Phân lập, tuyển chọn một số chủng vi khuẩn cố định đạm cao trong tự nhiên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o TRẦN THỊ NGA Tên đề tài: PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CỐ ĐỊNH ĐẠM CAO TRONG TỰ NHIÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Khoa : CNSH & CNTP Khóa học : 2012 – 2016 Thái Nguyên, năm 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o TRẦN THỊ NGA Tên đề tài: PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CỐ ĐỊNH ĐẠM CAO TRONG TỰ NHIÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo :Chính quy Chuyên ngành:Công nghệ sinh học Lớp :K44 - CNSH Khoa :CNSH & CNTP Khóa học :2012 – 2016 Giảng viên hƣớng dẫn: TS Trần Văn Chí Thái Nguyên, năm 2016 i LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực tập phòng Công nghệ Lên men, Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, em nhận nhiều giúp đỡ từ Ban chủ nhiệm Khoa CNSH - CNTP, thầy cô hướng dẫn, bạn bè gia đình Trước hết, em xin chân thành cảm ơn sâu sắc tới TS Trần Văn Chí, giảng viên Khoa CNSH - CNTP, tạo điều kiện, hướng dẫn tận tình giúp đỡ em hoàn thành khoá luận Em xin gửi lời cảm ơn tới ThS Vi Đại Lâm, giảng viên Khoa CNSH CNTP, người hướng dẫn em thao tác thực hành cho em sai lầm giúp em hoàn thành tốt khoá luận Em xin chân thành cảm ơn đến thầy cô Khoa CNSH - CNTP, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tận tình bảo, giúp đỡ em trình học tập hoàn thành khoá luận Cuối em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, người bên cạnh động viên giúp đỡ em suốt thời gian thực khoá luận Em xin chân thành cảm ơn! Thái nguyên, ngày 20 tháng 05 năm 2016 Sinh viên thực Trần Thị Nga ii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1.Các nhóm vi sinh vật tổng hợp IAA chất dẫn xuất 10 Bảng 2.2 Sự diện vi khuẩn Azosprillum số loại hoa màu 16 Bảng 3.1: Các hóa chất sử dụng nghiên cứu 26 Bảng 3.2: Các thiết bị sử dụng thí nghiệm 27 Bảng 3.3: Môi trường thạch Burk’ không đạm 27 Bảng 3.4: Môi trường thạch Ashby 27 Bảng 3.5: Môi trường Dobereiner cộng 28 Bảng 3.6: Môi trường nước chiết khoai tây (BMS) 28 Bảng 4.1: Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, kích thước vi khuẩn cố định đạm phân lập 36 Bảng 4.2:Khả cố định nitơ chủng vi khuẩn phân lập 38 Bảng 4.3: Hàm lượng đạm chủng vi khuẩn ĐT1 môi trường Dobereiner lỏng 39 Bảng 4.4.Kết đo OD IAA chuẩn nồng độ khác 40 Bảng 4.5 kết đo OD chủng ĐT1 qua thời gian 41 Bảng 4.6 Đặc điểm hình thái, Gram chủng vi khuẩn ĐT1 43 Bảng 4.7 Đặc điểm sinh lý sinh hóa chủng vi khuẩn ĐT1 43 Bảng 4.8 Kết đo mật độ tế bào chủng ĐT1 sau 48h mức sóng 660nm 45 Bảng 4.9 Kết định danh sơ chủng vi khuẩn cố định đạm (ĐT1) phân lập 46 Bảng 4.10 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến mật độ tế bào chủng ĐT1 sau 0h 48h nuôi cấy 46 Bảng 4.11 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến sinh khối chủng ĐT1 48 Bảng 4.12 ảnh hưởng pH ban đầu đến sinh trưởng chủng ĐT1 49 Bảng 4.13 Kết đo mật độ tế bào môi trường thay chủng ĐT1 .50 iii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 4.1 Chủng vi khuẩn ĐT1 tuyển chọn sau ngày môi trường Ashby .39 Hình 4.2 Đồ thị đường tương quan tuyến tính hàm lượng IAA chuẩn OD530nm 40 Hình 4.3 Đồ thị hàm lượng IAA chủng ĐT1 sinh qua thời gian 41 Hình 4.4 Các ống nghiệm chứa nồng độ IAA(µg/ml) chuẩn khác phản ứng với thuốc thử Salkowski .42 Hình 4.5 Phản ứng màu