Phát hiện vi khuẩn lao kháng đa thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tửW10.2E42

Phát hiện vi khuẩn lao kháng đa thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tửW10.2E42 Bộ tài liệu sưu tập gồm nhiều Bài tập THCS, THPT, luyện thi THPT Quốc gia, Giáo án, Luận văn, Khoá luận, Tiểu luận…và nhiều Giáo trình Đại học, cao đẳng của nhiều lĩnh vực: Toán, Lý, Hoá, Sinh…. Đây là nguồn tài liệu quý giá đầy đủ và rất cần thiết đối với các bạn sinh viên, học sinh, quý phụ huynh, quý đồng nghiệp và các giáo sinh tham khảo học tập. Xuất phát từ quá trình tìm tòi, trao đổi tài liệu, chúng tôi nhận thấy rằng để có được tài liệu mình cần và đủ là một điều không dễ, tốn nhiều thời gian, vì vậy, với mong muốn giúp bạn, giúp mình tôi tổng hợp và chuyển tải lên để quý vị tham khảo. Qua đây cũng gởi lời cảm ơn đến tác giả các bài viết liên quan đã tạo điều kiện cho chúng tôi có bộ sưu tập này. Trên tinh thần tôn trọng tác giả, chúng tôi vẫn giữ nguyên bản gốc.Trân trọng.ĐỊA CHỈ DANH MỤC TẠI LIỆU CẦN THAM KHẢOhttp:123doc.vntrangcanhan348169nguyenductrung.htmhoặc Đường dẫn: google > 123doc > Nguyễn Đức Trung > Tất cả (chọn mục Thành viên)DANH MỤC TẠI LIỆU ĐÃ ĐĂNGA.HOÁ PHỔ THÔNG1.CHUYÊN ĐỀ LUYỆN THI ĐẠI HỌC HÓA HỮU CƠ PHẦN 1, PDF2.CHUYÊN ĐỀ LUYỆN THI ĐẠI HỌC HÓA HỮU CƠ PHẦN 1, Word3.CHUYÊN ĐỀ LUYỆN THI ĐẠI HỌC HÓA HỮU CƠ PHẦN 2. PHẦN HỢP CHẤT CÓ NHÓM CHỨC4.CHUYÊN ĐỀ LUYỆN THI ĐẠI HỌC HÓA HỌC VÔ CƠ PHẦN 1. CHUYÊN Đề TRÌNH HÓA VÔ CƠ 10 VÀ 115.CHUYÊN ĐỀ LUYỆN THI ĐẠI HỌC HÓA HỮU CƠ PHẦN 2. PHẦN HỢP CHẤT CÓ NHÓM CHỨC6.BỘ ĐỀ LUYỆN THI ĐẠI HỌC MÔN HÓA HỌC 1407.BỘ ĐỀ LUYỆN THI ĐẠI HỌC MÔN HÓA HỌC 41708.ON THI CAP TOC HỌC HÓA HỮU CƠ PHẦN 1, PDF9.TỔNG HỢP KIẾN THỨC HÓA HỌC PHỔ THÔNG10.70 BỘ ĐỀ LUYỆN THI ĐẠI HỌC MÔN HÓA HỌC, word11.CHUYÊN ĐỀ VÔ CƠ, LỚP 11 – 12. ĐẦY ĐỦ CÓ ĐÁP ÁN12.Bộ câu hỏi LT Hoá học13.BAI TAP HUU CO TRONG DE THI DAI HOC14.CAC CHUYEN DE LUYEN THI CO DAP AN 4815.GIAI CHI TIET CAC TUYEN TAP PHUONG PHAP VA CAC CHUYEN DE ON THI DAI HOC. 8616.PHUONG PHAP GIAI NHANH BAI TAP HOA HOC VA BO DE TU LUYEN THI HOA HOC 27417.TỔNG HỢP BÀI TẬP HÓA HỌC LỚP 1218.PHAN DANG LUYEN DE DH 20072013 14519.BO DE THI THU HOA HOC CO GIAI CHI TIET.doc20.Tuyển tập Bài tập Lý thuyết Hoá học luyện thi THPT Quốc gia21.PHÂN DẠNG BÀI TẬP HOÁ HỌC ÔN THI THPT QUỐC GIA 5722.BỘ ĐỀ LUYỆN THI THPT QUỐC GIA MÔN HOÁ CÓ ĐÁP ÁN 29 ĐỀ 14523.BỘ ĐỀ LUYỆN THI THPT QUỐC GIA MÔN HOÁ CÓ ĐÁP ÁN PHẦN 2B.HỌC SINH GIỎI1.Bồi dưỡng Học sinh giỏi Hoá THPT Lý thuyết và Bài tập2.Tài liệu hướng dẫn thí nghiệm thực hành học sinh giỏiolympic Hoá học 543.CHUYÊN ĐỀ BỒI DƯỠNG HỌC SINH GIỎI HOÁ LÝ THUYẾT VÀ BÀI TẬP 174.ĐỀ THI CHUYÊN HOÁ CÓ HƯỚNG DẪN CHI TIẾT PHẦN ĐẠI CƯƠNG VÔ CƠ 5.Tuyển tập Đề thi Bồi dưỡng Học sinh giỏi Hoá THCS Lý thuyết và Bài tập6.Chuyên đề Bồi dưỡng HSG Hoá học, 12 phương pháp giải toán7.Hướng dẫn thực hành Hoá Hữu cơ Olympic hay dành cho sinh viên đại học, cao đẳngC. HOÁ ĐẠI HỌC, SAU ĐẠI HỌC1.ỨNG DỤNG CỦA XÚC TÁC TRONG HÓA HỮU CƠ2.CƠ CHẾ PHẢN ỨNG TRONG HÓA HỮU CƠTIỂU LUẬN3.TL HÓA HỌC CÁC CHẤT MÀU HỮU CƠ4.GIÁO TRÌNH HÓA HỮU CƠ DÀNH CHO SINH VIÊN CĐ, ĐH, Hóa học Hữu cơ, tập 1 của tác giả Đỗ Đình RãngHóa học Hữu cơ, tập 2 của tác giả Đỗ Đình RãngHóa học Hữu cơ, tập 3 của tác giả Đỗ Đình RãngHóa học Hữu cơ, tập 1 của tác giả Thái Doãn TĩnhHóa học Hữu cơ, tập 2 của tác giả Thái Doãn TĩnhHóa học Hữu cơ, tập 3 của tác giả Thái Doãn TĩnhCơ chế Hóa học Hữu cơ, tập 1 của tác giả Thái Doãn TĩnhCơ chế Hóa học Hữu cơ, tập 2 của tác giả Thái Doãn TĩnhCơ chế Hóa học Hữu cơ, tập 3 của tác giả Thái Doãn Tĩnh5.VAI TRÒ SINH HỌC CỦA CÁC HỢP CHẤT VÔ CƠ 446.BÀI TẬP NHIỆT ĐỘNG LỰC HỌC 407.Giáo trình Hoá học phân tích8.Giáo trình Khoa học môi trường. http:baigiang.violet.vnpresentshowentry_id4897549.Giáo trình bài tập Hoá Hữu cơ 110.Giáo trình bài tập Hoá Hữu cơ 211.Giáo trình bài tập Hoá Phân tích 112.Thuốc thử Hữu cơ13.Giáo trình môi trường trong xây dựng14.Bài tập Hóa môi trường có đáp án đầy đủ nhất dành cho sinh viên Đại họcCao đẳng15.Mô hình, mô hình hóa và mô hình hóa các quá trình môi trường16.Cây trồng và các yếu tố dinh dưỡng cần thiết17.Đất đồng bằng và ven biển Việt Nam18.Chất Hữu cơ của đất, Hóa Nông học19.Một số phương pháp canh tác hiện đại,Hóa Nông học20.Bài tập Hoá Đại cương có giải chi tiết dành cho sinh viên Đại học21.Hướng dẫn học Hoá Đại cương dành cho sinh viên ĐH, CĐ22.Bài giảng Vai trò chất khoáng đối với thực vật PP23.Giáo trình Thực hành Hoá vô cơ dành cho sinh viên ĐH, CĐ24.Bài tập Vô cơ dành cho sinh viên Đại học, Cao đẳng có giải chi tiết25.Bài tập Vô cơ thi Olympic dành cho sinh viên Đại học, Cao đẳng có giải chi tiết26.Bài giảng Hoá học Phức chất hay và đầy đủ27.Bài giảng Hoá học Đại cương A1, phần dung dịch28.Bài tập Hoá lý tự luận dành cho sinh viên có hướng dẫn đầy đủ29.Bài tập Hoá lý trắc nghiệm dành cho sinh viên có đáp án đầy đủ30.Khoá luận Tốt nghiệp bài tập Hoá lý31.Giáo trình Hoá Phân tích dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng32.Bài giảng Điện hoá học hay dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng33.Bài tập Hoá học sơ cấp hay dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng34.Bài giảng phương pháp dạy học Hoá học 135.Bài giảng Công nghệ Hoá dầu36.Hóa học Dầu mỏ và Khí37.Bài tập Hóa dầu hay có hướng dẫn chi tiết dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng38.Bài tập Công nghệ Hóa dầu, công nghệ chế biến khi hay có hướng dẫn chi tiết dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng39.Bài giảng Hóa học Dầu mỏ hay dành sinh viên Đại học, cao đẳng40.Hướng dẫn thực hành Hoá Hữu cơ hay dành cho sinh viên đại học, cao đẳng41.Phụ gia thực phẩm theo quy chuẩn quốc gia42.Hướng dẫn thực hành Hoá Vô cơRC0 Các phản ứng Hoá học mang tên các nhà khoa học hay dành cho sinh viên43.Bài tập trắc nghiệm Hoá sinh hay dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng44.Bài tập Hoá học Hữu cơ có giải chi tiết dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng P145.Bài giảng