0 3,0; H-5); 3,53 (1H, dd; 10,0 3,5; H-2); 3,52 (1H, dd; 9,5 3,5; H-3); 3,50 (1H, dd; 8,0 6,0; H-6a); 3,42 (1H, dd; 11,5 6,0; H-6b); 3,37 (1H, dd; 9,5 7,0; H-1b') 1,13 (3H, t; 7,0; H-2') Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 98,7 (C-1); 71,1 (C-5); 69,6 (C-3); 68,8 (C-4); 68,3 (C-2); 62,3 (C-1'); 60,6 (C-6) 15,0 (C-2') 3.1.23 Hợp chất 23: Adenine Dạng bột, màu trắng Phổ HR-ESI-MS m/z: 136,0635 [M+H]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3, δH ppm, J = Hz): 8,10 (1H, s, H-2); 8,08 (1H, s, H-8); 7,07 (2H, s, -NH2) 3,39 - 3,42 (1H, br s, -NH) Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3, δC ppm): 155,2 (C-6); 152,3 (C-2); 151,6 (C-4); 139,5 (C-8) 117,3 (C-5) 3.1.24 Hợp chất 24: 5-(hydroxymethyl)-2-furaldehyde Dạng dầu màu vàng, tan tốt CHCl3 Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 9,56 (1H, s, H-1); 7,23 (1H, d; 3,5; H-3); 6,52 (1H, d; 3,5; H-4) 4,70 (2H, s, H-6) Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 177,8 (C-1); 161,0 (C-5); 152,3 (C-2); 123,2 (C-3); 110,0 (C-4) 57,5 (C-6) 3.1.25 Hợp chất 25: Emodin-8-O-β-D-glucopyranoside Dạng bột màu cam, tan MeOH Phổ HR-ESI-MS m/z: 433,1134 [M+H]+ Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δH ppm, J = Hz): 7,46 (1H, br s, H-4); 7,26 (1H, d; 2,5; H-5); 7,15 (1H, br s, H-2); 6,97 (1H, d; 1,5; H-7); 5,02 - 5,10 (1H, m, H-1'); 3,71 (1H, d; 11,0; H-6'a); 3,50 (1H, t; 6,0; H-6'b); 3,41 - 3,42 (2H, m, H-2' H-5'); 3,33 (1H, m, H-3'); 3,23 3,26 (1H, m, H-4') 2,40 (3H, s, -CH3) Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6, δC ppm): 186,2 (C-9); 181,2 (C-10); 164,8 (C-6); 161,7 (C-1); 161,2 (C-8); 146,7 (C-3); 136,4 (C-12); 132,1 (C-14); 124,1 (C-2); 119,2 (C-4); 114,5 (C-13); 112,9 (C-11); 108,8 (C-5); 108,5 (C-7); 100,9 (C-1'); 77,3 (C-5'); 76,3 (C-3'); 73,3 (C-2'); 69,5 (C-4'); 60,6 (C-6') 21,4 (-CH3) 14 Dưới đây, trình bày chi tiết phương pháp xác định cấu trúc hợp chất Cleomeside A (6) → HMBC Hình: Cấu trúc hóa học hợp chất Hợp chất có dạng vô định hình, màu vàng Độ quay cực [α]D25 -0,25 (c 0,01; MeOH) Phổ tử ngoại UV (MeOH) λmax: 204, 257 350 nm Phổ IR νmax (MeOH): 3317, 2943, 2831, 1449, 1414, 1114 1022 cm-1 Phổ HR-ESI-MS m/z: 797,2134 [M-H]- (tính toán lý thuyết cho [C35H41O21]- 797,2140) cho phép xác định công thức phân tử C35H42O21 Khung aglycone hợp chất quercetin với tín hiệu proton δH 7,40 (1H, d; 2,0; H-2'); 7,33 (1H, dd; 8,5 2,0; H-6'); 6,89 (1H, d; 8,5; H-5'); 6,81 (1H, d; 2,0; H-8) 6,48 (1H, d; 2,0; H-6) phổ 1H-NMR tín hiệu carbon δC 178,0 (C-4); 161,3 (C-7); 160,9 (C-5); 157,5 (C-2); 156,0 (C-9); 148,9 (C-4'); 145,3 (C-3'); 134,9 (C-3); 121,1 (C-6'); 120,4 (C-1'); 115,6 (C-2'); 115,5 (C-5'); 99,5 (C-6) 94,6 (C-8) Phổ 13C-NMR kết hợp với DEPT cho thấy hợp chất cho tín hiệu carbon metylen kề oxy