IAA với thuốc thử salkowski chủng ĐT1 nuôi cấy ngày 42 Hình 4.6 Hình dạng khuẩn lạc tế bào chủng ĐT1 43 Hình 4.7 Thử nghiệm khả quan hệ với oxy khả sinh khí chủng ĐT1 .44 Hình 4.8 Khả sử dụng nguồn carbon môi trường dịch thể Dobereiner chủng ĐT1 44 Hình 4.9 Biểu đồ ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến chủng ĐT1 47 Hình 4.10 Đồ thị ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến sinh khối chủng ĐT1 48 Hình 4.11 Biểu đồ ảnh hưởng pH đến sinh trưởng chủng vi khuẩn ĐT1 49 iv DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT ATP: Adenosin Triphosphat DNA: Deoxyribonucleic acd IAA: Indole – – acetic acid OD: Optical Density RNA: Ribonucleic acid v MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH iii DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài .3 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn .3 PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .4 2.1.Cơ sở khoa học 2.1.1 Đạm 2.1.2 Auxin (IAA) 2.1.3 Tổng quan vi khuẩn cố định nitơ 11 2.1.4 Một số vi khuẩn có khả cố định đạm tổng hợp auxin .15 2.2 Tình hình nghiên cứu nước 20 2.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 20 2.2.2 Nghiên cứu nước 22 PHẦN 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 26 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 26 3.3 Hóa chất thiết bị sử dụng .26 3.3.1 Hóa chất 26 3.3.2 Thiết bị sử dụng 27 3.4 Môi truờng sử dụng 27 3.5 Nội dung nghiên cứu 28 3.6 Phương pháp nghiên cứu 29 vi 3.6.1 Phương pháp thu thập mẫu 29 3.6.2 Phương pháp phân lập tuyển chọn 29 3.6.3 Phương pháp mô tả đă ̣c điể m hin ̀ h thái , đă ̣c điể m sinh ho ̣c của các chủng vi khuẩ n cố đinh ̣ đa ̣m .32 3.6.4 Nghiên cứu sử dụng môi trường thay .35 3.6.5 Phương pháp định danh sơ 35 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 4.1 Kết nghiên cứu phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả cố định đạm cao tự nhiên 36 4.1.1 Kết phân lập chủng vi khuẩn có khả cố định đạm cao tự nhiên 36 4.1.2 Kết tuyển chọn 38 4.2 Kết nghiên cứu khả sinh IAA chủng ĐT1 40 4.3 Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng vi khuẩn ĐT1 42 4.4 Kết định danh sơ chủng vi khuẩn ĐT1 phân lập 45 4.5 Kết nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến sinh khối chủng ĐT1 46 4.5.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh khối chủng ĐT1 46 4.5.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến sinh khố chủng ĐT1 48 4.5.3 Nghiên cứu ảnh hưởng pH ban đầu đến sinh trưởng chủng vi khuẩn ĐT1 49 4.6 Kết nghiên cứu sử dụng môi trường thay 50 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Kiến nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Nitơ có vai trò đặc biệt quan trọng sinh trưởng, phát triển trồng định suất chất lượng thu hoạch Nitơ có thành phần hầu hết chất cây: protein, axit nucleic, sắc tố quang hợp, hợp chất dự trữ lượng: ADP, ATP, chất điều hoà sinh trưởng ,… Như nitơ vừa có vai trò cấu trúc, vừa tham gia trình trao đổi chất lượng Nitơ có vai trò định đến toàn trình sinh lý trồng Nitơ tự nhiên tồn dạng: N hữu cơ, N vô nitơ dạng tự do(N2) khí Cây chủ yếu hút N vô cơ, dạng N2 khí không đồng hóa trực tiếp mà phải nhờ cố định vi sinh vật đất Dạng nitơ vô mà đồng hóa nitrat (NO3-) amon (NH4+) [29] Nitơ nguyên tố dinh dưỡng quan trọng thiếu không trồng, mà vi sinh vật (VSV) Nguồn dự trữ nitơ tự nhiên lớn Người ta ước tính bầu không khí