Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào.

i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ CHÍNH NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG KEO LAI BV32 BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2011 - 2015 Thái Nguyên, năm 2015 ii ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ CHÍNH NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG KEO LAI BV32 BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : K43 - CNSH Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2011 - 2015 Giảng viên hƣớng dẫn : ThS Dƣơng Mạnh Cƣờng ThS Đào Duy Hƣng Thái Nguyên, năm 2015 i LỜI CẢM ƠN Thực tập tốt nghiệp bước quan trọng trình học tập sinh viên nhằm hệ thống lại toàn kiến thức học, vân dụng vào thực tiễn làm quen với nghiên cứu khoa học Qua đó, sinh viên trường hoàn thiện kiến thức lý luận phương pháp nghiên cứu, lực làm việc nhằm đáp ứng nhu cầu thực tiễn công việc sau Được giúp đỡ Ban giám hiệu trường Đại học Nông Lâm Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học & Công nghệ thực phẩm, em tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào” Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường Đại học Nông Lâm, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học, Lãnh đạo viện Khoa học sống- Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, chuyên viên môn Công nghệ tế bào (Viện khoa học sống), thầy cô giáo môn CNSH (khoa Công nghệ sinh học & Công nghệ thực phẩm) Đặc biệt, em xin trân trọng cảm ơn hai thầy giáo ThS Dương Mạnh Cường Th.S Đào Duy Hưng dành nhiều thời gian quý báu, tận tình hướng dẫn em suốt thời gian thực tập hoàn thành luận văn này.Em xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè giúp đỡ mặt để em hoàn thành khóa luận Do thời gian cò hạn trình độ chuyên môn nhiều hạn chế, thân bước đầu làm quen với công tác nghiên cứu khoa học, nên đề tài không tránh khỏi thiếu sót Kính mong quý thầy cô giáo bạn bè quan tâm góp ý để đề tài hoàn thiện Xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 30 tháng 05 năm 2015 Sinh viên Nguyễn Thị Chính ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai 35 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai 38 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai 41 Bảng 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai 44 Bảng 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến hiệu rễ chồi Keo lai 47 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến hiệu rễ chồi Keo lai 49 Bảng 4.7.Kết nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Keo lai .51 iii DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Ảnh hưởng BAP đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai (sau 30 ngày) 37 Biểu đồ 4.2 Ảnh hưởng Kinetin đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai 40 Biểu đồ 4.3 Ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai .43 Biểu đồ 4.4 Ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai .45 Biểu đồ 4.5 Ảnh hưởng IBA đến hiệu rễ chồi Keo lai 48 Biểu đồ 4.6 Ảnh hưởng NAA đến hiệu rễ chồi Keo lai 50 iv DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 4.1 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi Keo lai BV32 .36 Hình 4.2 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân nhanh 39 Hình 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai 42 Hình 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai 45 Hình 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến hiệu rễ chồi Keo lai 48 Hình 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến hiệu rễ chồi Keo lai 50 Hình 4.7:Kết nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Keo lai .52 v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BAP : Benzylamino purine IBA : Indol butyric acid NAA : Naphthyl acetic acid MS : Murashige & Skoog Medium MS* : MS cải tiến (có thay đổi hàm lượng số khoáng chất vitamin) CT : Công thức ĐC : Đối chứng HSNC :Hệ số nhân chồi TB : Trung bình W/w : Khối lượng/thể tích V/v : Thể tích/thể tích vi MỤC LỤC PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Mục đích nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Nguồn gốc Keo lai giống BV32 2.1.1 Lai giống nhân tạo 2.1.2 Dòng Keo lai BV32 2.2 Tình hình nghiên cứu Keo lai nước 2.2.1 Tình hình nghiên cứu giới 2.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 2.3 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.4 Cơ sở khoa học nhân giống nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.4.1 Tính toàn tế bào thực vật 2.4.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào thực vật 10 2.5 Các giai đoạn nuôi cấy mô tế bào thực vật 11 2.5.1 Giai đoạn chuẩn bị .11 2.5.2 Giai đoạn khử trùng mẫu, cấy khởi động .11 2.5.3 Giai đoạn tạo chồi nhân nhanh chồi 12 2.5.4 Giai đoạn tạo mô hoàn chỉnh .12 2.5.5 Giai đoạn chuyển in vitro vườn ươm 12 2.6 Các yếu tố ảnh hưởng tới kết nuôi cấy mô – tế bào 13 2.6.1 Điều kiện vô trùng .13 2.6.2 Vật liệu nuôi cấy 14 vii 2.6.3 Môi trường nuôi cấy 15 2.7 Những vấn đề nhân giống in vitro 26 2.7.1 Tính bất định mặt di truyền 26 2.7.2.Sự nhiễm mẫu .27 2.7.3 Sự hoá thuỷ tinh thể 27 2.7.4 Kiểu gen 28 PHẦN 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3.1 Đối tượng (vật liệu) 29 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu .29 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 29 3.2.2 Thời gian nghiên cứu .29 3.3 Nội dung nghiên cứu 29 3.3.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng (BAP, Kinetin, IBA, IAA) đến khả nhân nhanh chồi Keo lai 29 3.3.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng (NAA, IBA) đến khả rễ Keo lai .29 3.3.3 Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến tỷ lệ sống Keo lai 30 3.4 Phương pháp nghiên cứu .30 3.4.1 Điều kiện thí nghiệm 30 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng (BAP, Kinetin, IBA, IAA) đến khả nhân nhanh chồi Keo lai .30 3.4.3 Phương pháp nghiên cứu nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng (NAA, IBA) đến khả rễ Keo lai 32 3.4.4 Phương pháp nghiên cứu nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến tỷ lệ sống Keo lai .33 viii 3.5 Phương pháp đánh giá xử lý số liệu .33 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 35 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai 35 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai 35 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai (Acacia hybrids) 38 4.1.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai .40 4.1.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IAA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai .43 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng đến hiệu rễ chồi Keo lai 46 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến hiệu rễ chồi Keo lai .46 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến hiệu rễ chồi Keo lai 49 4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Keo lai nuôi cấy mô vườn ươm .51 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .53 5.1 Kết luận 53 5.2 Kiến nghị .53 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 49 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến hiệu rễ chồi Keo lai Các chồi đủ tiêu chuẩn giai đoạn nhân nhanh tách riêng chồi chuyển sang môi trường có bổ sung NAA Sau 30 ngày nuôi cấy Kết tiêu theo dõi tỷ lệ chồi rễ, số rễ trung bình mẫu chất lượng rễ tổng hợp bảng 4.2.1 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng NAA đến hiệu rễ chồi