Xu ly so lieu trong nghien cuu duoc ly

Các lô thường được sử dụng trong thí nghiệm gồm: Lô chứng sinh lý: dùng nước cất hoặc dùng dung môi pha thuốc Lô chứng bệnh lý: động vật được gây bệnh lý thực nghiệm rồi cho dùng nước cấ

PHẦN I. MỘT SỐ NGUYÊN TẮC CƠ BẢN TRONG

1 NGUYÊN TẮC THIẾT KẾ THÍ NGHIỆM VÀ PHÂN TÍCH SỐ LIỆU

1 1 Một số nguyên tắc thiết kế thí nghiệm

- Lựa chọn động vật: tùy theo yêu cầu của mỗi thí nghiệm mà lựa chọn động vật cho phù hợp Nếu không có yêu cầu riêng biệt thì thường chọn động vật trưởng thành,

có khối lượng đồng đều, cùng độ tuổi, khỏe mạnh, cả 2 giống, nếu là con cái thì không được có thai và không đang cho con bú Động vật sau khi mua về phải được kiểm tra

về khối lượng và chất lượng như: nhanh nhẹn, lông mượt, mắt sáng, răng, móng, bộ phận sinh dục ngoài …bình thường

- Chế độ nuôi dưỡng: động vật sau khi mua về phải nuôi tại nơi thí nghiệm 3-5 ngày để thích nghi với môi trường mới Chế độ nuôi dưỡng phải phù hợp với đặc tính sinh lý tự nhiên của động vật, phù hợp với yêu cầu của thí nghiệm và phải đồng nhất trong suốt quá trình nghiên cứu Không dùng thức ăn có khả năng ảnh hưởng đến tác dụng của thuốc Lựa chọn giờ cho ăn hàng ngày hợp lý để đảm bảo khi cho uống thuốc thì dạ dày đã được tiêu bớt, để hấp thu thuốc tốt hơn và tránh làm dạ dày căng quá mức gây hiện tượng khác thường nhầm với tác dụng của thuốc

- Số lượng động vật cần dùng tuỳ thuộc vào mỗi thí nghiệm nhưng nguyên tắc chung là phải đủ để đảm bảo độ tin cậy cho kiểm định thống kê (tối thiểu 6 động vật /lô)

- Phương pháp chia lô thí nghiệm: động vật thường được chia ngẫu nhiên thành các lô để thử thuốc Số lô tuỳ thuộc vào mục đích thí nghiệm Các lô thường được sử dụng trong thí nghiệm gồm:

Lô chứng sinh lý: dùng nước cất hoặc dùng dung môi pha thuốc

Lô chứng bệnh lý: động vật được gây bệnh lý thực nghiệm rồi cho dùng nước cất hoặc dung môi pha thuốc

Lô chứng dương: động vật được gây mô hình bệnh lý thực nghiệm rồi dùng một thuốc đã biết có tác dụng trên mô hình thử

Lô thử: động vật được gây bệnh lý thực nghiệm rồi dùng thuốc nghiên cứu (có thể có nhiều lô thử )

- Liều dùng được tính theo khối lượng động vật và phù hợp với từng loài Đối với các thuốc đã biết rõ tác dụng dược lý và mức liều có hiệu quả trên người, liều dùng trên động vật được xác định theo nguyên tắc ngoại suy dựa vào liều

có hiệu quả tương đương giữa các loài động vật và người (bảng 1.1)

Bảng 1.1 Hệ số có hiệu quả tương đương giữa các loài động vật và người

Sang loài

Từ loài

Chuột nhắt trắng

- Chỉ tiêu đánh giá: mỗi thí nghiệm dược lý có thể lựa chọn 1 hay nhiều chỉ tiêu đánh giá liên quan đến tác dụng dược lý hoặc độc tính cần thăm dò trong mô hình Chỉ tiêu này có thể phản ánh tác dụng dược lý ở mức độ cơ thể (ví dụ độ phù của bàn chân chuột sau khi gây viêm bằng carrageenan hay thời gian ngủ của chuột sau khi tiêm thiopental), mức độ cơ quan (ví dụ tần suất và biên độ co thắt cơ trơn ruột cô lập), mức