bao trùm lên 1ha đất đai chứa khoảng triệu nitơ, lượng nitơ cung cấp dinh dưỡng cho trồng hàng chục triệu năm (nếu đồng hóa chúng) Trong thể loại sinh vật trái đất chứa khoảng 10 – 25.109 nitơ Trong vật trầm tích chứa khoảng 4.1015 tỷ nitơ Nhưng tất nguồn nitơ trồng tự đồng hóa mà phải nhờ VSV Thông qua hoạt động loài VSV nitơ nằm dạng khác chuyển hóa thành dạng dễ tiêu cho trồng sử dụng Hàng năm trồng lấy từ đất hàng trăm triệu nitơ Bằng cách bón phân,con người trả lại cho đất khoảng > 40%, lượng thiếu hụt lại bổ sung nitơ hoạt động sống VSV cố định nitơ [31] Người ta nhận thấy muốn có thu hoạch 12 tạ hạt hecta, trồng cần lấy khỏi đất khoảng 30kg nitơ Hiệu suất sử dụng phân hóa học trồng vào khoảng 75% Như có nghĩa dựa vào nguồn nitơ phân hoá học muốn có hạt phải bón vào hecta khoảng 116,6kg nitơ (tương đương với 833kg amôn sunphát) Số lượng nitơ thật khó thỏa mãn nước có công nghiệp phân nitơ hóa học phát triển [10] Vậy làm để trả lại độ phì nhiêu cho đất mà đảm bảo tiêu chuẩn suất chất lượng cho trồng? Đó sử dụng sản phẩm phân bón vi sinh vật cố định nitơ đa chủng từ nguồn khác nhau, giải pháp hay giải vấn đề Tại Ấn Độ, sử dụng phân vi sinh vật cố định nitơ cho lúa, cao lương, làm tăng suất trung bình 11,4%, 18,2% 6,8% hay mang lại lợi nhuận 1015 rupi, 1149 rupi 343 rupi/ Tại Liên Bang Nga, bón chế phẩm VSV cố định nitơ cho tăng suất khoai tây 12,8 tạ/ha, tăng suất cà chua 28,0 tạ/ha, tăng suất ngô hạt 22,4 tạ/ha, tăng suất bắp cải 72,5 tạ/ha Ở Việt Nam thử nghiệm sử dụng phân vi sinh vật cố định nitơ hội sinh 15 tỉnh miền Bắc, miền Trung, miền Nam diện tích hàng chục ngàn cho thấy điều kiện sản xuất, ruộng lúa bón phân VSV cố định nitơ đề tốt so với đối chứng, biểu phát triển tốt hơn, tỉ lệ nhánh hữu hiệu, số bông/khóm nhiều đối chứng Năng suất hạt tăng so với đối chứng – 12%, nhiều nơi đạt 15 – 20% Những ruộng bón phân VSV cố định nitơ giảm bớt 1kg đạm ure cho sào, suất tăng so vớ đối chứng Đối với rau (xà lách, rau diếp, khoai tây…) bón phân VSV cố định nitơ làm tăng sản lượng thu hoạch 20- 30% Việc bón phân VSV cố định nitơ làm tăng khả chống chịu cho giảm lượng nitơ tồn dư rau Hiệu kinh tế sử dụng phân VSV cố định nitơ rõ rệt Ngoài tác dụng phân VSV thông qua hoạt chất sinh học chúng có tác dụng điều hòa, kích thích trình sinh tổng hợp trồng, đồng thời nâng cao sức đề kháng trồng số sâu, bệnh hại.( nghiên cứu khoai tây) [31] Do việc nghiên cứu phân lập vi sinh vật cố định nitơ cần thiết [33] Phạm Văn Toản, Phạm Bích Hiên (2003), “Nghiên cứu tuyển chọn số chủng Azotobacter có hoạt tính sinh học sử dụng cho sản xuất phân bón vi sinh vật chức năng”, Báo cáo Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc, Hà Nội tháng 12/2003, tr 266-270 [34] Lâm Minh Tú, Trần Văn Tuân, (2003), “Nghiên cứu sản xuất phân bón vi sinh đơn chủng hay đa chủng ứng dụng cho số trồng”, Báo cáo hội nghị CNSH toàn quốc [35] Lê Văn Tri, (2000) Phân phức hợp hữu vi sinh, Nxb Nông Nghiệp [36] Nguyễn Kim Vũ, Nguyễn Ngọc Quyên, Nguyễn Thu Hà, Phạm Văn Toản, Trần Tú Thủy (1999), Một số phương pháp lưu giữ chủng vi sinh vật cố định nitơ, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Tài liệu Tiếng Anh [37] Abbas Akbari Gh, Seyyed Mehdi Arab; H.A Alikhani, I; Allahdadi and M.H Arzanesh (2007) Isolation and Selection of Indigenous Azospirillum spp and the IAA of Superior Strains Effects on Wheat Roots World Journal of