Báo cáo Nghiên cứu quy trình nhân giống hoa Đồng Tiền bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Báo cáo Nghiên cứu quy trình nhân giống hoa Đồng Tiền phương pháp nuôi cấy mô tế bào Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Mục lục Trang Phần I: Mở đầu…………………………………………………… I.1/ Đặt vấn đề …………… ……………………………… I.2/ Mục đích, yêu cầu …………………………………… Phần II: Tổng quan tài liệu … …………………………………… II.1/ Tình hình sản xuất hoa nước giới … II.2/ Giới thiệu hoa Đồng Tiền………………………… Phần III: Đối tượng, nội dung, phương pháp nghiên cứu………… 10 III.1/Đối tượng …………………………………………… 10 III.2/ Nội dung……………………………………………… 10 III.3/ Các tiêu theo dõi ………………………………… 12 III.4/ Xử lý số liệu ………………………………………… 13 Phần IV: Kết thảo luận …… ……………………………… 15 IV.1/ Thí nghiệm tạo nguồn vật liệu vơ trùng……………… 15 IV.2/ Giai đoạn nhân nhanh………………………………… 17 Phần VI: Kết luận đề nghị……………………………………… 20 V.1/ Kết luận …………………………………………………20 V.2/ Đề nghị ………………………………………………… 20 Phụ lục …………………………………………………………… 21 Tài liệu tham khảo……………….……………… ,……………… 23 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Phần I MỞ ĐẦU I.1/ Đặt vấn đề: Từ thời cổ xưa người sớm biết thưởng thức đẹp thiên nhiên Hoa vào sống nét đẹp thiếu ngày lễ tết, hội hè, đình đám, tranh hồng nhà cửa… Ngày nay, với phát triển nhanh chóng xã hội, nhu cầu hoa gới nói chung nước ta nói riêng tăng nhanh hết hoa tươi trở thành loại sản phẩm mang lại giá trị kinh tế cao chiếm vị trí đặc biệt thị trường hang hóa nơng nghiệp giới Thị trường hoa tươi tập trung nước có công nghiệp phát triển cao: Hà Lan; Pháp; Anh; Nhật; Ý; Nhật; Mỹ Các nước chiếm ưu thị trường nước có cơng nghiệp phát triển cao, có cơng nghệ sản xuất hoa tiên tiến hiệu Họ nghiên cứu ứng dụng thành công kĩ thuật sinh học nông học đại khâu sản xuất như: chọn, tạo giống mới, nhân giống, nuôi trồng, bảo quản hoa tươi… Rõ rang để thương mại hóa ngành sản xuất hoa phải chương trình hóa q trình sản xuất : sản phẩm, loại gì, thời gian nào,kích thước, tiêu chuẩn…Điều thực kĩ thuật cao trước hết phải có cơng nghệ nhân giống đại Đó công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật Chỉ tính riêng Hà Lan hàng năm sản xuất 15 triệu giống hoa đồng tiền nuôi cấy mô tế bào để cung cấp cho sản xuất, Mấy năm gần đây, giới sản xuất khoảng 50 triệu cây/ năm, ước tính đạt 250 triệu năm đáp ứng với nhu cầu thực tế Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Một vấn đề đặt giá giống nhân phương pháp nuôi cấy mơ cịn cao , cần phải cải tiến quy trình nhân để làm hạ giá thành, đặc biệt giới hóa khâu nhân giống mở rộng quy mô, tăng xuất sản xuất giống Trong loại hoa trồng phổ biến Việt Nam hoa đồng tiền (Gerbera) loài hoa đẹpvới nhiều màu sắc đa dạng phong phú, nhiều người ưa chuộng, nhu cầu giống tăng cao.Với ưu nhân giống invitro từ lượng nhỏ mẹ tạo quần thể đồng đều, giữ đặc tính mẹ, có hệ số nhân giống cao dễ khắc phục gặp