PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM MELAMINE

PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM MELAMINE I. Tổng quan về chất melamine: 1. Melamine là gì:  Melamine tên đầy đủ là 1,3,5triazine2,4,6triamine.  Là một bazơ hữu cơ dạng tinh thể trắng.  Có công thức hóa học C3H6N6 tạo thành từ 3 phân tử cyanamide (CN2H2).  Khối lượng phân tử: 126.12gmol.  Hòa tan yếu trong nước (ở 200C, 3.1gl).  Tan chảy ở 3500C.  Nếu tính tỷ lệ các nguyên tố cacbon (C), nitơ (N) và hydro (H) thì nitơ chiếm tới 66% theo khối lượng.  Công thức cấu tạo và công thức phân tử: Trong tự nhiên, Melamine là sản phẩm trao đổi chất hình thành trong cơ thể động vật có vú khi ăn vào cyromazine. Melamine được tổng hợp đầu tiên do nhà hoá học Đức Justus von Liebig (1834). Ngày nay, việc tổng hợp được công nghiệp hoá sử dụng urea ((NH2)2CO), theo phản ứng: Sản phẩm hình thành là khí và dung dịch, khí được tái thu hồi để giảm thải tiết NH3 và dung dịch được tinh thể hoá để cho ra 70% Melamine, 23% oxytriazines (ammeline, ammelide và cyanuric acid), 0.7% polycondensates (melem, melam và melon). 2. Độc tính của Melamine: Melamine (màu xanh) dễ dàng kết hợp với acid cyanuric (màu đỏ) qua liên kết hydro tạo kiểu liên kết phân tử hình thành mái ngói, lắng đọng và gây sỏi thận. Melamine tự nó không được xem là một độc chất. Nhưng khi kết hợp với Acid cyanuric thì nó trở nên độc hại. Khi Melamine kết hợp với cyanamide sẽ cho ra Melamine cyanurate có khả gây sỏi thận thậm chí dẫn tới tử vong. Acid cyanuric là chất tổng hợp, dùng nhiều trong công nghiệp, có nhiều tên gọi khác nhau, có màu trắng, không mùi, là dẫn chất trong ngành nhuộm vải, thuốc tẩy, thuốc diệt cỏ. Acid cyanuric hiện được nghiên cứu đi đôi với Melamine, là thủ phạm kết hợp với Melamine làm thành một hỗn hợp có độc tính cao hơn, gây ra cơn sốt về ngộ độc sữa Melamine hiện nay. 3. Ảnh hưởng của Melamine đến sức khỏe:  Gây sỏi thận:  Ngộ độc Melamine cấp tính: 4. Vai trò của Melamine:  Melamine là chất có nitrogen chiếm 66% theo khối lượng, chính là cơ sở cho việc thêm Melamine vào sữa để tăng hàm lượng nitrogen nhằm thổi phồng là sữa giàu protein.  Vì hàm lượng nitơ cao nên Melamine được những nhà sản xuất gian dối đưa vào thực phẩm, đưa 1% Melamine vào trong thực phẩm thì làm tăng lên 4,13% protein thô.  Một điều cần lưu tâm là nhựa Melamine thường được sử dụng trong đóng gói thực phẩm của người và động vật cũng như làm nguyên liệu chế tạo các dụng cụ ăn uống như thìa, dĩa... nên Melamine có thể xâm nhập từ dụng cụ bao gói hay đồ dùng ăn uống vào thực phẩm với hàm lượng rất nhỏ (tính bằng phần triệu). 5. Ứng dụng. Melamine được dùng rộng rãi trong sản xuất đồ nhựa, đồ dùng gia đình, bảng trắng, phân bón Melamin khi phản ứng với formaldehit tạo thành keo melamin. Melamin cũng được sử dụng trong ngành công nghiệp phân bón. Khi trộn lẫn với một số nhựa, chúng tạo thành hỗn hợp có khả năng chống cháy do khi cháy chúng giải phóng ra một lượng khí nitơ. II. Tổng quan về sữa nhiễm Melamine và biện pháp: 1. Tổng quan về sữa nhiễm Melamine: Gần đây việc tìm thấy Melamine, một chất có hại cho sức khoẻ có trong sữa và các sản phẩm sữa như bánh, kẹo… đã gây nhiều lo lắng cho người dân và cả các nhà quản lý về an toàn vệ sinh thực phẩm, vì đây là loại thực phẩm rất phổ biến được nhiều người sử dụng, nhất là trẻ em. Kiểm soát hàm lượng Melamine trong sữa và các sản phẩm từ sữa hiện nay là việc cần thiết để bảo vệ sức khoẻ người dân. Việc thêm Melamin vào sữa tại Trung Quốc trong thời gian gần đây với mục đích tăng “đạm” đã gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người tiêu dùng. Theo thông tấn xã Pháp (AFP) tại Beijing, cho đến nay gần 13.000 trẻ em đã nhập viện tại Trung Quốc sau khi uống sữa có chứa Melamine, trong đó 104 trẻ bệnh rất nặng và có ít nhất 4 trẻ bị tử vong. Melamine đã được phát hiện trong sữa hộp trẻ em, sau đó phát hiện trong cả sữa lỏng đóng hộp, yoghurt và kem tại Trung Quốc. Hàm lượng nhiễm Melamine trong khoảng từ 0.09 mgkg đến 2.560 mgkg. Gần đây, việc nhập khẩu một lượng sữa và nguyên liệu sữa từ Trung Quốc và các nước khác vào tiêu thụ tại thị trường Việt Nam gây nhiều bất an cho người dân và cả cho các cơ quan chức năng về an toàn vệ sinh thực phẩm. Melamine có tìm thấy trong các loại sữa và sản phẩm sữa đang tiêu thụ tại nước ta không? Đây là vấn đề thật sự cần được quan tâm. Vì thế việc kiểm tra, giám sát Melamine nhiễm trong sữa và sản phẩm sữa là điều cần thiết phải thực hiện nhằm bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng. 2. Các biện pháp khắc phục khi thực phẩm bị nhiễm melamine: Tại Việt Nam hiện nay, việc xử lý sữa bị nhiễm melamine thực hiện bằng phương pháp đốt, còn tại Trung Quốc, nơi phát sinh sữa nhiễm melamine đầu tiên, thì xử lý bằng cách đóng gạch với mức