Keo lai Nồng độ Tổng số NAA mẫu (mg/l) (mẫu) 0,0 CT2 Công Tỷ lệ rễ Số rễ Mầu sắc (%) TB/cây(rễ) rễ 54 87,04 1,93 Trắng đục 0,2 54 88,89ns 2,78* Trắng đục CT3 0,5 54 90,74ns 1,71* Trắng đục CT4 0,8 54 92,59* 3,80* Trắng đục CT5 1,0 54 94,44* 4,86* Trắng đục LSD.05 6,88 0,21 CV% 4,0 3,7 thức CT1 (ĐC) Ghi chú: ns: sai khác ý nghĩa; * : công thức có sai khác có ý nghĩa Tương tự IBA, NAA có tác dụng việc thúc đẩy khả rễ dòng Keo lai BV32 Qua bảng ta thấy, mức độ tin cậy 95% công thức NAA cho kết tốt CT5 (1,0 mg/l) với tiêu tăng so với đối chứng là: Tỷ lệ rễ 94,44%-87,04%; số rễ TB/cây 4,86%-1,93% So sánh giá trị trung bình công thức thí nghiệm với đối chứng thông qua giá trị LSD 5% cho thấy tỷ lệ rễ sử dụng NAA với hàm lượng 50 0,8-1,0 mg/l sai khác có ý nghĩa so với đối chứng Từ thí nghiệm trên, ta thấy hàm lượng NAA tốt để kích thích rễ dòng Keo lai BV32 1,0 mg/l (CT5) CT1(ĐC): NAA 0,0 mg/l CT5: NAA 1,0 mg/l Hình 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng NAA đến hiệu rễ chồi Keo lai giá trị 4.5 3.5 2.5 Số rễ TB/cây (rễ) 1.5 0.5 0 0.2 0.5 0.8 Nồng độ Biểu đồ 4.6 Ảnh hƣởng NAA đến hiệu rễ chồi Keo lai 51 Như vậy, đánh giá khả rễ tác dụng riêng rễ hai loại Auxin NAA, IBA công thức cho hiệu rễ tốt IBA 1,0 mg/l Qua quan sát ta thấy việc sử dụng IBA cho hiệu rễ tương đối tốt, rễ khỏe, phát triển tốt dòng Keo lai Kết phù hợp với kết luận nghiên cứu Đoàn Thị Mai (2009) Keo tràm Như vậy, so với NAA, IBA thích hợp vai trò kích thích tạo rễ 4.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng giá thể đến tỷ lệ sống Keo lai nuôi cấy mô vƣờn ƣơm Đây giai đoạn cuối quy trình nhân giống in vitro Cây đạt tiêu chuẩn hình thái định (số lá, số rễ, chiều cao cây) chuyển dần từ ống nghiệm nhà kính hay nhà lưới, sau chuyển vườn ươm Cây đưa vườn ươm có tỷ lệ sống cao hiệu phương pháp nhân giống lớn, có ý nghĩ thực tiễn, khả ứng dụng cao Cây Keo lai BV32 trồng thử nghiệm loại giá thể để tìm loại giá thể thích hợp cho Kết tổng hợp bảng 4.3 Bảng 4.7.Kết nghiên cứu ảnh hƣởng giá thể đến tỷ lệ sống Keo lai Công thức CT1 (ĐC) CT2 CT3 Chiều Số Tỷ lệ sống cao TB (cây) (%) cây(cm) Giá thể 100% Đất tầng B 30 56,67 4,51 50% Đất tầng B + 50% trấu hun 30 66,67* 4,30ns 70% Đất tầng B + 30% trấu hun 30 70,00* 5,35* 70% Đất tầng B + 20% trấu CT4 30 93,33* 5,81* hun +10% mùn hữu LSD.05 9,98 0,23 CV% 6,8 2,3 ( Ghi chú: ns: sai khác ý nghĩa; * : công thức có sai khác có ý nghĩa) 52 Qua bảng kết ta thấy, với giá trị LSD.05 đạt 9,98 công thức thí nghiệm có sai khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Theo dõi kết sau tuần trồng, tỷ lệ sống Keo lai đất tầng B (100%) đạt 56,67%, sinh trưởng phát tốt Trên giá thể 70% Đất tầng B + 20% trấu hun +10% mùn hữu phát triển tốt nhất, tỷ lệ sống đạt 93,33% sau 30 ngày theo dõi Kết giải thích sau: Trong thành phần than trấu, đất tầng B, mùn hữu (có lượng phân hữu định) làm cho bầu tơi, xốp, dễ thoát nước lại có độ ẩm cần thiết cho trình sinh trưởng phát triển nên cho tỷ lệ sống cao, phát triển tốt so với loại giá thể khác CT4:70% Đất + 20% trấu +10%mùn CT1(ĐC): 100% Đất Hình 4.7: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng giá thể đến tỷ lệ sống Keo lai 53 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Qua kết thu đề tài rút kết luận sau: - Với môi trường là: MS* + 30 g/l Saccharose+ 6,5 g/l Agar + 0,1 g/l Myo inositol nồng độ bổ sung BAP phù hợp cho nhân nhanh chồi Keo lai 1,5 mg/l BAP Việc kết hợp BAP với IBA, IAA làm giảm hệ số nhân chồi - Với môi trường rễ là: 1/2MS* + 30 g/l Saccharose + 6,5 g/l Agar + 0,1 g/l Myo inositol nồng độ bổ sung IBA tốt cho rễ 1,0 mg/l IBA - Giá thể sống gồm: 70% Đất tầng B + 20% trấu hun +10% mùn hữu cho tỷ lệ sống 93,33 % cao nhiều so với giá thể