δC 60,3 (C-6'"); carbon metyl δC 17,4 (C-6") 17,5 (C-6"") với proton anomer δH 5,49 (1H, brs, H-1"); 4,23 (1H, d; 8,0; H-1'") 5,62 (1H, d; 1,0; H-1""); proton nhóm metyl bậc hai δH 0,90 (3H, d; 6,0; H-6") 1,03 (3H, m, H-6""); proton nhóm metylen kề oxy δH 3,43 - 3,48 (1H, m, H-6a'") 3,34 (1H, d; 10,0; H-6b'") phổ H-NMR.Vậy hợp chất flavonoid glycoside có khung quercetin với đơn vị đường Với proton anomer δH 5,49 (1H, br s, H-1") 5,62 (1H, d; 1,0; H-1"") với proton nhóm metyl bậc hai δH 0,90 (3H, d; 6,0; H-6") 11,03 (3H, m, H-6"") xác nhận đơn vị đường L-rhamnopyranose Bên cạnh đó, phổ COSY HSQC xác nhận đơn vị đường lại D-glucopyranose Mặt khác, với số ghép cặp J proton anomer δH 5,49 (1H, brs, H-1"); 4,23 (1H, d; 8,0; H-1'") 5,62 (1H, d; 1,0; H-1""), chứng tỏ đơn vị đường đường α-Rha, β-Glc α-Rha Mặt khác, phổ HMBC cho thấy proton anomer δH 5,49 (1H, br s, H-1") tương tác với carbon δC 134,9 (C-3), chứng tỏ đơn vị đường thứ α-Rha gắn vào khung aglycon vị 15 trí C-3 Proton anomer δH 4,23 (1H, d; 8,0; H-1'") tương tác với carbon methin kề oxy δC 81,4 (C-2"), chứng tỏ đơn vị đường thứ hai β-Glc gắn vào đơn vị đường thứ vị trí C-2" Ngoài ra, proton anomer lại δH 5,62 (1H, d; 1,0; H-1"") cho tương tác với carbon bậc bốn vòng thơm kề oxy δC 161,3 (C-7), chứng tỏ đơn vị đường thứ ba α-Rha gắn vào khung aglycon vị trí C-7 Đồng thời, phổ 1H-NMR có xuất thêm nhóm acetyl δH 2,04 (3H, s, H-8"") tín hiệu phổ 13C-NMR δC 170,0 (C-7"") 20,9 (C-8"") Thêm vào đó, phổ HMBC, proton nhóm metyl bậc bốn δH 2,04 (3H, s, H-8"") cho tương tác với carbon carbonyl δC 170,0 (C-7""), đồng thời proton metin kề oxy δH 4,88 (1H, t; 10,0; H-4"") cho tương tác với carbon này, chứng tỏ phần đường thứ ba α-Rha bị acetyl hóa vị trí C-4"" Từ liệu phổ 1H,13C-NMR, COSY, HSQC, HMBC HR-ESI-MS, nhận danh hợp chất quercetin 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→2)]-α-L-rhamnopyranoside 7-O-(4""acetyl)-α-L-rhamnopyranoside Đây hợp chất phân lập đặt tên cleomeside A Bảng: Dữ liệu phổ NMR hợp chất HMBC COSY δHa,c (J = Hz) Vị trí δCa,b 13 ( H- C) (1H-1H) Aglycone 157,5 134,9 178,0 160,9 99,5 6,48 (1H, d; 2,0) 5, 7, 8, 10 161,3 94,6 6,81 (1H, d; 2,0) 6, 7, 9, 10 156,0 10 105,9 1' 120,4 2' 115,6 7,40 (1H, d; 2,0) 2, 3', 4', 6' 3' 145,3 4' 148,9 5' 115,5 6,89 (1H, d; 8,5) 1', 3', 4' 6' 6' 121,1 7,33 (1H, dd; 8,5 2,0) 2, 2', 4' 5' Rha I 1'' 101,1 5,49 (1H, br s) 3, 3'', 5'' 2'' 2'' 81,4 4,13 (1H, d; 2,0) 1'', 3'', 4'', 1''' 1'', 3'' 3'' 70,2 3,91 (1H, s) 1'', 2'', 4'', 5'' 2'', 4'' 4'' 71,8 3,12 - 3,16 (1H, m) 2'', 3'', 5'', 6'' 3'', 5'' 16 5'' 6'' Glc 1''' 2''' 3''' 4''' 5''' 70,4 17,4 3,60 - 3,64 (1H, m) 0,90 (3H, d; 6,0) 1'', 3'', 4'', 6'' 4'', 5'' 4'', 6'' 5'' 106,2 73,9 76,2 69,1 76,5 2'', 3''', 5''' 1''', 3''', 4''', 2''' 1''', 2''', 4''', 5''' 