Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của cây bảy lá một hoa paris polyphylla var chinensis franchet thu thập tại việt nam (tt)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ …… ….***………… Nguyễn Thị Duyên NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY BẢY LÁ MỘT HOA – PARIS POLYPHYLLA VAR CHINENSIS THU THẬP TẠI VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa học hợp chất thiên nhiên Mã số: 62 44 01 17 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội - 2017 Công trình đƣợc hoàn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Đỗ Thị Hà GS TS Phạm Quốc Long Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án tiến sĩ cấp Học viện, họp Hội trường Học viện Khoa học Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi … ’, ngày … tháng … năm 2017 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Đất nước Việt Nam có dạng hình chữ S gồm phần đất liền trải dài theo vĩ độ Bắc từ 8030’ đến 23022’, có 4/5 diện tích đồi núi, khí hậu nhiệt đới gió mùa Những yếu tố địa lý khí hậu điều kiện thuận lợi để sinh vật phát triển đa dạng số lượng, phong phú chủng loại Theo ước tính, Việt Nam có khoảng 11.000 loài thực vật bậc cao có mạch, 800 loài rêu, 600 loài nấm 2000 loài tảo Trong đó, có nhiều loài dùng làm thuốc Đặc biệt, năm 2016 Viện Dược liệu công bố 5117 loài thuốc Danh mục Cây thuốc Việt Nam Căn theo hệ thống phân loại APG năm 2011 (dựa dẫn liệu sinh học phân tử) chi Paris thuộc họ Hắc dược hoa - Melanthiaceae gồm 26 loài với 13 thứ, phân bố vùng cận nhiệt ôn đới ôn đới ẩm Bắc bán cầu Kết nghiên cứu tài liệu cho thấy loài thuộc chi Paris có hoạt tính đáng quý như: tác dụng chống ung thư, tác dụng điều hòa miễn dịch, tác dụng cầm máu tan máu, tác dụng chống oxy hóa, tác dụng kháng virus, kháng nấm chống ký sinh trùng, tác dụng dày, tác dụng hạ sốt, giảm đau, an thần Về thành phần hóa học, hợp chất phân lập từ số loài Paris bao gồm saponin, flavonol, sphingolipid glycosid khác Trong đó, nhóm cấu trúc saponin nghiên cứu nhiều saponin steroid (có 120 hợp chất) từ 22 loài thuộc chi Paris công bố Ở Việt Nam, chi Paris chi gặp phân bố chủ yếu số tỉnh miền núi phía bắc vùng núi cao Tây Nguyên - nơi có khí hậu mát, độ ẩm cao Cho đến phát nước ta có loài thứ thuộc chi Paris gồm: Paris dunniana H.Lév., Paris fargesii Franch., Paris vietnamensis (Takht.) H.Li, Paris caobangensis Y.H.Ji, H.Li & Z.K.Zhou, Paris cronquistii (Takht.) H.Li, Paris xichouensis (H Li) Y.H.Ji, H.Li & Z.K.Zhou, Paris delavayi Franch., Paris polyphylla Sm., Paris polyphylla var yunnanensis (Franch.) Hand - Mazz., Paris polyphylla var chinensis (Franch.) H.Hara Trong y học cổ truyền Việt Nam, thân rễ số loài thuộc chi Paris với tên thường gọi bảy hoa (hay thất diệp chi hoa) dùng để chữa sốt, sốt rét cơn, giải độc bị rắn cắn, chữa mụn nhọt, viêm tuyến vú, sốt rét, ho lao, ho lâu ngày, hen suyễn Dùng với tác dụng sát trùng nơi bị sưng đau, vết rắn cắn, tràng nhạc, mụn lở, nhọt [1] Mặc dù có nhiều công bố chi Paris nước ngoài, chủ yếu tập trung đối tượng Paris polyphylla var yunnanensis, nghiên cứu đối tượng Paris polyphylla var chinensis khiêm