Hoá học Hữu cơ 1 powerpoint hay46.Bài tập cơ chế phản ứng Hữu cơ có hướng dẫn chi tiết dành cho sinh viên47.Bài giảng Hoá học Hữu cơ dành cho sinh viên48.Bài tập Hoá sinh học hay có đáp án dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng49.Hoá học hợp chất cao phân tử50.Giáo trình Hoá học Phức chất dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng51.Bài giảng Hoá học Đại cương dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng52.Bài giảng Cơ sở Lý thuyết Hoá Hữu cơ dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng53.Bài giảng Hoá Hữu cơ dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng phần Hidrocacbon54.Bài giảng Hoá Hữu cơ dành cho sinh viên Đại học, cao đẳng phần dẫn xuất Hidrocacbon và cơ kim55.Bài giảng Hoá học Hữu cơ file word đầy đủ và hay nhấtD.HIỂU BIẾT CHUNG1.TỔNG HỢP TRI THỨC NHÂN LOẠI2.557 BÀI THUỐC DÂN GIAN3.THÀNH NGỬCA DAO TỤC NGỬ ANH VIỆT4.CÁC LOẠI HOA ĐẸP NHƯNG CỰC ĐỘC5.GIAO AN NGOAI GIO LEN LOP6.Điểm chuẩn các trường năm 2015E.DANH MỤC LUẬN ÁNLUẬN VĂNKHOÁ LUẬN…1.Công nghệ sản xuất bia2.Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học trong hạt tiêu đen3. Giảm tạp chất trong rượu4.Tối ưu hoá quá trình điều chế biodiesel5.Tinh dầu sả6.Xác định hàm lượng Đồng trong rau7.Tinh dầu tỏi8.Tách phẩm mầu9.Một số phương pháp xử lý nước ô nhiễm10.Tinh dầu HỒI11.Tinh dầu HOA LÀI12.Sản xuất rượu vang13.Vấn đề mới và khó trong sách Giáo khoa thí điểm14.Phương pháp tách tạp chất trong rượu15.Khảo sát hiện trạng ô nhiễm arsen trong nước ngầm và đánh giá rủi ro lên sức khỏe cộng đồng16.REN LUYEN NANG LUC DOC LAP SANG TAO QUA BAI TAP HOA HOC 10 LV 15117.Nghiên cứu đặc điểm và phân loại vi sinh vật tomhum18.Chọn men cho sản xuất rượu KL 4019.Nghiên cứu sản xuất rượu nho từ nấm men thuần chủng RV 4020.NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÂY DẤU DẦU LÁ NHẴN21.LUẬN ÁN TIẾN SĨ CHẾ TẠO KHẢO SÁT ĐẶC TÍNH ĐIỆN HOÁ CỦA ĐIỆN CỰC 2122.NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI UVARIA L. HỌ NA (ANNONACEAE)23.Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học trong dịch chiết từ đài hoa bụp giấm file word RE02324.Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học trong quả mặc nưa25.Nghiên cứu xử lý chất màu hữu cơ của nước thải nhuộm …bằng phương pháp keo tụ điện hóa26.Nghiên cứu và đề xuất hướng giải quyết các vấn đề khó và mới về hoá hữu cơ trong sách giáo khoa hoá học ở Trung học phổ thông27.Nghiên cứu chiết xuất pectin từ phế phẩm nông nghiệp, thực phẩm28.Chiết xuất quercetin bằng chất lỏng siêu tới hạn từ vỏ củ Hành tây29.Thành phần Hóa học và hoạt tính Kè bắc bộ pp30.Nghiên cứu phương pháp giảm tạp chất trong rượu Etylic31.Tối ưu hoá quá trình điều chế biodiesel từ mỡ cá tra với xúc tác KOHγAl2O3 bằng phương pháp bề mặt đáp ứng32.Tối ưu hoá quá trình chiết ANTHOCYANIN từ bắp cải tím33.Chiết xuất và tinh chế CONESSIN, KAEMPFEROL, NUCIFERIN từ dược liệu (Ko) RE03334.Phương pháp tính toán chỉ số chất lượng nước cho một số sông thuộc lưu vực sông Nhuệ sông Đáy 35.Xử lý suy thoái môi trường cho các vùng nuôi tôm (Nghiên cứu và ứng dụng công nghệ tiến tiến, phù hợp xử lý suy thoái môi trường nhằm sử dụng bền vững tài nguyên cho các vùng nuôi tôm các tỉnh ven biển Bắc bộ và vùng nuôi cá Tra ở Đồng Bằng Sông Cửu Long)36.Đánh giá học sinh dùng lý thuyết tập mờ, W813E0036 (Xây dựng một hệ thống thông tin hỗ trợ đánh giá học sinh dùng lý thuyết tập mờ)37.Công nghệ lên men mêtan xử lý chất thải làng nghề“Nghiên cứu hiện trạng ô nhiễm và công nghệ lên men mêtan nước thải chế biến tinh bột sắn của một số làng nghề thuộc huyện Hoài Đức, Hà Nội”38.Tính chất của xúc tác Fe2O3 biến tính bằng Al2O3(Tổng hợp và tính chất xúc tác của Fe2O3 được biến tính bằng Al2O3 và anion hóa trong phản ứng đồng phân hóa nankan”)39.Tác động môi trường của việc thu hồi đất, Word, 5, E0039 “Đánh giá ảnh hưởng môi trường của việc thu hồi đất tại quận Tây Hồ, Hà Nội” 540.Không gian hàm thường gặp, W8, E40 (“Về một số không gian hàm thường gặp”. 41.Xác định hoạt chất trong thuốc kháng sinh, W 10, E41 (Nghiên cứu xây dựng phương pháp phổ hồng ngoại gần và trung bình kết hợp với thuật toán hồi quy đa biến để định lượng đồng thời một sốhoạt chất có trong thuốc kháng sinh thuộc họ βLactam”42.Phát hiện vi khuẩn lao kháng đa thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tửW10.2E42 “Nghiên cứu phát hiện vi khuẩn lao kháng đa thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tử”F.TOÁN PHỔ THÔNG1.TUYEN TAP CAC DANG VUONG GOC TRONG KHONG GIAN2.Luyện thi THPT Quốc gia môn Toán 500 câu có đáp án3.Phân dạng Luyện thi THPT Quốc gia môn Toán4.Bộ đề Trắc nghiệm Luyện thi THPT Quốc gia môn Toán5.Chuyên đề Trắc nghiệm Luyện thi THPT Quốc gia môn Toán6.Bộ đề Thi thử Trắc nghiệm THPT Quốc gia môn Toán7.Bộ đề kiểm tra trắc nghiệm 1 tiết phút môn Toán lớp 128.Bài tập trắc nghiệm môn toán lớp 12, luyện thi THPT quốc gia tổng hợp rất nhiều P19.Bài tập trắc nghiệm môn toán lớp 12, luyện thi THPT quốc gia tổng hợp rất nhiều P210.Bài tập trắc nghiệm môn toán lớp 12, luyện thi THPT quốc gia tổng hợp rất nhiều P311.Bài tập trắc nghiệm môn toán Giải tích lớp 12, luyện thi THPT quốc gia P1 có đáp án12.Bài tập trắc nghiệm môn toán Giải tích lớp 12, luyện thi THPT quốc gia P213.Phân dạng Bài tập trắc nghiệm môn toán lớp 12, luyện thi THPT quốc gia14.Bài tập trắc nghiệm môn toán Hình học lớp 12, luyện thi THPT quốc gia.15.Bài tập trắc nghiệm môn toán Hình học lớp 12, luyện thi THPT quốc gia có đáp án16.Phân dạng Bài tập trắc nghiệm môn toán Hình học lớp 12, luyện thi THPT quốc gia17.Đề Thi thử Trắc nghiệm THPT Quốc gia môn Toán18.Đề Thi thử Trắc nghiệm THPT Quốc gia môn Toán có đáp án19.Đề Thi thử Trắc nghiệm THPT Quốc gia môn Toán có giải chi tiết20.Ôn tập Toán 12, luyện thi THPT Quốc gia21.Phân dạng bài tập hình học 11 rất hay có giải chi tiết các dạng22.Bài tập trắc nghiêm Toán 1123.Đề trắc nghiệm toán đại số 12 dành cho kiểm tra 1 tiêt, 15 phút có đáp ánG.LÝ PHỔ THÔNG1.GIAI CHI TIET DE HOC SINH GIOI LY THCS