2''', 3''', 5''', 6''' 1''', 3''', 4''', 6''' 2''' 1''', 3''' 2''', 4''' 3''', 5''' 4''', 6''' 6''' 60,3 4,23 (1H, d; 8,0) 2,97 - 3,00 (1H, m) 2,97 - 3,00 (1H, m) 3,52 - 3,55 (1H, m) 3,12 - 3,16 (1H, m) 3,43 - 3,48 (1H, m) 3,34 (1H, d; 10,0) 4''', 5''' 5''' Rha II 1'''' 2'''' 3'''' 4'''' 5'''' 6'''' 7'''' 8'''' 98,0 69,7 67,8 73,3 67,5 17,5 170,0 20,9 5,62 (1H, d; 1,0) 7, 3'''', 5'''' 2'''' 3,12 - 3,16 (1H, m) 1'''', 3'''', 4'''' 1'''', 3'''' 3,85 - 3,87 (1H, m) 1'''', 2'''', 4'''', 5'''' 2'''', 4'''' 4,88 (1H, t; 10,0) 2'''', 3'''', 5'''', 6'''', 7'''' 3'''', 5'''' 3,60 - 3,64 (1H, m) 1'''', 3'''', 4'''', 6'''' 4'''', 6'''' 1,03 (3H, d; 6,0) 4'''', 5'''' 5'''' 2,04 (3H, s) 7'''' a b c DMSO-d6, 125MHz, 500 MHz 3.2 Khả gây độc tế bào tác dụng bảo vệ tế bào gan Các cao chiết n-hexane, EtOAc MeOH khảo sát nồng độ 25, 50 100 µg/mL ủ với dòng tế bào HepG2, theo dõi phát triển tế bào sau 24, 48 72 so sánh với hợp chất doxorubicin - hợp chất làm độc tế bào biết Các hợp chất tinh khiết khảo sát nồng độ 25, 50 100 µM ủ với dòng tế bào HepG2 Sau 24 giờ, thay môi trường, tế bào xử lý với CCl4 mM có hợp chất tinh khiết 24 so sánh với hợp chất quercetin, hợp chất có tác dụng bảo vệ tế bào gan biết Kết cho thấy: Đa số cao chiết n-hexane, EtOAc MeOH từ thân Màn hoa tím, không làm giảm tỷ lệ tế bào sống nồng độ khảo sát 25, 50 100 µg/mL so với mẫu chứng có nồng độ DMSO tương đương sau 24, 48 72 tiếp xúc Trong khi, mẫu đối chứng doxorubicin nồng độ 10 µg/mL làm giảm khoảng 40%, 70% 80% tỷ lệ tế bào HepG2 sống sau 24, 48 72 Kết hoàn toàn phù hợp với độc tính doxorubicin Đặc biệt, số cao từ Màn hoa tím thể tác dụng kích thích tăng trưởng tế bào, làm tăng tỷ lệ tế bào sống khoảng 25% đến 60% so với mẫu chứng (p < 0,05) Cụ thể, cao EtOAc từ thân Màn hoa tím có tác dụng kích thích tăng trưởng tế bào nồng độ 50 100 µg/mL thời điểm khảo sát 24, 48 72 Trong đó, sau 24 tiếp xúc, nồng 17 độ 50 100 µg/mL làm tăng khoảng 25% tỷ lệ tế bào sống (p < 0,05); sau 48 72 giờ, kết tương tự nhau: Nồng độ 50 µg/mL làm tăng khoảng 25% - 30%, nồng độ 100 µg/mL làm tăng khoảng 50% - 60% (p < 0,05) Cao từ Màn hoa tím tác dụng kích thích tăng trưởng tế bào HepG2 nồng độ 50 100 µg/mL, có ý nghĩa thống kê sau 48 27 (tăng 25% - 50%, p < 0,05) Ở nồng độ 25 µg/mL, cao EtOAc thân Màn hoa tím làm tăng tỷ lệ tế bào sống so với mẫu chứng ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Đối với cao n-hexane MeOH từ thân Màn hoa tím, sau 24 48 giờ, không làm thay đổi tỷ lệ tế bào sống (p > 0,05) Tuy nhiên, sau 72 giờ, cao n-hexane nồng độ 100 µg/mL từ thân làm tăng 21,4% 26,9% tỷ lệ tế bào sống so với mẫu chứng (p < 0,05) Sau 72 tiếp xúc, cao MeOH từ thân Màn hoa tím làm tăng khoảng 20% - 30% tỷ lệ tế bào sống so với mẫu chứng nồng độ 25, 50 100 µg/mL (p < 0,05); khác