NGHIÊN cứu KHẢ NĂNG ức CHẾ QUÁ TRÌNH SINH ACID của STREPTOCOCCUS MUTANS từ DỊCH CHIẾT lá SIM

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ HƯNG NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ QUÁ TRÌNH SINH ACID CỦA STREPTOCOCCUS MUTANS TỪ DỊCH CHIẾT LÁ SIM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KÝ THUẬT Y HỌC KHOÁ 2012 - 2016 HẢI PHÒNG - 2016 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ HƯNG NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ QUÁ TRÌNH SINH ACID CỦA STREPTOCOCCUS MUTANS TỪ DỊCH CHIẾT LÁ SIM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành sinh học phân tử Hướng dẫn khoa học : Ts Bạch Thị Như Quỳnh HẢI PHÒNG - 2016 LỜI CẢM ƠN Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy cô Ban giám hiệu, Phòng đào tạo đại học, môn trường Đại học Y Dược Hải Phòng dìu dắt, dạy dỗ năm học qua Tôi xin trân trọng cảm ơn TS.BS Nguyễn Hùng Cường - chủ nhiệm khoa Kỹ thuật y học, - phó khoa Kỹ thuật y học thầy cô khoa tận tình dạy dỗ suốt năm học tập Xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Bạch Thị Như Quỳnh- người hướng dẫn nghiên cứu hoàn thành khóa luận Bước đầu làm quen với phương pháp nghiên cứu khoa học, thầy dạy cho từ điều Ở thầy học tập tính chủ động công việc lòng nhiệt huyết với nghề Sự nhiệt tình giúp đỡ thầy khiến thêm động lực vượt qua khó khăn để hoàn thành khóa luận cách tốt Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc TS Nguyễn Thị Mai Phương - Viện công nghệ sinh học, người giúp đỡ nhiều thực hoàn thành quy trình kỹ thuật khóa luận Con muốn thể lòng biết ơn tới công lao sinh thành, nuôi nấng cha mẹ Cảm ơn gia đình, người thân yêu sát cánh bên con, quan tâm, động viên tạo điều kiện cho học tập Cuối muốn gửi lời cảm ơn tới người bạn giúp đỡ nhiều học tập sống Hải Phòng, ngày 30 tháng năm 2016 Sinh viên Đỗ Thị Hưng CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIÊT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN CAM ĐOAN Kính gửi: - Ban giám hiệu trường Đại học Y Dược Hải Phòng - Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp khoa Kỹ thuật y học trường Đại học Y Dược Hải Phòng Tôi xin cam đoan kết quả, số liệu trình bày khóa luận tốt nghiệp hoàn toàn trung thực, khách quan, không chép từ nghiên cứu khác Hải Phòng, ngày 30 tháng năm 2016 Người viết Đỗ Thị Hưng MỤC LỤC .38 DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG CHỮ VIẾT TẮT ADS DNA EPS EtO FDI GTF Gtf HIV MeOH OD PCR PTS TLC TSA UV Arginine deiminase Deoxyribonucleic acid Extracellular polysacharides Acethyl acetate Federal Dental International Glucosyltransferase Glucosyltransferase Human immunodeficiency virus Methanol Optical Density Polymerase chain reaction Phosphotransferase system Thin layerchromatography Tryptic soy agar Ultra Violet ĐẶT VẤN ĐỀ Sâu bệnh miệng phổ biến có xu hướng ngày tăng lên nước phát triển Tổ chức Y tế giới cảnh báo mức độ phổ biến bệnh sau bệnh tim mạch ung thư [9] Theo số liệu (09/2012) Hội Răng Hàm Mặt Việt Nam, thực tế có tới 90% dân số Việt Nam đối mặt với vấn đề miệng, phổ biến sâu dẫn đến [10] Đây tỷ lệ thuộc hàng cao giới Ngay nước phát triển