độ tế bào (ví dụ nồng độ insulin trong môi trường nuôi cấy đảo tụy cô lập) hay ở mức

độ phân tử (ví dụ khả năng ức chế hoạt độ enzym cyclooxygenase khi ủ cơ chất và

enzym với thuốc) Chỉ tiêu đánh giá được thực hiện ở tất cả các lô thí nghiệm, tại các thời điểm xác định theo thiết kế thí nghiệm để sau đó có thể xử lý kết quả và kiểm định thống kê phù hợp

- Đánh giá kết quả của thí nghiệm: tùy theo thiết kế thí nghiệm mà lựa chọn kiểm định thống kê phù hợp để:

+ So sánh trước - sau trên cùng 1 lô động vật thực nghiệm

+ So sánh giữa 2 lô động vật thực nghiệm: nhóm thử và nhóm chứng

+ So sánh giữa nhiều lô động vật thực nghiệm: nhóm chứng sinh lý, nhóm chứng bệnh lý, nhóm chứng dương và các nhóm thử

+ So sánh lặp lại nhiều thời điểm trên cùng 1 lô động vật thực nghiệm

+ So sánh lặp lại nhiều thời điểm trên các lô động vật thực nghiệm khác nhau:

có thể so sánh trong cùng lô (within-group) hoặc giữa các lô (between-groups)

1 2 Ghi nhận kết quả và phân tích số liệu

1.2.1 Xây dựng bộ dữ liệu

Điều quan trọng nhất trong quá trình thực hiện thí nghiệm là theo dõi các thông

số đánh giá, ghi chép và lưu trữ kết quả thực nghiệm để phân tích, xử lý thống kê sau

đó Thông tin cần lưu giữ bao gồm tên lô động vật thử, số thứ tự các cá thể trong lô và kết quả các thông số đánh giá của từng cá thể

Số liệu thu thập trong thí nghiệm dược lý thuộc 1 trong 4 loại biến số: biến định danh (nominal), biến thứ bậc (ordinal), biến rời rạc hoặc liên tục (metric,

discrete/continuous) (bảng 1.2) Đi từ biến định danh đến biến tham số, tính thông tin

tăng dần nhưng khả năng xuất hiện sai số đo lường cũng tăng dần Loại số liệu nghiên cứu và đặc điểm phân bố của mẫu số liệu sẽ quyết định việc lựa chọn phép toán thống

kê để xử lý kết quả

Phần mềm xử lý số liệu thường được sử dụng trong phân tích kết quả thí nghiệm dược lý bao gồm: Microsoft Excel (Microsoft Office, Microsoft), Statistical Package for the Social Sciences (SPSS version 16.0, IBM) hay GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc.)

Bảng 1.2 Đặc điểm của các loại số liệu trong thí nghiệm dược lý

Loại biến

thống kê mô tả

Nội dung thông tin

Biến định

danh

Bao gồm các số liệu không có thứ bậc

Giới tính, tình trạng sống/chết

Tần số, tỉ lệ Thấp

Biến thứ bậc Bao gồm các số liệu

có thứ bậc nhưng khoảng cách giữa chúng không định lượng được

Mức độ đau (nhẹ, trung bình, nặng)

Tần số, tỉ lệ, trung vị

Trung bình

Biến liên tục

hoặc rời rạc

có thứ bậc

Số liệu có thứ bậc, nhưng phạm vi giá trị được phân thành các khoảng có thể định lượng được Số liệu có được do đếm (rời rạc) hoặc do đo lường (liên tục)

Số lượng hồng cầu, bạch cầu/l máu ngoại vi (rời rạc) Hoạt độ enzym

huyết thanh (liên tục)

Tần số, tỉ lệ, trung vị, trung bình, độ lệch chuẩn

Cao

1.2.2 Một số khái niệm thống kê cơ bản

- Phân bố mẫu: có thể tuân theo phân bố chuẩn (Gausse) hoặc không tuân theo phân bố chuẩn Tính chuẩn của mẫu có thể xác định thông qua hình dạng của đường phân bố mẫu (histogram) hoặc thông qua các kiểm định thống kê

