NGHIÊN CỨU THU NHẬN HOẠT CHẤT KÌM HÃM α- GLUCOSIDAZA TỪ ASPERGILLUS ORYZAE VÀ HƯỚNG ỨNG DỤNG

Header Page of 148 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC TIẾN NGHIÊN CỨU THU NHẬN HOẠT CHẤT KÌM HÃM α- GLUCOSIDAZA TỪ ASPERGILLUS ORYZAE VÀ HƯỚNG ỨNG DỤNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội - 2015 Footer Page of 148 Header Page of 148 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC TIẾN NGHIÊN CỨU THU NHẬN HOẠT CHẤT KÌM HÃM α- GLUCOSIDAZA TỪ ASPERGILLUS ORYZAE VÀ HƯỚNG ỨNG DỤNG Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 62420201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS HOÀNG ĐÌNH HÒA PGS.TS QUẢN LÊ HÀ Hà Nội - 2015 Footer Page of 148 Header Page of 148 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực công trình nghiên cứu nhận nhiều giúp đỡ, đóng góp ý kiến bảo chân tình Thầy Cô, bạn đồng nghiệp Cơ quan Trước hết cho phép bày tỏ lòng cảm ơn chân thành đến Giáo Sư Tiến Sĩ Hoàng Đình Hòa, Phó Giáo Sư Tiến Sĩ Quản Lê Hà, người hướng dẫn, bảo, động viên giúp đỡ tận tình suốt trình thực luận án Tôi xin cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Cơ điện nông nghiệp Công nghệ sau thu hoạch thuộc Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn giúp đỡ trình thực đề tài hoàn thành luận án Tôi xin cảm ơn Sở khoa học Công nghệ Hà Nội cấp kinh phí cho tôi, giúp đỡ trình thực đề tài hoàn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn đến Thầy cô Viện Công Nghệ Sinh Học Thực Phẩm - Trường Đại Học Bách khoa Hà Nội giúp đỡ suốt trình làm luận án Tôi xin cảm ơn đồng nghiệp làm việc động viên giúp đỡ thời gian thực đề tài hoàn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn Giáo Sư, Phó Giáo Sư, Tiến Sĩ chủ tịch hội đồng, phản biện Ủy viên hội đồng dành nhiều thời gian quý báu để đọc tham gia hội đồng chấm luận án với góp ý cụ thể, gợi ý bổ ích, giúp hoàn tất tốt nội dung nghiên cứu luận án Bên cạnh đó, xin gửi lời biết ơn đến bố mẹ, gia đình người thân với tất tình yêu khuyến khích, ủng hộ dành cho chặng đường để hoàn thành luận án nghiên cứu Tác giả luận án NGUYỄN ĐỨC TIẾN Footer Page of 148 Header Page of 148 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố công trình khác Hà Nội, ngày 18 tháng 03 năm 2015 Tập thể giáo viên hướng dẫn GS.TS HOÀNG ĐÌNH HÒA PGS.TS QUẢN LÊ HÀ Footer Page of 148 Tác giả luận án NGUYỄN ĐỨC TIẾN Header Page of 148 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Nội dung Đối tượng phạm vi nghiên cứu Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học tính thực tiễn luận án Bố cục luận án Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh đái tháo đường (ĐTĐ) 1.1.1 Khái niệm ĐTĐ 1.1.2 Phương pháp điều trị bệnh ĐTĐ 1.2 Cơ sở khoa học việc sử dụng AGIs đến trình trao đổi đường thể 1.2.1 Enzyme α-glucosidase 1.2.1.1 Sơ lược enzyme 1.2.1.2 Giới thiệu enzyme α - glucosidase 1.2.2 Cơ sở khoa học sử dụng AGIs để điều trị bệnh ĐTĐ 1.3 