Hoa Kỳ, tỷ lệ sâu tới 84% lứa tuổi niên Trong năm qua, chi phí cho việc chăm sóc, sửa chữa Việt Nam lên tới nhiều tỷ đồng Bệnh sâu vi khuẩn mảng bám sử dụng carbonhydrate để lên men tạo acid, chủ yếu lactic Môi trường acid sẽ phá vỡ cân hệ vi khuẩn đường miệng Khi lượng acid đủ lớn sẽ hòa tan chất khoáng có men dẫn đến làm mòn men răng, tạo thành hố gây sâu [27] Streptococcus mutans xác định tác nhân gây sâu người S mutans phát tất mảng bám răng, có số lượng cao vùng sâu nguyên nhân chủ yếu dẫn đến bệnh sâu [27] Do đó, S mutans sử dụng đối tượng điển hình cho nghiên cứu sâu Hàng loạt biện pháp khác nhằm ngăn chặn bệnh sâu nghiên cứu ứng dụng như: sử dụng chất kháng khuẩn, sử dụng chất thay đường; sử dụng liệu pháp thay thế; sử dụng vaccine Trong đó, biện pháp sử dụng chất kháng khuẩn để kiểm soát sâu tỏ hữu hiệu Tuy nhiên, việc sử dụng lâu dài chất kháng khuẩn có chất hoá học thường gây phản ứng phụ không mong muốn làm đổi màu răng, tạo chủng kháng chất kháng khuẩn trường hợp fluor hay chlorhexidine [31] Vì thế, việc tìm kiếm sử dụng chất kháng khuẩn tự nhiên, đặc biệt chất có nguồn gốc thực vật quan tâm chúng chất thay nhiều triển vọng [5], [6], [26] Ở Việt Nam, việc nghiên cứu chất kháng khuẩn sâu tự nhiên quan tâm Nghiên cứu Nguyễn Quang Huy cộng [4] cho thấy dịch chiết từ vỏ Sao đen (Hopea odorata Roxb), Sắn thuyền (Syzygium polyanthum (Wight) Walp có tác dụng ức chế trình sinh acid, diệt khuẩn hay kìm hãm hoạt độ enzyme F-ATPase, PTS chủng S mutans GS-5 S mutans H2 phân lập từ người Việt Nam [4] Trong năm gần đây, nhóm nghiên cứu Voravuthikunchai cộng [28], [29], [30], [35], [36] phát thấy dịch chiết sim (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) có khả ức chế hình thành biofilm Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis tốt dùng chất kháng sinh vancomycin Ngoài ra, dịch chiết gây ức chế sinh trưởng hàng loạt vi khuẩn có S mutans Những số liệu nghiên cứu ban đầu gợi ý dịch chiết sim có chứa chất kháng khuẩn sâu triển vọng Xuất phát từ tồn chung, xu hướng nghiên cứu nay, để góp phần khai thác nguồn nguyên liệu tự nhiên phong phú nước ta, thực đề tài: “Nghiên cứu khả ức chế trình sinh acid vi khuẩn streptococcus mutans từ dịch chiết sim (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk” với mục tiêu chính: - Đánh giá khả kháng vi khuẩn S mutans thông qua khả ức chế sự sinh axit dịch chiết sim - Thu nhận phân đoạn có hoạt tính kháng vi khuẩn sâu 10 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 BỆNH SÂU RĂNG VÀ VI KHUẨN STREPTOCOCCUS MUTANS 1.1.1 Tình hình sâu giới Việt Nam Sâu bệnh gây phá hủy cấu trúc Nếu không chữa trị kịp thời sẽ dẫn đến đau răng, răng, nhiễm trùng bệnh miệng nguy hiểm khác Bệnh sâu có lịch sử phát triển từ lâu, chứng khảo cổ học cho thấy bệnh bắt đầu xuất từ thời kỳ trung cổ Sâu phát triển với thay đổi điều kiện sinh hoạt chế độ ăn uống người ngày nay, trở thành bệnh phổ biến toàn giới [3] Theo thống kê, 90% trẻ em toàn giới hầu hết người trưởng thành có vấn đề miệng Sâu phổ biến nước châu Á châu Mỹ La Tinh, nước châu Phi nơi có tỷ lệ người mắc bệnh thấp [4] Ở Hoa Kỳ, sâu bệnh kinh