điều kiện bất lợi đặc biệt tạo lượng lớn bệnh, phẩm chất tốt, đáp ứng nhu cầu giống hoa Với ưu điểm dễ trồng, dễ nhân giống, chăm sóc đơn giản tốn cơng, trồng lần thu hoạch liên tục từ - năm Hiện nay, diện tích hoa đồng tiền chiếm tới 8% cấu chủng loại sản xuất hoa nước không ngừng mở rộng Tuy nhiên, giống hoa sản xuất người trồng nhập từ nhiều nguồn khác không qua khảo nghiệm đánh giá cách hệ thống suất, phẩm chất hoa chưa đáp ứng thị hiếu người tiêu dùng Do vậy, công tác nghiên cứu chọn tạo, nhập nội giống, tuyển chọn giống hoa đồng tiền thích nghi với điều kiện khí hậu nước ta có ý nghĩa quan trọng góp phần nâng cao hiệu sản xuất, tăng thu nhập cho người dân Xuất phát từ thực tế trên, để góp phần vào cơng tác chọn tạo giống hồn thiện quy trình kỹ thuật thâm canh nâng cao suất, chất lượng hiệu sản xuất hoa đồng tiền, tiến hành nghiên cứu đề tài “ Nghiên cứu quy trình nhân giống hoa Đồng Tiền phương pháp nuôi cấy mô tế bào” Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn I.2/ Mục đích, yêu cầu: I.2.1/ Mục đích: Nghiên cứu nhân nhanh invitro giống hoa Đồng Tiền I.2.2/ Yêu cầu: I.2.2.1/ Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp khử trùng mẫu với lọa mẫu cấy, tạo nguyên liệu khởi đầu cho nhân giống vơ tính invitro I.2.2.2/ Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng tới trình nhân chồi I.2.2.3/ Nghiên cứu ảnh hưởng chất điêu tiết sinh trưởng đến trình tạo hoàn chỉnh I.2.2.4/ Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến tốc độ sinh trưởng phát triển Đồng Tiền đưa vườn ươm * Với thời gian thực tập tháng hi vọng hồn thành u cầu (I.2.2.1 I.2.2.2) cịn hai yêu cầu cuối tiếp tục tiến hành nghiên cứu thời gian cho phép Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Phần II TỔNG QUAN TÀI LIỆU II.1/ Tình hình sản xuất hoa Đồng Tiền nước giới: II.1.1/ Tình hình sản xuất hoa Đồng Tiền giới Ngày sản xuất hoa giới phát triển cách mạnh mẽ trở thành ngành thương mại cao Sản xuất hoa mang lại lợi ích to lớn cho kinh tế nước trồng hoa cảnh, có nước châu Á Sản xuất hoa nước châu Á phát triển mạnh cạnh tranh liệt để chiếm lĩnh thị trường hoa giới Cây hoa đồng tiền tên khoa học Gerbera jamesonic Bolus, 10 loại hoa quan trọng giới (sau hoa hồng, cúc, lan, cẩm chướng, lay ơn) Hoa đồng tiền có nguồn gốc Nam Phi, năm 1697 Relomen phát thấy vùng phía Nam châu Phi (Delansia) ông đưa vườn thực vật nước Anh Iwin Lych người tiến hành lai tạo giống đồng tiền với Sau người Pháp người Hà Lan tiến hành lai tạo hai nước trở thành trung tâm tạo giống cho đồng tiền giới (Đặng Văn Đông cs, 2003) Hiện công tác nghiên cứu sản xuất hoa nước ngồi phát triển Trình độ tạo giống sản xuất Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn nước Hà Lan, Nhật Bản, Mỹ, Đức cao công ty Forist Hà Lan công ty dẫn đầu giới tạo giống, nghiên cứu, sản xuất, buôn bán hoa đồng tiền Họ có lực lượng mạnh nghiên cứu khoa học thiết bị sản