Chất kìm hãm α-glucosidase (alpha-Glucosidase inhibitor) (AGIs) 11 1.3.1 Các AGIs từ tổng hợp 12 1.3.2 AGIs từ động vật 12 1.3.3 AGIs từ thực vật 12 1.3.4 AGIs từ vi sinh vật 14 1.3.5 AGIs từ A.oryzae 15 1.4 Đỗ đen sản phẩm lên men bề mặt từ đậu đỗ 16 1.4.1 Đỗ đen 16 1.4.2 Sản phẩm lên men bề mặt từ đậu đỗ 17 1.5 A.oryzae lên men bề mặt 19 Footer Page of 148 Header Page of 148 1.5.1 Đặc điểm hình thái A.oryzae 19 1.5.2 Ảnh hưởng thành phần môi trường đến sinh trưởng hình thành AGIs A.oryzae 21 1.5.2.1 Ảnh hưởng nguồn carbon 22 1.5.2.2 Ảnh hưởng nguồn nitơ 23 1.5.2.3 Ảnh hưởng nguồn khoáng dinh dưỡng 23 1.5.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh trưởng hình thành AGIs A.oryzae 24 1.5.3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy 24 1.5.3.2 Độ ẩm môi trường 24 1.5.3.3 Ảnh hưởng độ thoáng khí 25 1.5.3.4 Điều kiện pH ban đầu môi trường 25 1.5.3.5 Tỷ lệ giống 26 1.5.3.6 Thời gian lên men 27 1.6 Thu nhận AGIs 27 1.6.1 Chiết xuất AGIs từ sản phẩm môi trường sau lên men 27 1.6.2 Tinh AGIs 29 1.7 Ứng dụng sóng siêu âm chiết xuất 30 1.8 Nghiên cứu, thử nghiệm ứng dụng AGIs từ đậu đỗ lên men giới 35 1.9 Nghiên cứu ứng dụng AGIs Việt Nam 39 Chương 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 41 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu 41 2.1.1 Các nguồn vi sinh vật vật liệu 41 2.1.2 Hóa chất 41 2.1.3 Môi trường 42 2.1.3.1 Môi trường nuôi cấy phân lập giữ giống 42 2.1.3.2 Môi trường nghiên cứu định loại Aspergillus 42 Footer Page of 148 Header Page of 148 2.1.3.3 Môi trường đậu đỗ giá thể rắn 42 2.1.3.4 Các môi trường rắn cho nhân giống 42 2.1.3.5 Đỗ đen lên men 43 2.1.4 Thiết bị 43 2.1.5 Địa điểm thời gian nghiên cứu 43 2.1.5.1 Địa điểm nghiên cứu 43 2.1.5.2 Thời gian nghiên cứu 43 2.2 Phương pháp phân tích đo đạc 44 2.2.1 Phương pháp xác định mật độ tế bào nấm mốc 44 2.2.2 Xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase 44 2.2.2.1 Xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase môi trường sau lên men theo phương pháp Yamaki Mori (2006) 44 2.2.2.2 Xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase dịch chiết xuất dung môi 45 2.2.2.3 Phương pháp xác định hoạt tính kìm hãm α-glucosidase theo Toomoyuki cộng sự, (1999) 45 2.2.2.4 Hoạt lực kìm hãm α-glucosidase (giá trị IC50) 45 2.2.3 Xác định hàm lượng protein, lipit, carbonhydrate độ ẩm sản phẩm thực phẩm 46 2.2.4 Phương pháp phân tích cảm quan 46 2.2.5 Phương pháp tính toán, đánh giá hiệu tinh chế phẩm AGIs kỹ thuật 47 2.2.6 Phương pháp phân tích tiêu an toàn thực phẩm 47 2.2.7 Phương pháp phân tích xử lý số liệu 47 2.3 Phương pháp nghiên cứu 48 2.3.1 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát 48 2.3.2 Tuyển chọn A.oryzae có hoạt tính kìm hãm α-glucosidase cao 49 2.3.2.1 Phân lập A.oryzae 49 2.3.2.2 Tuyển chọn chủng nấm có hoạt tính kìm hãm α-glucosidase cao 50 Footer Page of 148 Header Page of 148 2.3.2.3 Định danh chủng