Phân bố chuẩn, đặc trưng bằng Χ ± SD,

sử dụng kiểm định tham số

Phân bố không chuẩn, đặc trưng bằng

Median và tứ phân vị,

sử dụng kiểm định phi tham số

Hình 1.1 Phân bố kết quả thực nghiệm chuẩn và không chuẩn

- Giá trị trung bình (Mean, X)

- Độ lệch chuẩn (SD): diễn tả sự biến thiên của các giá trị quan sát của mẫu so với giá trị trung bình Nếu mẫu tuân theo phân bố chuẩn, 95% giá trị của mẫu được tìm thấy trong khoảng X ± 2 SD

- Sai số chuẩn (SE): diễn tả sự biến thiên của giá trị đặc trưng (số trung bình) tính được từ mẫu Với mẫu tuân theo phân bố chuẩn, khoảng X ± 2 SE là khoảng dao động của giá trị trung bình trong 95% trường hợp

- Tứ phân vị (quartiles): 25% hoặc 75% là giá trị mà tại đó tương ứng có 25% hoặc 75% giá trị trong mẫu bé hơn giá trị này

- Trung vị (median): giá trị giữa của mẫu, được tính là giá trị giữa nếu cỡ mẫu lẻ hoặc trung bình của 2 giá trị giữa nếu cỡ mẫu chẵn

định giả thuyết thay thế hay không Có 2 giả thuyết: giả thuyết H0 và giả thuyết thay thế Thí nghiệm Dược lý được thiết kế để chứng minh giả thuyết thay thế và chỉ ra xác xuất sai cao của giả thuyết H0

- Giá trị p: biến cố tồn tại giả thuyết H0 Nếu p > 0,05, không phát hiện được sự khác biệt ở mức ý nghĩa 95% Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê được xác định khi p < 0,05

1.2.3 Xử lý thống kê

Phân tích thống kê được bắt đầu bằng test kiểm định phân bố của mẫu Có thể xác định khá chính xác đặc tính phân bố của mẫu với cỡ mẫu lớn, tuy nhiên với khoảng 5-20 giá trị đo lường trong thực hành dược lý, việc thiết lập phân bố mẫu nhiều khi không chính xác Trong một số trường hợp, với n < 30 người ta coi mẫu dữ liệu phân bố phi tham số (nonparametric distribution)

Kiểm định thống kê được áp dụng tùy theo đặc tính phân bố của mẫu Trong trường hợp mẫu phân bố tham số (parametric) như phân bố Gausse, mẫu được đại diện bằng giá trị trung bình và độ lệch chuẩn và được kiểm định bằng các test tham số Trong trường hợp phân bố phi tham số, mẫu được đại diện bằng trung vị và các tứ phân vị 25% và 75% và được kiểm định bằng các test phi tham số Test phi tham số cũng được áp dụng với các biến định danh, biến thứ bậc và biến rời rạc

Sau đó, tùy theo yêu cầu của nghiên cứu mà áp dụng các test kiểm định khác nhau Với 2 mẫu, có thể sử dụng test so sánh cặp (paired) và test so sánh 2 mẫu độc

lập (không cặp, unpaired), tùy thuộc vào các mẫu là độc lập hay phụ thuộc (hình 1.2)

Trong trường hợp so sánh nhiều hơn 2 mẫu hoặc đo lường lặp lại tại nhiều thời điểm,

có thể áp dụng các kiểm định khác (hình 1.3)

Hình 1.2 Tóm tắt các kiểm định thống kê áp dụng khi so sánh 2 mẫu

Hình 1.3 Tóm tắt các kiểm định thống kê áp dụng khi so sánh nhiều mẫu

Bài tập áp dụng 1 (kiểm định các mẫu độc lập, phân bố chuẩn với test tham số):