tiêu tốn 100 đô la Mỹtấn (đốt thì rẻ hơn 70% so với đóng gạch). Ngoài ra sữa nhiễm melamine có thể được xử lý thành phân bón hóa hữu cơ bằng giải pháp công nghệ sinh học. Quy trình thực hiện tương tự như sản xuất phân vi sinh, tuy nhiên điểm khác biệt duy nhất (khác với vi sinh thông thường) là phải bổ sung thêm một số chủng vi sinh chọn lọc – củng vi sinh có enzyme có khả năng phân hủy sữa trong vòng 30 ngày. 3. Một số biện pháp hạn chế sự nhiễm melamine vào cơ thể: Sữa mẹ là thức ăn tốt nhất cho trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ. Do đó, bà mẹ nên cho con bú hoàn toàn ít nhất trong 6 tháng đầu. Trong thời điểm nhạy cảm này, bà mẹ phải cố gắng tận dụng tối đa nguồn sữa mẹ. Trong trường hợp đi làm thì có thể vắt sữa để dành cho con. Dụng cụ chứa sữa có thể là bình nhựa hoặc ly thủy tinh đậy kín nắp. Các nhà sản xuất cần phải công bố rõ rang thành phần các chất dinh dưỡng, vitamin và các chất khác trên bao bì, nhãn mác. Khuyến khích các doanh nghiệp tự gửi mẫu đến các trung tâm kiểm nghiệm để kiểm tra sản phẩm của mình có an toàn hay không. Bạn hãy chọn những nhãn sữa có nhãn mác ghi đầy đủ các thông tin như tên sản phẩm, tác dụng, hạn sử dụng, nhà sản xuất hay nhà nhập khẩu có địa chỉ rõ ràng, thành phần của sữa, có chứng nhận công bố của Cục An toàn vệ sinh thực phẩm và đã được Bộ Y tế công nhận là sữa không nhiễm melamine. Thường xuyên theo dõi báo đài để có kiến thức tiêu dung sang suốt khi lựa chọn một sản phẩm nào đó. III. Phương pháp kiểm nghiệm Melamine: 1. Xác định hàm lượng Melamine trong mẫu sữa bằng phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GCMS): Sắc kí khí ghép khối phổ (GCMS_Gas Chromatography Mass Spectometry) là một trong những phương pháp sắc kí hiện đại nhất hiện nay với độ nhạy và độ đặc hiệu cao, được sử dụng trong các nghiên cứu và phân tích kết hợp. Thiết bị GCMS được cấu tạo thành 2 phần: phần sắc ký khí (GC) dùng để phân tích hỗn hợp các chất và tìm ra chất cần phân tích, phần khối phổ (MS) mô tả các hợp phần riêng lẽ bằng cách mô tả số khối. Bằng sự kết hợp kỹ thuật này, các nhà hóa học có thể đánh giá, phân tích định tính, định lượng và có cách giải quyết 1 số hóa chất. Ngày nay, người ta ứng dụng kỹ thuật GCMS rất nhiều và sử dụng rộng rãi trong các ngành như y học, môi trường, nông sản, kiểm nghiệm thực phẩm… 2. Nguyên tắc: Melamine trong mẫu được chiết bằng nước cất – aceonitril. Mẫu được làm sạch bằng cột chiết pha rắn SPE amino, sau đó tạo dẫn xuất bằng cột bằng N,OBIS (Trimethylsilyl) trifloracetamid (BSTFA) với 1% trimethylclosilan (TMCS) dẫn xuất của Melamine được xác định trên máy sắc kí khí ghép khối phổ. Giới hạn phát hiện của phương pháp là 50 ppb. 3. Thiết bị và dụng cụ:  Micropipet.  Lọ đựng mẫu cho máy GCMS.  Giấy lọc thô.  Phễu lọc.  Tube thủy tinh nút nhám 50, 100, 150 ml.  Bình định mức 20, 50, 100, 500 ml.  Cột chiết pha rắn SPE amino (StrataNH2 500mg3ml – phenomenex).  Máy sắc kí khí ghép khối phổ (GCMS) có chế độ tiêm mẫu chia không chia dòng (SplitSplitless Injector).  Cột sắc kí phân tích DB5MS, đường kính trong 0.25 mm, bề dày lớp phim 0.25µm.  Cân phân tích 4 số lẻ (chính xác đến 0.1mg).  Bếp cách thủy.  Bể siêu âm.  Máy lắc vortex.  Máy cô quay chân không. a. Hóa chất và thuốc thử:  Chuẩn Melamine (Mr.Ehrenstoefer GmbH).  Pyridine (Merck).  Dung dịch N,Obis (trimethylsilyl) trifluoacetamide (BSTFA) voiws 1% trimethylchlorosilane (TMCS) Alltech18089.  Acetoonitril tinh khiết HPLC (Merck).  Nước cất 2 lần.  2,6 diamino4chlropyrimidine (DACP)Sigma. b. Pha chế dung dịch:  Dung dịch chuẩn Melamine 600 ppm: Cân chính xác 30mg Melamine cho vào bình định mức 50 ml, thêm vào khoảng 20 ml pyridine. Hòa tan hòa toàn và định mức đến vạch bằng pyridine.  Dung dịch chuẩn Melamine 6 ppm: Hút 1ml dung dịch chuẩn Melamine 600 ppm cho vào bình định mức 100 ml, định mức đến vạch bằng pyridine.  Dung dịch chuẩn Melamine 600 ppb: Hút 1ml dung dịch chuẩn Melamine 6 ppm cho vào bình định mức 10ml, định mức đến vạch bằng pyridine.  Dung dịch nội chuẩn 2,6 diamino4chloropyrimidine(DACP) 600 ppm: cân chính xác 30 mg DACP cho vào bình định mức 50 ml, thêm vào khoảng 20 ml pyridine. Hòa tan hoàn toàn rồi định mức đến vạch bằng pyridine.  Dung dịch nội chuẩn 2,6 diamino4chloropyrimidine (DACP) 6 ppm: hút 1 ml dung dịch nội chuẩn DACP 600 ppm cho và bình định mức 100ml, định mức đén vạch bằng pyridine.  Dung dịch nội chuẩn 2,6 diamino4chloropyrimidine (DACP) 6 ppb: hút 1ml dung dịch nội chuẩn DACP 6 ppm cho vào bình định mức 10 ml, định mức đến vạch bằng pyridine. 