TUYỂN TẬP BÀI TẬP PHỔ THÔNG, ĐẠI HỌC, SAU ĐẠI HỌC LUẬN ÁN-ĐỒ ÁN-LUẬN VĂN-KHOÁ LUẬN-TIỂU LUẬN LUẬN VĂN THẠC SĨ PHÁT HIỆN VI KHUẨN LAO KHÁNG ĐA THUỐC BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ {{{ DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Bp : Base pairs CNSH : Công nghệ sinh học CTCLQG : Chương trình chống lao quốc gia DNA : Acit deoxyribonucleic dNTPs : Deoxyribonucleotide Triphosphate EDR : Extensively drug resitant (Kháng thuốc mở rộng) EMB : Ethambutol HRS : Ba loại thuốc isoniazid, rifampicin, streptomycin HRSE : Bốn loại thuốc isoniazid, rifampicin, streptomycin ethambutol INH : Isoniazid IPTG : Isopropyl-thio-β-D-galactoside Kb : Kilo base LB : Luria - Bertani MDR : Multidrugs resistant (Kháng đa thuốc) PAS : Paraminosalicylic acid PAZ : Pyrazinamid PCR : Polymerase Chain Reaction RMP : Rifampicin RNA : Acid Ribonucleic RRDR : Rifampin resistance determining region (Vùng định kháng rifampicin) Taq polymerase : Thermus aquaticus DNA polymerase TCYTTG : Tổ chức Y tế Thế giới V : Volume (thể tích) X-gal : 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside MỞ ĐẦU Bệnh lao vi khuẩn lao (Mycobacterium tuberculosis) biết rõ từ một kỷ Hiện tỷ lệ nhiễm lao ước tính 1/3 dân số giới, khoảng triệu người mắc lao mới triệu người chết lao năm Bệnh lao trở nên nghiêm trọng với xuất hiện các chủng lao kháng đa thuốc (Multi-Drugs Resistant - MDR), tức thể lao với vi khuẩn kháng hai loại thuốc chống lao mạnh isoniazid (INH) rifampicin (RMP) Theo số liệu thống kê chương trình chống lao Quốc gia năm 2007, giới có khoảng 511.000 trường hợp nhiễm lao kháng đa thuốc, có 130.000 trường hợp tử vong Do khó khăn việc điều trị bệnh nhân mang các chủng lao kháng thuốc phổ rộng đa kháng mà việc phát hiện sớm các chủng lao kháng đa thuốc trở nên quan trọng điều trị bệnh lao Hiện nhiều nơi chẩn đoán vi khuẩn lao kháng thuốc dựa vào phương pháp nuôi cấy vi khuẩn làm kháng sinh đồ chủ yếu, nhiên, việc ứng dụng sinh học phân tử tạo đột phá phát hiện vi khuẩn lao kháng thuốc Cơ chế kháng thuốc ở vi khuẩn lao quá trình tiến hóa, có nhiều đột biến xuất hiện một số gen chức năng, trước hết ở gen rpoB katG Thời gian chẩn đoán rút ngắn vài ngày, với độ nhạy độ đặc hiệu cao, tạo điều kiện cho kiểm soát bệnh lao dễ dàng Các nghiên cứu sinh học phân tử chẩn đoán lao kháng thuốc loại kháng thuốc xuất hiện các đột biến gen tương ứng chịu trách nhiệm Chính vì việc xác định các trường hợp nhiễm lao kháng thuốc thường kèm với chẩn đoán phát hiện đột biến gen đối với các chủng lao phát hiện Các chủng vi khuẩn lao kháng isoniazid có liên quan tới đột biến tại codon 315 gen katG, đối với các chủng kháng rifampicin xuất hiện các đột biến ở một vùng nóng gồm 27 codon nằm gần trung tâm gen rpoB Xuất phát từ lý trên, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu phát vi khuẩn lao kháng đa thuốc kỹ thuật sinh học phân tử” Với mục tiêu nghiên cứu: phát nhanh chủng vi khuẩn lao kháng thuốc thông qua xác định vị trí đột biến liên quan kháng thuốc gen katG rpoB phương pháp giải trình tự kỹ thuật multiplex real-time PCR Để đạt mục tiêu đề tài, tiến hành một số nội dung nghiên cứu sau: Xác định trình tự gen rpoB katG Phân tích đặc điểm phân tử các chủng vi khuẩn lao kháng thuốc phân lập tại Việt Nam sở trình tự nucleotide hai gen rpoB katG Tối ưu hóa thành phần chu trình bộ kit multiplex real-time PCR phát hiện nhanh vi khuẩn lao kháng thuốc Chương – TỔNG QUAN 1.1 BỆNH LAO Lao (Tuberculosis) một bệnh truyền nhiễm mạn tính, tình trạng nhiễm vi khuẩn Mycobacterium tuberculosis, thường gặp ở phổi ảnh hưởng đến hệ thần kinh trung ương (lao màng não), hệ bạch huyết, hệ tuần hoàn (lao kê), xương khớp Bệnh lao gắn liền với phát triển xã hội loài người từ hàng ngàn năm nay, giới chưa không một quốc gia nào, một khu vực nào, một dân tộc người mắc chết vì bệnh lao Trực khuẩn lao lần bác sĩ Robert Koch phát hiện vào ngày 24/3/1882 Trong thời gian ở Mỹ châu Âu, cứ người thì có người chết vì lao, vậy, phát hiện Robert Koch một bước ngoặt quan trọng việc khống chế loại trừ bệnh Trước đây, lao xem một bệnh truyền nhiễm nguy hiểm giới, lưu hành với tỷ lệ mắc bệnh khá cao, đặc biệt ở các nước thuộc châu Phi khu vực châu Á, có Việt Nam Việt Nam đứng thứ 12 22 nước có số bệnh nhân lao cao toàn cầu Trong khu vực Tây Thái Bình Dương, Việt Nam đứng thứ ba sau Trung Quốc Philippines số bệnh nhân lao, số bệnh nhân lao xuất hiện năm Hiện nguy nhiễm lao ở nước ta năm ước tính 1,5% dân số (ở các tỉnh phía Nam 2%, ở các tỉnh phía Bắc 1%) Trên thực tế số nguy nhiễm lao hàng năm cao 1,5%, vậy, các số nêu lớn Điều tăng thêm khó khăn đối với công tác phòng chống lao các năm tới mà thời gian khá dài, đến hàng chục năm, ở thiên niên kỷ mới [3, 35] 1.2 TÌNH HÌNH LAO KHÁNG THUỐC Bệnh lao ngày trở nên phức tạp có ảnh hưởng nặng nề xuất hiện thêm vi khuẩn lao kháng thuốc tạo nên một dạng bệnh khó phòng chống Các chủng lao kháng thuốc chia làm hai thể, lao kháng đa thuốc (Multi-drugs resistant - MDR) lao kháng thuốc phổ rộng (Extensively drug resistant - XDR), chủng vi khuẩn lao kháng thuốc nguồn lây nhiễm mối đe dọa cho sức khỏe cộng đồng Theo ước tính Tổ chức Y tế giới (WHO), giới có khoảng 42 vạn người mắc lao kháng đa thuốc, chiếm số lượng lớn ở khu vực Tây Thái Bình Dương có 15 vạn trường hợp, khu vực Đông Nam Á sau khu vực Châu Phi Đông Âu Một số chủng lao vừa kháng đa thuốc vừa kháng thuốc phổ rộng, coi loại siêu kháng thuốc [17] Tình hình lao siêu kháng thuốc ngày trở nên trầm trọng, từ tháng 11/2004 đến 11/2005, WHO Trung tâm Kiểm soát Bệnh Hoa Kỳ phân tích 17.890 mẫu đờm gửi từ 40 quốc gia toàn giới, thấy có 20% trường hợp kháng đa thuốc 2% trường hợp kháng thuốc phổ rộng Ở Việt Nam, theo nghiên cứu Chương trình Chống lao Quốc gia thì có 32,5% các trường hợp bệnh lao mới mang vi khuẩn lao kháng thuốc [1, 3] Vi khuẩn lao kháng thuốc một thách thức lớn, đe dọa công cuộc phòng chống lao toàn cầu, vì các thuốc chống lao có hiệu hiện