Agricultural Sciences (4): 523-529 [38] Abdel Wahap A.M., and P F Wareing (1980) Nitrogenase activity associated with the rhizosphere of inoculation of seedlings with Azotobacter New Phytol, 84, 711-721 [39] Andres D Naiman, Alejandra Latro’nico, Ine’s E Garci’a de Salamone ( 2009), “Inoculation of wheat with Azospizillum brasilense and Pseudomonas fluorescens: Impact on the production and culturable rhizosphere microflora”, European Journal of Soil Biology, Vol 45, pp 44-45 [40] Bashan Y, Holgui G(1997), “Azospirillum – plat relationships: environmental and physiologycal advances (1990-1996)”, Can.J Microbiol,pp 103-121 [41] Bennasar, A., C Guasp, M Tesar, and J Lalucat 1998 Genetic relationships among Pseudomonas stutzeri strains based on molecular typing methods J Appl Microbiol 85:643-656 [42] Bilal, R, G.Roul, j.A Qureshi and K.A Mail R 1990 Chareterization of Azospirillum and related diazotrophs associated with roots of plants growing in saline soils, world j Microbiol 6:46 – 52 [43] Boddey RM, Urquiaga S, Reis VM, DSbereiner J 1991 Biological nitrogen fixation associated with sugar cane Plant and Soil 137, 111-17 [44] Caballero – Mellado, J., L Martimez – Aguilar and G Paredes – Valdez 2004 BurKholderia uname sp Nov., an N2 – fixing rhizospherie and endophytic, Int J Syst EvolMierobiol 54: 1165 – 1172 [45] Caballero-Mellado J, Onofre-Lemus J, Estrada-de los Santos P, MartínezAguilar L (2007) The tomato rhizosphere, an environment rich in nitrogenfixing Burkholderia species with capabilities of interest for agriculture and bioremediation Appl Environ Microbiol 73:5308–5319 [46] Cassán F, Maiale S, Masciarelli O, Vidal A, Luna V, Ruiz O 2009 Cadaverine production by Azospirillum brasilense and its possible role in plant growth promotion and osmotic stress mitigation Eur J Soil Biol 45:12–19 10.1016/j.ejsobi.2008.08.003 Microsoft Academic search 21 [47] Cattenlla A.J.,Hartel P.G And Fuhrmann J.J.(1999), Screening for plant growth-promoting rhizobacteria to promote early soybean growth Soil.Sci.Soc.Am.,63:1670-1680 [48] Chan Y.,W.L Barraquio and R Knowles 1994 “ N2-fixing Pseudomonas spp and ralated soibacteria” FEMS Microbiology Review 13:95-118 [49] Coenye T, Vandamme P (2003) Diversity and significance of Burkholderia species occupying diverse ecological niches Environ Microbiol 5(9):719-29 [50] Dekhil, S B., M Cahill, E Stackebrandt and LI Sly 1997 Transfer of Conglomeromonas largomobiliz subsp largomobiliz to the genus Azospirillum as Azospirillum largomobile com nov., and elevation of Conglomeromonas largomobiliz subsp parooensis to the new type species of Conglomeromonas, Conglomeromonas parooensis sp nov, syst Appl Microbiol 20: 72-77 [51] Dobereiner J., Reis J and Lazarini A.C 1988 Newnitrogen fixing baeteriain asociation with cereals and sugar cane In: Nitrogen fixation : Humdred.years After (Bothe H., de Bruijin F.J and Newton W.E esd), Grusra V Fisher, shuttgart, 721 - 722 [52] Eckert, B., Weber, O B., Kirchhof, G., Halbritter, A., Stoffels, M & Hartmann, A (2001) Azospirillum doebereinerae sp nov., a nitrogen fixing bacterium associated with the C4-grass Miscanthus Int J Syst Evol Microbiol 51, 17–26 [53] El Komy HMA (2005) Coimmobilization of Azospirillum lipoferum and Bacillums megaterium for successful phosphorus and nitrogen nutrition of wheat plants Food Tech Biotechnol 43:19-27 [54] El Zemrany, H., Cortet, J., Peter Lutz, M., Chabert, A., Baudoin, E., Haurat, J., Maughan, N., Felix, D et al (2006) Field survival of the phytostimulator Azospirillum lipoferum CRT1 and functional impact on maize crop, biodegradation of crop residues, and soil faunal indicators in a context of decreasing nitrogen fertilisation Soil Biol Biochem 38, 1712–1726 [55] Elazar Fallik, Yaacov Okon (1996) Inoculants of Azospirillum brasilense: Biomass production, survival and growth promotion of Setaria italica and Zea mays [56] Fabricio Cassa’na, Diego Perriga, Vero’nica Sgroya, Oscar Masciarellia, Claudio Pennab, Virginia Lunaa (2009), “Azospirillum brasilense Az39 and Bradyrhizobium japonicum E109, inoculate singly or in combination, promote seed germination and early seedling growth in corn (Zea mays L.) and soybean (Glycine max L.)”, European journal of Soi Biology, Vol 45, pp 28 – 35 [57] Fulchieri M, Lucangeli C, Bottini R (1993) Inoculation with A lipoferum affects growth and gibberellin status of corn seedlings roots Plant Cell Physiol l34: 1305–1309 [58] Garrity, George (2005), Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology, Volume 2: The Proteobacteria (PartA), Springer, New York [59] Glick BR The enhancement of plant growth by free-living bacteria Can J Microbiol 1995;41:109–117 [60] Guasp, C., Moore, E R B., Lalucat, J & Bennasar, A (2000) Utility of internally transcribed 16S–23S rDNA spacer regions for the definition of Pseudomonas stutzeri genomovars and other Pseudomonas species Int J Syst Evol Microbiol 50, 1629–1639 [61] Huub Haaker anh Cees Veeger (1976) Ivolvement of the cytoplasmic membrane in Nitrogen Fixation by Azotobacter vinelandii, Eur J Biochem 77, 1-10 [62] Khammas K M., E Ageron, P A D Grimont and P Kaiser 1989 Azospirillum irakense sp nov., a nitrogen-fixing organism associated with rice roots and rhizosphere soil, Res Microbiol 140 [63] Kloepper JW, Lifshitz R, Zablotowicz RM Free-living bacterial inocula for enhancing crop productity Trends Biotechnol 1989;7 [64] Lalucat; Bennasar, A; Bosch, R; García-Valdés, E; Palleroni, NJ; et al (2006) "Biology of Pseudomonas stutzeri" Microbiol Mol Biol Rev 70 (2): 510–47 [65] Lin S-Y,Young C-C, Hupfee H et al (2009) Azospirillum thiophilum picis sp nov., isolated from discarded tar Int J Syst Evol Microbiol 59: 761-765 [66] Luna MF, CF Miganone and JL Brardi 2000 The carbon sourceinfluences the energetieeffeieney of the respiratory chain of N2 – fixing Acetobaeter diazotrophicus Appl Microbiol Bioteehnol.54.564-569 [67] Magalhaes F M., J J Baldani, S.M Souto, J K Kuykendall and J.Dobereiner 1983 A new acid-tolerant Azospirillum species , An Acad Bras.Cienc 55 [68] MaliK RA, Tefaye S, Thompson SD et al (1994) Transperjneurial abnormalities in the sural nerve of patients with diabetie neuropathy Mierovase Res :48:236 -245 [69] Martínez-Aguilar L, Díaz R, Peña-Cabriales JJ, Estrada-de los Santos P, Dunn MF, Caballero-Mellado J (2008) Multichromosomal genome structure and confirmation of diazotrophy in novel plant-associated Burkholderia species Appl Environ Microbiol 74:4574–4579 [70] Mehnaz, S., Weselowski, B & Lazarovits, G (2007) Azospirillum canadense sp nov., a nitrogen-fixing bacterium isolated from corn rhizosphere Int J Syst Evol Microbiol 57, 620–624 [71] O'Sullivan LA1, Mahenthiralingam E (2005) Biotechnological potential within the genus Burkholderia Lett Appl Microbiol;41(1):8-11 [72] Peng, G., Wang, H., Zhang, G., Hou, W., Liu, Y., Wang, E T & Tan, Z.