4. Tiến hành phân tích: a) Chuẩn bị mẫu: Cân 5 mg mẫu cho vào cốc thủy tinh 50 ml. Hòa tan mẫu bằng 15 ml nước cất, đánh siêu âm cho đến khi mẫu đồng nhất. Cho tất cả dịch mẫu vào bình định mức 50 ml, định mức đến vạch bằng acetonitril. Sau đó lọc qua giấy lọc thô. Lấy dịch lọc qua cột SPE amino như sau: Hoạt hoá cột bằng 2 ml ethanol (để chảy từ từ không dùng áp suất). Cho 2 ml dung dịch lọc ở trên qua cột (để chảy từ từ không dùng áp suất). Sau khi mẫu đã qua cột dùng bơm chân không hút cột cho khô hẳn. Dịch chiết qua cột SPE được cho vào bình cô quay 50 ml. Cô quay tại 700C cho đến khi khô hoàn toàn. Sau đó cho vào bình cô quay 2 ml methanol, siêu âm 2 phút, chuyển lượng methanol này vào tube 15 ml có nắp vặn, đun khí nitơ thổi khô hoàn toàn dung dịch methanol có chứa Melamine. Sau đó thêm vào tube 100 µm pyridine đậy nắp kĩ tránh bay hơi. b) Tạo dẫn xuất cho chuẩn và mẫu: Lấy 100 µm dung dịch chuẩn Melamine 0.6 ppm cho vào tube thủy tinh có nắp vặn hoặc 100 µm dung dịch mẫu kiểm tra, thêm vào 100 µl dung dịch DACP 600 ppb và 400 µl dung dịch BSTFA với 1% TMCS. Đậy kín lọ, lắc đều, tạo dẫn xuất tại 700C45 phút . Lấy ra để nguội về nhiệt độ phòng. Cho vào lọ đựng mẫu phân tích trên máy GCMS. c) Phân tích trên máy sắc ký khí ghép khối phổ (GCMS): + Cột phân tích DB5MS. + Chế độ tiêm: không chia dòng (splitless). Mở xả khí sau một phút. Tốc độ chia 40 mlphút. + Nhiệt độ buồng tiêm : 2800C. + Thể tích tiêm: 1 µl. + Khí mang: He. + Tốc độ khí 1.5 mlphút. + Áp suất: 17.5 psi. + Chế độ chạy: đẳng dòng (constant flow). + Nhiệt độ ban đầu: 750C. + Thời gian giữ: 1 phút . + Bước tăng nhiệt: 150C phút . + Nhiệt độ cuối: 3200C. + Thời gian giữ 9 phút . + Nhiệt độ buồng chuyển 2000C. Điều kiện phối phổ: + Năng lượng electron: 70eV. + Chế độ chạy: toàn phổ từ 40 450 amu và lựa chọn ion (SIM) với 4 ion 171 ; 197; 327 ; 342. + Thời gian mở felament: sau 8 phút. + Nhiệt độ tứ cực: 1500C. + Nhiệt độ nguồn ion hóa: 2300C. + Giá trị bộ khuếch đại: 300500V. 5. Xác định và tính kết quả: Xác định sự hiện diện của Melamine trong mẫu, mẫu chỉ được coi là dương tính với Melamine: + Trong phổ phải có sự hiện diện của cả 4 ion : 171; 197; 327; 342. + Thời gian lưu của chất phân tích phải trùng với thời gian lưu của chất dẫn xuất Melamine. + Tỉ lệ giữa các ion : 171327; 197327; 324 327 của mẫu phân tích phải tương ứng với dẫn xuất Melamine. Tính hàm lượng Melamin trong mẫu : Hàm lượng Melamine trong mẫu được tính toán theo phương pháp nội chuẩn : Tiêu chuẩn Melamine của bộ y tế là < 0.5 ppm. Trong đó: Smẫu: là diện tích đo trên máy. Snc(chuẩn): diện tích nội chuẩn của chuẩn đo trên máy. Schuẩn: diện tích chuẩn 0.6 ppm đo trên máy. Snc(mẫu): diện tích nội chuẩn của mẫu đo trên máy. 0.6: nồng độ chuẩn Melamine (ppm). 0.1: thể tích pyridin hòa tan mẫu (ml). 2: thể tích mẫu qua cột chiết pha rắn (ml). 50: thể tích dung môi pha loãng mẫu (ml). 6. Đánh giá phương pháp phân tích: Ưu điểm:  Là phương pháp phân tích Melamine hiện đại nhất hiện nay.  Độ nhạy và độ đặc hiệu cao.  Giới hạn phát hiện của phương pháp là 50 ppb.  Dùng chất nội chuẩn để tăng tính chính xác cho phân tích. Nhược điểm:  Phương pháp này dùng chất nội chuẩn nên ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi.  Với điều kiện của Melamine thì không phân tích được sắc kí khối phổ trực tiếp nên phải tạo dẫn xuất để phân tích.  Giá thành phân tích mẫu khá đắt. Chú thích: Cột chiết pha rắn SPE 1. Nguyên tắc và điều kiện 1.1. Nguyên tắc chung Nguyên tắc • Chiết pha rắn cũng là quá trình phân bố của các chất giữa 2 pha, trong đó lúc đầu chất mẫu ở dạng lỏng (pha nước, hay hữu cơ), còn chất chiết ở dạng rắn, dạng hạt nhỏ và xốp đường kính 25 70 μm. Vì thế nên có tên là chiết pha rắn (Solid Phase Extraction ), hay chiết rắnlỏng. • Chất chiết được gọi là pha tĩnh, và được nhồi vào một cột chiết nhỏ, cột chiết kích thước: 6 x 1 cm, hay dung lượng chiết 100600 mg, hoặc dạng đĩa chiết có kích thước dầy 12 mm và đường kính 34 cm. Chất chiết là các hạt Silica trung tính, các hạt ôxit nhôm, hay các Silicagen trung tính đã bị alkyl hoá nhóm OH bằng nhóm mạch carbon thẳng C2, C4, C8, C18,.. , hay nhân phenyl. Nó được chế tạo trong điều kiện giống như pha tĩnh của sắc ký HPLC, và các hạt này có độ xốp lớn, với diện tích bề mặt xốp thường từ 50 300 m2gam. • Khi xử lý mẫu, dung dịch chất mẫu được dội lên cột chiết. Lúc này pha tĩnh sẽ tương tác với các chất và giữ một nhóm chất phân tích lại trên cột (trên pha tĩnh), còn các nhóm chất khác sẽ đi ra khỏi cột cùng với dung môi hoà tan mẫu. Như thế là chúng ta thu được nhóm chất cần phân tích ở trên pha tĩnh (chất chiết rắn). • Sau đó dùng một dung môi thích hợp hoà tan tốt các chất phân tích để rửa giải chúng ra khỏi pha tĩnh (cột chiết), và chúng ta thu được dung dịch có chất phân tích để xác định chúng theo một cách đã chọn. Các loại chất chiết pha rắn Theo đặc điểm và bản chất của sự chiết, các chất chiết pha rắn được chế tạo và phân chia theo các loại chất: • Loại hấp phụ pha thường. Đó là các Silica trung tính và ôxit