đất Bên cạnh tiếp tục nghiên cứu giá thể khác 5.2 Kiến nghị Cần tiến hành nghiên cứu thêm môi trường nhân chồi rễ thích hợp cho dòng Keo lai BV32, thử nghiệm với Cytokinin, Auxin khác đánh giá kết hợp chất điều hòa sinh trưởng để tìm môi trường thích hợp TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài Liệu Tiếng Việt Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội Ngô Xuân Bình, Bùi Bảo Hoàn, Nguyễn Thúy Hà (2003), Giáo trình Công nghệ sinh học, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Đặng Ngọc Hùng (2009), Ngiên cứu nhân bạch đàn giống dòng lai UE35 UE56 Eucalyptuep urophyla E exserta phương pháp nuôi cấy mô, Báo cáo đề tài Thạc sỹ, trường đại học Nông Lâm, Thái Nguyên Lê Đình Khả (1999), Ngiên cứu sử dụng giống lai tự nhiên Keo tai tượng Keo tràm Việt Nam, Nxb Nông Nghiệp Lê Đình Khả (2006), Lai giống rừng, Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội Lê Đình Khả, Dương Mộng Hùng (2003), Giống rừng, Nxb Nông Nghiệp Lê Đình Khả, Nguyễn Đình Hải, Hồ Quang Vinh (1997), Kết khảo nghiệm giống lai tự nhiên Keo tai tượng Keo tràm, Tạp chí Lâm Nghiệp Lê Đình Khả, Nguyễn Hoàng Nghĩa, Nguyễn Xuân Liệu (2006), Cẩm nang nghành lâm nghiệp chương Cải thiện giống quản lý giống rừng Việt Nam, Bộ Nông nghiệp PTNT, Chương trình Hỗ trợ Ngành Lâm nghiệp Đối tác Dương Công Kiên (2002), Nuôi cấy mô thực vật, Nxb Đại học Quốc gia, Thành phố Hồ Chí Minh 10 Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo trình công nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội 11 Nguyễn Đức Lương, Phan Thanh Trúc, Lương Văn Hinh, Trấn Văn Điền (1999) Giáo trình Chọn tạo giống trồng, Nxb Nông nghiệp 12 Đoàn Thị Mai, Lê Sơn (2011), Kết khoa học công nghệ đề tài Nghiên cứu nhân nhanh giống Keo lai tự nhiên, Keo lai nhân tạo, Bạch đàn uro, Bạch đàn lai nhân tạo (mới chọn tạo) Lát hoa công nghệ tế bào, Trung tâm Nghiên cứu Giống rừng, Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam 13 Đoàn Thị Mai, Nguyễn Thị Mỹ Hương, Vũ Thị Ngọc, Trần Thanh Hương, Văn Thu Huyền (2009), Nuôi cấy mô số giống Keo lai chọn tạo, Trung tâm nghiên cứu giống rừng, Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam 14 Nguyễn Kim Thanh, Nguyễn Thuận Châu (2005), Giáo trình Sinh lý học thực vật, Nxb Hà Nội 15 Phan Hữu Tôn (2005), Giáo trình Công nghệ sinh học chọn tạo giống trồng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 16 Nguyễn Văn Uyển (1993), Nuôi cấy mô tế bào thực vật phục cụ công tác giống trồng, Nxb Nông Nghiệp 17 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2005), Công nghệ sinh học,tập 2- Công nghệ sinh học tế bào, Nxb Giáo Dục II Tài Liệu Tiếng Anh 18 Trindate H., J G Ferreira, M S Pais, R Aloni (1990), The role of cytokinin and auxin in rapid multiplication of shoots of Eucalyptus globulus grownln vitro, Australian Forestry 19 Sharma J.K (1994), Patbological investigations in Forest Nurseries and plantations in Vietnam, Report of Food and Agriculture organization of the United Nations, FAO VIE/92,022: Hanoi 20 Gamborg O.L, Philips.G.C (1995), Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fugamental Methods, Springer-Verlag, New York 21 Edwin F.George Ph.D (1993), Plant propagation by tissue culture part the technology, Exegetics Ltd., Edington, Wilts., BA13 4QG, England 22 Trigiano R.N, Gray.D.J (1999), Plant Tissueculture Concepts and Laboratory Exercises, CRC press, Bocaration, Florida, USA 23 Nissen S.J, Sutter.E.G (1990), Sability of IAA and IBA nutrient medium to several tissue culture procedures, Hortsciense 24 Bhojwani S.S, M.K Razdan (1983), Plant tissue culture: Theory and Practice, Amsterdam, Oxford, New York, Tokyo PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết thí