niên thường gặp trẻ em Mức độ phổ biến bệnh cao gấp lần so với bệnh hen suyễn, vốn bệnh giới quan tâm tính phổ biến nguy hiểm Gần 20% trẻ em từ đến tuổi có xuất lỗ hổng chân [5] Đây nguyên nhân gây nên trẻ em Không trẻ em, sâu bệnh phổ biến tất lứa tuổi Theo thống kê tạp chí sức khỏe miệng WebMD (2008) [6, 7], 80% thiếu niên độ tuổi 17 xuất lỗ nhỏ li ti bề mặt Khoảng 2/3 người trưởng thành từ 35-44 tuổi có nhiều lỗ hổng Ở người 75 tuổi, có 50% số người có nhiều bị sâu chân Việt Nam xếp vào nhóm nước có tỷ lệ trẻ em mắc bệnh miệng cao giới Kết điều tra sức khỏe miệng toàn quốc [6] Viện Răng Hàm Mặt Hà Nội Đại học Adelaide (Ôxtrâylia) tiến hành gần cho thấy 90% dân số Việt Nam bị sâu mắc bệnh răng, đặc biệt tập trung lứa tuổi từ 35-44 (Hình 1) Tỷ lệ sâu sữa trẻ em 34 Hình 3.8 Sơ đồ phân tách phân đoạn chiết có hoạt tính quan tâm sau qua cột sắc ký silica gel 35 Hoạt tính ức chế sinh acid phân đoạn kiểm tra máy đo pH nhằm xác định phân đoạn có chứa chất quan tâm Kết thu hình 3.9 p H Hình 3.9 Ảnh hưởng phân đoạn tinh Sa, Sb Sc lên acid vi khuẩn S mutans Đối chứng(); Sa (); Sb (); Sc () Thời gian (phút) - Giá trị pH cuối thời điểm 135 phút thu phân đoạn lần - lượt 4,95 (C); 4,80 (B); 4,34 (A) 3,92 (đối chứng) Các phân đoạn Sb Sc có hoạt tính quan tâm cao so với phân đoạn Sa - đối chứng, gợi ý chúng chứa chất có hoạt tính quan tâm nhiều Độ phân đoạn kiểm tra TLC Kết thu (Hình 3.10) Sc Sb Hình 3.10 Sắc ký đồ phân đoạn Sb Sc cột sắc ký silica gel sử dụng hệ dung môi hexane : acetone (5 : 2) 36 Kết thu (Hình 3.13) cho thấy phân đoạn Sc có thành phần chất thể qua số vạch sắc ký rõ rệt so với phân đoạn Sb 37 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN Streptococcus mutans xác định tác nhân gây sâu người.Vi khuẩn mang hai đặc tính gây bệnh đặc biệt, khả sinh, chịu acid cao sinh polysaccharide ngoại bào (EPS) mạnh EPS khung để tạo thành mảng bám răng, có tính chất biofilm sinh học Sâu bệnh liên quan viêm lợi (gingivitis), viêm quanh (periodontitis) thuộc số bệnh gây biofilm Do đó, S mutans sử dụng đối tượng điển hình cho nghiên cứu sâu Như vậy, nói kiểm soát sâu kiểm soát đặc tính gây bệnh S mutans, hay nói cách khác tìm kiếm chất kháng khuẩn có khả ức chế sinh acid (antiacidogeneic agents) ức chế tạo biofilm (anti-biofilm agents) S mutans Các hợp chất tự nhiên chiết xuất từ thực vật xem có nhiều tiềm ứng dụng thực tế Các nghiên cứu phát thấy hợp chất polyphenol chè xanh (Camellia sinensis L.) có khả chống sâu thông qua chế ức chế trình đường phân ức chế hoạt độ enzyme glucosyltransferase (GTF) enzyme có vai trò tạo glucan, sở để hình thành mảng bám Lopes & cs[136] phát thấy acid tannic (một polyphenol từ thực vật) có khả ức chế hình thành gốc •OH phản ứng Fenton có mặt ion Fe2+ Nhiều loại dịch chiết thực vật nghiên cứu thử nghiệm khả chống sâu răng, ức chế hình thành mảng bám Ở Việt Nam, nghiên cứu chất kháng khuẩn sâu tự nhiên tiến hành năm gần Nghiên cứu Nguyễn Thị Mai Phương cộng [5], [6], [35] cho thấy chất α-mangostin từ dịch chiết vỏ măng cụt ức chế tới 50% hoạt độ enzyme phosphotransferase system (PTS), F-ATPase, NADH oxidase enzyme trình