nhôm, • Hấp phụ pha ngược. Đó là các Silica thường được alkyl hoá nhómOH, • Loại chất trao đổi iôn (để tách Cation và Anion), • Chất rây hay sàng lọc phân tử theo độ lớn, kích thước của phân tử chất, • Loại chất hấp phụ khí (purge and trap Extraction), để hấp thụ chất khí. Các kiểu và cơ chế chiết pha rắn Chính vì có nhiều loại chất chiết pha rắn, cho nên kỹ thuật chiết pha rắn cũng có nhiều cơ chế và quá trình động học khác nhau, theo bản chất của mỗi loại chất chiết (pha chiết). Nói chung, các chất chiết pha rắn này cũng tương tự như các pha tĩnh trong sắc lý lỏng hiệu năng cao (HPLC). Nó có thể là dạng cột chiết (1x6 cm có thể tích 46 mL) hay dạng đĩa chiết (dầy 12 mm và đường kính 34 cm). Do đó chiết pha rắn cũng có 3 loại cơ chế chính là: 1. Hấp phụ pha thường (loại NP), và Hấp phụ pha ngược (loại RP), 2. Trao đổi ion và cặp ion đối với các chất dạng ion (loại IEx), 3. Rây phân tử theo độ lớn của chất phân tích (Gel). 1.2. Các điều kiện của chiết pha rắn Quá trình chiết ở đây thực chất cũng là sự phân bố của chất phân tích giữa 2 pha, pha rắn (chất chiết) và pha lỏng (dung dịch chứa chất phân tích) không trộn lẫn vào nhau trong những điều kiện nhất định, như pH, dung môi, nhiệt độ, tốc độ chảy của mẫu qua cột chiết. Trong đó hệ số phân bố nhiệt động Kb của chất phân tích giữa hai pha (rắn và lỏng chứa mẫu) cũng là một yếu tố quyết định hiệu quả của sự chiết. Nó cũng tương tự như trong hệ sắc ký cột lỏngrắn (của các hệ HPLC). Vì thế muốn thực hiện chiết pha rắn tốt phải có các điều kiện sau đây: • Pha rắn hay chất chiết (dạng cột chiết hay đĩa chiết) phải có tính chất hấp thụ hay trao đổi chọn lọc với một chất, hay một nhóm chất phân tích nhất định, tức là tính chọn lọc của pha tĩnh chiết. • Các chất chiết và dung môi rửa giải phải có độ sạch cao theo yêu cầu của cấp hàm lượng phân tích. • Hệ số phân bố nhiệt động Kfb của cân bằng chiết phải lớn, để có được hiệu suất chiết cao. • Quá trình chiết phải xẩy ra nhanh và nhanh đạt cân bằng, nhưng không có tương tác phản ứng hoá học làm mất hay hỏng pha rắn và chất phân tích. • Quá trình chiết phải có tính thuận nghịch, để còn có thể rửa giải được tốt chất phân tích ra khỏi pha chiết bằng một pha động phù hợp. • Không làm nhiễm bẩn thêm chất phân tích trong quá trình chiết bởi bất kỳ từ nguồn nào. • Sự chiết phải được thực hiện trong điều kiện nhất định phù hợp, phải lặp lại được tốt và tất nhiên là càng đơn giản dễ thực hiện thì càng tốt. Máy cô quay chân không là hệ thống bao gồm bình thắt cổ quay bay hơi, giúp tăng diện tích của bể ổn nhiệt ở điều kiện hút chân không, để nung nóng hay bay hơi giúp thu hồi sản phẩm tách chiết. Quá trình bay hơi được sử dụng rộng trong việc kết tinh hóa, cô đặc sản phẩm, làm khô bột, tách dung môi, tách chiết,… Trong thí nghiệm và công nghiệp thường sử dụng các máy cô quay chân không có dung tích khoảng vài chục lít. Đặc tính kỹ thuật của máy cô quay chân không: – Máy cất quay chân không theo kiểu sinh hàn thẳng đứng với diện tích bề mặt làm lạnh của sinh hàn là 1200cm2 – Thao tác đơn giản và an toàn nhớ các núm điều chỉnh nhiệt độ và tốc độ đặt phía trước máy. – Hệ thống nâng hạ tự động kèm theo chức năng “dừng an toànsafe stop”. – Để thực hiện quá trình làm khô có thể di chuyển bình cất sang trái hoặc phải mà không phải dừng quá trình cất quay. – Có điểm điều chỉnh cuối cùng khoảng cách từ bình cất tới bể gia nhiệt nên tránh được việc vỡ bình cất. – Tốc độ cất quay được hiển thị số còn tốc độ theo kiểu scale. – Bể gia nhiệt của máy cô quay chân không được thiết kế phù hợp với bình cất 1 lít, có thể gia nhiệt bằng nước hoặc dầu với tốc độ gia nhiệt nhanh. Cung cấp hoàn chỉnh kèm theo bộ sinh hàn dạng thằng đứng, bình hứng và bình cất Ứng dụng: • Máy cô quay chân không, thiết bị tạo môi trường phản ứng chân không, cô đặc dung dịch, tách chiết dung môi, sấy khô vật liệu nhạy với nhiệt độ (thường là thuốc bột). Máy cô quay chân không được sử dụng phổ biến trong công nghệ thực phẩm, dược phẩm, mỹ phẩm, nghiên cứu khoa học và thực nghiệm. Pyridin là một chất lỏng không màu, dễ cháy, kiềm yếu hòa tan trong nước với một, mùi cá khó chịu. Pyridin được sử dụng như là một tiền thân của hóa chất nông nghiệp và dược phẩm và cũng là một dung môi quan trọng và tinh khiết. Pyridin được thêm ethanol để làm cho nó phù hợp cho uống (xem rượu làm biến tính). Nó được sử dụng trong tổng hợp trong ống nghiệm của DNA7, trong việc tổng hợp sulfapyridine (một loại thuốc chống lại bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn và virus), thuốc Thuốc chống dị ứng tripelennamine và mepyramine, cũng như thuốc chống nước, khuẩn, và thuốc diệt cỏ. Một số hợp chất hóa học, mặc dù không được tổng hợp từ pyridine, có cấu trúc vòng của nó. Chúng bao gồm vitamin B và niacin pyridoxal, các thuốc chống