nghiệm Ảnh hƣởng BAP đến khả nhân nhanh chồi Keo lai BV32 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE NN BAP 27/ 5/15 2:19 :PAGE VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 5.13056 1.28264 273.48 0.000 R 101332E-02 506661E-03 0.11 0.898 * RESIDUAL 375201E-01 469001E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.16909 369221 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTB FILE NN BAP 27/ 5/15 2:19 :PAGE VARIATE V004 CCTB SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1.85531 463827 430.79 0.000 R 165333E-02 826667E-03 0.77 0.499 * RESIDUAL 861351E-02 107669E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.86557 133255 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NN BAP 27/ 5/15 2:19 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS HSN CCTB 4.27667 2.20667 4.81333 3.08667 3 4.89333 3.06000 5.90667 3.12333 5.60667 3.06667 SE(N= 3) 0.395390E-01 0.189446E-01 5%LSD 8DF 0.128933 0.617763E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSN 5.11000 5.09800 5.09000 CCTB 2.91800 2.91400 2.89400 SE(N= 5) 0.306268E-01 0.146744E-01 5%LSD 8DF 0.998709E-01 0.478517E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NN BAP 27/ 5/15 2:19 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN CCTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 5.0993 15 2.9087 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.60764 0.68484E-01 1.3 0.0000 0.36504 0.32813E-01 1.1 0.0000 |R | | | 0.8984 0.4985 | | | | Phụ lục 2: Kết thí nghiệm ảnh hƣởng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Keo lai BV32 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE NN KNT 16/ 5/15 5:54 :PAGE VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 8.88504 2.22126 332.52 0.000 R 164934E-01 824668E-02 1.23 0.342 * RESIDUAL 534408E-01 668010E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 8.95497 639641 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTB FILE NN KNT 16/ 5/15 5:54 :PAGE VARIATE V004 CCTB SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 295066E-01 737666E-02 4.65 0.031 R 297333E-02 148667E-02 0.94 0.433 * RESIDUAL 126933E-01 158667E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 451733E-01 322667E-02 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NN KNT 16/ 5/15 5:54 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS HSN CCTB 2.29667 1.17000 3.22333 1.20000 3 4.29667 1.30000 2.16667 1.24333 3.22333 1.21000 SE(N= 3) 0.471879E-01 0.229976E-01 5%LSD 8DF 0.153875 0.749928E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSN 3.08800 3.02200 3.01400 CCTB 1.22800 1.24000 1.20600 SE(N= 5) 0.365516E-01 0.178139E-01 5%LSD 8DF 0.119191 0.580892E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NN KNT 16/ 5/15 5:54 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN CCTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.0413 15 1.2247 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.79978 0.81732E-01 2.7 0.0000 0.56804E-010.39833E-01 3.3 0.0314 |R | | | 0.3419 0.4332 | | | | Phụ lục 3: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp BAP IBA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai BV32 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE NN IBA 17/ 5/15 4:13 :PAGE VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 3.38369 845923 57.05 0.000 R 117734E-01 588669E-02 0.40 0.688 * RESIDUAL 118627 148283E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.51409 251007 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTB FILE NN IBA 17/ 5/15 4:13 :PAGE VARIATE V004 CCTB SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 810667E-02 202667E-02 3.45 0.064 R 604000E-02 302000E-02 5.15 0.036 * RESIDUAL 