tốn thực đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học bảy hoa - Paris polyphylla var chinensis Franchet thu thập Việt Nam” Mục tiêu luận án: Đề tài nghiên cứu thực hai mục tiêu nghiên cứu sau: Mục tiêu 1: Nghiên cứu thành phần hóa học Paris polyphylla var chinensis Mục tiêu 2: Xác định hoạt tính gây độc tế bào ung thư in vitro bảy hoa Luận án thực nội dung nghiên cứu sau: - Nghiên cứu thành phần hóa học loài Paris polyphylla var chinensis Franchet trồng Lào Cai: + Xác định cấu trúc hợp chất phân lập + Bước đầu xây dựng dấu vân tay hóa học để phân biệt số loài thuộc chi Paris - Khảo sát khả gây độc tế bào ung thư tìm hiểu chế tác dụng hợp chất paris saponin II dòng tế bào ung thư vú MCF-7 NỘI DUNG CHÍNH CỦA LUẬN ÁN CHƢƠNG I: TỔNG QUAN Phần tổng quan tập hợp nghiên cứu nước nước vấn đề: - Đặc điểm thực vật, phân bố công dụng chi Paris; - Các nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài thuộc chi Paris; - Đặc điểm thực vật; phân bố; nghiên cứu thành phần hóa học; hoạt tính sinh học bảy hoa Paris polyphylla var chinensis CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng Mẫu tiêu số P8102013 N.T.T 01/08/2015 giám định tên khoa học Paris polyphylla var chinensis Franchet (tên đồng nghĩa là: Paris chinensis Franchet) thuộc họ Trọng Lâu Mẫu dược liệu PPC sử dụng nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học mẫu trồng Sapa – Lào Cai Cả hai mẫu tiêu lưu Khoa hóa Thực vật – Viện Dược liệu 2.2 Phƣơng pháp hóa học Sử dụng phương pháp chiết lỏng - rắn lỏng - lỏng để chiết xuất phân đoạn, lớp chất có độ phân cực khác Sử dụng chủ yếu phương pháp sắc ký lớp mỏng để phân tích phần chiết, kiểm tra độ tinh khiết chất; sắc ký cột với chất hấp phụ khác để phân lập chất Bên cạnh luận án sử dụng phương pháp kết tinh lại tách làm chất Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất Xác định cấu trúc hợp chất phân lập dựa thông số vật lý: điểm chảy, suất quay cực phương pháp phổ: phổ khối phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1D-NMR): 1H-NMR, 13C-NMR DEPT, hai chiều (2D-NMR): HSQC, HMBC, COSY Phương pháp xác định dấu vân tay hóa học Sử dụng phương pháp TLC HPLC nghiên cứu đa dạng hóa học mẫu thực vật thuộc chi Paris 2.3 Các phƣơng pháp thử hoạt tính sinh học 2.3.1 Các phương pháp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào Sử dụng phương pháp MTT theo mô hình Mosmann (1983), dòng tế bào ung thư: A549, HL-60, Hela Caco-2 Sử dụng phần mềm chuyên dụng graphpad prism để xác định giá trị IC50 Số liệu định lượng trình dạng ± SE Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú MCF-7 bổ sung yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGF): Tiến hành tương tự phương pháp MTT Sử dụng phần mềm phân tích phương sai ANOVA để xử lý số liệu khác biệt coi có ý nghĩa pPPC, PPY, PV mẫu PPP 4.3 Kết thử hoạt tính sinh học 4.3.1 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư Kết thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư cao chiết, cao phân đoạn hợp chất spirostan steroid tinh khiết phân lập từ PPC dòng tế bào A549, HL-60, Hela Caco-2 Sử dụng Adriamycin làm chứng dương Giá