nấm tuyển chọn dựa so sánh trình tự gen vùng ITS1 - 5,8S - ITS2 50 2.3.3 Xác định số yếu tố ảnh hưởng tới sinh trưởng A.oryzae T6 nhân giống môi trường rắn 52 2.3.3.1 Ảnh hưởng thành phần chất môi trường rắn đến sinh trưởng A.oryzae T6 52 2.3.3.2 Ảnh hưởng thành phần tỷ lệ trấu môi trường rắn đến sinh trưởng A.oryzae T6 52 2.3.3.3 Ảnh hưởng độ ẩm ban đầu môi trường nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 52 2.3.3.4 Ảnh hưởng pH ban đầu môi trường nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 52 2.3.3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 52 2.3.3.6 Ảnh hưởng độ dày khối môi trường nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 53 2.3.3.7 Ảnh hưởng thời gian nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 53 2.3.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 53 2.3.4.1 Ảnh hưởng nguồn chất môi trường lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 53 2.3.4.2 Ảnh hưởng thành phần tỷ lệ cám gạo bổ sung vào môi trường lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 53 2.3.4.3 Ảnh hưởng thành phần K2HPO4; KCL MgSO4 bổ sung vào môi trường lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 53 2.3.4.4 Ảnh hưởng pH ban đầu môi trường lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 54 2.3.4.5 Ảnh hưởng độ ẩm ban đầu môi trường lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 54 2.3.4.6 Ảnh hưởng độ đầy khối môi trường lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 54 Footer Page of 148 Header Page of 148 2.3.4.7 Ảnh hưởng lượng giống ban đầu lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 54 2.3.4.8 Ảnh hưởng nhiệt độ lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 55 2.3.4.9 Sự biến động AGIs trình lên men A.oryzae T6 55 2.3.5 Chiết xuất AGIs từ đỗ đen lên men sử dụng sóng siêu âm 55 2.3.5.1 Ảnh hưởng dung môi đến khả chiết xuất AGIs từ đỗ đen lên men 55 2.3.5.2 Ảnh hưởng nồng độ ethanol đến khả chiết xuất AGIs từ đỗ đen lên men 55 2.3.5.3 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi ethanol đỗ đen lên men đến khả chiết xuất AGIs 56 2.3.5.4 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến khả chiết xuất AGIs từ đỗ đen lên men: 56 2.3.5.5 Ảnh hưởng thời gian cường độ sóng siêu âm đến khả chiết xuất AGIs từ đỗ đen lên men 56 2.3.6 Tinh định lượng AGIs từ đỗ đen lên men 56 2.3.6.1 Khảo sát dung môi cho tinh sơ AGIs 56 2.3.6.2 Khảo sát nồng độ ethanol cho tinh sơ AGIs 57 2.3.6.3 Thu nhận AGIs 57 2.3.6.4 Tinh AGIs RP - HPLC 57 2.3.6.5 Xác định khối lượng phân tử trình tự amino acid AGIs khối phổ 57 2.3.6.6 Định lượng peptide AGIs RP - HPLC 58 2.3.7 Ứng dụng AGIs 58 2.3.7.1 Ảnh hưởng nhiệt độ cô, sấy tạo chế phẩm đến chất lượng chế phẩm AGIs 59 2.3.7.2 Đánh giá tiêu chất lượng, cảm quan an toàn thực phẩm chế phẩm AGIs 59 2.3.7.3 Thử nghiệm ứng dụng chế phẩm AGIs để tạo bột uống liền AGIs 60 Với A: T3; 61 Footer Page of 148 Header