469333E-02 586666E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 188400E-01 134571E-02 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NN IBA 17/ 5/15 4:13 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 HSN 3.84000 3.51000 4.86667 3.81333 4.31667 CCTB 1.22000 1.15667 1.19333 1.22000 1.20000 SE(N= 3) 0.703048E-01 0.139841E-01 5%LSD 8DF 0.229257 0.456008E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSN 4.10600 4.06400 4.03800 CCTB 1.22600 1.18000 1.18800 SE(N= 5) 0.544579E-01 0.108320E-01 5%LSD 8DF 0.177582 0.353222E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NN IBA 17/ 5/15 4:13 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN CCTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 4.0693 15 1.1980 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.50101 0.12177 3.0 0.0000 0.36684E-010.24221E-01 2.0 0.0640 |R | | | 0.6884 0.0364 | | | | Phụ lục 4: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp BAP IAA đến hiệu nhân nhanh chồi Keo lai BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE NN IAA 17/ 5/15 4: :PAGE VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 3.38337 845843 85.19 0.000 R 857335E-02 428668E-02 0.43 0.667 * RESIDUAL 794268E-01 992835E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.47137 247955 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTB FILE NN IAA 17/ 5/15 4: :PAGE VARIATE V004 CCTB SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 330133 825333E-01 15.32 0.001 R 149333E-02 746667E-03 0.14 0.872 * RESIDUAL 431067E-01 538834E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 374733 267667E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NN IAA 17/ 5/15 4: :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 HSN 4.91000 3.82667 3.71000 3.79333 3.61667 CCTB 1.49333 1.52333 1.72000 1.82000 1.42667 SE(N= 3) 0.575278E-01 0.423806E-01 5%LSD 8DF 0.187592 0.138199 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSN 3.97600 3.94000 3.99800 CCTB 1.58600 1.59400 1.61000 SE(N= 5) 0.445609E-01 0.328278E-01 5%LSD 8DF 0.145308 0.107048 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NN IAA 17/ 5/15 4: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSN CCTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.9713 15 1.5967 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.49795 0.99641E-01 2.5 0.0000 0.16361 0.73405E-01 4.6 0.0010 |R | | | 0.6673 0.8725 | | | | Phụ lục 5: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng IBA đến hiệu rễ chồi Keo lai BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE RR IBA 24/ 5/15 5: :PAGE VARIATE V003 TLRR LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 102.749 25.6873 1.92 0.200 R 16.4576 8.22881 0.62 0.568 * RESIDUAL 106.975 13.3718 * TOTAL (CORRECTED) 14 226.181 16.1558 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE RR IBA 24/ 5/15 5: :PAGE VARIATE V004 SRTB SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 20.8562 5.21406 427.56 0.000 R 284400E-01 142200E-01 1.17 0.361 * RESIDUAL 975603E-01 121950E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 20.9822 1.49873 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RR IBA 24/ 5/15 5: :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 TLRR 87.0367 88.8900 90.7367 92.5900 94.4400 SRTB 1.93333 3.80000 1.71333 2.78000 4.86333 SE(N= 3) 2.11123 0.637574E-01 5%LSD 8DF 6.88449 0.207907 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TLRR 89.9980 89.9980 92.2200 SRTB 3.00000 3.07800 2.97600 SE(N= 5) 1.63535 0.493863E-01 5%LSD 8DF 5.33270 0.161044 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RR IBA 24/ 5/15 5: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLRR SRTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 90.739 15 3.0180 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 4.0194 3.6567 4.0 0.2000 1.2242 0.11043 3.7 0.0000 |R | | | 0.5679 0.3606 | | | | Phụ lục 6: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng NAA đến hiệu rễ chồi Keo lai BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE RR NAA 26/ 5/15 4: :PAGE VARIATE V003 TLRR LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 152.189 38.0471 2.31 0.145 R 12.3655 6.18274 0.38 0.702 * RESIDUAL 131.639 16.4548 * TOTAL (CORRECTED) 14 296.193 21.1566 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE RR NAA 26/ 5/15 4: :PAGE VARIATE V004 SRTB SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 27.7019 6.92547 675.20 0.000 R 902800E-01 451400E-01 4.40 0.051 * RESIDUAL 820551E-01 102569E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 27.8742 1.99101 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RR NAA 26/ 5/15 4: :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 TLRR 87.0367 88.8867 90.7400 92.5900 96.2933 SRTB 1.93333 2.74667 3.83333 4.66333 5.77333 SE(N= 3) 2.34200 0.584719E-01 5%LSD 8DF 7.63701 0.190671 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TLRR 91.1120 89.9960 92.2200 SRTB 3.69600 3.78800 3.88600 SE(N= 5) 1.81410 0.452921E-01 5%LSD 8DF 5.91560 0.147693 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RR NAA 26/ 5/15 4: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLRR SRTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 91.109 15 3.7900 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 4.5996 4.0565 4.5 0.1452 1.4110 0.10128 2.7 0.0000 |R | | | 0.7016 0.0511 | | | | Phụ lục 7: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng giá thể đến tỷ lệ sống Keo lai BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLRR FILE RC 27/ 5/15 1:10 :PAGE VARIATE V003 TLRR LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 2200.00 733.333 29.33 0.001 R 116.667 58.3333 2.33 0.177 * RESIDUAL 150.000 25.0000 * TOTAL (CORRECTED) 11 2466.67 224.242 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTB FILE RC 27/ 5/15 1:10 :PAGE VARIATE V004 CCTB SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 4.52796 1.50932 112.33 0.000 R 571665E-02 285833E-02 0.21 0.815 * RESIDUAL 806168E-01 134361E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 4.61429 419481 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RC 27/ 5/15 1:10 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 TLRR 93.3333 76.6667 66.6667 56.6667 CCTB 5.81333 5.35000 4.30333 4.51000 SE(N= 3) 2.88675 0.669232E-01 5%LSD 6DF 9.98574 0.231498 MEANS FOR EFFECT R R NOS 4 TLRR 77.5000 70.0000 72.5000 CCTB 5.01750 5.00000 4.96500 SE(N= 4) 2.50000 0.579572E-01 5%LSD 6DF 8.64791 0.200483 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RC 27/ 5/15 1:10 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLRR CCTB GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 73.333 12 4.9942 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 14.975 5.0000 6.8 0.0009 0.64767 0.11591 2.3 0.0001 |R | | | 0.1775 0.8150 | | | | [...]... niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật Nhân giống bằng nuôi cấy mô tế bào là phương pháp nhân giống được thực hiện bằng nuôi cấy cơ quan, mô (thậm chí là tế bào) trong môi trường dinh dưỡng đặc biệt hoàn toàn vô trùng và được kiểm soát Vì vật liệu nuôi cấy thường rất nhỏ và thực hiện trong môi trường nhân tạo nên phương pháp nhân giống này còn được gọi là vi nhân giống (Micropropagation) hay nhân giống in... định và tối ưu hoá phương pháp nhân chồi, ra rễ và điều kiện nuôi cấy, Cho các giống mới được chọn tạo bằng công nghệ nuôi cấy mô tế bào là hướng đi thích hợp