trị IC50 cao tổng, cao phân đoạn hợp chất tinh khiết phân lập từ PPC Ký hiệu mẫu IC50 (µg/ml) A549 HL-60 Hela Caco-2 RPC 10,46 ±0,76 15,55 ±0,98 11,05 ±0,67 23,57 ±1,78 RPCBt 7,54 ±0,55 9,52 ±0,65 10,47 ±0,89 11,92 ±1,05 RPCEt 6,42 ±0,52 7,0 ±0,35 9,467 ±0,53 9,78 ±0,89 RPCW 10,16 ±1,02 18,59 ±0,98 9,144 ±0,43 22,7 ±1,56 PC 7,76 ±0,63 13,46 ±0,89 8,41 ±0,54 20,19 ±1,36 PCEt 9,33 ±0,65 11,77 ±0,97 9,24 ±0,68 8,23 ±0,43 PCBt 10,54 ±0,98 12,4 ±1,23 8,09 ±0,57 8,66 ±0,69 PCW 7,89 ±0,56 15,03 ±1,06 11,6 ±0,78 25,70 ±1,68 Pennogenin 7,62 ± 0,49 6,72 ± 0,52 4,79 ± 0,48 14,94 ± 0,50 Paris saponin D 26,95 ± 1,05 14,80 ± 1,12 19,24 ± 1,05 39,50 ± 1,04 Paris saponin H 30,76 ± 1,01 19,41 ± 1,09 10,96 ± 1,05 43,59 ± 1,25 Paris saponin VII 35,86 ± 1,23 13,06 ± 1,21 13,17 ± 1,14 26,01 ± 1,17 Diosgenin 17,09 ± 0,50 20,05 ± 0,54 10,63 ± 0,49 18,99 ± 0,60 Gracillin 31,26 ± 1,03 11,34 ± 1,07 10,13 ± 1,03 39,68 ± 1,03 Dioscin 85,86 ± 1,07 102,98 ± 1,34 39,90 ± 1,12 50,36 ± 1,02 Paris saponin II 67,14 ± 1,23 52,98 ± 1,32 13,46 ± 1,17 37,28 ± 1,19 Adriamycin 0,95 ± 0,09 0,54 ± 0,07 0,31 ± 0,01 2,04 ± 0,35 Trong đó: RPC: Mẫu cao tổng phần thân rễ; RPCBt: Mẫu cao phân đoạn butanol phần thân rễ; RPCEt: Mẫu cao phân đoạn etyl axetat phần thân rễ; RPCW: Mẫu cao phân đoạn nước phần thân rễ; PC: Mẫu cao tổng phần mặt đất; PCEt: Mẫu cao phân đoạn etyl axetat phần mặt đất; PCBt: Mẫu cao phân đoạn butanol phần mặt đất; PCW: Mẫu cao phân đoạn nước phần mặt đất Nhân xét: Cao tổng phần mặt đất phần mặt đất có tác dụng gây độc dòng tế bào ung thư A549, Hela HL-60 với giá trị IC50 từ 7,56 - 15,55 µg/mL, tác dụng Caco-2 (giá trị IC50 > 20 µg/mL) Hoạt tính gây độc tế bào ung thư phần mặt đất mạnh phần mặt đất kết cho thấy dùng thay phần thân rễ phần mặt đất nghiên cứu ung thư Phân đoạn etyl axetat mặt đất có tác dụng độc tế bào dòng tế bào ung thư A549, HL-60, Hela Caco-2 với giá trị IC50 từ 6,42 - 11,7 µg/mL Phân đoạn butanol mặt đất có tác dụng độc tế bào dòng tế bào ung thư A549, HL-60, Hela Caco-2 với giá trị IC50 từ 7,54 - 12,4 µg/mL Trong hợp chất tinh khiết spirostan steroid phân lập từ PPC có hợp chất pennogenin (AE8) biểu hoạt tính gây độc tế bào ung thư mạnh với giá trị IC50 từ 4,79 – 7,62 µg/mL dòng tế bào A549, HL-60 Hela Các hợp chất biểu tác dụng trung bình đến yếu Như vậy, kết thực nghiệm mang tính thống kê cao (mỗi phép thử lặp lại lần) thực nhiều dòng tế bào (4 dòng tế bào ung thư người) cho ta nhìn tổng quát khả gây độc tế bào ung thư đối tượng nghiên cứu Paris polyphylla var chinensis gợi ý việc sử dụng cao chiết phân đoạn chiết để sử dụng làm chế phẩm nghiên cứu tác dụng ung thư Tuy nhiên, chất tinh khiết sử dụng marker để kiểm tra chất lượng chế phẩm Kết sàng lọc hoạt tính gây độc tế bào ung thư vú MCF-7 phương pháp MTT có bổ sung EGR Mức độ phát triển tế bào Mức độ phát triển tế bào - + 50 µg/ml 10 11 12 13 14 - + 10 30 Paris II (µM) 30 µg/ml 50 ng/ml EGF Ảnh hƣởng cao chiết hợp chất tinh khiết với phát triển tế bào ung thƣ vú MCF7 50 ng/ml EGF Ảnh hƣởng paris saponin II với phát triển tế bào ung thƣ vú MCF7 Ghi chú: (-): Chứng âm không bổ sung EGF; (+): Chứng dương có bổ sung EGF; (1): Cao tổng phần mặt đất; (2): Cao phân đoạn butanol phần mặt đất; (3): Cao phân đoạn etyl acxetat phần mặt đất; (4): Cao phân đoạn nước phần mặt đất; (5): Cao tổng phần mặt đất; (6): Cao phân đoạn butanol phần mặt đất; (7): Cao phân đoạn etyl axetat phần mặt đất; (8): Cao phân đoạn nước phần mặt đất; (9): diosgenin; (10): paris saponin D; (11): gracillin; (12): paris saponin H; (13): paris saponin II; (14): paris saponin VII Nhận xét: Tại nồng độ thử 50 µg/ml cao tổng, cao phân đoạn butanol, cao phân đoạn nước phần phần mặt đất không cho tác dụng ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú có bổ sung yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGF) (mức độ sai khác có ý nghĩa thông kê 0), phân đoạn etyl axetat phần phần mặt đất thể tác dụng ức chế tăng sinh tế bào MCF-7 (mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê 0,5 0,05) Sự khác biệt ý nghĩa phần mặt đất, mặt đất Tại nồng độ thử 30 µg/mL hợp chất spirostan saponin tinh khiết phân lập từ PPC thể hoạt tính ức chế tăng sinh tế bào MCF-7, paris saponin II thể hoạt tính cao với khả ức chế tăng sinh MCF-7 giảm 2,2 lần so với đối chứng dương đạt độ tin cậy so sánh 0,005 Trên mô hình thử ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú có bổ sung EGF, diosgenin thể khả ức chế tăng sinh tế bào yếu so với saponin tương ứng Khi tiến hành đánh giá ảnh hưởng paris saponin II đến khả ức chế tăng sinh tế bào MCF-7 cho thấy: hợp chất ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú phụ thuộc vào nồng độ nồng độ 30 µM thể khả ức chế tăng sinh tế bào mạnh gần đối chứng âm Mặt khác, nghiên cứu sâu chế tác động hợp chất chưa có công bố Chính vậy, nhóm nghiên cứu lựa chọn hợp chất paris saponin II để nghiên cứu chế tác dụng số đích phát sinh ung thư 4.3.2 Kết tác dụng hợp chất paris saponin II lên hoạt độ hai yếu tố NF-κB Ap-1 kỹ thuật phân tích luciferase Renilla Sử dụng kít thử nghiệm hệ thống (Promega, WI, USA) thu kết biểu tương đương hoạt độ hai yếu tố NF-κB Ap-1: Hoạt Hoạt độ độ Ap-1 NF-κB - + 10 30 + LPS ng/ml paris II (µM) - + 10 30 + LPS ng/ml paris II (µM) Ảnh hƣởng paris saponin II (paris II) lên hoạt độ hai yếu tố NF-κB Ap-1 Ghi chú: (-): Chứng âm LPS; (+): Chứng dương bổ sung LPS Nhận xét: Kết hình cho thấy hoạt độ hai yếu tố NF-κB Ap-1 mẫu chứng dương tế bào RAW246.7 bị kích thích viêm ng/ml lipopolysaccharid (LPS) hoạt độ hai yếu tố phiên mã NF-κB Ap-1 tăng khoảng lần so với mẫu chứng âm với độ tin cậy 0,001 khẳng định tính mô hình Paris saponin II làm giảm hoạt độ của NF-κB Ap1 có mặt LPS phụ thuộc nồng độ ức chế mạnh nồng độ 30 µM 4.3.3 Kết biểu protein tế bào ung thư vú MCF-7 sử dụng kỹ thuật Western Blot p27 p21 Cyclin D1 p-Rb Rb E2F1 β-actin Paris II (μM) - 10 30 Tác dụng paris saponin II lên biểu nhóm protein tham gia vào chu trình tế bào Tác dụng paris saponin II lên biểu nhóm protein tham gia vào trình apoptosis Như vậy, kỹ thuật Western Blot hợp chất paris saponin II tác động khác lên biểu hai nhóm protein tham gia vào chu trình tế bào trình apoptosis: Đối với nhóm protein tham gia chu trình tế bào: Hợp chất paris