Biến liên tục

2 mẫu

Phân bố chuẩn Test tham số

Phân bố không chuẩn Test phi tham số

Mann-Whitney test không cặp

Wilcoxon test cặp

Biến liên tục > 2 mẫu

Phân bố chuẩn Test tham số

Phân bố không chuẩn Test phi tham số

Độc lập Phụ thuộc

(trước – sau) Độc lập

Phụ thuộc (trước – sau) Phân tích phương

Kruskal-Test Friedmann

Nếu có sự khác biệt dùng hậu kiểm so sánh cặp: test

Dunnett

bằng phút của chuột trong các lô (12 chuột/lô): lô chứng uống nước muối sinh lý (lô 1), lô uống thuốc thử liều thấp (lô 2) và lô uống thuốc thử liều cao (lô 3) thu được kết quả như sau:

Thời gian bơi của chuột (phút)

- Nhập số liệu

Bước 2 Tính toán các thông số đặc trưng mẫu về thời gian bơi của 3 lô

- Kiểm định tính chuẩn của mẫu: sử dụng SPSS: Analyse\Descriptive Statistics\Explore\Plot\Normality plots with tests

Dùng phép kiểm định Kolmogorov-Smirnov khi cỡ mẫu lớn hơn 50 hoặc phép kiểm định Shapiro-Wilk khi cỡ mẫu nhỏ hơn 50

Mẫu được coi là có phân phối chuẩn khi mức ý nghĩa (Sig.) lớn hơn 0,05

Kết quả kiểm định với dữ liệu ở 3 lô cho thấy các mẫu này có phân phối chuẩn

Chú ý: Để nhận biết phân phối chuẩn của mẫu trong SPSS, cũng có thể sử dụng giản

đồ Histogram (phân phối chuẩn khi giản đồ có dạng hình chuông úp đối xứng với tần

số cao nhất nằm ngay giữa và các tần số thấp dần nằm ở 2 bên) hoặc giản đồ xác suất chuẩn (normal Q-Q plot) (phân phối chuẩn khi giản đồ xác suất này có quan hệ tuyến tính)

- Tính toán các thông số đặc trưng của mẫu: giá trị trung bình (Mean), độ lệch chuẩn (SD), trung vị (Median), giá trị nhỏ nhất và lớn nhất (Min, Max) của các lô 1, 2 và 3

Sử dụng SPSS (Analyse\Descriptive Statistics\Explore\Statistics\ Descriptives)

Kết quả thu được như sau:

Thông số đặc

trƣng của mẫu

Thời gian bơi của chuột (phút)

Bước 3 So sánh sự khác biệt về tác dụng của các lô dùng thuốc thử (lô 2 và lô 3) so với lô chứng (lô 1)

- Giả thuyết H0: không có sự khác biệt về thời gian bơi giữa lô chứng (lô 1) và lô uống thuốc thử liều thấp (lô 2) Không có sự khác biệt về thời gian bơi giữa lô chứng (lô 1)

và lô uống thuốc thử liều cao (lô 3)

- Dùng test T-Student để so sánh sự khác biệt về giá trị trung bình của hai mẫu độc lập

Sử dụng SPSS (Analyse\Compare Means\Independent Samples T test)

Kết quả thu được như sau:

t0,05; 22

-1,213

-2,842

So sánh sự khác biệt giữa 3 lô nghiên cứu

- Dùng kiểm định ANOVA một chiều với giả định các mẫu quan sát là độc lập, phân

bố chuẩn và phương sai đồng nhất

Sử dụng SPSS (Analyse\Compare Means\One-Way ANOVA), chọn test hậu kiểm (post-hoc) LSD với phương sai đồng nhất và Dunnett’s T3 với các phương sai không đồng nhất để so sánh từng cặp (lô 1 với lô 2; lô 1 với lô 3; lô 2 với lô 3) (dùng kiểm định Homogeneity of variance test để xác định xem phương sai giữa các lô có đồng nhất hay không)

- Như vậy, kết quả phân tích ANOVA cho thấy thời gian bơi giữa các lô có sự khác biệt (p = 0,042)

Test Homogeneity of variance cho mức ý nghĩa lớn hơn 0,05 nên sử dụng kết quả của hậu kiểm LSD Kết quả p1-3 = 0,012 cho phép kết luận có sự khác biệt có ý nghĩa về thời gian bơi giữa lô uống thuốc thử liều cao (lô 3) và lô chứng (lô 1), tương tự kết quả phân tích qua kiểm định T-Student đã trình bày ở trên