(2006) Azospirillum melinis sp nov., a group of diazotrophs isolatedfrom tropical molasses grass Int J Syst Evol Microbiol 56 [73] Puneet K.; Sohal R.P (1998) “Effect of innoculation of Azotobacter and PSN on fertilizer economy, plant growth and yield of winter maize”, Nitrogen fixation with non legumes, Kluwer Academic Publisher,pp 271-273 [74] Rangarajan S, Saleena, LM, Nair S (2000) Diversity of pseudomonads isolated from rice rhizospheres populations grown along a salinity gradient.J.Appl Microbiol 91:742-749 [75] Reinhold B., T Hurek, I Fendrik, B Pots, M Gillis, K Kersters, S.Thielemans and J Deley 1987 Azospirillum halopralferens sp nov., anitrogen-fixing organism associated with the roots of Kallar grass (Leptochloa fusca L.Kurth), Int J.Syst Bacteriol 37: 43 – 51 [76] Rius N, Fusté MC, Guasp C, Lalucat J Lorén JG Clonal population structure of Pseudomonas stutzeri, a species with exceptional genetic diversity J Bacteriol 2001;183:736–744 [77] Rossello´ , R A., Garci´a-Valde´ s, E., Lalucat, J & Ursing, J (1991) Genotypic and phenotypic diversity of Pseudomonas stutzeri Syst Appl Microbiol 14, [78] Scar pella E, Rueb S and Meijer AH 2003 The Radi-Cleless1 gene is required for vascular pattern formation in rice Development 130: 645–658 [79] Weber, O B., Baldani, V L D., Teixeira, K R S., Kirchhof, G., Baldani, J I & Do¨ bereiner, J (1999) Isolation and characterization of diazotrophic bacteria from banana and pineapple plants Plant Soil 210, 103–113 [80] Shabave V P., Smolin V Y., Strekozova V I, (1991), The effects of Azotobacter brasilense sp7 and Azotobacter chroococcum on nitrogen blance in soil under cropping with oats Biology and Fertility of Soils, pp 290 - 292 [81] Sikorski, J., Moehle, M & Wackernagel, W (2002) Identification of complex composition, strong strain diversity and directional selection in local Pseudomonas stutzeri populations from marine sediment and soils Environ Microbiol 4, 465–476 [82] Stoltzfus JR, R So, PP Malarvithi, JK Ladha and FJ de Bruijn 1997 Isolation of endophytic bacteria from rice and assessment of their potential for supplying rice with biologically fixed nitrogen Plant Soil 194:25-36 [83] Su, J.J., B.Y Liu and Y.C Chang, 2001 Indentifying an interfering factor on chemical oxygen demand (COD) determination in piggery wastewater and eliminating the factor by an indigenous Pseudomonas stutzeri strain Applied Microbiology, 33(6), 440-444 [84] Tarrand, J J., Krieg, N R & Do¨ bereiner, J (1978) A taxonomic study of the Spirillum lipoferum group, with descriptions of a new genus, Azospirillum gen nov., and two species, Azospirillum lipoferum (Beijerinck) comb nov and Azospirillum brasilense sp nov Can J Microbiol 24, [85] Theologis A, Ray PM 1982 Early auxin-regulated polyadenylated mRNA sequences in pea stem tissue Proc Natl Acad Sci 79: 418 [86] Van Tran, V., Mavingui, P., Berge, O., Balandreau, J & Heulin, T (1994) Promotion de croissance du riz inocule´ par une bacte´rie fixatrice d’azote, Burkholderia vietnamiensis, isole´e d’un sol sulfate´ acide du Viet-nam Agronomie 14, 697–707 [87] Van Tran, V., Berge, O., Ngo Ke, S., Balandreau, J., and Heulin, T 2000 Repeated beneficial effects of rice inoculation with a strain