đường phân nồng độ µM Nghiên cứu Nguyễn Quang Huy cộng [4] cho thấy dịch chiết từ vỏ Sao đen (Hopea odorata Roxb), Sắn thuyền (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.) chất tinh gồm acid asiatic, hopea phenol, malibatol A thu từ dịch chiết có tác dụng ức chế trình sinh acid, diệt 38 khuẩn hay kìm hãm hoạt độ enzyme F-ATPase, PTS chủng S mutans GS-5 S mutans H2 phân lập từ người Việt Nam [4] Các nghiên cứu gần cho thấy dịch chiết sim Thái Lan ethanol acetone có tính kháng khuẩn cao, đặc biệt với vi khuẩn Staphylococus arueus kháng methilciliine Ngoài ra, dịch chiết thể hoạt tính kháng biofilm thông qua việc ức chế hệ thống QSS [30], [36] Điều gợi ý dịch chiết sim chứa chất kháng sâu Vì vậy, tiến hành kiểm tra hoạt tính kháng vi khuẩn S mutans, tác nhân gây sâu chủ yếu người, dịch chiết ethanol sim trồng Việt Nam thông qua việc tìm hiểu khả ức chế sinh acid vi khuẩn S mutans 4.1 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG VI KHUẨN S MUTANS THÔNG QUA ỨC CHẾ SỰ SINH ACID (ỨC CHẾ SỰ GIẢM PH MÔI TRƯỜNG ) Vi khuẩn S mutans xem tác nhân gây sâu khả sinh acid cao (chủ yếu acid lactic), đặc biệt môi trường dư thừa glucose Chính acid hóa mảng bảm (thậm chí đến pH 4,0) dẫn đến làm mòn men gây sâu Vì vậy, hoạt tính ức chế sinh acid vi khuẩn xem thí nghiệm khởi đầu để khảo sát tác dụng bảo vệ hợp chất cần quan tâm Trong thí nghiệm này, tế bào đưa vào môi trường dư thừa glucose, trình glycolysis sinh acid bị dừng lại pH thấp thiếu chất đường phân glucose Hoạt tính ức chế sinh acid vi khuẩn S mutans đánh giá thông qua việc xác định khả ức chế giảm pH môi trường tế bào S mutans xử lý với dịch chiết nghiên cứu Kết nghiên cứu trình bày hình 3.1 Số liệu thu cho thấy dịch chiết sim ức chế rõ rệt sinh acid vi khuẩn S mutans Giá trị pH cuối thu với dịch chiết nồng độ 0,01; 0,05; 0,1; 0,3 % 3,94; 4,69; 4,94 5,1 mẫu đối chứng (không xử lý dịch chiết) 3,5 Như vậy, dịch chiết ethanol sim trồng Việt Nam có khả 39 ức chế sinh axit S mutans.Vì vậy, tiến hành phân lập chất có hoạt tính sinh học quan tâm từ đối tượng thực vật 4.2 THU NHẬN PHÂN ĐOẠN CÓ HOẠT TÍNH KHÁNG VI KHUẨN SÂU RĂNG Sau kiểm chứng đối tượng nghiên cứu (lá sim) có chất mang hoạt tính quan tâm (chất có khả ức chế sinh acid S mutans), bước tiến hành tách chiết dung môi có độ phân cực khác Dung môi có độ phân cực khác sẽ hòa tan chất có độ phân cực khác Sử dụng tính chất nghiên cứu tiến hành phân tách dịch chiết sim trongvới dung môi: - Hexane: độ phân cực thấp - Ethyl acetate (EtOAc): độ phân cực trung bình - Methanol (MeOH): độ phân cực cao Nguyên liệu dạng bột mịn (3 kg) chiết rút theo tỉ lệ kg nguyên liệu: lit dung môi tương ứng Mỗi loại dung môi tiến hành chiết rút lần (Hình 3.3) Cao chiết thu sau cô cất quay chân không sử dụng để phân tích sơ thành phần dịch chiết sắc ký lớp mỏng (hình ?) đánh giá hoạt tính kháng sinh acid S Mutans (hình?) Kết nghiên cứu cho thấy dịch chiết dung môi EtOAc chứa thành phần chất phức tạp (chạy TLC cho vạch hơn), khả ức chế trình sinh acid phân đoạn tốt nhất: sau 105 phút giữ pH dung dịch 5,3 pH dịch chiết hexane, MeOH, mẫu đối chứng là: 4,7; 4,7; đồng