biệt có ý nghĩa thống kê tỷ lệ tế bào sống nồng độ (p > 0,05) Đối với Màn hoa vàng, cao n-hexane, EtOAc MeOH không thay đổi tỷ lệ tế bào sống có ý nghĩa thống kê so với mẫu chứng tương ứng nồng độ khảo sát (25, 50 100 µg/mL) sau khoảng thời gian xử lý tế bào khác 24, 48 72 (p > 0,05), ngoại trừ cao EtOAc, cao MeOH từ cao n-hexane từ thân nồng độ 100 µg/mL làm tăng khoảng 20% 30% tỷ lệ tế bào sống sau 72 (p < 0,05) Khảo sát hoạt tính hợp chất phân lập từ Màn hoa tím Màn hoa vàng, cụ thể cleomeside A (6), cleomeside B (8), quercetin-3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→2)]-α-Lrhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside (5) từ cao cleomeside C (20) từ cao thân Màn hoa tím; quercetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (4), kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (18), visconoside A (9) từ cao visconoside B (10) từ cao thân Màn hoa vàng (Sơ đồ 1-4) Khảo sát khả gây độc tế bào với hợp chất nồng độ 25, 50 100 µM dòng tế bào HepG2 sau 24 (Bảng 3.28) cho thấy nồng độ 100 µM, tất hợp chất không làm thay đổi tỷ lệ tế bào sống, khả gây độc tế bào HepG2 (p < 0,05) Ở nồng độ 50 µM, đa số chất làm giảm tỷ lệ tế bào sống ý nghĩa thống kê so với mẫu chứng tương ứng (p > 0,05), ngoại trừ hợp chất làm giảm tỷ lệ tế bào sống có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Ở nồng độ 25 µM, hợp chất 4, 5, làm giảm khoảng 25% - 30% tỷ lệ tế bào sống (p < 0,05) hợp chất 9, 10 18 làm thay đổi không đáng kể tỷ lệ (p < 0,05) Đặc biệt, hợp chất 20 nồng độ 25µM làm tăng tỷ lệ tế bào sống 100 % so với mẫu chứng tương ứng (p < 0,05) Dựa kết thu được, tiến hành khảo sát tác động bảo vệ tế bào gan HepG2 hợp chất để phòng ngừa ức chế tăng trưởng tế bào HepG2 tác nhân độc gan CCl4 mM gây sau 24 phương pháp MTT 18 Kết cho thấy CCl4 mM ức chế tăng trưởng tế bào HepG2, làm giảm tỷ lệ tế bào sống khoảng 20% - 25% so với mẫu chứng môi trường môi trường bổ sung DMSO 1% (p < 0,05) Kết phù hợp với báo cáo trước tác dụng ức chế tăng trưởng tế bào HepG2 CCl4 mM sau 24 tiếp xúc Kết cho thấy, dung môi DMSO 1% làm dung môi trung gian để hòa tan mẫu thử ảnh hưởng đến tỷ lệ sống tế bào HepG2 Do đó, để đảm bảo kết xác, loại bỏ ảnh hưởng DMSO, kết tác động bảo vệ tế bào gan hợp chất so sánh với mẫu chứng bệnh CCl4 mM có bổ sung DMSO 1% chất đối chứng quercetin so sánh với mẫu bệnh xử lý tế bào với CCl4 mM Về tác dụng bảo vệ tế bào gan, kết cho thấy ức chế tăng trưởng CCl4 mM gây sau 24 phòng ngừa bổ sung vào môi trường nuôi cấy quercetin 10 µM (p < 0,01) Kết hoàn toàn phù hợp với tác dụng bảo vệ tế bào gan quercetin 10 µM báo cáo trước Từng hợp chất riêng lẻ không gây độc tế bào, tỷ lệ sống tế bào HepG2 thay đổi ý nghĩa thống kê so với mẫu chứng DMSO 1% (p > 0,05) Ở nồng độ 100 µM, hợp chất 8, 9, 10 