bị vi khuẩn lao kháng lại kháng đa thuốc [10] Thuốc chống lao có nhiều loại, tác dụng thuốc trực khuẩn lao không giống Hiện người ta chia thuốc chống lao thành hai loại: (1) các thuốc chống lao chủ yếu (còn gọi các thuốc chống lao loại một, thuốc chống lao hàng đầu), (2) các thuốc chống lao thứ yếu (còn gọi các thuốc chống lao loại hai, thuốc chống lao hàng thứ hai) Trong các thuốc chống lao loại một thuốc có hiệu độc tính nhất, thì các thuốc chống lao hàng thứ hai thuốc có tác dụng lại có độc tính cao giá thành đắt Ở New York, chi phí điều trị bệnh nhân nhạy với thuốc 2.000 USD điều trị bệnh nhân kháng thuốc hết 250.000 USD Hiện số tử vong hàng năm lao giới lớn số tử vong HIV, sốt rét các bệnh nhiệt đới cộng lại Tổ chức Y tế Thế giới nhận định bệnh lao hiện quay trở lại trở nên tồi tệ bởi kháng thuốc vi khuẩn lao [17] Thuốc kháng sinh dùng để điều trị lao streptomycin, vài năm sau kháng sinh sử dụng thì người ta nhận thấy hiện tượng đề kháng lại streptomycin vi khuẩn lao Sau các kháng sinh chống lao khác tiếp tục đời: para – aminosalysilic, isoniazid, rifampicin không mang lại hiệu sau một thời gian điều trị định [7] Nghiên cứu tìm kiếm hoá dược mới có hiệu điều trị lao, đặc biệt lao kháng thuốc luôn thực hiện ngày có nhiều hợp chất chống lao mới đưa vào sử dụng, ví dụ, gần linezolid [43] Tuy nhiên, theo chế áp lực, vi khuẩn không ngừng biến đổi tạo nên nhiều chủng mới có khả kháng thuốc nhanh chóng [52] Khả điều trị thành công đạt 95-100% đối với bệnh nhân mắc lao thông thường, tỷ lệ thành công với bệnh nhân mắc lao kháng thuốc 20 – 30%, chí không điều trị mắc lao kháng đa thuốc kháng thuốc phổ rộng dùng kết hợp đến năm loại kháng sinh điều trị lao Vì vậy, việc phát hiện ngăn chặn lan truyền các chủng lao kháng đa thuốc vấn đề quan trọng điều trị lao hiện [7, 10, 35] 1.3 VI KHUẨN LAO 1.3.1 Cấu tạo Trực khuẩn lao có dạng hình que, thân mảnh dẻ, nha bào, kích thước - µm, dày 0,3 µm, kháng cồn, kháng acid (hình 1.1) Khi nhuộm phương pháp Ziehl - Neelsen, trực khuẩn lao bắt màu đỏ thẫm, không bị cồn acid làm màu carbonfuchsin Ở môi trường nuôi cấy có độ acid đậm đặc định, trực khuẩn lao phát triển được, vì vậy, chúng gọi trực khuẩn kháng cồn, kháng toan (acid fast bacilli AFB), đặc điểm nổi bật vi khuẩn thuộc chi mycobacteria Đặc điểm quan trọng để phát hiện trực khuẩn lao phương pháp hình thái học (nhuộm màu) các mẫu bệnh phẩm Một số giả thiết cho mức kháng acid độ dài các chuỗi mycolic acid M tuberculosis có khả thể hiện tất các chế cần thiết để tổng hợp các vitamin, amino acid các enzyme cofactor thiết yếu tế bào Mycobacteria có cấu trúc gần giống với vi khuẩn Gram dương chúng không xếp vào loại vi khuẩn Gram dương các phân tử gắn với thành tế bào lipid chứ protein hay polysaccharide Do đó, chúng không giữ lại tinh thể màu tím xuất hiện nhuộm Gram [2, 5, 37, 38] Trực khuẩn lao hiếu khí, phát triển tốt ở 37 oC dưới áp suất O2 100 mmHg Đỉnh phổi vùng phổi dưới xương đòn thường hay mắc lao vì có áp suất O từ 120 – 130 mmHg (khi đứng) đến thân xương đầu xương vì áp suất O ở 100 mmHg Lách, gan, dạ dày, thực quản mắc lao vì áp suất O2 thấp Trực khuẩn lao sinh sản chậm, cứ 20 mới có một lần phân chia tế bào, điều kiện phòng thí nghiệm thì cứ 12 đến 24 M tuberculosis phân chia một lần môi trường nuôi cấy giàu dinh dưỡng Loewenstein [46] Tốc độ phát triển chậm tính thẩm thấu thành tế bào hạn chế việc hấp thụ chất dinh dưỡng liên quan đến tốc độ tổng hợp ribosome (Hình 1.2) Hình 1.1 Hình dạng tế bào M tuberculosis (http://www.diseasedetectives.org/micro be_gallery/tuberculosis) Hình 1.2 Tế bào vi khuẩn lao phát triển môi trường nuôi cấy (http://abcnews.go.com/Health/Germs/st ory?id=3079114&page=1) Trực khuẩn lao có cấu tạo phức tạp, hoàn hảo mà vi sinh vật có Dưới kính hiển vi điện tử trực khuẩn lao có cấu tạo sau (hình 1.3): - Lớp có cấu trúc màng, có thành phần chủ yếu các phospholipid gồm nhóm: nhóm ưa nước hướng vào bên trong, nhóm kỵ nước quay Cấu trúc tạo nên màng sinh học có tác dụng giúp trực khuẩn điều hòa thẩm thấu vỏ trực khuẩn, màng chứa các protein chức khác các protein truyền tín hiệu đến bộ máy trao đổi chất di truyền nguyên sinh chất, các enzyme liên quan đến quá trình trao đổi chất sinh lượng, các chất mang làm trung gian cho quá trình vận chuyển các chất dinh dưỡng các ion Các enzyme xuyên màng tổng hợp màng, tạo thành vách ngăn phân chia tế bào, tập hợp tiết một số enzyme ngoại bào, chép DNA [2, 4, 37, 38] - Lớp peptidoglucan liên kết với đường arabinose các phân tử mycolic acid tạo nên một bộ khung định hình cho vi khuẩn đảm bảo cho vi khuẩn có độ cứng định Thành tế bào mycobacteria cấu trúc phức tạp biết ở prokaryote, có một số thành phần hóa học liên kết chéo bất thường, mức độ liên kết peptidoglucan ở thành tế bào M tuberculosis 70 - 80% ở vi khuẩn E coli 20 - 30% [38] - Lớp tạo nên bởi liên kết các mycolic acid các chất phức tạp, lớp tạo nên độc tính vi khuẩn lao có cấu trúc phức tạp làm tăng khả chống thấm nước thành tế bào vi khuẩn giúp trực khuẩn tồn tại lâu với môi trường bên ngoài, chống khả bị hủy diệt bởi đại thực bào các tế bào miễn dịch [38] - Lớp vỏ có vai trò quan trọng, có cấu trúc peptidoglyolipid Nó đảm bảo cho tồn tại trực khuẩn, làm cho trực khuẩn bền vững với hiện tượng thực bào, giúp bảo vệ khỏi áp suất thẩm thấu nên vào thể trực khuẩn khó bi tiêu diệt Hình 1.3 Cấu tạo thành tế bào M tuberculosis (http://www3.niaid.nih.gov/topics/tuberculosis/Research/basicResearch/biology cell.htm) 1.3.2 Cơ chế gây bệnh Vi khuẩn lao xâm nhập vào thể qua nhiều đường khác nhau: thường đường hô hấp, qua đường tiêu hóa, da, kết mạc mắt Sau gây tổn thương tiên phát, vi khuẩn lao theo đường bạch huyết đường máu để đến gây tổn thương thứ phát ở các quan khác: Phổi, thận, màng não, xương, hạch thường bị đỉnh phổi, nơi có áp suất oxy 120 mmHg vì điều kiện hoạt động tốt cho vi khuẩn lao Độc lực vi khuẩn lao có liên quan đến “Cord factor” (trehalose - 6,6’- dimycolate) chất gây ức chế hoạt động tế bào