thời khối lượng cao chiết thu nhiều (79,63 g) nên lựa chọn cho bước tinh 4.3.TINH SẠCH PHÂN ĐOẠN QUAN TÂM BẰNG CỘT SẮC KÝ CHÂN KHÔNG (QCC) VÀ CỘT SẮC KÝ SILICA GEL Sắc ký chân không thường sử dụng để phân tách nhanh chất có nguyên liệu Phương pháp cho phép phân tách khối 40 lượng lớn nguyên liệu ban đầu Với khối lượng cao khô phân đoạn EtOAc lên tới 79,63g, sử dụng cột QCC (hình 3.7) để tiến hành phân tách nhanh Hệ dung môi sử dụng bước sắc ký bao gồm: 12 phân đoạn (hình 3.7) Các phân đoạn phân tách F1 – F12 (Hình 3.8; 3.9) sau thu lại, làm khô tiến hành đánh giá hoạt tính kháng sinh acid S mutans Hình 4.1 Các phân đoạn phân tách sau sắc ký chân không QCC dịch chiếtlá sim EtOAc Kết kiểm tra hoạt tính kháng sinh acid 12 phân đoạn phân tách thu (Bảng 3.1) cho thấy phân đoạn tương ứng với hệ dung môi EtOAc 10% EtOAc 20% có hoạt tính ức chế sinh acid S mutans cao Vì hai phân đoạn dồn lại để tiếp tục phân tách chất quan tâm kỹ thuậtsắc ký cột silica gel 41 Hình 4.2 Cột sắc ký silica gel phân đoạn sim sau qua cột QCC Hai phân đoạn F2 F3 thu sau quay cất khô có khối lượng tổng cộng 25,3 g đưa lên cột sắc ký silica gel có kích thước x 50 cm (Hình 4.2) Hệ dung môi phù hợp để tách chất quan tâm cột silica gel thử nghiệm lựa chọn EtOAc 10% hexane Các phân đoạn rửa cột 100 ml thu lại, kiểm tra thành phần TLC, tiến hành dồn phân đoạn có phổ TLC giống quay cất khô chân không Cuối cùng, phân đoạn chiết sau bước sắc ký thu lại, ký hiệu Sa (11,92 g); Sb (5,63 g); Sc (4,92 g) tiến hành đánh giá hoạt tính quan tâm (Hình 3.8) Các phân đoạn Sb Sc có hoạt tính quan tâm cao so với phân đoạn Sa đối chứng, gợi ý chúng chứa chất có hoạt tính quan tâm nhiều Độ phân đoạn kiểm tra TLC Kết thu (Hình 3.10) cho thấy phân đoạn Sc có thành phần chất thể qua số vạch sắc ký rõ rệt so với phân đoạn Sb Có số thời điểm pH đo dung dich thời điểm sau lại cao thời điểm trước ( phân đoạn Sa pH thời điểm 80 phút 4,3 pH sau 20 phút thời điểm 100 phút lại cao 4,4) Tuy nhiên, sai số ngẫu nhiên ý nghĩa thống kê Như vậy, sau qua cột sắc ký QCC CC, độ phân đoạn tăng lên qua bước phân tách Tuy nhiên, chất quan tâm chưa tinh hoàn toàn Phân đoạn Sc có hoạt tính quan tâm mạnh có độ cao phân đoạn Sb Điều gợi ý lựa chọn phân đoạn cho nghiên cứu sâu ảnh hưởng lên hoạt tính enzyme liên quan đến sinh chống chịu acid hình thành cấu trúc biofilm vi khuẩn S mutans Như vậy, phần nghiên cứu khẳng định dịch chiết lá sim có hoạt tính kháng vi khuẩn sâu S mutans cao Khả chúng có chứa chất ức chế trình sinh acid vi khuẩn S.mutans, tác nhân gây sâu người 42 Do thời gian thực khóa luận có hạn, việc tinh hoàn toàn xác định cấu trúc hoá học chất quan tâm chưa thực Điều sẽ cho phép xác định chế kháng khuẩn chất quan tâm Là sở cho việc ứng dụng chất việc tạo sản phẩm vệ sinh miệng tương lai Các bước nghiên cứu nhóm nghiên cứu Ts Nguyễn Thị Mai Phương cộng Viện công nghệ sinh học Việt Nam tiếp tục thực 43 KẾT LUẬN - Đã xác định dịch chiết sim ethanol, methanol, ethyl acetate hexane có khả kháng vi khuẩn sâu thông qua việc ức chế sinh acid - Phân đoạn ethyl acetate có hoạt tính kháng sinh acidmạnh so với phân đoạn