Bài tập áp dụng 2 (kiểm định các mẫu độc lập, phân bố không chuẩn với test phi tham số): Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan trên mô hình gan bị tổn thương do CCl4

của một cao chiết từ dược liệu ở 2 mức liều khác nhau (liều 1: 250 mg/kg và liều 2:

1000 mg/kg) tiến hành song song cùng điều kiện với 1 lô dùng silymarin (liều 150 mg/kg) để đối chiếu Lô chứng bệnh lý là lô gây tổn thương gan bằng CCl4 nhưng không dùng thuốc Lô chứng sinh lý là lô không gây tổn thương gan và không dùng thuốc Thông số đánh giá là hoạt độ ALT (U/L) trong các lô thu được kết quả như sau:

Hoạt độ ALT (U/L)

sinh lý

Chứng bệnh lý

Silymarin Cao chiết

liều 1

Cao chiết liều 2

chung sinh ly 140 10 200* 936 10 507 chung benh 302 9 018 702 9 002 silymarin 159 10 200* 933 10 478 lieu 1 214 10 200* 877 10 121

Theo kết quả kiểm chuẩn, lô chứng bệnh có dữ liệu hoạt độ ALT huyết thanh tuân theo phân bố không chuẩn (p 0,002) Do đó, để so sánh sự khác biệt về hoạt độ ALT giữa

các lô, cần sử dụng test phi tham số (thường sử dụng test Kruskal-Wallis và test Mann Whitney U)

o nh ự h c biệt giữa c c b ng te t ruskal-Wallis H:

Sử dụng SPSS (Analyse Nonparametric Tests K ndipendent Samples ), chọn Kruskal-Wallis Chuyển biến phụ thuộc (hoạt độ ALT) vào ô Test Variable và biến độc lập vào ô rouping Variable Xác định các nhóm cần phân tích trong mục Define Range Ví dụ, trong trường hợp này cần so sánh hoạt độ ALT của cả 5 lô nghiên cứu,

do đó chọn khoảng giá trị min là 1, giá trị max là 5 Nếu chỉ quan tâm đến sự khác biệt giữa lô chứng bệnh và các lô dùng thuốc, có thể chọn giá trị min là 2 (bỏ qua lô chứng sinh lý)

Ngoài ra, có thể kết hợp xác định các thông số đặc trưng của mẫu (trong trường hợp mẫu không chuẩn, thường dùng tứ phân vị) trong mục option

Kết quả từ phân tích trên đây cho phép kết luận có sự khác biệt về giá trị hoạt độ ALT giữa các lô nghiên cứu (p 0,000) Tuy nhiên, test Kruskal-Wallis chỉ cho biết trong các lô phân tích, có ít nhất 2 lô có sự khác nhau có ý nghĩa thống kê về thông số nghiên cứu mà không cho biết sự khác biệt đó xảy ra giữa các lô cụ thể nào Có hai hướng khắc phục hạn chế này của test Kruskal-Wallis H:

- Sử dụng test Mann Whitney U (Analyse\Nonparametric Tests\ 2 Indipendent Samples , chọn Mann Whitney U) Về bản chất, test Kruskal-Wallis chính là test

mở rộng của test Mann Whitney U để kiểm định đồng thời nhiều lô nghiên cứu Ví dụ,

để so sánh sự khác biệt giữa lô sử dụng chứng dương silymarin với lô chứng bệnh lý,

ta thực hiện test Mann Whitney U như sau

Kết quả của test Mann Whitney U cho thấy hoạt độ ALT giữa lô chuột được uống silymarin và lô chứng bệnh khác biệt có ý nghĩa thông kê (p 0,010)

h trong trường hợp cỡ mẫu lớn, có thể lấy giá trị p ở mục Asyp Sig

- Ngoài ra, có thể so sánh sự khác biệt giữa hai lô nào đó bằng cách sử dụng hậu kiểm