of Burkholderia vietnamiensis on early and late yield component in low fertility sulphate acid soils of Vietnam Plant Soil, 218: 273–284 [88] Van Niel, C B., and M B Allen 1952 A note on Pseudomonas stutzeri J Bacteriol 64:413-422 [89] Vivek Kuman, Rishi Kumar Behl and Narula (2001) Establishment of phosphat solubilizing strains of Azotobacter chroococcum in the rhizosphere and their effect on wheat cultivars under green house conditions.Microbiol.Res 156, 87- 93 [90] Weber, O B., Baldani, V L D., Teixeira, K R S., Kirchhof, G., Baldani, J I & Do¨ bereiner, J (1999) Isolation and characterization of diazotrophic bacteria from banana and pineapple plants Plant Soil 210, 103–113 [91] Xie, C.-H & Yokota, A (2005) Azospirillum oryzae sp nov., a nitrogenfixing bacterium isolated from the roots of the rice plant Oryza sativa Int J Syst Evol Microbiol 55, 1435–1438 [92] Young, C C., Hupfer, H., Siering, C., Ho, M.-J., Arun, A B., Lai, W.-A., Rekha, P D., Shen, F.-T., Hung, M.-H & other authors (2008) Azospirillum rugosum sp nov., isolated from oil-contaminated soil Int J Syst Evol Microbiol 58, 959–963 Tài liệu mạng [93] https://en.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas_stutzeri [94] https://en.wikipedia.org/wiki/Klebsiella [95] https://vi.wikipedia.org/wiki/Auxin PHỤ LỤC CT HLĐ NL 1 7,8 19,72 119,17 7,78 2 19,94 119,33 7,5 19,95 3 119,23 Bảng 4.3 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HLÐ FILE B43 16/ 5/** 13:37 PAGE VARIATE V003 HLÐ LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 22466.7 * RESIDUAL 11233.4 106537 ****** 0.000 177561E-01 * TOTAL (CORRECTED) 22466.8 2808.35 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B43 16/ 5/** 13:37 PAGE MEANS FOR EFFECT CT - CT NOS HLÐ 7.69333 19.8700 3 119.243 SE(N= 3) 5%LSD 6DF 0.769331E-01 0.266124 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B43 16/ 5/** 13:37 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 9) SD/MEAN | HLÐ NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | 48.936 CT 52.994 0.13325 | | | | | 0.3 0.0000 MĐ NL 1 0,037 0,338 0,014 0,354 0,037 2 0,339 0,015 0,357 0,038 0,338 3 0,014 0,354 Bảng 4.9 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MÐ FILE B49 16/ 5/** 13:55 PAGE VARIATE V003 MÐ LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 310012 * RESIDUAL 103337 ****** 0.000 800783E-05 100098E-05 * TOTAL (CORRECTED) 11 310020 281837E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B49 16/ 5/** 13:55 PAGE MEANS FOR EFFECT CT - CT NOS MÐ 0.373333E-01 0.338333 3 0.143333E-01 0.355000 SE(N= 3) 0.577633E-03 5%LSD 8DF 0.188360E-02 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B49 16/ 5/** 13:55 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | MÐ NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | 12 0.18625 0.16788 | | | | 0.10005E-02 0.5 0.0000 | CT NL 0h 48h 1 0,008 0,353 0,006 0,213 0,009 0,361 0,009 0,433 0,008 0,356 2 0,007 0,216 0,009 0,365 0,009 0,429 0,007 0,351 0,007 0,214 3 0,009 0,361 0,01 0,436 Bảng 4.11 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 0H FILE B411 16/ 5/** 14:17 PAGE VARIATE V003 0H LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 136667E-04 455555E-05 18.22 0.001 * RESIDUAL 200000E-05 250000E-06 * TOTAL (CORRECTED) 11 156667E-04 142424E-05 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 48H FILE B411 16/ 5/** 14:17 