lao isoniazid, nicotine và các sản phẩm thực vật có chứa nitơ khác8. Trong lịch sử, pyridin được sản xuất từ nhựa than đá và là một sản phẩm phụ của quá trình khí hóa than. Tuy nhiên, nhu cầu tăng lên đối với pyridin dẫn đến sự phát triển của các phương pháp kinh tế hơn tổng hợp từ acetaldehyde và ammonia, và hơn 20.000 tấn mỗi năm được sản xuất trên toàn thế giới. Phân tử Pyridin ở trạng thái liên hợp kín, các orbital p của các nguyên tử N và C xen phủ bên với nhau. Từ đó, tính bazơ của Pyridin khá nhỏ (lớn hơn anilin nhưng không đáng kể). Một π electron trong nguyên tử Nitơ hợp với 5 π electron khác của năm nguyên tử carbon tạo thành một vòng thơm. Do Nitơ không sử dụng cặp electron không liên kết để tạo thành vòng thơm theo quy tắc (4n+2), như pyrrole, nên vẫn thể hiển tính bazơ. Tính bazơ của Pirydin yếu hơn các amin khác ví dụ như Piperidine, được giải thích bởi sự lai hóa sp2 của nguyên tử Nitơ trong Pirydin, orbital sp2 có nhiều tính chất của orbital s hơn sp3, trạng thái lai hóa mà nguyên tử Nitơ của các amin khác tồn tại Pyridin thường được biết đến trong hỗn hợp Pyridin Cloro Cromic (PCC) gồm Pyridin, HCl, CrO3, là hợp chất có tính oxy hóa trung bình, chỉ oxy hóa alcol thành aldehyd và không oxy hóa được ceton. Cũng giống như nhiều hợp chất dị vòng chứa nitơ khác, pyridin có mùi khó chịu (tương tự như mùi cá ươn). Ngoài tính base yếu do dị tố quyết định, do phân tử ở trạng thái liên hợp kín, pyridin thể hiện hóa tính gần giống với hydrocacbon thơm (phản ứng thế, phản ứng cộng hợp). Trimethylsilylation là sự silyl hóa tức là thay thế H của nhóm OH hay NH của một hợp chất bằng nhóm trimethylsilyl Si(CH3)3 nhằm làm giảm độ phân cực của hợp chất này, qua đó làm tăng độ bền nhiệt (điểm quan trọng nhất), (có thể) làm giảm nhiệt độ bay hơi của hợp chất tạo thành (so với hợp chất chưa silyl hóa). Sự silyl hóa như thế này thường sử dụng nhiều trong sắc ký khí để phân tích các hợp chất có chứa nhóm phân cực.

PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM MELAMINE I Tổng quan chất melamine: Melamine gì:  Melamine tên đầy đủ 1,3,5-triazine-2,4,6-triamine  Là bazơ hữu dạng tinh thể trắng  Có công thức hóa học C3H6N6 tạo thành từ phân tử cyanamide (CN2H2)  Khối lượng phân tử: 126.12g/mol  Hòa tan yếu nước (ở 200C, 3.1g/l)  Tan chảy 3500C  Nếu tính tỷ lệ nguyên tố cacbon (C), nitơ (N) hydro (H) nitơ chiếm tới 66% theo khối lượng  Công thức cấu tạo công thức phân tử: Trong tự nhiên, Melamine sản phẩm trao đổi chất hình thành thể động vật có vú ăn vào cyromazine (NH ) 2CO → C3H N + NH + CO Melamine tổng hợp nhà hoá học Đức Justus von Liebig (1834) Ngày nay, việc tổng hợp công nghiệp hoá sử dụng urea ((NH2)2CO), theo phản ứng: Sản phẩm hình thành khí dung dịch, khí tái thu hồi để giảm thải tiết NH dung dịch tinh thể hoá 70% Melamine, 23% oxytriazines (ammeline, ammelide cyanuric acid), 0.7% polycondensates (melem, melam melon) Độc tính Melamine: Melamine (màu xanh) dễ dàng kết hợp với acid cyanuric (màu đỏ) qua liên kết hydro tạo kiểu liên kết phân tử hình thành mái ngói, lắng đọng gây sỏi thận Melamine tự không xem độc chất Nhưng kết hợp với Acid cyanuric trở nên độc hại Khi Melamine kết hợp với cyanamide cho Melamine cyanurate có khả gây sỏi thận chí dẫn tới tử vong Acid cyanuric chất tổng hợp, dùng nhiều công nghiệp, có nhiều tên gọi khác nhau, có màu trắng, không mùi, dẫn chất ngành nhuộm vải, thuốc tẩy, thuốc diệt cỏ Acid cyanuric nghiên cứu đôi với Melamine, thủ phạm kết hợp với Melamine làm thành hỗn hợp có độc tính cao hơn, gây sốt ngộ độc sữa Melamine Ảnh hưởng Melamine đến sức khỏe:  Gây sỏi thận:  Ngộ độc Melamine cấp tính: Vai trò Melamine:  Melamine chất có nitrogen chiếm 66% theo khối lượng, sở cho việc thêm Melamine vào sữa để tăng hàm lượng nitrogen nhằm thổi phồng sữa giàu protein  Vì hàm lượng nitơ cao nên Melamine nhà sản xuất "gian dối" đưa vào thực phẩm, đưa 1% Melamine vào thực phẩm thì làm tăng lên 4,13% protein thô  Một điều cần lưu tâm nhựa Melamine thường sử dụng đóng gói thực phẩm người động vật làm nguyên liệu chế tạo dụng cụ ăn uống thìa, dĩa nên Melamine xâm nhập từ dụng cụ bao gói hay đồ dùng ăn uống vào thực phẩm với hàm lượng nhỏ (tính phần triệu) Ứng dụng Melamine dùng rộng rãi sản xuất đồ nhựa, đồ dùng gia đình, bảng trắng, phân bón Melamin phản ứng với formaldehit tạo thành keo melamin Melamin sử dụng ngành công nghiệp phân bón Khi trộn lẫn với số nhựa, chúng tạo thành hỗn hợp có khả chống cháy cháy chúng giải phóng lượng khí nitơ II Tổng quan sữa nhiễm Melamine biện pháp: Tổng quan sữa nhiễm Melamine: Gần việc tìm thấy Melamine, chất có hại cho sức khoẻ có sữa sản phẩm sữa bánh, kẹo… gây nhiều lo lắng cho người dân nhà quản lý an toàn vệ sinh thực phẩm, loại thực phẩm phổ biến nhiều người sử dụng, trẻ em Kiểm soát hàm