18 thể tác dụng bảo vệ tế bào gan HepG2 phòng ngừa ức chế tăng trưởng tế bào CCl4 mM gây sau 24 tiếp xúc (p < 0,05) hợp chất 9, 10 18 thể tác dụng bảo vệ tế bào gan tốt với tỷ lệ phòng ngừa từ 65% đến 75% 3.3 Nhận xét chung Màn hoa tím Màn hoa vàng hai loài dược liệu người dân sử dụng để điều trị bệnh gan hiệu Trên giới, có nhiều công bố hoạt tính sinh học hai loài này, nhiên nghiên cứu thành phần hóa học hai loài chưa có nhiều Việt Nam giới Kết nghiên cứu luận án phân lập xác định cấu trúc 25 hợp chất, có hợp chất lần đầu tìm thấy Thành phần hóa học hai loài hợp chất flavonoid chủ yếu dẫn xuất khung quercetin kaempferol, điều tương đồng với nghiên cứu tác giả trước Ngoài hợp chất 2, 3, 5, 7, 11, 12, 13, 15, 16, 21, 22, 23, 24 25 biết từ số loài thực vật khác lần tìm thấy chúng diện chi Cleome Các hợp chất 1, 4, 14, 17, 18 19 tìm thấy loài C amplyocarpa, C brachycarpa, C chrysantha C droserifolia, lần đầu tìm thấy hai loài Màn hoa tím Màn hoa vàng Các hợp chất quercetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (4) kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (18) có hàm lượng tương đối lớn Màn hoa vàng Có thể sử dụng hợp chất chất chuẩn đối chiếu loài Màn hoa vàng 19 Các hợp chất flavonoid phân lập từ loài Màn hoa tím (C chelidonii L.f.) Hợp chất (Mới) (Mới) 16 19 20 (Mới) R1 OH OH OH OH OH OH H H H R2 OH OH OH OH OH OH OH OH OH R3 Rha Glc Glc-(1→2)-Rha Glc-(1→2)-Rha (6-Coumaroyl)-Glc-(1→2)-Rha (6-Coumaroyl)-Glc-(1→2)-Rha 2,4-Diacetyl-Rha Rha -(1→6)-Glc [2-(6-Feruloyl)-3-(6-coumaroyl)-Glc]-Rha R4 H H Rha 4-acetyl-Rha Rha 4-acetyl-Rha H H Rha Các hợp chất flavonoid phân lập từ loài Màn hoa vàng (C viscosa L.) Hợp chất R1 R2 R3 R4 OH OH H Rha OH OH Glc Rha OH OH Glc-(1→3)-(4-acetyl)-Rha Rha (Mới) OH OH Sinapinoyl (1→6)- Glc-(1→3)-(4-acetyl)-Rha Rha 10 (Mới) H OH CH3 H 11 H OCH3 CH3 H 12 H OH Glc H 13 H OH H Rha 14 H OH 4-Acetyl-Rha H 15 H OH Rha Rha 17 H OH Glc Rha 18 21 23 24 20 22 25 Ngoài ra, kết thử nghiệm hoạt tính bảo vệ gan cao chiết số chất phân lập cho thấy đáp ứng mô hình thử nghiệm Tác dụng bảo vệ gan cao chiết số hợp chất phân lập từ hai loài Màn phù hợp với báo cáo từ nghiên cứu Việt Nam Nguyễn Tuấn Quang cs nghiên cứu giới Kết nghiên cứu luận án góp phần giải thích tác dụng trị viêm gan mạn tính dược liệu Màn sử dụng dân gian CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ hai loài Màn hoa tím (Cleome chelidonii L.f.) Màn hoa vàng (Cleome viscosa L.) tỉnh Bình Dương, phương pháp sắc ký, phân lập 25 hợp chất tinh khiết, hợp chất phân lập chủ yếu flavonoid, có hợp chất 20 hợp chất biết Bằng phương pháp phổ đại IR, UV, 1D-NMR, 2D-NMR, MS, HR-MS xác định cấu trúc 25 hợp chất sau ● Loài Màn hoa tím + hợp chất mới: Cleomeside A (6), cleomeside B (8) cleomeside C (20) + 10 hợp chất biết: Quercitrin (2), isoquercitrin (3), quercetin 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→2)]-α-Lrhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside (5), quercetin-3-O-[2"-O-(6'''-p-coumaroyl)-β-Dglucopyranosyl]-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranoside (7), kaempferol-3-O-(2,4O-diacetyl-α-L-rhamnopyranoside) (16), kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-O-β-Dglucopyranoside (19), glycerol monostearate (21), ethyl α-galactopyranoside (22), adenine (23) emodin-8-O-β-D-glucopyranoside (25) ● Loài Màn hoa vàng + hợp chất mới: Visconoside A (9) visconoside B (10) + 10 hợp chất biết: Quercetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (4), quercetin-7-O-α-Lrhamnopyranoside (1), kaempferol-3-O-methylether (11), kaempferol-3,4'-O-dimethylether 21 (12), kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside (13), kaempferol-7-O-α-L-rhamnopyranoside (14), kaempferol-3-O-(4-O-acetyl-α-L-rhamnopyranoside) (15), kaempferol-3,7-O-α-L-dirhamnopyra noside (17), kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (18) 5-(hy droxymethyl)-2-furaldehyde (24) Các cao chiết từ thân, hai loài hoạt tính độc tế bào, thể tác dụng tác dụng kích thích tăng trưởng tế bào khoảng 20% - 30% sau 72 Cleomeside A (6), cleomeside B (8), cleomeside C (20), visconoside A (9), visconoside B (10), quercetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (4), quercetin-3-O-[β-Dglucopyranosyl-(1→2)]-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamno pyranoside (5), kaempferol-3O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (18) hoạt tính độc tế bào Hợp chất cleomeside C (20) làm tăng tỷ lệ tế bào sống 100% nồng độ 25µM Các hợp chất cleomeside B (8), visconoside A (9), visconoside B (10) kaempferol-3-O-βD-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside (18) thể tác dụng bảo vệ tế bào gan HepG2 phòng ngừa ức chế tăng trưởng tế bào CCl4 mM gây sau 24 tiếp xúc nồng độ 100 µM, hợp chất 9, 10 18 thể tác dụng bảo vệ tế bào gan tốt với tỷ lệ phòng ngừa 65% - 75% KIẾN NGHỊ Đây nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính bảo vệ tế bào gan Màn hoa tím (Cleome chelidonii L.f.) Màn hoa vàng (Cleome viscosa L.) Việt Nam Tiếp tục nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan in vivo số mô hình gây tổn thương gan paracetamol, cyclophosphamide ethanol Dựa kết thu cho thấy dược liệu Màn có khả phát triển thành nguyên liệu cho ngành công nghiệp dược nước ta Cho nên cần có kế hoạch để bảo tồn phát triển loài 22 Các công trình công bố có liên quan đến luận án ● Phan Nhat Minh, Mai Dinh Tri, Nguyen Tan Phat, Bui Trong Dat, Nguyen Ngoc Hanh, Ngo Quoc Luan, Ma Thi Thu Thanh & Chung Hoang Huynh (2015), “Two new flavonol glycosides from the leaves of Cleome chelidonii