saponin II có tác dụng làm tăng biểu p21 p27 giảm biểu cyclin D1 pRb phụ thuộc nồng độ không làm thay đổi mức độ biểu Rb E2F1 Kết phân tích vai trò protein nhóm tham gia vào chu trình tế bào cho thấy: paris saponin II có tác dụng làm cho tế bào không chuyển sang pha tổng hợp (pha S) dừng chu trình tế bào pha G1, điều có ý nghĩa việc ngăn trình nhân lên kiểm soát tế bào ung thư Đối với protein tham gia trình apoptosis: Hợp chất paris saponin II tác dụng làm tăng biểu hai protein Bax p53 phụ thuộc theo nồng độ 1, 3, 10 µM nồng độ 30 µM không thấy tác dụng Kết phân tích vai trò hai protein trình apoptosis cho thấy: chất paris saponin II có tác động trực tiếp gián tiếp thúc đẩy trình apoptosis KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Về thành phần hóa học Paris polyphylla var chinensis Franchet trồng Lào Cai 1.1 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập Từ cao phân đoạn etyl axetat phần thân rễ bảy hoa (PPC) phân hợp chất tinh khiết (RE1, RE2A RE2B, RE3 – RE5) gồm: diosgenin (RE1), hỗn hợp hai chất stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranosid (RE2A) β-sitosterol-3-O-βD-glucopyranosid (RE2B), gracillin (RE3), paris saponin D (RE4), paris saponin H (RE5) Từ cao phân đoạn etyl axetat butanol phần mặt đất loài PPC phân lập 15 hợp chất tinh khiết (AE6 – AB20): có hợp chất 12- hydroxy-diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl(1→3)]-β-D-glucopyranosid (AB17), hợp chất lần phân lập từ chi Paris gồm 1-O-α-linolenoyl-3-β-D-galactopyranosyl-glyxerol (AE6), stigmasterol (AE7), thymidin (AE11), resveratrol (AE12), ε-viniferin (AE13); hợp chất lần phân lập từ PPC gồm quercetin (AE9), quercetrin (AE14); hợp chất khác pennogenin (AE8), stigmasterol-3-O-D-glucosid (AB10), diosgenin-3-O-αL-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-D-glycopyranosid (AE15), diosgenin-3-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glycopyranosid (AE16), dioscin (AB18), paris saponin II (AB19), paris saponin VII (AB20) 1.2 Bước đầu xây dựng dấu vân tay hóa học để phân biệt số loài thuộc chi Paris Đề tài bước đầu xây dựng dấu vân tay hóa học phương pháp TLC HPLC Kết cho thấy có khác biệt thành phần hóa học loài thuộc chi Paris thu Việt Nam Mặt khác, thông qua tín hiệu píc hợp chất sắc ký đồ mỏng HPLC, có mặt hợp chất loài Paris polyphylla var chinensis thu hái tự nhiên trồng có khác biệt Đặc biệt, hợp chất Paris saponin II mẫu trồng có cường độ píc cao loài thu tự nhiên Những nghiên cứu bước đầu cung cấp phương pháp xác định dấu vân tay khác HPLC TLC phục vụ cho nghiên cứu sâu lĩnh vực tương lai Đánh giá khả gây độc tế bào ung thƣ sơ chế tác dụng hợp chất paris saponin II dòng tế bào ung thƣ vú MCF-7 Đề tài đánh giá tác dụng gây độc dòng tế bào ung thư người A549, HL-60, Hela Caco-2 cao tổng, cao phân đoạn hợp chất spirostan steroid phân lập từ PPC + Cao chiết tổng phần mặt đất phần mặt đất thể hoạt tính rõ rệt dòng tế bào ung thư A549, Hela HL-60 với giá trị IC50 từ 7,5615,55 µg/mL, tác dụng Caco-2 Phân đoạn etyl axetat phần mặt đất thể hoạt tính gây độc bốn dòng tế bào ung thư mạnh với giá trị IC50 từ 