Page 10 of 148 2.3.8 Đề xuất công nghệ sản xuất chế phẩm AGIs từ đỗ đen xanh lòng lên men A.oryzae T6 62 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 63 3.1 Tuyển chọn A.oryzae có hoạt tính kìm hãm α-glucosidase cao 63 3.1.1 Phân lập Aspergillus oryzae 63 3.1.2 Tuyển chọn chủng nấm có hoạt tính kìm hãm α-glucosidase cao 64 3.1.3 Định danh chủng tuyển chọn dựa so sánh trình tự gen vùng ITS1- 5,8S - ITS2 66 3.2 Một số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng A.oryzae T6 nhân giống môi trường rắn 68 3.2.1 Ảnh hưởng thành phần chất môi trường rắn đến sinh trưởng A.oryzae T6 68 3.2.2 Ảnh hưởng thành phần tỷ lệ trấu môi trường rắn đến sinh trưởng A.oryzae T6 70 3.2.3 Ảnh hưởng độ ẩm ban đầu môi trường nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 71 3.2.4 Ảnh hưởng pH ban đầu môi trường nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 72 3.2.5 Ảnh hưởng nhiệt độ nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 73 3.2.6 Ảnh hưởng độ dày khối môi trường nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 74 3.2.7 Ảnh hưởng thời gian nhân giống đến sinh trưởng A.oryzae T6 76 3.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 77 3.3.1 Ảnh hưởng nguồn chất môi trường lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 77 3.3.2 Ảnh hưởng thành phần tỷ lệ cám gạo bổ sung vào môi trường lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 79 3.3.3 Ảnh hưởng thành phần K2HPO4, KCL MgSO4 bổ sung vào môi trường lên men đến khả hình thành AGIs A.oryzae T6 80 Footer Page 10 of 148 Header Page 160 of 148 144 Sequence ID: emb|FN823241.1|Length: 950Number of Matches: Query Sbjct 652 Query 61 Sbjct 592 Query 121 Sbjct 532 Query 181 Sbjct 472 Query 241 Sbjct 412 Query 301 Sbjct 352 Query 361 Sbjct 292 Query 420 Sbjct 232 Query 480 Sbjct 172 GTCCAGCCGGACCAGTACTCGCGGTGAGGCGGACCGGCCAGCCAGACCCAAGGTTCAACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTCCAGCCGGACCAGTACTCGCGGTGAGGCGGACCGGCCAGCCAGACCCAAGGTTCAACT 60 ACGAGCTTTTTAACTGCAACAACTTTAATATACGCTATTGGAGCTGGAATTACCGCGGCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACGAGCTTTTTAACTGCAACAACTTTAATATACGCTATTGGAGCTGGAATTACCGCGGCT 120 GCTGGCACCAGACTTGCCCTCCAATTGTTCCTCGTTAAGGGATTTAGATTGTACTCATTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCTGGCACCAGACTTGCCCTCCAATTGTTCCTCGTTAAGGGATTTAGATTGTACTCATTC 180 CAATTACGAGACCCAAAAGAGCCCCGTATCAGTATTTATTGTCACTACCTCCCCGTGTCG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAATTACGAGACCCAAAAGAGCCCCGTATCAGTATTTATTGTCACTACCTCCCCGTGTCG 240 GGATTGGGTAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTTGGATGTGGTAGCCGTTTCTCAGGCTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGATTGGGTAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTTGGATGTGGTAGCCGTTTCTCAGGCTC 300 CCTCTCCGGAATCGAACCCTAATTCCCCGTTACCCGTTGCCACCATGGTAGGCCACTATC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCTCTCCGGAATCGAACCCTAATTCCCCGTTACCCGTTGCCACCATGGTAGGCCACTATC 