L.f.”, Journal of Asian Natural Products Research, 17(4), pp 338-342 ● Phan Nhật Minh, Mai Đình Trị, Nguyễn Tấn Phát, Nguyễn Ngọc Hạnh, Mã Thị Thu Thanh, Chung Hoàng Huynh (2014), “Góp phần khảo sát thành phần hóa học màn hoa tím”, Tạp chí Dược liệu, số 2-2014, tr 106-109 ● Phan Nhật Minh, Mai Đình Trị, Nguyễn Tấn Phát, Nguyễn Ngọc Hạnh (2013), “Cleomeside A, coumaroyl flavonol glycoside từ màn tím Cleome chelidonii L.f.”, Tạp chí Hóa Học, T.51(6ABC), tr 78-81 ● Phan Nhật Minh, Phạm Thị Thùy Linh, Nguyễn Thị Diễm Thúy, Mai Đình Trị, Nguyễn Tấn Phát, Lê Tiến Dũng, Nguyễn Thanh Hồng, Nguyễn Trọng Tuân, Nguyễn Ngọc Hạnh (2015), “Phân lập quercetin diglycoside kaempferol tetraglycoside hoạt tính bảo vệ gan cao methanol thân màn hoa vàng (Cleome viscosa L.) màn hoa tím (Cleome chelidonii L.f.) mô hình gan chuột bị gây độc CCl4”, Tạp chí Hóa học, T.53(4e3), tr 1-6 ● Phan Nhật Minh, Nguyễn Tấn Phát, Lê Tiến Dũng, Nguyễn Việt Thống, Lê Thị Thùy Dương, Mai Thanh Phong, Mai Đình Trị (2015), “Flavonol glycoside phân lập từ Màn hoa vàng Cleome viscosa L.”, Tạp chí Hóa học, T.53(6e1,2), tr 237-240 [...]... như l chất chuẩn đối chiếu trong loài Màn màn hoa vàng 19 Các hợp chất flavonoid phân l p từ loài Màn màn hoa tím (C chelidonii L. f. ) Hợp chất 2 3 5 6 (Mới) 7 8 (Mới) 16 19 20 (Mới) R1 OH OH OH OH OH OH H H H R2 OH OH OH OH OH OH OH OH OH R3 Rha Glc Glc-(1→ 2)- Rha Glc-(1→ 2)- Rha (6-Coumaroyl)-Glc-(1→ 2)- Rha (6-Coumaroyl)-Glc-(1→ 2)- Rha 2,4-Diacetyl-Rha Rha -(1→ 6)- Glc [2-(6-Feruloyl)-3-(6-coumaroyl)-Glc]-Rha... kaempferol-3-O-methylether (1 1), kaempferol-3,4'-O-dimethylether 21 (1 2), kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside (1 3), kaempferol-7-O-α -L- rhamnopyranoside (1 4), kaempferol-3-O-(4-O-acetyl-α -L- rhamnopyranoside) (1 5), kaempferol-3,7-O-α -L- dirhamnopyra noside (1 7), kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α -L- rhamnopyranoside (1 8) và 5-(hy droxymethyl)-2-furaldehyde (2 4) Các cao chiết từ thân, l của cả hai loài... 1, 4, 14, 17, 18 và 19 được tìm thấy trong các loài C amplyocarpa, C brachycarpa, C chrysantha và C droserifolia, nhưng đây l l n đầu tìm thấy trong hai loài Màn màn hoa tím và Màn màn hoa vàng Các hợp chất quercetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α -L- rhamnopyranoside ( 4) và kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α -L- rhamnopyranoside (1 8) có hàm l ợng tương đối l n trong l Màn màn hoa vàng Có thể sử dụng... cứu đầu tiên về thành phần hóa học và hoạt tính bảo vệ tế bào gan của Màn màn hoa tím (Cleome chelidonii L. f. ) và Màn màn hoa vàng (Cleome viscosa L. ) ở Việt Nam Tiếp tục nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan in vivo trên một số mô hình gây tổn thương gan bằng paracetamol, cyclophosphamide và ethanol