lượng Melamine sữa sản phẩm từ sữa việc cần thiết để bảo vệ sức khoẻ người dân Việc thêm Melamin vào sữa Trung Quốc thời gian gần với mục đích tăng “đạm” gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người tiêu dùng Theo thông xã Pháp (AFP) Beijing, gần 13.000 trẻ em nhập viện Trung Quốc sau uống sữa có chứa Melamine, 104 trẻ bệnh nặng có trẻ bị tử vong Melamine phát sữa hộp trẻ em, sau phát sữa lỏng đóng hộp, yoghurt kem Trung Quốc Hàm lượng nhiễm Melamine khoảng từ 0.09 mg/kg đến 2.560 mg/kg Gần đây, việc nhập lượng sữa nguyên liệu sữa từ Trung Quốc nước khác vào tiêu thụ thị trường Việt Nam gây nhiều bất an cho người dân cho quan chức an toàn vệ sinh thực phẩm Melamine có tìm thấy loại sữa sản phẩm sữa tiêu thụ nước ta không? Đây vấn đề thật cần quan tâm Vì việc kiểm tra, giám sát Melamine nhiễm sữa sản phẩm sữa điều cần thiết phải thực nhằm bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng Các biện pháp khắc phục thực phẩm bị nhiễm melamine: Tại Việt Nam nay, việc xử lý sữa bị nhiễm melamine thực phương pháp đốt, Trung Quốc, nơi phát sinh sữa nhiễm melamine đầu tiên, xử lý cách đóng gạch với mức tiêu tốn 100 đô la Mỹ/tấn (đốt rẻ 70% so với đóng gạch) Ngoài sữa nhiễm melamine xử lý thành phân bón hóa hữu giải pháp công nghệ sinh học Quy trình thực tương tự sản xuất phân vi sinh, nhiên điểm khác biệt (khác với vi sinh thông thường) phải bổ sung thêm số chủng vi sinh chọn lọc – củng vi sinh có enzyme có khả phân hủy sữa vòng 30 ngày Một số biện pháp hạn chế nhiễm melamine vào thể: - Sữa mẹ thức ăn tốt cho trẻ sơ sinh trẻ nhỏ Do đó, bà mẹ nên cho - III bú hoàn toàn tháng đầu Trong thời điểm nhạy cảm này, bà mẹ phải cố gắng tận dụng tối đa nguồn sữa mẹ Trong trường hợp làm vắt sữa để dành cho Dụng cụ chứa sữa bình nhựa ly thủy tinh đậy kín nắp Các nhà sản xuất cần phải công bố rõ rang thành phần chất dinh dưỡng, vitamin chất khác bao bì, nhãn mác Khuyến khích doanh nghiệp tự gửi mẫu đến trung tâm kiểm nghiệm để kiểm tra sản phẩm có an toàn hay không Bạn chọn nhãn sữa có nhãn mác ghi đầy đủ thông tin tên sản phẩm, tác dụng, hạn sử dụng, nhà sản xuất hay nhà nhập có địa rõ ràng, thành phần sữa, có chứng nhận công bố Cục An toàn vệ sinh thực phẩm Bộ Y tế công nhận sữa không nhiễm melamine Thường xuyên theo dõi báo đài để có kiến thức tiêu dung sang suốt lựa chọn sản phẩm Phương pháp kiểm nghiệm Melamine: Xác định hàm lượng Melamine mẫu sữa phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS): Sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS_Gas Chromatography Mass Spectometry) phương pháp sắc kí đại với độ nhạy độ đặc hiệu cao, sử dụng nghiên cứu phân tích kết hợp Thiết bị GCMS cấu tạo thành phần: phần sắc ký khí (GC) dùng để phân tích hỗn hợp chất tìm chất cần phân tích, phần khối phổ (MS) mô tả hợp phần riêng lẽ cách mô tả số khối Bằng kết hợp kỹ thuật này, nhà hóa học đánh giá, phân tích định tính, định lượng có cách giải số hóa chất Ngày nay, người ta ứng dụng kỹ thuật GC-MS nhiều sử dụng rộng rãi ngành y học, môi trường, nông sản, kiểm nghiệm thực phẩm… Nguyên tắc: Melamine mẫu chiết nước cất – aceonitril Mẫu làm cột chiết pha rắn SPE amino, sau tạo dẫn xuất cột N,O-BIS (Trimethylsilyl) trifloracetamid (BSTFA) với 1% trimethylclosilan (TMCS) dẫn xuất Melamine xác định máy sắc kí khí ghép khối phổ Giới hạn phát phương pháp 50 ppb Thiết bị dụng cụ:               Micropipet Lọ đựng mẫu cho máy GC-MS Giấy lọc thô Phễu lọc Tube thủy tinh nút nhám 50, 100, 150 ml Bình định mức 20, 50, 100, 500 ml Cột chiết pha rắn SPE amino (Strata-NH2 500mg*3ml – phenomenex) Máy sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) có chế độ tiêm mẫu chia / không chia dòng (Split/Splitless Injector) Cột sắc kí phân tích DB-5MS, đường kính 0.25 mm, bề dày lớp phim 0.25µm Cân phân tích số lẻ (chính xác đến 0.1mg) Bếp cách thủy Bể siêu âm Máy lắc vortex Máy cô quay chân không a Hóa chất thuốc thử:       Chuẩn Melamine (Mr.Ehrenstoefer GmbH) Pyridine (Merck) Dung dịch N,O-bis (trimethylsilyl) trifluoacetamide (BSTFA) voiws 1% trimethylchlorosilane (TMCS) Alltech-18089 Acetoonitril tinh khiết HPLC (Merck) Nước cất lần 2,6 diamino-4-chlropyrimidine (DACP)-Sigma b Pha chế dung dịch:  Dung dịch chuẩn Melamine 600 ppm: Cân xác 30mg Melamine cho vào bình định mức 50 ml, thêm vào khoảng 20 ml pyridine Hòa tan hòa toàn định mức đến vạch pyridine  Dung dịch chuẩn Melamine ppm: Hút 1ml dung dịch chuẩn Melamine 600 ppm cho vào bình định mức 100 ml, định mức đến vạch pyridine  Dung dịch chuẩn Melamine 600 ppb: Hút 1ml dung dịch chuẩn Melamine ppm cho vào bình định mức 10ml, định mức đến vạch pyridine  Dung dịch nội chuẩn 2,6 diamino-4-chloropyrimidine(DACP) 600 ppm: cân xác 30 mg DACP cho vào bình định mức 50 ml, thêm vào khoảng 20 ml pyridine Hòa tan hoàn toàn định