bạch cầu, gây nên u hạt mạn tính [7] Khi vi khuẩn lao xâm nhập vào thể, thể xuất hiện đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào Lúc này, đại thực bào, các tế bào lympho T, lympho B các nguyên bào sợi kết tập lại tạo các u hạt, với các tế bào lympho vây quanh đại thực bào Chức các u hạt không ngăn cản lan tỏa tế bào M tuberculosis mà tạo môi trường tại chỗ cho các tế bào hệ miễn dịch trao đổi thông tin [23] Bên các u hạt, tế bào lympho T tiết các cytokine, γ interferon, hoạt hóa đại thực bào khiến chúng diệt khuẩn tốt Tế bào lympho T tiêu diệt trực tiếp các tế bào bị nhiễm Nhưng điều quan trọng vi khuẩn không bị u hạt loại trừ hoàn toàn mà trở nên bất hoạt tạo dạng nhiễm khuẩn “tiềm ẩn” (latent tuberculosis) [18] 1.3.3 Đặc điểm hệ gen Toàn bộ hệ gen vi khuẩn lao M tuberculosis chủng H37Rv giải trình tự, phân tích công bố năm 1998 gồm 4.411.529 bp, với đặc tính chứa nhiều guanine cystosine (G + C khoảng 65 %) Trên 90% trình tự dự đoán có mã hóa cho protein có gen giả (pseudogene - gen không mang thông tin di truyền mã hóa cho protein) [28, 38, 44] Dữ liệu hệ gen một số vi khuẩn thuộc chi Mycobacterium, trước hết vi khuẩn lao (M tuberculosis) vi khuẩn phong (M leprae) có tầm quan trọng đặc biệt nghiên cứu đặc điểm sinh học phân tử hỗ trợ dịch tễ học, di truyền học nghiên cứu kháng thuốc, số liệu lưu giữ tại một số trung tâm sử dụng một số chương trình để truy cập khám phá sử dụng [11, 53] 1.4 CƠ CHẾ KHÁNG THUỐC Ở VI KHUẨN LAO 1.4.1 Kháng sinh điều trị lao Thuốc chống lao có nhiều loại, tác dụng chúng lên trực khuẩn lao không giống Hiện người ta chia thuốc chống lao làm hai loại: (1) Các thuốc chống lao chủ yếu: gồm năm thuốc chủ yếu là: isoniazid (INH), rifampicin (RMP), ethambutol (EMB), pyrazinamid (PZA), streptomycin (SM) Đây thuốc kháng lao hiệu độc tính (2) Các thuốc chống lao thứ yếu: thuốc chống lao có tác dụng có độc tính cao, không dùng phác đồ điều trị lao lại dùng các trường hợp điều trị thất bại vi khuẩn lao kháng lại các loại thuốc chống Từ bảng tổng hợp kết thử nghiệm phản ứng multiplex real-time PCR phát hiện đột biến ở trên, tiến hành so sánh với kết xác định trình tự nhận thấy kết phát hiện đột biến phản ứng multiplex real-time PCR có độ tương đồng 100% so với phương pháp giải trình tự Từ kết luận sử dụng các probe thiết kế tối ưu thành công các thành phần, chu trình phản ứng multilex real-time PCR phát hiện đột biến liên quan kháng thuốc ở vi khuẩn lao KẾT LUẬN Kết giải trình tự gen katG 82 chủng vi khuẩn lao kháng thuốc, 64 chủng kháng isoniazid, 46 chủng kháng rifampicin cho thấy, 65/82 (79,3%) mẫu xảy đột biến gen katG, đột biến xảy ở một điểm nhiều điểm đoạn gen quan tâm, 47/64 (73,4%) chủng kháng INH xảy đột biến tại codon 315 Đối với gen rpoB, 51/82 (62,2%) chủng kháng thuốc cho thấy đột biến tại một số vị trí riêng biệt vùng nóng 81 bp Trong tổng số 51 chủng kháng thuốc xảy đột biến tại vùng nóng 81 bp cho thấy đột biến xảy một số vị trí codon khác nhau, thường gặp tại vị trí codon 531 (37,5%) sau codon 526 (22,2%) Các mẫu nhạy cảm với thuốc kháng sinh chủng chuẩn quốc tế H37Rv không phát hiện đột biến gen nghiên cứu Tối ưu hóa thành công multiplex real-time PCR phát hiện nhanh vi khuẩn lao kháng thuốc Kết thử nghiệm phản ứng multiplex real-time PCR phát hiện đột biến liên quan kháng thuốc có độ tương đồng 100% so với phương pháp xác định đột biến cách giải trình tự gen KIẾN NGHỊ Cần nghiên cứu với số lượng chủng vi khuẩn lao lớn để đánh giá xác tỷ lệ, vị trí, tương quan kháng thuốc các đột biến xảy gen rpoB katG Thử nghiệm qui trình multiplex real-time PCR phát hiện đồng thời đột biến (katG315, rpoB526 rpoB531) để phát hiện vi khuẩn lao kháng thuốc (isoniazid rifampicin) cho các sở khác để nâng cao hiệu chẩn đoán lao nước TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đặng Đức Anh (2001), Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch số thể bệnh lao, Luận án Tiến sĩ sinh học Nguyễn Đình Bảng (1992), Vi sinh vật y học, Nhà xuất Học viện Quân y Bộ Y tế, Trung tâm phòng chống lao quốc gia (2006), Báo cáo tổng kết chương trình chống lao quốc gia năm 2005, Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyễn Thị Chính, Trương Thị Hòa (2005), Vi sinh vật y học, Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2003), Vi sinh vật học, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội Nguyễn Văn Hưng (2001), Nghiên cứu số đặc điểm sinh học Mycobacterium tubeculosis phân lập Viện lao Bệnh phổi, Luận án Tiến sỹ Y học Trần Văn Sáng (1999), Vi khuẩn lao kháng thuốc cách phòng điều trị, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội Phạm Hùng Vân (2009), PCR real-time PCR, vấn đề áp dụng thường gặp, Nhà xuất Y học, Thành phố Hồ Chí Minh Tiếng Anh Ahmad, S., Fares, E., Araj, G.F., Chugh, T.D., Mustafa, A.S (2002), ”Prevalence of S315T mutation within the katG gene in isoniazid-resistant clinical Mycobacterium tuberculosis isolates from Dubai and Beirut”, International Journal of Tuberculosis and Lung Disease, 6(10), pp 920-926 10 Ahmad, S., Mokaddas, E (2009), “Recent advances in the diagnosis and treatment of multidrug-resistant tuberculosis”, Respir Med, 103(12), pp 1777-1790 11 Ambur, O.H., Davidsen, T., Frye, S.A., Balasingham, S.V., Lagesen, K., Rognes, T., Tønjum, T (2009), “Genome dynamics in major bacterial pathogens”, FEMS Microbiol Rev, 33(3), pp 453-470 12 Ani, A.E (2008), “Advances in the laboratory diagnosis of Mycobacterium tuberculosis”, Ann Afr Med, 7(2), pp 57-61 13 Argekar, A.P., Kunjir, S.S., Purandare, K.S (1996), “Simultaneous determination of rifampicin, isoniazid and pyrazinamid by high performance thin layer chromatography”, J Pharm Biomed Anal., 14, pp 1645-1650 14 Asgharzadeh, M., Kafil, H.S (2007), ”Current trends in molecular epidemiology studies of Mycobacterium tuberculosis”, Biotechnol Mol Biol Rev., 2(5), pp 108-115 15 Aslan, G., Tezcan, S., Serin, M.S., Emekdas, G (2008), ”Genotypic analysis of isoniazid and rifampicin