hexane methanol - Đã thu nhận phân đoạn Sc từ phân đoạn chiết ethyl acetate thông qua bước sắc ký là: (i) sắc ký chân không (ii) sắc ký cột silica gel sử dụng phương pháp rửa chiết bước rửa chiết gradient 44 KIẾN NGHỊ - Tiếp tục tinh phân đoạn Sc để thu nhận chất kháng vi khuẩn sâu tinh - Nghiên cứu sâu chế kháng sinh acid chất tinh định hướng ứng dụng 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Arodzinxki A M., Arodzinxki D M (1981), Sách tra cứu tóm tắt sinh lý thực vật , Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học Hà Nội, tr 567 - 568 Nguyễn Quang Huy (2009), “Nghiên cứu tác dụng số chất thứ cấp từ thực vật lên vi khuẩn gây sâu Streptococcus mutans’’, Luận án Tiến sỹ Sinh học Nguyễn Thị Mai Phương, Phan Tuấn Nghĩa, Nguyễn Thị Ngọc Dao, Đặng Minh Phương (2003), "Tác dụng dịch chiết vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) lên vi khuẩn sâu Streptococcus mutans", Hội nghị Khoa học Sự sống lần thứ 2, Huế, tr 983 - 986 Nguyễn Thị Mai Phương, Phan Tuấn Nghĩa, Đỗ Ngọc Liên, Nguyễn Thị Ngọc Dao (2004), "Thành phần polyphenol vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) tác dụng ức chế sinh acid vi khuẩn sâu Streptococcus mutans", Tạp chí Dược học, (44), tr 18 - 21 Nguyễn Thị Mai Phương (2005), Nghiên cứu ảnh hưởng số chất kháng khuẩn lên trình sinh lý hoá sinh vi khuẩn gây sâu Streptococcus mutans, Luận án Tiến sỹ Sinh học Nguyễn Thị Thịnh (2008), Nghiên cứu đáp ứng với stress oxi hóa vi khuẩnStreptococcus mutans, Luận án thạc sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, Hà Nội Trần Văn Trường, Trịnh Đình Hải, Spencer J A., Thomson R K (2002), “Điều tra sức khoẻ miệng toàn quốc Việt Nam 1999 - 2000”, Tạp chí Y học Việt Nam, 8, tr - 10 TÀI LIỆU TIẾNG ANH 46 10 Belli W A and Marquis R E (1991), Adaptation of Streptococcus mutans and Enterococcus hirae to acid stress in continuous culture Appl Environ Microbiol 57(4), pp 1134 – 1138 11 Bowen W H., Koo H (2011), “Biology of Streptococcus mutans - derived glucosyltransferases: role in extracellular matrix formation of cariogeneic biofilms”, Caries Res, 45, pp.69-86 12 Chen C P., Lin C C., Namba T (1989), “Screening of Taiwanese drugs for antibacterial activity against Streptococcus mutans”, J Ethnopharmacol, 27, pp 285 - 295 13 Dewhirst F E , Chen T., Izard J., Paster B J., Tanner A C., Yu W H., Lakshmanan A., Wade W G (2010), “The human oral microbiome”, J Bacteriol, 192: 5002 - 5017 14 Duckworth R M., Morgan S N., Murray A M (1987), “Fluoride in saliva and plaque following use of fluoride-containing mouthwashes”, J Dent Res, 59, pp.1187 – 1191 15 Hamilton - Miller J M T (2001), “Anti-cariogenic properties of tea (Camellia sinensis)”, J Med Microbiol, 50, pp 299 - 302 16 Hardie J M (1992), “Oral microbiology: current concepts in the microbiology of dental caries and periodontal disease”, Brit Dent J, 172, pp 271 – 278 17 Iio M., Uyeda M., Iwanani T., Nakagawa Y (1984), “Flavonoids as a possible preventive of dental caries”, Agric Biol Chem, 48, pp 2143 – 2145 18 Keyes P H (1960), “Infections and transmissible nature of experimental dental caries”, Arch