360 CTACCATCGAAAGTTGATAGGGCAGAAATTTGAATGAACCATCGCCGGCGCA-AGGCCAT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||| CTACCATCGAAAGTTGATAGGGCAGAAATTTGAATGAACCATCGCCGGCGCATAGGCCAT 419 GCGATTCGTTAAGTTATTATGAATCACCAAGGAGCCCCGAAGGGCATGGGTTTTTTATCT ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||||||||||| GCGATTCGTTAAGTTATTATGAATCACCAAGGAGCCCCGAAGGGCATTGGTTTTTTATCT AATAAATACACCCCTTCC |||||||||||||||||| AATAAATACACCCCTTCC 593 533 473 413 353 293 233 479 173 497 155 Hình PL.2 So sánh độ tương đồng trình tự nucleotide đoạn ADN vùng ITS1-5,8S-ITS2 chủng T6 với trình tự nucleotide A.oryzae công bố Ngân hàng liệu Quốc tế với mã số embFN823241.1 Footer Page 160 of 148 Header Page 161 of 148 145 A.oryzae strain SEMCC-3.248 18S ribosomal RNA gene, partial sequence Sequence ID: gb|HM064501.1|Length: 1770Number of Matches: Query Sbjct 668 Query 61 Sbjct 608 Query 121 Sbjct 548 Query 181 Sbjct 488 Query 241 Sbjct 428 Query 301 Sbjct 368 Query 361 Sbjct 308 Query 421 Sbjct 248 Query 481 Sbjct 188 GTCCAGCCGGACCAGTACTCGCGGTGAGGCGGACCGGCCAGCCAGACCCAAGGTTCAACT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GTCCAGCCGGACCAGTACTCGCGGTGAGGCGGACCGGCCAGCCAGACCCAAGGTTCAACT 60 ACGAGCTTTTTAACTGCAACAACTTTAATATACGCTATTGGAGCTGGAATTACCGCGGCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACGAGCTTTTTAACTGCAACAACTTTAATATACGCTATTGGAGCTGGAATTACCGCGGCT 120 GCTGGCACCAGACTTGCCCTCCAATTGTTCCTCGTTAAGGGATTTAGATTGTACTCATTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCTGGCACCAGACTTGCCCTCCAATTGTTCCTCGTTAAGGGATTTAGATTGTACTCATTC 180 CAATTACGAGACCCAAAAGAGCCCCGTATCAGTATTTATTGTCACTACCTCCCCGTGTCG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CAATTACGAGACCCAAAAGAGCCCCGTATCAGTATTTATTGTCACTACCTCCCCGTGTCG 609 549 489 240 429 GGATTGGGTAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTTGGATGTGGTAGCCGTTTCTCAGGCTC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGATTGGGTAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTTGGATGTGGTAGCCGTTTCTCAGGCTC 300 CCTCTCCGGAATCGAACCCTAATTCCCCGTTACCCGTTGCCACCATGGTAGGCCACTATC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCTCTCCGGAATCGAACCCTAATTCCCCGTTACCCGTTGCCACCATGGTAGGCCACTATC 360 CTACCATCGAAAGTTGATAGGGCAGAAATTTGAATGAACCATCGCCGGCGCAAGGCCATG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CTACCATCGAAAGTTGATAGGGCAGAAATTTGAATGAACCATCGCCGGCGCAAGGCCATG 420 CGATTCGTTAAGTTATTATGAATCACCAAGGAGCCCCGAAGGGCATGGGTTTTTTATCTA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||| CGATTCGTTAAGTTATTATGAATCACCAAGGAGCCCCGAAGGGCATTGGTTTTTTATCTA 480 ATAAATACACCCCTTCC ||||||||||||||||| ATAAATACACCCCTTCC 369 309 249 189 497 172 Hình PL.3 So sánh độ tương đồng trình tự nucleotide đoạn ADN vùng ITS1-5,8S-ITS2 chủng T6 với trình tự nucleotide A.oryzae công bố Ngân hàng liệu Quốc tế với mã số gbHM064501.1 Footer Page 161 of 148 Header Page 162 of 148 146 Conc.