resistance in drug-resistant clinical Mycobacterium tuberculosis complex isolates in southern Tukey”, Jpn J Infect Dis., 61(4), pp 255-60 16 Bahrmand, A.R., Titov, L.P., Tasbiti, A.H., Yari, S., Graviss, E.A (2009), “High-level rifampin resistance correlates with multiple mutations in the rpoB gene of pulmonary tuberculosis isolates from the Afghanistan border of Iran”, J Clin Microbiol., 47(9), pp 2744-2750 17 Balganesh, T.S., Alzari, P.M., Cole, S.T (2008), “Rising standards for tuberculosis drug development” Trends Pharmacol Sci., 29(11), pp 576-581 18 Barry, C.E., Boshoff, H.I., Dartois, V., Dick, T., Ehrt, S., Flynn, J., Schnappinger, D., Wilkinson, R.J, Young, D (2009), “The spectrum of latent tuberculosis: rethinking the biology and intervention strategies”, Nat Rev Microbiol., 7(12), pp 845-855 19 Borrell, S., Gagneux, S (2009), “Infectiousness, reproductive fitness and evolution of drug-resistant Mycobacterium tuberculosis”, Int J Tuberc Lung Dis., 13(12), pp 1456-1466 20 Campbell, E.A., Korzheva, N., Mustaev, A., Murakami, K., Nair, S., Goldfarb, A., Darst, S.A (2001), ”Structural mechanism for rifampicin inhibition of bacteria RNA polymerase”, J Cell 104, pp 901-912 21 Caws M., Duy, P.M., Tho, D.Q., Lan, N.T.N., Hoa, D.V., Farrar, J (2006), ”Mutations prevalent among rifampicin and isoniazid resistant Mycobacterium tuberculosis isolates from a hospital in Vietnam”, J Clin Microbiol., 44, pp 2333-2337 22 Cavusoglu, C., Hilmioglu, S., Guneri, S., Bilgic, A (2002), ”Characterization of rpoB mutations in rifampin – resistant clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from Turkey by DNA sequencing and line probe assay” J Clin Microbiol 40, pp 44354438 23 Chan, E.D., Bai, X., Kartalija, M., Orme, I.M., Ordway, D.J (2010), “Host immune response to rapidly-growing mycobacteria, an emerging cause of chronic lung disease”, Am J Respir Cell Mol Biol., [Epub ahead of print] 24 Cooksey, R., Morlock, G., Glickman, S., Crawford J (1997), “Evaluation of a line probe assay kit for characterization of rpoB mutations in refampin resistant Mycobacterium tuberculosis isolates from New York city”, J Clin Microbiol., 35(5), pp 1281-1283 25 Dale, J.W., Nor, R.M., Ramayah, S., Tang, T.H., Zainuddin, Z.F (1999), “Molecular epidemiology of tuberculosis in Malaysia”, J Clin Microbiol., 37(5), pp 1265-1268 26 de Viedma, D.G., Infantes, S.M.D., Lasala, F., Chaves, F., Alcala, L., Bouza, E (2002), “New real-time PCR able to detect in a single tube multiple rifampin resistance mutations and high-level isoniazid resistance mutations in Mycobacterium tuberculosis”, J Clin Microbiol., 40, pp 988-995 27 Espasa, M., González-Martín J., Alcaide, F., Aragón, L.M., Lonca, J., Manterola, J.M., Salvadó, M., Tudó, G., Orús, P., Coll, P (2005), “Direct detection in clinical samples of multiple gene mutations causing resistance of Mycobacterium tuberculosis to isoniazid and rifampicin using fluorogenic probes” J Antimicrob Chemother., 55(6), pp 860-865 28 Espitia, C., Laclette, J.P., Mondragón-Palomino, M., Amador, A., Campuzano, J., Martens, A., Singh, M., Cicero, R., Zhang, Y., Moreno, C (1999), “The PE-PGRS glycine-rich proteins of Mycobacterium tuberculosis: a new family of fibronectinbinding protein”, Microbiology, 145, pp 3487-3495 29 Hahn, Y., Shin, S (2001), “Electrochemical behavior and diffenrential pulse polarographic determination of rifampicin in pharmaceutical preparations”, Arch Pharma Res., 24(2), pp 100-104 30 Hillemann, D., Weizenegger, M., Kubica, T., Richter, E., Niemann, S (2005), “Use of the genotype MTBDR assay for rapid detection of rifampin and isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis complex isolates”, J Clin Microbiol., 43(8), pp 3699-3703 31 Marín, M., García de Viedma D., Ruíz-Serrano, M.J., Bouza, E (2004), “Rapid Direct Detection of Multiple Rifampin and Isoniazid Resistance Mutations in Mycobacterium tuberculosis in Respiratory Samples by Real-Time PCR” Antimicrob Agents Chemother., 48(11), pp 4293-4300 32 Matsiota-Bernard, P., Vrioni, G., and Marinis, E (1998), “Characterization of rpoB Mutations in Rifampin-Resistant Clinical Mycobacterium tuberculosis Isolates from Greece”, J Clin Microbiol., 36, pp 20–23 33 Miotto, P., Piana, F., Penati, V., Canducci, F., Migliori, G.B., Daniela Maria Cirillo, D.M (2006), “Use genotype MTBDR assay for molecular detection of refampin and isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis clinical strains isolates in Italy”, J Clin Microbiol., 44, pp 2485-2491 34 Mokrousov, I., Otten, T., Vyshnevsky, B., Narvskaya, O (2003), “Allele-specific rpoB PCR assays for detection of rifampicin-resistant Mycobacterium tuberculosis in sputum smears”, Antimicrob Agents Chemother, 47, pp 2231-2235 35 Musser, J.M (1995), “Antimicrobial agent resistance in Mycobacteria: Molecular Genetic Insights”, Clinical Microbiology Review, 8(4), pp 496-514 36 Naga, S., Urvashi, B.S., Jyoti, A., Jitendra, N.P., Pradeep, S., Jyotish, C.S (2006), “Rapid detection of rifampicin-resistant Mycobacterium tuberculosis by in-house, reverse line blot assay”, Diagn Microbio Infect Dis., 56(2), pp 133-140 37 Noordhoek, G.T., Kaan, J.A., Mulder, S., Wilke, H., Kolk, A.H (1995), “Routine application of the polymerase chain reaction for detect of Mycobacterium tuberculosis in clinal samples”, J Clin Pathol., 48, pp 810-814 38 Palomino, J.C., Leao, S.C., Ritacco, V (2007), Tuberculosis 2007 - from basic science to patient care www.tubercuosistextbook.com 39 Qian, L., Abe, C., Lin, T.P., Lin, T.P., Yu, M.C., Cho, S.N., Wang, S., Douglas, J.T (2002), “rpoB genotypes of Mycobacterium tuberculosis Beijing family isolates from East Asian countries” J Clin Microbiol., 40, pp 1091-1094 40 Ramaswamy, S., and Musser, J.M (1998), “Molecular genetic basis of anti-microbial agent resistance in Mycobacterium Tuberculosis” Tuber Lung Dis., 79(1), pp 3-29 41 Rattan, A., Kalia, A., Ahmad (1998), ”Multidrug - resistant Mycobacterium tuberculosis” Emerg Infect Dis., 4(2), pp 195-209 42 Sajduda, A., Brzostek, A., Poplawska, M., Augustynowicz-Kopee, E., Zwolska, Z., Niemann, S., Dziadek, J., Hillemann, D (2004), ”Molecular Characrerization of Rifampin and Isoniazid-Resistant Mycobacterium tuberculosis Strains Isolated in Poland”, J Clin Micobiol, pp 2425-2431 43 Schecter, G.F., Scott, C., True, L., Raftery, A., Flood, J., Mase, S (2010), “Linezolid in the treatment of multidrug-resistant tuberculosis”, J Clin Infect Dis 50(1), pp 4955 44 Scholossberg, D (2006), Tuberculosis and nontuberculus Mycobacteria infections, Fifth edition McGraw-Hill, Medical Publishing Division 45 Shin, S.S., Naroditskaya, V., Sloutsky, A., Werner, B., Timperi, R., Bayona, J., Farmer, P.E., Becerra, M.C (2005), ”rpoB gene mutations in clinical isolates of multidrug resistance in Mycobacterium tuberculosis in Northern Lima, Peru”, Microb Drug Resist, 11(1), pp 26-30 46 Shitrit, D., Vertenshtein, T., Shitrit, A.B., Shlomi, D., Kramer, M.R., (2005), “The role of routine culture for tuberculosis during bronchoscopy in a nonendemic area: analysis of 300 cases and review of the literature”, Infect Control 33(10), pp 602-605 47 Telenti, A., Imboden, P., Marchesi, F., Lowrie, D., Cole, S., Colston, M.J., Matter, L., Schopfer, K., Bodmer, T (1993), ”Detection of rifampicin-resistance mutations in Mycobacterium tuberculosis”, Lancet 341, pp 647-650 48 W.H.O (2004), “Anti-tuberculosis drug resistant in the world”, WHO Report No 2, http://www.who.int/tb/piblication/who_htm_tb_2004_343/en/ 49 W.H.O., (2007), “Global tuberculosis control surveillance, planning, financing”, WHO Report 2007 50 Wada, T., Maeda, S., Tamaru, A., Imai, S., Hase, A., Kobayashi, K (2004), “Dual-Probe Assay for Rapid Detection of Drug-Resistant Mycobacterium tuberculosis by RealTime PCR” J Clin Microbiol, 42(11), pp 5277-5285 51 Woodford, N., Ellington, M.J (2007), “The emergence of antibiotic resistance by mutation”, J Clin Microbiol Infect., 13(1), pp 5-18 52 Zhang, Y., Yew, W.W (2009), “Mechanisms of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis”, Tuberc Lung Dis., 13(11), pp 1320-1330 53 Zhu, X., Chang, S., Fang, K., Cui, S., Liu, J., Wu, Z., Yu, X., Gao, G.F., Yang, H., Zhu, B., Wang, J (2009), “MyBASE: a database for genome polymorphism and gene function studies of Mycobacterium”, BMC Microbiol, pp 9: 40 PHỤ LỤC Phụ lục Các công trình khoa học có liên quan tới luận văn đã công bố Nghiêm Ngọc Minh, Nguyễn Văn Bắc, Nguyễn Hữu Cường, Nguyễn Trung Nam, Chu Hoàng Hà, Nguyễn Thái Sơn (2009) Chẩn đoán các chủng vi khuẩn lao kháng rifampicin phương pháp xác định đột biến gen rpoB Tạp chí Công nghệ Sinh học 7(2): 251-256 Nguyễn Văn Bắc, Nguyễn Hữu Cường, Chu Hoàng Hà, Lã Duy Anh, Nguyễn Thái Sơn, Nghiêm Ngọc Minh (2009) Xác định các chủng vi khuẩn lao kháng isoniazid phương pháp xác định đột biến gen katG Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc 749-752 Nguyễn Văn Bắc, Cung Thị Ngọc Mai, Nghiêm Ngọc Minh (2010) Đặc điểm phân tử các chủng vi khuẩn lao kháng isoniazid phân lập tại miền Nam – Việt Nam Tạp chí Công nghệ Sinh học 8(3A): 741-745 Nghiêm Ngọc Minh, Nguyễn Văn Bắc (2010) Vi khuẩn lao kháng thuốc các phương pháp phát hiện Tạp chí Công nghệ Sinh học 8(2): 133-144 Phụ lục Danh sách mẫu DNA tách từ chủng vi khuẩn lao Học viện Quân Y cung cấp DANH SÁCH MẪU DNA TÁCH TỪ CHỦNG VI KHUẨN LAO - BỆNH VIỆN LAOBỆNH PHỔI TRUNG ƯƠNG Các chủng kháng đơn thuốc STT Mã DNA KQ KSĐ Mã chủng ĐO1-02 ĐO2-02 ĐO3-02 ĐO4-02 ĐO5-02 H H H H H TB02-53 TB02-54 TB02-56 TB02-51 TB02-52 Nồng độ DNA (ng/ul) 9,8 13,0 34,8 6,0 20,7 OD260/280 1,83 2,06 1,70 2,79 1,67 10 11 12 13 14 15 ĐO6-02 ĐO7-02 ĐO8-02 ĐO9-02 ĐO10-02 ĐO11-02 ĐO12-02 ĐO13-02 ĐO14-02 ĐO15-02 H H S S S S S S S S Các chủng kháng đa thuốc STT Mã DNA KQ KSĐ 10 11 12 13 14 15 ĐA1-02 ĐA2-02 ĐA3-02 ĐA4-02 ĐA5-02 ĐA6-02 ĐA7-02 ĐA8-02 ĐA9-02 ĐA10-02 ĐA11-02 ĐA12-02 ĐA13-02 ĐA14-02 ĐA15-02 HRS HRS HRS HRS HRS HRS HRS HRS HRS HRS HRS HRS HRS HRSE HRSE TB02-55 TB02-57 TB02-68 TB02-71 TB02-75 TB02-76 TB02-77 TB02-79 TB02-80 TB02-81 30,8 10,4 11,7 18,5 20,0 19,7 20,7 9,3 22,8 32,3 1,64 1,65 1,84 1,79 1,72 1,80 1,79 1,91 1,76 1,74 Mã chủng Nồng độ DNA (ng/ul) 44,0 7,2 6,8 18,5 8,2 8,0 36,3 5,7 5,2 6,9 14,0 7,2 10,1 9,8 6,8 OD260/280 TB02-101 TB02-105 TB02-107 TB02-110 TB02-111 TB02-112 TB02-113 TB02-115 TB02-116 TB02-117 TB02-118 TB02-122 TB02-124 TB02-130 TB02-133 1,89 2,1 2,06 1,94 1,8 2,1 1,76 1,89 1,98 1,91 1,85 1,80 1,92 2,06 1,77 DANH SÁCH MẪU DNA TÁCH TỪ CHỦNG VI KHUẨN LAO- BỆNH VIỆN TRUNG ƯƠNG HUẾ Các chủng kháng đơn thuốc STT Mã DNA ĐO1-05 ĐO2-05 ĐO3-05 ĐO4-05 KQ KSĐ S H S S Mã chủng Nồng độ OD260/280 TB05-49 TB05-79 TB05-84 TB05-109 DNA (ng/ul) 15.19 16,9 6,5 39,5 1.64 1,84 1,39 1,71 10 11 12 13 14 15 ĐO5-05 ĐO6-05 ĐO7-05 ĐO8-05 ĐO9-05 ĐO10-05 ĐO11-05 ĐO12-05 ĐO13-05 ĐO14-05 ĐO15-05 S S H H S H S S H S S TB05-110 TB05-116 TB05-130 TB05-214 TB05-223 TB05-231 TB05-237 TB05-243 TB05-266 TB05-278 TB05-283 Các chủng kháng đa thuốc STT Mã DNA KQ KSĐ 10 11 12 13 14 15 ĐA1-05 ĐA2-05 ĐA3-05 ĐA4-05 ĐA5-05 ĐA6-05 ĐA7-05 ĐA8-05 ĐA9-05 ĐA10-05 ĐA11-05 ĐA12-05 ĐA13-05 ĐA14-05 ĐA15-05 HS HS HRSE HRS HRS HS HRSE HRSE HRSE HS HS HRS HS HRSE HR 33,3 41,5 12.0 20.1 38.4 84.2 129.7 53.2 30.0 22.0 74.8 Mã chủng TB05-1 TB05-77 TB05-97 TB05-108 TB05-117 TB05-138 TB05-146 TB05-147 TB05-172 TB05-199 TB05-213 TB05-220 TB05-221 TB05-225 TB05-254 1,75 1,74 1.79 1.91 1.79 1.69 1.52 1.75 1.58 2.14 1.83 Nồng độ DNA (ng/ul) 46,3 5.21 3,6 49,2 24,3 28.93 110,4 77,6 10.86 7.75 18.7 28.9 73.3 26.4 28.2 OD260/280 1,55 2.02 1,37 1,69 1,60 1.41 1,59 1,59 1.52 2.11 1.59 2.01 2.00 2.06 1.68 DANH SÁCH MẪU DNA TÁCH TỪ CHỦNG VI KHUẨN LAO- BỆNH VIỆN PHẠM NGỌC THẠCH Các chủng nhạy cảm với thuốc kháng sinh Stt Mã DNA KQ Kháng sinh đồ Mã chủng Nồng độ DNA (ng/ul) OD260/280 10 N1 N2 N3 N4 N5 N6 N7 N8 N9 N10 TB06-140 TB06-143 TB06-144 TB06-145 TB06-146 