xuất tạo nhiều giống, sản lượng ngày nhiều, việc sử lý sau thu hoạch, bảo quản, đóng góp trình độ cao Ở Trung Quốc từ năm 20 kỷ 20 có sản xuất hoa đồng tiền cắt cành Ở Mai Long Thượng Hải, giống thoái hoá nghiêm trọng nên không phát triển năm 1987 vận dụng kỹ thuật nuôi cấy mô kỹ thuật nhân giống nhanh khắc phục tình trạng thối hố giống hoa đồng liền khơi phục phát triển Hiện Thượng Hải nơi có diện tích trồng lớn 35 ha, trung tâm nhân giống hoa Hà Viên Nghê nông trường Đông Hải đứng đầu sản xuất nhân giống hoa đồng tiền Ở Giang Tô nơi phát triển mạnh hoa đồng tiền, năm 1995 có 6.000m2, đến năm 1999 có tới Viện nghiên cứu rau, Viện nghiên cứu khoa học nông nghiệp nông trường Liên Vân đơn vị có diện tích trồng lớn, kỹ thuật tương đối cao Tuy nhiên sản xuất hoa đồng tiền số nước phát triển có số biểu sau: • Tính chun nghiệp quy mơ sàn xuất chưa cao Rất có cơng ty chun sản xuất, quy mơ sản xuất thường nhỏ nên khơng có sản phẩm đứng đầu, đủ sức cạnh tranh thị trường nước quốc tế Ví dụ: Tơ Châu diện tích trồng hoa Đồng Tiền lớn không ha, nhỏ 1.000m2, sản lượng hoa hàng ngày ít, nên phí thu hái, bao gói, vận chuyển khơng cân xứng, tiêu thụ chỗ thừa, bán ngồi khơng kinh tế nên hiệu kinh tế thấp Trong Colombia có 100 nông trường quy mô từ 20 đến 30 ha, nông trường trồng - giống, giống 8-10 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn • Tổng diện tích sản xuất lớn sản lượng ít, chất lượng Diện tích trồng trọt mở rộng phân tán, lực lượng kỹ thuật không tập trung lại thêm thiết bị sản xuất thấp, chất lượng ảnh hưởng nghiêm trọng đến hiệu kinh tế Theo thống kê năm 1996 diện tích trồng hoa Trung Quốc 75.000 ha, giá trị 600 triệu đơm Mỹ Trong Hà Lan trồng 8017 giá trị sản lượng tỷ 590 triệu đơla Mỹ gấp 56 lần Trung Quốc • Trang thiết bị trồng trọt lạc hậu, hàm lượng kỹ thuật cao Tỷ lệ thiết bị tiên tiến trồng trọt nhỏ, cách trồng cổ truyền văn chiếm ưu gây lên sản lượng thấp, chất lượng kém, mùa vụ sản xuất không phù hợp với nhu cầu lúc cần, khả cung ứng hoa quanh năm không mạnh giá khơng ổn định, hiệu kinh tế thấp Nghề trồng hoa Hà Lan áp dụng rộng rãi nhu cầu cơng nghiệp hố tự động hố 80% hoa trồng mơi trường khơng cần đất II.1.1.2/ Tình hình sản xuất Đồng Tiền hoa nước: Ở nước ta hoa Đồng Tiền trồng tập trung chủ yếu vùng trồng hoa truyền thống là: Ngọc Hà, Sa Pa, Đà Lạt… Hiện nay, diện tích trồng hoa nước chiếm khoảng 2000ha chiếm 0.02% diện tích đất trồng trọt, dẫn đầu Hà Nội (500ha); Nam Định (390ha); Hải Phòng(320ha)(Nguyễn Xuân Linh 1998) Năm 2001 diện tích trồng hoa chuyên canh tăng lên 3500ha, 100ha thâm canh cao nhà lồng, nhà kính, nhà lưới Cơng tác chọn tạo giống chậm so với sản xuất Hiện giống sản xuất ít, đa số giống nhập từ nước ngồi, khơng tự sản xuất được, giống trồng sản xuất lạc hậu, biểu suất thấp, không tươi lâu dễ nhiễm sâu bệnh Đầu tư cho quan khoa học hoa cắt nên cịn nhiều vấn đề chọn tạo giống, nhân