mức đến vạch pyridine  Dung dịch nội chuẩn 2,6 diamino-4-chloropyrimidine (DACP) ppm: hút ml dung dịch nội chuẩn DACP 600 ppm cho bình định mức 100ml, định mức đén vạch pyridine  Dung dịch nội chuẩn 2,6 diamino-4-chloropyrimidine (DACP) ppb: hút 1ml dung dịch nội chuẩn DACP ppm cho vào bình định mức 10 ml, định mức đến vạch pyridine Tiến hành phân tích: a) Chuẩn bị mẫu: Cân mg mẫu cho vào cốc thủy tinh 50 ml Hòa tan mẫu 15 ml nước cất, đánh siêu âm mẫu đồng Cho tất dịch mẫu vào bình định mức 50 ml, định mức đến vạch acetonitril Sau lọc qua giấy lọc thô Lấy dịch lọc qua cột SPE amino sau: Hoạt hoá cột ml ethanol (để chảy từ từ không dùng áp suất) Cho ml dung dịch lọc qua cột (để chảy từ từ không dùng áp suất) Sau mẫu qua cột dùng bơm chân không hút cột cho khô hẳn Dịch chiết qua cột SPE cho vào bình cô quay 50 ml Cô quay 70 0C khô hoàn toàn Sau cho vào bình cô quay ml methanol, siêu âm phút, chuyển lượng methanol vào tube 15 ml có nắp vặn, đun khí nitơ thổi khô hoàn toàn dung dịch methanol có chứa Melamine Sau thêm vào tube 100 µm pyridine đậy nắp kĩ tránh bay b) Tạo dẫn xuất cho chuẩn mẫu: Lấy 100 µm dung dịch chuẩn Melamine 0.6 ppm cho vào tube thủy tinh có nắp vặn 100 µm dung dịch mẫu kiểm tra, thêm vào 100 µl dung dịch DACP 600 ppb 400 µl dung dịch BSTFA với 1% TMCS Đậy kín lọ, lắc đều, tạo dẫn xuất 700C-45 phút Lấy để nguội nhiệt độ phòng Cho vào lọ đựng mẫu phân tích máy GC-MS c) Phân tích máy sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS): + Cột phân tích DB-5MS + Chế độ tiêm: không chia dòng (splitless) Mở xả khí sau phút Tốc độ chia 40 ml/phút + Nhiệt độ buồng tiêm : 2800C + Thể tích tiêm: µl + Khí mang: He + Tốc độ khí 1.5 ml/phút + Áp suất: 17.5 psi + Chế độ chạy: đẳng dòng (constant flow) + Nhiệt độ ban đầu: 750C + Thời gian giữ: phút + Bước tăng nhiệt: 150C/ phút + Nhiệt độ cuối: 3200C + Thời gian giữ phút + Nhiệt độ buồng chuyển 2000C Điều kiện phối phổ: + Năng lượng electron: 70eV + Chế độ chạy: toàn phổ từ 40- 450 amu lựa chọn ion (SIM) với ion 171 ; 197; 327 ; 342 + Thời gian mở felament: sau phút + Nhiệt độ tứ cực: 1500C + Nhiệt độ nguồn ion hóa: 2300C + Giá trị khuếch đại: 300-500V Xác định tính kết quả: Xác định diện Melamine mẫu, mẫu coi dương tính với Melamine: + Trong phổ phải có diện ion : 171; 197; 327; 342 + Thời gian lưu chất phân tích phải trùng với thời gian lưu chất dẫn xuất Melamine + Tỉ lệ ion : 171/327; 197/327; 324/ 327 mẫu phân tích phải tương ứng với dẫn xuất Melamine Tính hàm lượng Melamin mẫu : Hàm lượng Melamine mẫu tính toán theo phương pháp nội chuẩn : Tiêu chuẩn Melamine y tế < 0.5 ppm Trong đó: Smẫu: diện tích đo máy Snc(chuẩn): diện tích nội chuẩn chuẩn đo máy Schuẩn: diện tích chuẩn 0.6 ppm đo máy Snc(mẫu): diện tích nội chuẩn mẫu đo máy 0.6: nồng độ chuẩn Melamine (ppm) 0.1: thể tích pyridin hòa tan mẫu (ml) 2: thể tích mẫu qua cột chiết pha rắn (ml) 50: thể tích dung môi pha loãng mẫu (ml) Đánh giá phương pháp phân tích: Ưu điểm:  Là phương pháp phân tích Melamine đại  Độ nhạy độ đặc hiệu cao  Giới hạn phát phương pháp 50 ppb  Dùng chất nội chuẩn để tăng tính xác cho phân tích Nhược điểm:  Phương pháp dùng chất nội chuẩn nên ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi  Với điều kiện Melamine không phân tích sắc kí khối phổ trực tiếp nên phải tạo dẫn xuất để phân tích  Giá thành phân tích mẫu đắt Chú thích: Cột chiết pha rắn SPE Nguyên tắc điều kiện 1.1 Nguyên tắc chung Nguyên tắc • Chiết pha rắn trình phân bố chất pha, lúc đầu chất mẫu dạng lỏng (pha nước, hay hữu cơ), chất chiết dạng rắn, dạng hạt nhỏ xốp đường kính 25 - 70 μm Vì nên có tên chiết pha rắn (Solid Phase Extraction ), hay chiết rắn-lỏng • Chất chiết gọi pha tĩnh, nhồi vào cột chiết nhỏ, cột chiết kích thước: x cm, hay dung lượng chiết 100-600 mg, dạng đĩa chiết có kích thước dầy 1-2 mm đường kính 3-4 cm Chất chiết hạt Silica trung tính, hạt ôxit nhôm, hay Silicagen trung tính bị alkyl hoá nhóm -OH nhóm mạch carbon thẳng -C2, -C4, -C8, -C18, , hay nhân phenyl Nó chế tạo điều kiện giống pha tĩnh sắc ký HPLC, hạt có độ xốp lớn, với diện tích bề mặt xốp thường từ 50 300 m2/gam • Khi xử lý mẫu, dung dịch chất mẫu dội lên cột chiết Lúc pha tĩnh tương tác với chất giữ nhóm chất phân tích lại cột (trên pha tĩnh), nhóm chất khác khỏi cột với dung môi hoà tan mẫu Như thu nhóm chất cần phân tích pha tĩnh (chất chiết rắn) • Sau dùng dung môi thích hợp hoà tan tốt chất phân tích để rửa giải chúng khỏi pha tĩnh (cột chiết), thu dung dịch có chất phân tích để xác định chúng theo cách chọn Các loại chất chiết pha rắn Theo đặc điểm chất chiết, chất chiết pha rắn chế tạo phân chia theo loại chất: • Loại hấp phụ pha thường Đó Silica trung tính ôxit nhôm, • Hấp phụ pha ngược Đó Silica thường alkyl hoá nhóm-OH, • Loại chất trao đổi iôn (để tách Cation