6,42-11,7 µg/mL + Pennogenin có hoạt tính cao diosgenin gây độc tế bào ung thư mạnh với giá trị IC50 < 10 µg/mL dòng tế bào A549, HL-60 Hela Các aglycon (diosgenin pennogenin) có hoạt tính gây độc tế bào ung thư cao saponin tương ứng Các hợp chất lại có hoạt tính từ trung bình đến yếu Đề tài đánh giá tác dụng ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú MCF-7 có bổ sung EGF cao tổng, cao phân đoạn etyl axetat, butanol, nước hợp chất spirostan steroid phân lập từ PPC: + Tại nồng độ thử 50 µg/ml, cao tổng, cao phân đoạn butanol, cao phân đoạn nước phần phần mặt đất không cho tác dụng ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú, phân đoạn etyl axetat phần phần mặt đất thể tác dụng ức chế tăng sinh tế bào MCF-7 khác biệt có ý nghĩa phần mặt đất, mặt đất + Tại nồng độ 30 µg/ml, hợp chất spirostan steroid thể tác dụng ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú MCF-7 điều kiện có bổ sung yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGF) Trong đó, hợp chất paris saponin II thể tác dụng ức chế tăng sinh tế bào mạnh liều thử nghiệm + Hợp chất paris saponin II ức chế tăng sinh tế bào ung thư vú MCF-7 bổ sung EGF phụ thuộc nồng độ, nồng độ 30 µM ức chế mạnh Đề tài lần đánh giá ảnh hưởng hợp chất paris saponin II lên hoạt độ hai yếu tố NF-κB AP-1 kỹ thuật phân tích luciferase Renilla: Hợp chất Paris saponin II làm giảm hoạt độ NF-kB Ap-1 bổ sung chất kích thích gây viêm lipopolysaccharide (LPS) đại thực bào RA W264.7 phụ thuộc nồng độ, nồng độ 30 µM có tác dụng mạnh Đề tài lần đánh giá mức độ biểu protein tế bào ung thư vú MCF-7 theo nồng độ hợp chất paris saponin II kỹ thuật Western Blot + Đối với nhóm protein tham gia chu trình tế bào: Hợp chất paris saponin II có tác dụng làm tăng biểu p21 p27 giảm biểu cyclin D1 pRb phụ thuộc nồng độ không làm thay đổi mức độ biểu Rb E2F1 Với tác dụng nghĩ đến hợp chất paris saponin II ức chế tế bào ung thư pha G1 chu trình nhân lên tế bào ung thư + Đối với protein tham gia trình apoptosis: Hợp chất paris saponin II tác dụng làm tăng biểu hai protein Bax p53 phụ thuộc theo nồng độ 1, 3, 10 µM nồng độ 30 µM không thấy tác dụng Với tác dụng nghĩ đến paris saponin II có tác dụng thúc đẩy chết theo chu trình tế bào ung thư (apoptosis) NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN Luận án thành công viêc phân lập 21 chất gồm: RE1 (diosgenin); RE2 hỗn hợp hai chất stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranosid βsitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid), RE3 (gracillin), RE4 (paris saponin D), RE5 (paris saponin H), AE6 (1-O-α-linolenoyl-3-β-D-galactopyranosyl-glyxerol), AE7 (stigmasterol), AE8 (pennogenin), AE9 (quercetin), AE10 (stigmasterol-3-O-Dglucosid), AE11 (thymidin), AE12 (resveratrol), AE13 (ε-viniferin), AE14 (quercetrin), AE15 (diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-Dglycopyranosid), AE16 (diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-Dglycopyranosid), AB17 (12-hydroxy-diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)- [α-L-rhamnopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucopyranosid), AB18 (dioscin), AB19 (paris saponin II), AB20 (paris saponin VII) Trong 21 hợp chất phân lập có hợp chất AB17; có hợp chất lần phân lập từ chi Paris AE6, AE7, AE11, AE12 AE13 hai hợp chất đối tượng nghiên cứu (PPC) AE9 AE14 Luận án thành công việc sử dụng phương pháp TLC HPLC cho nghiên cứu đa dạng mức độ loài loài mẫu thuộc chi Paris Kết sắc ký đồ cho thấy có khác biệt mẫu thuộc chi Paris gợi ý việc thay cho phương pháp tiêu gặp khó khăn nhận diện mẫu có tính đồng hình cao hay phương pháp sinh học phân tử đòi hỏi chi phí cao máy móc phức tạp nghiên cứu đa dạng Luận án đánh giá in vitro tác dụng gây độc tế bào ung thư người dòng tế bào A549 (tế bào ung thư phổi); HL-60 (tế bào ung thư bạch cầu); Hela (tế bào ung thư cổ tử cung); Caco-2 (tế bào ung trực tràng); MCF7 (tế bào ung thư biểu mô vú) phần thân rễ cao chiết hợp chất spirostan steroid phân lập từ loài PPC Kết nghiên cứu cho thấy khác biệt ý nghĩa hoạt tính gây độc tế bào ung thư phần mặt đất, nên sử dụng thay phần nghiên cứu ung thư Kết thực nghiệm góp phần nâng cao giá trị sử dụng loài dược liệu quý Luận án thành công việc lần sơ chế tác dụng hợp chất paris saponin II dòng tế bào ung thư vú MCF-7 Hợp chất có hàm lượng lớn chất sử dụng dược điển Trung Quốc để định lượng nhận diện hai đối tượng Paris polyphylla var chinensis Paris polyphylla var yunnanesis Kết thực nghiệm bước đầu giải thích đường mà hợp chất paris saponin gây độc tế bào ung thư vú (MCF-7) theo đường apoptosis chu kỳ tế bào CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN DANH MỤC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Thị Duyên, Phạm Quốc Long, Đỗ Thị Hà (2016), “Saponin steroid từ cắn ethyl acetat thân rễ bảy hoa (Paris polyphylla var chinensis Franchet) trồng Việt Nam”, Tạp chí Dược liệu, 21(1+2), tr.30-35 Nguyễn Thị Thu, Trần Ngọc Lân, Nguyễn Tiến Dũng, Nguyễn Đắc Bình Minh, Đào Thùy Dương, Nguyễn Thị Duyên (2016), “Nghiên cứu đặc điểm thực vật vi học bảy hoa Việt Nam”, Tạp chí Dược liệu, 21(4), tr.242-247 Nguyễn Thị Duyên, Đỗ Thị Hà, Nguyễn Minh Khởi, Nguyễn Thị Thu, Phạm Quốc Long (2016), “Nghiên cứu thành phần hóa học phần mặt đất bảy hoa (Paris polyphylla var chinensis Franchet) họ Trọng lâu (Triliaceae)”, Tạp chí khoa học công nghệ 56(2C), tr.472-478 Nguyễn Thị Duyên, Đỗ Thị Hà, Trần Vũ Thắng, Nguyễn Quyết Chiến, Phạm Quốc Long, “Thành phần hóa học cao dịch chiết etyl acetat bảy hoa (Paris polyphylla var chinensis Franchet) trồng Việt Nam”, Tạp chí Hóa học, chấp nhận đăng tập 55 số năm 2017 ... Paris; - Các nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài thu c chi Paris; - Đặc điểm thực vật; phân bố; nghiên cứu thành phần hóa học; hoạt tính sinh học bảy hoa Paris polyphylla var chinensis. .. sinh học bảy hoa - Paris polyphylla var chinensis Franchet thu thập Việt Nam Mục tiêu luận án: Đề tài nghiên cứu thực hai mục tiêu nghiên cứu sau: Mục tiêu 1: Nghiên cứu thành phần hóa học Paris. .. metylen bị hydroxy hóa cấu trúc hợp chất AB17 Mặt khác so sánh phần liệu phổ phần aglycon hợp chất (25R)-spiros-5-ene-3β, 12α-diol3-O-α-L-Rha(1→4 )- -L-Rha(1→4 )-[ α-LRha(1→2) ]- -D-Glc (có liên kết