giống ứng dụng công nghệ cao vào sản xuất bảo quản, xử lý hoa Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Vì vậy, Nhà nước cần có sách đầu tư phát triển như: • Nhập nội, chọn lọc, lai tạo giống hoa chất lượng cao • Áp dụng công nghệ cho nghề trồng hoa ( nhà lưới,b sản xuất giống bệnh….) • Đầu tư sở vật chất cho nghề trồng hoa • Đào tạo đội ngũ cán nâng cao hiểu biết hoa, giống, phân bón, thuốc bảo vệ thực vật… II.2/ Giới thiệu hoa Đồng Tiền II.2.1/ Nguồn gốc phân bố: Tên khoa học: Gerbera (Tên gọi Gerbera đặt theo tên nhà tự nhiên học người Đức Traugott Gerber, người bạn Carolus Linnaeus.) Tên Việt Nam: Đồng Tiền Cúc Đồng Tiền Họ: Asteraceae Bộ: Asterales Nguồn Gốc: Có khoảng 30-100 lồi sống hoang dã, phân bổ Nam Mỹ, châu Phi đại lục, Madagascar vùng nhiệt đới châu Á Miêu tả khoa học chi Gerbera J.D Hooker thực tạp chí thực vật Curtis năm 1889 ông miêu tả Gerbera jamesonii, loài Nam Phi biết tên gọi cúc Transvaal hay cúc Barberton Ở Việt Nam hoa Đồng Tiền trồng phổ biến rộng rãi II.2.2/ Đặc điểm hình thái đặc tính sinh học hoa Đồng Tiền: Thân, lá: thân ngầm, không phân cành mà đẻ nhánh, hoa phát triển từ thân Lá mọc chếch so với mặt đất góc 15o – 45o.Lá có hình lông chim, xẻ thùy nông sâu, mặt lưng có lớp lơng nhung Rễ: thuộc loại rễ chùm, phát triển khỏe, rễ hình ống ăn ngang phía mặt luống, rễ thường vươn dài tương ứng với diện tích tỏa Hoa: đồng tiền hai loại hoa nhỏ hình lưỡi hình ống tạo thành, loại hoa tự đơn hình đầu Hoa hình lưỡi tương đối lớn mọc phía ngồi xếp thành vịng vài vịng nhỏ, thay đổi hình thái mầu sắc nên gọi mắt hoa Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn tâm hoa trọng Trong trình hoa nở, hoa hình lưỡi nở trước, hoa hình ống nở theo thứ tự từ ngồi vào trong, theo vòng Quả: đồng tiền thuộc dạng bế có lơng, khơng có nội nhũ, hạt nhỏ, gam hạt có khoảng 280 - 300 hạt (Đặng Văn Đông cs, 2003) PHẦN III NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU III.1 Đối tượng, vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu: III.1.1 Đối tượng nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu giống Gerbera III.1.2Vật liệu nghiên cứu: - Các nụ hoa non khoẻ mạnh, không sâu bệnh - Các thiết bị, dụng cụ hoá chất nuôi cấy mô, tế bào bao gồm: + Thiết bị dụng cụ: nồi hấp khử trùng, bình tam giác, đèn cồn, box cấy vơ trùng + Hố chất: dung dịch MS, cồn 70o 90o, số phytohoocmon BAP, Kinetin, NAA, IBA, chất khử trùng HgCl2 + Ngồi cịn sử dụng số chất khác như: agar, đường saccarose Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn III.1.2Địa điểm thời gian nghiên cứu Địa điểm nghiên cứu: phòng nuôi cấy mô hoa cảnh – Bộ môn đột biến và Ưu thế lai – Viện Di truyền Nông nghiệp Thời gian nghiên cứu: từ tháng 12 đến hết tháng III.2 Nội dung nghiên cứu III.2.1Giai đoạn phịng III.2.1.1Giai đoạn khử trùng mẫu Thí nghiệm: Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl 0.1% đến tỷ lệ mẫu nhiêm Thời gian khử trùng 1, 3, và phút.Môi trường MS bản CT1: Khử trùng phút CT2: Khử trùng phút CT3: Khử trùng 10 phút CT4: Khử trùng 15 phút Thí nghiệm: Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng Oxy già (H2O2) đến tỷ lệ mẫu nhiêm Thời gian khử trùng 15 phút.Môi trường MS bản CT1: Khử trùng nồng độ 25% CT2: Khử trùng nồng độ 30% CT3: Khử trùng nồng độ 35% CT4: Khử trùng nồng độ 40% III.2.1.2Giai đoạn tái sinh nhân nhanh chồi Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng BAP môi trường MS đến khả phát sinh chồi Môi trường MS, bổ sung BAP ở các nồng độ khác nhau: 0.2 mg/l; 0.4; 0.6; 0.8; 1.0 mg/l CT1: MS (đối chứng) CT2: MS + 30g saccarose + 6,5g Aga + 0.1 mg/l BAP CT3: MS + 30g saccarose + 6,5g Aga + 0.3 mg/l BAP CT4: MS + 30g saccarose + 6,5g Aga + 0.5 mg/l BAP CT5: MS + 30g saccarose + 6,5g Aga + 0.7 mg/l BAP Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng BAP Kinetin môi trường MS đến quá trình nhân nhanh Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn CT1: MS (đối chứng) CT2: MS + 30g saccarose + 6,5g Aga + 0.1 mg/l BAP + 0.1mg/l Kinetin CT3: MS + 30g saccarose + 6,5g Aga + 0.3 mg/l BAP + 0.1mg/l Kinetin CT4: MS + 30g saccarose + 6,5g Aga + 0.5 mg/l BAP + 0.1mg/l Kinetin CT5: MS + 30g saccarose + 6,5g Aga + 0.7 mg/l BAP + 0.1mg/l Kinetin III.3/ Các tiêu theo dõi III.3.1/Các tiêu theo dõi phòng Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) = Tỷ lệ mẫu chết (%) = × 100 × 100 Tỷ lệ mẫu sống (%) = 100% - Tỷ lệ mẫu nhiễm - Tỷ lệ mẫu chết Tỷ lệ mẫu phát sinh chồi (%) = × 100 Hệ số nhân chồi (lần/tháng) = Chiều cao chồi trung bình (cm/cây) = Chất lượng chồi: +++: Tốt (chồi mập, to, xanh đậm) ++: Trung bình (chồi to trung bình, to trung bình, xanh) +: Kém (chồi nhỏ, nhỏ, xanh nhạt vàng) Số trung bình (lá/chồi) = Độ dài rễ (cm/rễ) = Số rễ trung bình (rễ/cây) = III.3.2Các tiêu theo dõi ngồi vườn ươm Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tỷ lệ sống (%) = × 100 Chiều cao trung bình (cm/cây) = Số trung bình (lá/cây) = Đường kính tán (cm/cây) = Thời gian sinh trưởng, phát triển (ngày) III.4 Xử lý số liệu Bố trí thí nghiệm theo phương pháp hồn tồn ngẫu nhiên số liệu xử lý theo chương trình Excel IRRISTAT Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Phần V Kết thảo luận IV.1/ Thí nghiệm khử trùng mẫu: Đây giai đoạn đưa đối tượng nuôi cấy từ điều kiện bình thường vào ni cấy vơ trùng ống nghiệm Vì vậy, tất loại trồng khác việc xác định phương pháp khử trùng thích hợp có vai trị định tới thành cơng q trình nghiên cứu invitro Giai đoạn cần yêu cầu sau; tỉ lệ nhiễm thấp, tỉ lệ sống cao, mẫu phân hóa sinh trưởng tốt Bảng 1: Hiệu phương pháp khử trùng HgCl2 0.1% Nồng Thời Số mẫu Số mẫu Số mẫu Tỉ lệ Tỉ lệ Tỉ lệ tái độ gian đưa vào chết nhiễm chết nhiễm sinh (%) HgCl2 khử (%) (%) (%) 0,1 0,1 0,1 0,1 (Phút) 10 15 0 16 30 20 70 80 91 81 30 30 30 30 0 Bảng 2: Hiệu khử trùng