Dựa trên các kết quả thu được cho thấy dược liệu Màn màn có khả năng phát triển thành nguyên liệu cho ngành... Tấn Phát, L Tiến Dũng, Nguyễn Thanh Hồng, Nguyễn Trọng Tuân, Nguyễn Ngọc Hạnh (201 5), “Phân l p quercetin diglycoside và kaempferol tetraglycoside và hoạt tính bảo vệ gan của cao methanol thân cây màn màn hoa vàng (Cleome viscosa L. ) và màn màn hoa tím (Cleome chelidonii L. f. ) trên mô hình gan chuột bị gây độc bằng CCl4”, Tạp chí Hóa học, T.53(4e 3), tr 1-6 ● Phan Nhật Minh, Nguyễn Tấn Phát, L Tiến... từ l và cao n-hexane từ thân ở nồng độ 100 µg/mL l m tăng khoảng 20% 30% tỷ l tế bào sống sau 72 giờ (p < 0,0 5) Khảo sát hoạt tính của 8 hợp chất phân l p được từ Màn màn hoa tím và Màn màn hoa vàng, cụ thể l cleomeside A ( 6), cleomeside B ( 8), quercetin-3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→ 2)] -α-Lrhamnopyranoside-7-O-α -L- rhamnopyranoside ( 5) từ cao l và cleomeside C (2 0) từ cao thân của Màn màn hoa tím; ... kaempferol-3-O-(2,4O-diacetyl-α -L- rhamnopyranoside) (1 6), kaempferol-3-O-α -L- rhamnopyranosyl-(1→ 6)- O-β-Dglucopyranoside (1 9), glycerol monostearate (2 1), ethyl α-galactopyranoside (2 2), adenine (2 3) và emodin-8-O-β-D-glucopyranoside (2 5) ● Loài Màn màn hoa vàng + 2 hợp chất mới: Visconoside A ( 9) và visconoside B (1 0) + 10 hợp chất đã biết: Quercetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α -L- rhamnopyranoside ( 4), quercetin-7-O-α-Lrhamnopyranoside ( 1), kaempferol-3-O-methylether... Thanh, Chung Hoàng Huynh (201 4), “Góp phần khảo sát thành phần hóa học l màn màn hoa tím , Tạp chí Dược liệu, số 2-2014, tr 106-109 ● Phan Nhật Minh, Mai Đình Trị, Nguyễn Tấn Phát, Nguyễn Ngọc Hạnh (201 3), “Cleomeside A, một coumaroyl flavonol glycoside mới từ l cây màn màn tím Cleome chelidonii L. f. ”, Tạp chí Hóa Học, T.51(6ABC), tr 78-81 ● Phan Nhật Minh, Phạm Thị Thùy Linh, Nguyễn Thị Diễm Thúy,... như sau ● Loài Màn màn hoa tím + 3 hợp chất mới: Cleomeside A ( 6), cleomeside B ( 8) và cleomeside C (2 0) + 10 hợp chất đã biết: Quercitrin ( 2), isoquercitrin ( 3), quercetin 3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→ 2)] -α-Lrhamnopyranoside-7-O-α -L- rhamnopyranoside ( 5), quercetin-3-O-[2"-O-(6'''-p-coumaroyl)-β-Dglucopyranosyl]-α -L- rhamnopyranoside-7-O-α -L- rhamnopyranoside ( 7), kaempferol-3-O-(2,4O-diacetyl-α -L- rhamnopyranoside)... (C-1b); 161,6 (C- 7); 160,7 (C- 5); 160,2 (C-4 '); 159,7 (C-7b); 156,2 (C- 2); 155,7 (C- 9); 149,1 (C-7a); 147,4 (C-6a); 145,2 (C-3a); 144,5 (C-3b); 133,6 (C- 3); 130,5 (C-2' và C-6 '); 130,0 (C-5b và C-9b); 125,1 (C-4a); 124,9 (C-4b); 122,2 (C-9a); 120,1 (C-1 '); 115,6 (C-6b và C-8b); 115,3 (C-3' và C-5 '); 115,0 (C-8a); 113,9 (C-2a); 113,7 (C-2b); 110,6 (C-5a); 105,5 (C-1 0); 104,9 (C-1'''' '); 104,4 (C-1''' ');