nhất, cần thiết và có ý nghĩa thực tiễn trong sản xuất lâm nghiệp Vì vậy, chúng tôi thực hiện làm đề tài: Nghiên cứu nhân giống Keo lai BV32 bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào” 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu khả năng nhân nhanh, ra rễ và... cs, 2003) Các phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật: - Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng (nuôi cấy chop đỉnh và chồi bên) - Nuôi cấy mô sẹo - Nuôi cấy tế bào đơn thu nhận các chất có hoạt tính sinh học - Nuôi cấy protoplast - chuyển gen - Nuôi cấy hạt phấn 2.4 Cơ sở khoa học của nhân giống bằng nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.4.1 Tính toàn năng của tế bào thực vật Tính toàn năng (Totipotence) của tế bào được... và giá thể phù hợp với cây Keo lai BV32 được nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào 1.3 Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi cây Keo lai Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng đến khả năng ra rễ chồi cây Keo lai Nghiên cứu ảnh hưởng của một số giá thể đến tỷ lệ sống của cây Keo lai 1.4 Ý nghĩa khoa học và... Giúp sinh viên rèn luyện kỹ năng và học tập nghiên cứu khoa học + Biết được các phương pháp nghiên cứu một số vấn đề khoa học, xử lý và phân tích số liệu, cách trình bày một bài báo khoa học + Sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào nhằm nâng cao hệ số nhân và chất lượng cây Keo mới - Ý nghĩa thực tiễn: 4 Nâng cao hiệu quả nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào, làm giảm chi phí giá thành, tăng... từ nuôi cấy mô thường cao hơn 3- 4 lần so với cây hom và 8-10 lần so với cây con từ hạt (Lê Đình Khả, 2006) Nuôi cấy mô ở nước ta đã áp dụng rộng rãi trong công tác nhân giống một số giống Keo lai có năng suất cao Ngoài những nghiên cứu nuôi cấy mô Keo lai đã được giới thiệu khi tổng kết đề tài KH03.03 năm 1996 trên cơ sở kế thừa các nghiên cứu của Nguyễn Ngọc Tân và cộng sự (1996), nhóm nghiên cứu nuôi. .. cấp giống Keo mới ra thị trường 5 PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Nguồn gốc của cây Keo lai giống BV32 2.1.1 Lai giống nhân tạo Lai giống (tạp giao) là phương pháp nhằm kết hợp nhiều đặc trưng, đặc tính tốt của các giống cây trồng (Nguyễn Đức Lương và cs, 1999) Lai giống nhân tạo bằng thụ phấn có kiểm soát là phương thức cho phép kết hợp các tính trạng mong muốn trong một giống lai, làm cơ sở chọn giống. .. Kiên, 2002) - Mục đích và khả năng nuôi cấy: Để phục vụ cho nhân giống vô tính thường chọn chồi ngọn, chồi bên (chồi muộn) Nuôi cấy mô sẹo, nuôi cấy phôi: có thể sử dụng là mầm, trụ là mầm, thân, là, phôi… Để thu cây đơn bội phục vụ cho lai tạo giống dùng bao phấn và hạt phấn cho nuôi cấy - Phụ thuộc vào mẫu có nuôi cấy thành công hay không Nếu nuôi cấy mô sẹo hay nuôi cấy phôi không thể thực hiện với... Tình hình nghiên cứu trong nước Ở Việt Nam nuôi cấy mô được phát triển từ những năm 70 và những cơ sở hiện nay đang nhân giống trong nuôi cấy mô ở quy mô lớn như: Viện CNSH, Viện KHKT NN, Viện di truyền Nông nghiệp, Viện lúa ĐBSCL, Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy Phù Ninh, Phú Thọ, Trung tâm ứng dụng KHSX nông lâm nghiệp Quảng Ninh, Xí nghiệp giống lâm nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, Nghiên cứu ứng... trưởng để nuôi cấy và ngược lại … ( Nguyễn Kim Thanh và cs, 2005) 2.6.3 Môi trường nuôi cấy Môi trường nuôi cấy bao gồm cả môi trường hóa học và điều kiện bên ngoài được xem là vấn đề quyết định sự thành bại của quá trình nuôi cấy 2.6.3.1 Môi trường hoá học Môi trường hóa học được xem là phần đệm để cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết cho sự tăng trưởng và phân hoá mô trong suốt quá trình nuôi cấy in