H2O2 Nồng Thời Số mẫu Số mẫu Số mẫu Tỉ lệ Tỉ lệ Tỉ lệ tái độ H2O2 gian đưa vào chết nhiễm chết nhiễm sinh (%) Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn (%) khử 25 30 35 40 (Phút) 15 15 15 15 30 30 30 30 0 13 10 9 (%) (%) 0 13 16 43 33 30 30 57 67 57 54 Qua kết thu từ phương pháp thấy phương pháp khử trùng HgCl2 0.1% 10 phút Oxy già 30% 15 phút cho hiệu cao Sau khử trùng phải ngâm mẫu vào nước cất vô trùng 15 phút tráng lại nhiều lần nước cất Trước cấy phải cắt bỏ bớt phần vết cắt có tiếp xúc với chất khử trùng để tránh làm chết mẫu Kết Luận: Để tạo nguồn vật liệu ban đầu cho trình nhân nhanh hoa Đồng Tiền caand thực phương pháp khử trùng sau: Chọn hoa non khỏe mạnh→Mẫu cắt bớt phần cuống để lại 710cm→ Rửa vòi nước sạch→ Ngâm nước xà phịng lỗng 15 phút→ Rửa vài lần nước sạch→Ngâm nước 15 phút→ Tráng lại nước cất→ tráng cồn 70% phút→ Rửa lại nước cất vô trùng 2-3 lần→ Ngâm HgCl2 10 phút →rửa lại nhiều lần ngâm nước cất vô trùng→ Tráng lại vài lần gắp vào đĩa Petri có đặt sẵn giấy thấm vơ trùng để thấm IV.2/ Giai đoạn nhân nhanh: Thí nghiệm theo dõi ảnh hưởng số tổ hợp chất điều tiết sinh trưởng tới tái sinh trồi hoa Đồng Tiền: Các nghiên cứu giai đoạn nhằm tìm mơi trường thích hợp cho trình nhân nhanh chồi Đây giai đoạn định hiệu tốc độ công nghệ invitro, giai đoạn cần yêu cầu sau: Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tạo hệ số nhân giống cho hiệu kinh tế cao, tiết kiệm tối đa nguyên liệu, sử dụng mơi trường đơn giản, hóa chất rẻ dễ kiếm Các trồi tạo phải đồng mặt di truyền, có sức sinh trưởng tốt, chồi tạo hồn chỉnh đem trồng phải có tỉ lệ sống cao, phát triển mạng mẽ, tỉ lệ biến dị thấp Để nhân nhanh hoa Đồng Tiền sử dụng phương thức tạo, nhân nhanh chồi từ chồi được sinh từ mẫu sinh thí nghiệm Trong giai đoạn tiến hành nghiên cứu tác dụng tổ hợp KIN + BAP BAP với nồng đọ khác lên tạo chồi nhằm tìm mơi trường thích hợp cho q trình nhân nhanh hoa Đồng Tiền Thí nghiệm 2.1 : Ảnh hưởng BAP đến hệ số nhân: Môi trường CT1 CT2 CT3 CT4 Đối chứng Số mẫu ban Số mẫu tạo Hệ số nhân đầu 30 30 30 30 30 thành 122 130 135 120 82 4.1 4.3 4.5 2.7 BAP 0.1 0.3 0.5 0.7 MS Qua bảng kết rút kết luận: Đỉnh chồi đưa vào mơi trường ni cấy có khả bật chồi điều kiện môi trường không chưa chất điều tiết sinh trưởng.Tuy nhiên số chồi tạo thấp sinh trưởng Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Ở môi trường MS có bổ sung BAP nồng độ khác hệ số nhân trồi khác nhau.Quy luật chung tác động BAP đến hệ số nhân chồi hoa Đồng tiền thí nghiệm là: khoảng nồng độ 0,1mg/l BAP đến 0,5mg/l BAP hệ số nhân tăng dần theo tỉ lệ tăng nồng độ BAP Nếu tiếp tục tăng dần nồng độ BAP hệ số nhân lại giảm dần Vậy mơi trường có bổ sung 0,5mg/l BAP Cây khỏe, mập, phát triển đều, hệ số nhân đạt tới 4.5 Thí nghiệm 2.2 : Ảnh hưởng BAP + KIN đến hệ số nhân: CT1 CT2 CT3 CT4 Đối chứng Môi trường BAP 0.1 0.3 0.5 0.7 MS Số mẫu ban Số mẫu tạo KIN 0.1 