Oral Biol., 1, pp 304 - 320 19 Loesche W J (1986), “Role of Streptococcus mutans in human dental decay”, Microbiol Rev, 50(4), pp 353 – 380 47 20 Limsuwan S., Hesseling-Meinders A., Voravuthikunchai S P., van Dijl J M., Kayser O (2011), “Potential antibiotic and anti - infective effects of rhodomyrtone from Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk on Streptococcus pyogenes as revealed by proteomics’’, Phytomedicine, 18(11), pp 934 - 940 21 Limsuwan S., Kayser O., Voravuthikunchai S P (2012), “Antibacterial activity of Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk leaf extract against clinical isolates of Streptococcus pyogenes’’, Evid Based Complement Alternat Med.; 697183 22 Marquis R E., Burne R A (2001), “Biofilm acid/base physiology and gene expression in oral bacteria”, Methods Enzymeol, 337, pp 403 - 415 23 Marsh P and Marin M V (2000), “Oral Microbiology th edition”, Reed Education and professional publishing Ltd, USA 24 Nguyen P T M and Marquis R E (2011), “Antimicrobial actions of alpha - mangostin against oral Streptococci”, Can J Microbiol, 57(3), pp 217 - 225 25 Nguyen P T M., Baldzac J D., Olslo J., Marquis R.E (2005), “Antimicrobial actions of benzimidazoles against oral bacteria”, Oral Microl Immunol, 20, pp – 26 Quivey R G., Kuhnert W L and Hahn K (2000), “Adaptation of oral streptococci to low pH”, Adv Microbiol Physiol, 42, pp 239 - 274 27 Saising J., Ongsakul M., Voravuthikunchai S P (2011), “Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk ethanol extract and rhodomyrtone: a potential strategy for the treatment of biofilm-forming staphylococci’’, J Med Microbiol, 60(Pt 12), pp 1793 - 1800 28 Sheng J., Marquis R E (2006), “Enhanced axit resistance of oral streptococci at lethal pH values associated with axit-tolerant catabolism and with ATP synthase activity”,FEMS Microbiol Lett.,262, pp 93 – 98 29 Vasavi H S., Arun A B., Rekha P D (2013), “Inhibition of quorum sensing in Chromobacterium violaceum by Syzygium cumini L and Pimenta dioica L.”, Asian Pac J Trop Biomed, 3(12), pp 954 – 959 30 Wilson M (1996), “Susceptibility of oral bacterial biofilms to antimicrobial agents”, J Med Microbiol, 44, pp 79 - 87 48 31 Xiao J., Koo H (2010), “Structural organization and dynamics of exopolysaccharide matrix and microcolonies formation by Streptococcus mutans in biofilms”,J Appl Microbiol, 108, pp 2103 – 2113 ... 3.1 KHẢ NĂNG ỨC CHẾ QUÁ TRÌNH SINH ACID TRÊN S MUTANS CỦA DỊCH CHIẾT LÁ SIM Kết nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết sim lên sinh acid vi khuẩn S mutans trình bày hình 3.1 Hình 3.1 Khả ức chế sinh acid. .. HỌC Y DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ HƯNG NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ QUÁ TRÌNH SINH ACID CỦA STREPTOCOCCUS MUTANS TỪ DỊCH CHIẾT LÁ SIM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Chuyên ngành sinh học phân tử Hướng dẫn khoa... pH mẫu đối - chứng Như vậy, phân đoạn dịch chiết sim có khả ức chế chế trình sinh acid S Mutans số phân đoạn chiết dịch chiết EtOAC có hoạt tính ức chế sinh acid vi khuẩn mạnh 31 3.2.2 Tinh phân