TB06-147 TB06-148 TB06-149 TB06-150 TB06-151 66.9 82.3 67.8 60.9 38.5 32.7 4.7 19.1 57.8 62.0 1.72 1.89 1.96 2.0 1.85 1.94 1.79 1.96 1.86 1.98 Các chủng kháng đơn thuốc Stt Mã KQ Kháng DNA sinh đồ Mã chủng OD260/280 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 TB06-105 TB06-107 TB06-113 TB06-115 TB06-121 TB06-128 TB06-133 TB06-134 TB06-141 TB06-142 TB06-157 TB06-161 TB06-162 TB06-164 TB06-165 Nồng độ DNA (ng/ul) 52.8 50.6 10.8 3.6 13.0 304 4.5 6.1 8.2 120.6 6.7 57.4 31.4 3.5 66.5 Nồng độ DNA (ng/ul) 13.4 8.9 4.9 5.0 12.0 3.8 3.4 4.5 OD260/280 ĐO1 ĐO2 ĐO3 ĐO4 ĐO5 ĐO6 ĐO7 ĐO8 ĐO9 ĐO10 ĐO11 ĐO12 ĐO13 ĐO14 ĐO15 S H S S H S R S H S H H S S S Các chủng kháng đa thuốc Stt Mã KQ Kháng DNA sinh đồ Mã chủng 26 27 28 29 30 31 32 33 TB06-22 TB06-23 TB06-26 TB06-27 TB06-28 TB06-31 TB06-33 TB06-35 ĐA1 ĐA2 ĐA3 ĐA4 ĐA5 ĐA6 ĐA7 ĐA8 HSRE HSRE HSRE HSR HSRE HSRE HSRE HSR 1.74 1.59 1.76 2.25 1.68 1.85 2.89 2.36 2.2 1.91 2.01 1.85 1.90 1.46 1.91 1.89 1.82 1.86 1.8 1.8 2.08 1.56 1.75 34 35 36 37 38 39 40 ĐA9 ĐA10 ĐA11 ĐA12 ĐA13 ĐA14 ĐA15 HSRE HSRE HSR HSRE HSRE HSRE HSRE TB06-36 TB06-37 TB06-38 TB06-39 TB06-41 TB06-51 TB06-82 Các chủng siêu kháng thuốc Stt Mã KQ Kháng sinh đồ DNA Kháng dòng Kháng dòng 41 42 43 44 45 46 S1 S2 S3 S4 S5 S6 HSRE HSRE HSRE HSRE HSRE HSRE 47 48 S7 S8 HSRE HSRE 49 S9 HSRE 50 S10 HSRE 51 S11 HSRE 52 S12 HSRE 53 S13 HSRE 54 S14 HSRE 55 S15 HSRE 10.3 72.9 7.7 8.0 36.8 43.9 5.5 1.99 1.77 1.98 1.9 1.73 1.74 1.91 Mã chủng Nồng độ DNA (ng/ul) OD260/280 TB06-24 TB06-25 TB06-29 TB06-30 TB06-32 TB06-34 88.1 14.1 3.8 103.2 12.9 14.0 1.83 1.95 1.75 1.85 1.52 1.83 TB06-40 TB06-204 26.7 18.9 1.57 1.83 TB06-205 19.7 1.92 TB06-217 4.7 2.12 TB06-218 4.8 2.88 TB06-219 19.3 2.07 TB06-221 17.3 1.84 TB06-222 28.2 1.85 TB06-223 14.4 2.07 PAS Ofx Cs Ofx,Eto Ofx, Th Ofx,Eto,Km, PAS Ofx Ofx,Cs,Eto, Km,PAS Ofx,Eto,Cs, PAS Ofx,Cs,Km, PAS Ofx,Eto,Cs, Km,PAS Ofx,Eto,Cs, Km,PAS Ofx,Th,Cs,K m,PAS Ofx,Th,Eto, Cs, Km,PAS Ofx,Th,Eto, Cs, Km,PAS MỤC LỤC {{{ .1 Kết phát hiện đột biến .51 [...]... năng giết chết vi khuẩn gây bệnh Hiện tượng kháng thuốc của vi khuẩn lao có thể xảy ra trước khi xâm nhập (tiên phát) hoặc sau khi nhập vào cơ thể người bệnh (thứ phát) Vi khuẩn lao kháng thuốc tiên phát là hiện tượng lây nhiễm bởi một chủng đã kháng thuốc mà vi khuẩn này đã có sự đề kháng tự nhiên Vi vậy, bệnh nhân mắc lao do sự lây nhiễm này, ngay từ đầu vi khuẩn lao xâm nhập vào... thước của hang lớn hơn - Xét nghiệm vi khuẩn: + Về hình thể: các vi khuẩn bình thường có cấu tạo thành tế bào 3 lớp nhưng ở vi khuẩn kháng thuốc thành tế bào có cấu tạp 4 lớp (vi khuẩn có thêm một lớp peptidoglycolipid ở ngoài cùng) Vi khuẩn kháng với rifampicin có thành tế bào cũng dày hơn hẳn so với vi khuẩn nhạy với thuốc Khuẩn lạc của vi khuẩn kháng thuốc có thể không điển... trúc quần thể vi khuẩn lao ở bệnh nhân lao kháng thuốc, đa nh giá được tỷ lệ đột biến liên quan kháng thuốc trên các chủng lao phân lập từ các vùng địa lý khác nhau Qua đó làm tiền đề xây dựng một số bộ kit real-time PCR, nhằm phát hiện nhanh vi khuẩn lao kháng rifampicin và isoniazid tại Vi ̣t Nam 1.5.4 Kỹ thuật real-time PCR và multiplex real-time PCR Real-time PCR là kỹ thuật PCR... đang sử dụng Còn hiện tượng kháng thuốc thứ phát xảy ra đối với các chủng vi khuẩn lao ở bệnh nhân nào đó dùng thuốc chống lao không đúng quy định, không đúng liều lượng, thời gian sử dụng thuốc do đó đã chọn lọc vi khuẩn lao khang thuốc [1, 38] Các chủng vi lao kháng thuốc được chia làm hai loại: (1) Các chủng lao kháng đa thuốc (MDR – TB): Là trường hợp khi các chủng vi khuẩn. .. nhanh và chính xác cho vi ̣c phát hiện các chủng M tuberculosis kháng isoniazid 1.5 CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN LAO KHÁNG THUỐC 1.5.1 Đặc điểm lâm sàng và các xét nghiệm cận lâm sàng *) Đặc điểm lâm sàng Nhìn chung các dấu hiệu lâm sàng của bệnh lao có vi khuẩn kháng thuốc không khác nhiều với bệnh lao mà vi khuẩn nhạy cảm với thuốc Trường hợp nhiễm vi khuẩn lao kháng thuốc tiên phát... acid có tác dụng chống chuyển hóa [7, 35, 37, 38] 1.4.2 Nguyên nhân gây kháng thuốc Vi khuẩn lao kháng thuốc là khi chúng không chịu sự tác động của các loại kháng sinh dùng điều trị chúng Thường nói tới vi khuẩn lao kháng thuốc là nói tới những trường hợp vi khuẩn lao kháng với một trong những thuốc chống lao dòng thứ nhất: isoniazid, rifampicin, pyrazinamide, ethambutol hoặc streptomycin... trung nghiên cứu cơ chế kháng đa thuốc, tức là trường hợp vi khuẩn lao kháng đồng thời hai thuốc chống lao mạnh nhất hiện nay là isoniazid và rifampicin, điều đó đồng nghĩa với vi ̣c nghiên cứu các đột biến trên gen rpoB với katG Hình 1.4 Cơ chế kháng đa thuốc của vi khuẩn lao (http://www3.niaid.nih.gov/topics/tuberculosis) 1.4.3 Rifampicin và cơ chế kháng Rifampicin tên khoa học là... tác dụng nữa trong vi ̣c tiêu diệt vi khuẩn - Sản phẩm của gen, mà hoạt tính của nó bị ức chế bởi thuốc được vi khuẩn sản xuất thừa ra, do đó lượng thuốc mà bệnh nhân uống vào không đủ để ức chế hoàn toàn vi khuẩn lao - Những thay đổi xảy ra ở mức độ phân tử và cơ chế xâm nhập của thuốc vào bên trong tế bào vi khuẩn làm cho nồng độ thuốc bên trong tế bào không đa t tới nồng độ tối... nitrate và nhiều phương pháp khác [13] Các phương pháp này đều xác định khả năng phát triển của vi khuẩn lao trong môi trường nuôi cấy có kháng sinh, từ đó đưa ra kết luận về khả năng kháng thuốc của chủng vi khuẩn lao đang nghiên cứu [12] Nhược điểm của các phương pháp này là vi khuẩn lao mọc chậm, trên môi trường Lowenstein-Jensen thường mất 4-6 tuần Sử dụng hệ thống môi trường lỏng... rifampicin B, một kháng sinh được chiết xuất từ nấm Streptomyces mediterranei, là thuốc có hoạt tính diệt khuẩn mạnh, tiệt khuẩn, thuốc diệt vi khuẩn lao trong và ngoài tế bào Rifampicin không có hiện tượng kháng thuốc chéo với các loại thuốc chữa lao khác Nồng độ ức chế tối thiểu (minimum inhibitory concentration - MIC) đối với vi khuẩn là 5 - 200 ng/ml (in vitro) Đây là thuốc ức