(post hoc) của test Kruskal-Wallis (tương tự kiểm định One-way Anova) Phương

pháp này có ưu điểm là thực hiện được đồng thời với nhiều cặp so sánh, tuy nhiên điều này chỉ thực hiện được với phiên bản SPSS 20.0 trở lên

Bài tập áp dụng 3 (kiểm định các mẫu phụ thuộc): Đường huyết đo được (mg/dl)

trên chuột nhắt trắng trước và sau khi uống một thuốc thử như sau:

Sử dụng SPSS (Analyse Nonparametric Tests 2 Related Samples ), chọn test Wilcoxon Kéo biến glucose trước dùng thuốc và glucose sau dùng thuốc tương ứng vào vị trí của Variable 1 và Variable 2

Như vậy, test Wilcoxon cho phép kết luận giá trị glucose huyết trước và sau dùng thuốc khác biệt có ý nghĩa thống kê (p 0,046)

h : Với trường hợp hai biến phụ thuộc tuân theo phân phối chuẩn, sử dụng kiểm

định T-test cặp (Paired-Samples T test)

2 KỸ THUẬT BẮT GIỮ, TIÊM VÀ CHO ĐỘNG VẬT UỐNG THUỐC

2.1 Kỹ thuật bắt, giữ động vật

Bắt và giữ động vật là công việc thường xuyên trong thực hành và nghiên cứu thuốc trên động vật Việc bắt giữ động vật đúng cách sẽ giúp cho thực hiện các thao tác tiêm hoặc cho động vật uống thuốc được chính xác và dễ dàng hơn đồng thời hạn chế được sai số nghiên cứu do động vật sợ hãi quá mức gây nên Với mỗi loài động vật

sẽ có các thao tác khác nhau tuy nhiên nguyên tắc chung khi bắt, giữ các loài động vật là: động tác nhẹ nhàng, từ từ nhưng dứt khoát và đúng kỹ thuật

2.1.1 Kỹ thuật bắt và giữ chuột

- Cách 1: Bắt chuột bằng cách túm đuôi sát vùng thân chuột nhấc lên Đặt chuột lên bề mặt cứng, tốt nhất là đặt chuột lên các vật dụng có dạng lưới bằng thép để chuột có thể bám chặt như nắp hộp nhốt chuột Một tay cầm đuôi kéo nhẹ về phía sau, tay còn lại túm vào gáy chuột sát phần gốc tai và giữ thật chặt đầu chuột sao cho chuột không thể quay đầu lại để tấn công hoặc cắn được Nhấc chuột lên, xoay ngửa bàn tay để chuột nằm lọt hẳn trong lòng bàn tay và kẹp đuôi chuột vào giữa bàn tay và ngón tay đeo

nhẫn hoặc ngón út để giữ cho chặt (hình 1.4)

Hình 1.4 Kỹ thuật bắt và giữ chuột theo cách 1

- Cách 2: Bắt giữ chuột bằng cách dùng một tay nắm vòng quanh lấy thân chuột ở vùng ngực, ngón tay cái và ngón trỏ đặt ở hai bên đầu con vật ở phần hàm dưới giữ chắc chắn để chuột không thể quay đầu lại cắn nhưng không được giữ quá chặt vì có thể làm con vật ngạt thở Với những con chuột to có thể phải dùng tay còn lại để đỡ 2

chân sau (hình 1.5)

Hình 1.5 Kỹ thuật bắt và giữ chuột theo cách 2

- Cách 3: dùng dụng cụ hỗ trợ để giữ chuột Những dụng cụ này thường có hình trụ hoặc hình nón với các kích thước khác nhau được làm bằng nhựa cứng, bằng thép hoặc nylon có các lỗ thông khí để chuột có thể hít thở dễ dàng Ngoài ra, tùy thuộc vào yêu cầu của từng thí nghiệm mà có thể sử dụng các dụng cụ có chỗ để thò đuôi ra ngoài

thuận tiện cho các thao tác tiêm tĩnh mạch đuôi hoặc lấy máu ở vùng đuôi (hình 1.6)