0.1 0.1 0.1 đầu 30 30 30 30 30 thành 103 150 130 123 82 Hệ số nhân 3.4 4.5 4.1 2.7 Qua bảng ta thấy môi trường CT3 ( 0.5mg/l BAP + 0.1KIN) hệ số nhân cao lần, Mẫu cao, mập, xanh thẫm phát triển đều.Khi ta so với môi trường chưa 0.5mg/l BAP lớn điều chứng tỏ kết hợp BAP KIN có hiệu cao sử dụng BAP Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Phần VI Kết Luận Đề Nghị V.1/ Kết Luận Từ kết thu rút số kết luận sau: Để tạo nguồn nguyên liệu khởi đầu Đồng Tiền cho q trình ni cấy invitro chế độ khử trùng tốt : Khử trùng HgCl2 0,1% 10 phút với tỉ lệ tái sinh 91% Để tái sinh nhân nhanh chồi Đồng Tiền, môi trường nhân tôt MS có bổ sung 0.3mg/l BAP + 0.1mg/l KIN Trên mơi trường này, sau tuần nuôi cấy , đạt hệ số nhân cao V.2/ Đề Nghị: Trên sở kết nghiên cứu thu thời gian thực tập chúng tơi có số đề nghị sau:  Tiếp tục nghiên cứu tìm chế độ khử trùng tốt , đơn giản nhất, độc hại với người thực nghiên cứu  Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp chất điều tiết sinh trưởng khác tới trình tạo nhân nhanh chồi nhằm đạt hiệu cao, giá thành hạ  Tiếp tục nghiên cứu hồn thiện quy trình tạo rễ; tạo hồn chỉnh, tìm giá rẻ thích hợp cho trình ươm đưa vào sản xuất đồng ruộng Phụ lục Thành phần mô trường dinh dưỡng Murashige and Skoog – 1962 (MS) Lượng pha lít cho dung dịch mẹ Lượng lấy cho lít mơi trường Đa lượng: NH4NO3 KNO3 33.0g 38.0g Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn MgSO4 KH2PO4 CaCl2.4H2O 2.Vi lượng H3BO4 MnSO4.4H2O ZnSO4 4H2O KI MoO4Na.2 H2O CoCl2.6 H2O2.5mg CuSO4.5 H2O 3.Sắt FeSO4.7 H2O Na2EDTA 4.Vitamin Glycine Axit Nicotinic (B5) Pyricloxin (B6) Thiamin HCL (B1) Ionsitol Agar Đường Saccaroza pH: 5,7 – 5,8 7.4g 3.4g 8.8g 620mg 2230mg 860mg 83mg 25mg Lấy 50ml/l Lấy 10ml/l 2.5mg 5.56mg 7.46mg 400mg 100mg 100mg 200mg Lấy 5ml/l Lấy 5ml/l 100mg/l 6,5g/l 20mg/l Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu tham khảo 1./ Giáo trình sinh lý thực vật ( Nguyễn Quang Thạch – Hồng Minh Tấn: NXB Nơng Nghiệp 1996) 2./ Cách sử dụng chất điều hòa sinh trưởng vi lượng đạt hiệu ( Lê Văn Tri : NXB Khoa học Kĩ thuật Hà Nội -1992) 3./ Hoa Kĩ thuật trồng hoa (Nguyễn Xuân Linh; NXB Nông Nghiệp-1998) 4./Nuôi cấy mô tế bào thực vật nghiên cứu mô trồng (Nguyễn Văn Uyển Cộng sự) Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn ... tạo giống hồn thiện quy trình kỹ thuật thâm canh nâng cao suất, chất lượng hiệu sản xuất hoa đồng tiền, tiến hành nghiên cứu đề tài “ Nghiên cứu quy trình nhân giống hoa Đồng Tiền phương pháp nuôi. .. nghiên cứu: III.1.1 Đối tượng nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu giống Gerbera III.1.2Vật liệu nghiên cứu: - Các nụ hoa non khoẻ mạnh, không sâu bệnh - Các thiết bị, dụng cụ hoá chất nuôi cấy mô, ... nuôi cấy mô tế bào? ?? Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn I.2/ Mục đích, yêu cầu: I.2.1/ Mục đích: Nghiên cứu nhân nhanh invitro giống hoa Đồng Tiền