PAGE VARIATE V004 48H LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT * RESIDUAL 751620E-01 250540E-01 ****** 0.000 526717E-04 658396E-05 * TOTAL (CORRECTED) 11 752147E-01 683770E-02 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B411 16/ 5/** 14:17 PAGE MEANS FOR EFFECT CT - CT NOS 0H 48H 0.766667E-02 0.353333 0.666667E-02 0.214333 3 0.900000E-02 0.362333 0.933333E-02 0.432667 SE(N= 3) 0.288675E-03 0.148144E-02 5%LSD 8DF 0.941341E-03 0.483081E-02 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B411 16/ 5/** 14:17 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | | 0H 12 0.81667E-020.11934E-020.50000E-03 6.1 0.0008 48H 12 0.34067 0.82690E-010.25659E-02 0.8 0.0000 | CT NL 0h 24 48 72 1 0,008 0,298 0,453 0,849 0,011 0,102 0,364 0,596 0,009 0,103 0,382 0,701 0,009 0,299 0,454 0,849 2 0,012 0,106 0,364 0,597 0,008 0,101 0,382 0,701 0,009 0,3 0,452 0,848 0,013 0,104 0,365 0,597 3 0,008 0,101 0,381 0,703 Bảng 4.14 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 0H FILE THNH 16/ 5/** 14:42 PAGE VARIATE V003 0H LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 246667E-04 123333E-04 22.20 0.002 * RESIDUAL 333333E-05 555556E-06 * TOTAL (CORRECTED) 280000E-04 350000E-05 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 24 FILE THNH 16/ 5/** 14:42 PAGE VARIATE V004 24 LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 769709E-01 384854E-01 ****** 0.000 * RESIDUAL 126777E-04 211296E-05 * TOTAL (CORRECTED) 769836E-01 962294E-02 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 48 FILE THNH 16/ 5/** 14:42 PAGE VARIATE V005 48 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 132507E-01 662533E-02 ****** 0.000 * RESIDUAL 333520E-05 555866E-06 * TOTAL (CORRECTED) 132540E-01 165675E-02 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 72 FILE THNH 16/ 5/** 14:42 PAGE VARIATE V006 72 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 961380E-01 480690E-01 ****** 0.000 * RESIDUAL 399664E-05 666106E-06 * TOTAL (CORRECTED) 961420E-01 120177E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE THNH 16/ 5/** 14:42 PAGE MEANS FOR EFFECT CT - CT NOS 0H 24 48 72 0.866667E-02 0.299000 0.453000 0.848667 0.120000E-01 0.104000 0.364333 0.596667 3 0.833333E-02 0.101667 0.381667 0.701667 SE(N= 3) 5%LSD 6DF 0.430332E-03 0.839237E-03 0.430452E-03 0.471206E-03 0.148859E-02 0.290306E-02 0.148900E-02 0.162998E-02 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE THNH 16/ 5/** 14:42 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 9) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS | | | | 0H 0.96667E-020.18708E-020.74536E-03 7.7 0.0021 24 0.16822 0.98097E-010.14536E-02 0.9 0.0000 48 0.39967 0.40703E-010.74556E-03 0.2 0.0000 72 0.71567 0.10963 0.81615E-03 0.1 0.0000 ... tài: Phân lập, tuyển chọn số chủng vi khuẩn cố định đạm cao tự nhiên 1.2 Mục đích đề tài - Phân lập tuyển chọn số chủng vi khuẩn cố định đạm cao tự nhiên 1.3 Yêu cầu đề tài - Phân lập tuyển chọn. .. nghiên cứu phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả cố định đạm cao tự nhiên 36 4.1.1 Kết phân lập chủng vi khuẩn có khả cố định đạm cao tự nhiên 36 4.1.2 Kết tuyển chọn ... chọn chủng vi khuẩn có khả cố định đạm cao, khảo sát khả sinh chất kích thích sinh trưởng IAA chủng vi khuẩn cố định đạm tự nhiên - Nghiên cứu đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng vi khuẩn tuyển chọn