(x10) mAU 75 1(#1) Ch1 280nm 2(#1) Ch1 280nm 2(#2) Ch1 280nm 3(#1) Ch1 280nm 50 4(#1) Ch1 280nm 5(#1) Ch1 280nm 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 25 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 22.5 0.0 25000 50000 75000 100000 125000 150000 175000 200000 Area Hình PL.4 Đường chuẩn chất kìm hãm glucosydase Từ vùng diện tích píc suy đường tuyến tính: Y = aX + b a = 1.818422e-004 b = 11.18738 R^2 = 0.9771138 R = 0.9884907 External Standard Curve Fit Type:Linear Origin:Not Forced Weight:None Mean RF : 6.020700e-004 RF SD : 5.854472e-004 RF %RSD : 97.23906 25.0 27.5 Hình PL.5 Diện tích píc trùng sau chạy HPLC với nồng độ khác chất kìm hãm -glucosydase Bảng PL.3 Vùng diện tích píc với nồng độ khác chất kìm hãm -glucosydase Level Conc (mg/ml) Area 10 6225 20 31433 30 103323 40 171369 50 204929 - Định lượng sản phẩm AGIs dịch trích ly đỗ đen lên men đường chuẩn Conc.(x10) 5.0 Level 4.0 3.0 Bảng PL.4 Vùng diện tích sản phẩm glucosydase so sách với đường chuẩn Conc Mean Area SD %RSD Area 1 10 6225 20 38577 30 103323 103323 40 171369 171369 50 204929 204929 Area 6225 2.0 10102.97 26.18913 31433 1.0 0.0 25000 50000 75000 100000 125000 150000 175000 200000 Area Hình PL.6 Nồng độ sản phẩm sau lên men bề mặt đường chuẩn Footer Page 162 of 148 29862 Header Page 163 of 148 147 Hình PL.7 Đỗ đen xanh lòng nguyên liệu Hình PL.8 Cám gạo nguyên liệu Hình PL.10 Thiết bị chiết xuất Hình PL.9 Đỗ đen xanh lòng sau lên men A.oryzae T6 Hình PL.11 Thử độc tính cấp chế phẩm AGIs Footer Page 163 of 148 sóng siêu âm TJS-3000 intelligent Ultrasonic Generator V6 (tần số 20 kHz công suất tối đa 3000W) Hình PL.12 Sản phẩm bột uống liền Header Page 164 of 148 148 Phụ lục KQ KP: Xác định khối lượng phân tử trình tự axit amin peptide AGIs từ đỗ đen lên men (đỗ đen xanh lòng lên men A.oryzae T6) khối phổ Footer Page 164 of 148 Header Page 165 of 148 149 Footer Page 165 of 148 Header Page 166 of 148 150 Footer Page 166 of 148 Header Page 167 of 148 151 Footer Page 167 of 148 Header Page 168 of 148 152 Footer Page 168 of 148 Header Page 169 of 148 153 Footer Page 169 of 148 Header Page 170 of 148 154 Footer Page 170 of 148 Header Page 171 of 148 155 Footer Page 171 of 148 Header Page 172 of 148 156 Footer Page 172 of 148 Header Page 173 of 148 157 Footer Page 173 of 148 Header Page 174 of 148 158 Footer Page 174 of 148 ... Page of 148 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC TIẾN NGHIÊN CỨU THU NHẬN HOẠT CHẤT KÌM HÃM α- GLUCOSIDAZA TỪ ASPERGILLUS ORYZAE VÀ HƯỚNG ỨNG DỤNG Chuyên ngành: Công... HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Từ viết tắt AGIs alpha-Glucosidase inhibitor (chất kìm hãm α -glucosidaza ) ( chất kìm hãm α-glucosidase) (chất ức chế α-glucosidase) A .oryzae Aspergillus oryzae. .. AGIs từ A .oryzae lên men nguồn nguyên liệu nước hướng ứng dụng điều kiện Việt Nam vấn đề cấp thiết, mang ý nghĩa khoa học thực tiễn cao Nghiên cứu thu nhận hoạt chất kìm hãm α -glucosidaza từ Aspergillus