Hình 1.6 Cách giữ chuột sử dụng dụng cụ hỗ trợ 2.1.2 Kỹ thuật bắt và giữ thỏ

Khác với chuột, thỏ có 2 chân sau rất khoẻ vì vậy bắt thỏ luôn phải dùng 2 tay

- Cách 1: Bắt thỏ bằng cách dùng 1 tay túm vào lớp da vùng gáy thỏ, tay còn lại đỡ ở

phần hai chân sau và nhấc lên (hình 1.7) Chú ý không túm gáy hoặc túm tai thỏ xách

lên vì các động tác này khiến thỏ giẫy giụa mạnh, có thể gây trật khớp đốt sống thắt lưng hay gãy xương hoặc có thể sẽ làm tổn thương các mạch máu ở tai ảnh hưởng tới nghiên cứu sau đó

Hình 1.7 Kỹ thuật bắt và giữ thỏ theo cách 1

- Cách 2: cho con vật rúc đầu vào vùng khuỷu tay và ôm chặt vào người Cách này thường dùng trong trường hợp cần chuyển thỏ từ chuồng này sang chuồng khác ở khoảng cách ngắn

Hình 1.8 Kỹ thuật bắt và giữ thỏ theo cách 2

- Cách 3: Dùng hộp nhốt thỏ Hộp nhốt thỏ thường làm bằng gỗ hoặc bằng thép không

gỉ có khoét lỗ để thuận tiện cho việc cố định phần đầu thỏ Toàn bộ phần thân thỏ được giữ trong hộp, phần đầu thỏ được để ở bên ngoài hộp và khoảng giữa đầu và thân thỏ có một thanh hãm để cố định đầu thỏ không cho thỏ rụt đầu vào hộp nhưng đảm bảo thỏ vẫn có khả năng hít thở dễ dàng Dụng cụ này rất thuận tiện cho các thao tác tiêm hoặc lấy máu vùng tai Thỏ cũng có thể được giữ bằng cách sử dụng một chiếc khăn quấn quanh cơ thể và tùy vào yêu cầu của từng thí nghiệm mà có thể để lộ những phần trên cơ thể thỏ cần thao tác

Hình 1.9 Giữ thỏ bằng hộp nhốt thỏ theo cách 3

2 2 Kỹ thuật tiêm và cho động vật uống thuốc

Có nhiều đường đưa thuốc vào cơ thể động vật nghiên cứu, thông thường là tiêm tĩnh mạch, tiêm bắp, tiêm dưới da, tiêm phúc mạc và đường uống

2.2.1 Kỹ thuật tiêm thuốc

Trước khi tiêm thuốc cần làm sạch vị trí tiêm, sát trùng bằng cồn 70o Chọn kích cỡ bơm và kim tiêm phù hợp với từng loại động vật và lượng thuốc cần đưa vào

cơ thể Hiện nay thường dùng bơm và kim tiêm 1 lần để đảm vô trùng và kim nhọn sắc

dễ thực hiện thao tác hơn Lưu ý, nên chọn loại kim nhỏ nhất có thể để hạn chế tổn thương mô nơi tiêm và gây đau cho động vật

2.2.1.1 Kỹ thuật tiêm tĩnh mạch

 Tiêm tĩnh mạch đu i chuột

Để tiêm tĩnh mạch đuôi chuột nên sử dụng kim và bơm tiêm loại 1 ml Các bước thao tác như sau:

- Lấy thuốc vào bơm tiêm

- Nhốt chuột vào hộp thò đuôi ra ngoài, xoa nhẹ nhàng đuôi chuột để giãn nở mạch máu, sát trùng vị trí cần tiêm

- Tay trái cầm đuôi chuột, tay phải cầm bơm tiêm đã lấy thuốc Đặt kim tiêm chếch

1 góc 20 độ vào vị trí tĩnh mạch đuôi ở khoảng 1/3 chiều dài đuôi chuột tính từ chóp đuôi Đưa kim nhẹ nhàng vào sâu tĩnh mạch Cần phải kiểm tra xem đã đưa kim vào đúng tĩnh mạch hay chưa bằng cách kéo pít-tông lại, nếu máu được hút vào bơm tiêm

là đúng Từ từ bơm thuốc vào tĩnh mạch cho đến khi hết thuốc (hình 1.10)