Anion), • Chất rây hay sàng lọc phân tử theo độ lớn, kích thước phân tử chất, • Loại chất hấp phụ khí (purge and trap Extraction), để hấp thụ chất khí Các kiểu chế chiết pha rắn Chính có nhiều loại chất chiết pha rắn, kỹ thuật chiết pha rắn có nhiều chế trình động học khác nhau, theo chất loại chất chiết (pha chiết) Nói chung, chất chiết pha rắn tương tự pha tĩnh sắc lý lỏng hiệu cao (HPLC) Nó dạng cột chiết (1x6 cm tích 4-6 mL) hay dạng đĩa chiết (dầy 1-2 mm đường kính 3-4 cm) Do chiết pha rắn có loại chế là: Hấp phụ pha thường (loại NP), Hấp phụ pha ngược (loại RP), Trao đổi ion cặp ion chất dạng ion (loại IEx), Rây phân tử theo độ lớn chất phân tích (Gel) 1.2 Các điều kiện chiết pha rắn Quá trình chiết thực chất phân bố chất phân tích pha, pha rắn (chất chiết) pha lỏng (dung dịch chứa chất phân tích) không trộn lẫn vào điều kiện định, pH, dung môi, nhiệt độ, tốc độ chảy mẫu qua cột chiết Trong hệ số phân bố nhiệt động Kb chất phân tích hai pha (rắn lỏng chứa mẫu) yếu tố định hiệu chiết Nó tương tự hệ sắc ký cột lỏng-rắn (của hệ HPLC) Vì muốn thực chiết pha rắn tốt phải có điều kiện sau đây: • Pha rắn hay chất chiết (dạng cột chiết hay đĩa chiết) phải có tính chất hấp thụ hay trao đổi chọn lọc với chất, hay nhóm chất phân tích định, tức tính chọn lọc pha tĩnh chiết • Các chất chiết dung môi rửa giải phải có độ cao theo yêu cầu cấp hàm lượng phân tích • Hệ số phân bố nhiệt động Kfb cân chiết phải lớn, để có hiệu suất chiết cao • Quá trình chiết phải xẩy nhanh nhanh đạt cân bằng, tương tác phản ứng hoá học làm hay hỏng pha rắn chất phân tích • Quá trình chiết phải có tính thuận nghịch, để rửa giải tốt chất phân tích khỏi pha chiết pha động phù hợp • Không làm nhiễm bẩn thêm chất phân tích trình chiết từ nguồn • Sự chiết phải thực điều kiện định phù hợp, phải lặp lại tốt tất nhiên đơn giản dễ thực tốt Máy cô quay chân không hệ thống bao gồm bình thắt cổ quay bay hơi, giúp tăng diện tích bể ổn nhiệt điều kiện hút chân không, để nung nóng hay bay giúp thu hồi sản phẩm tách chiết Quá trình bay sử dụng rộng việc kết tinh hóa, cô đặc sản phẩm, làm khô bột, tách dung môi, tách chiết,… Trong thí nghiệm công nghiệp thường sử dụng máy cô quay chân dung tích khoảng vài chục lít Đặc tính kỹ thuật máy cô quay chân không: – Máy cất quay chân không theo kiểu sinh hàn thẳng đứng với diện tích bề mặt làm lạnh sinh hàn 1200cm2 – Thao tác đơn giản an toàn nhớ núm điều chỉnh nhiệt độ tốc độ đặt phía trước máy – Hệ thống nâng hạ tự động kèm theo chức “dừng an toàn-safe stop” – Để thực trình làm khô di chuyển bình cất sang trái phải mà dừng trình cất quay – Có điểm điều chỉnh cuối khoảng cách từ bình cất tới bể gia nhiệt nên tránh việc vỡ bình cất – Tốc độ cất quay hiển thị số tốc độ theo kiểu scale – Bể gia nhiệt máy cô quay chân không thiết kế phù hợp với bình cất lít, gia nhiệt nước dầu với tốc độ gia nhiệt nhanh Cung cấp hoàn chỉnh kèm theo sinh hàn dạng thằng đứng, bình hứng bình cất Ứng dụng: • Máy cô quay chân không, thiết bị tạo môi trường phản ứng chân không, cô đặc dung dịch, tách chiết dung môi, sấy khô vật liệu nhạy với nhiệt độ (thường thuốc bột) Máy cô quay chân không sử dụng phổ biến công nghệ thực phẩm, dược phẩm, mỹ phẩm, nghiên cứu khoa học thực nghiệm Pyridin chất lỏng không màu, dễ cháy, kiềm yếu hòa tan nước với một, mùi cá khó chịu Pyridin sử dụng tiền thân hóa chất nông nghiệp dược phẩm dung môi quan trọng tinh khiết Pyridin thêm ethanol để làm cho phù hợp cho uống (xem rượu làm biến tính) Nó sử dụng tổng hợp ống nghiệm DNA[7], việc tổng hợp sulfapyridine (một loại thuốc chống lại bệnh nhiễm trùng vi khuẩn virus), thuốc Thuốc chống dị ứng tripelennamine mepyramine, thuốc chống nước, khuẩn, thuốc diệt cỏ Một số hợp chất hóa học, không tổng hợp từ pyridine, có cấu trúc vòng Chúng bao gồm vitamin B niacin pyridoxal, thuốc chống lao isoniazid, nicotine sản phẩm thực vật có chứa nitơ khác[8] Trong lịch sử, pyridin sản xuất từ nhựa than đá sản phẩm phụ trình khí hóa than Tuy nhiên, nhu cầu tăng lên pyridin dẫn đến phát triển phương pháp kinh tế tổng hợp từ acetaldehyde ammonia, 20.000 năm sản xuất toàn giới Phân tử Pyridin trạng thái liên hợp kín, orbital p nguyên tử N C xen phủ bên với Từ đó, tính bazơ Pyridin nhỏ (lớn anilin không đáng kể) Một π electron nguyên tử Nitơ hợp với π electron khác năm nguyên tử carbon tạo thành vòng thơm Do Nitơ không sử dụng cặp electron không liên kết để tạo thành vòng thơm theo quy tắc (4n+2), pyrrole, nên thể hiển tính bazơ Tính bazơ Pirydin yếu amin khác ví dụ Piperidine, giải thích lai hóa sp2 nguyên tử Nitơ Pirydin, orbital sp2 có nhiều tính chất orbital s sp3, trạng thái lai hóa mà nguyên tử Nitơ amin khác tồn Pyridin thường biết đến hỗn hợp Pyridin Cloro Cromic (PCC) gồm Pyridin, HCl, CrO3, hợp chất có tính oxy hóa trung bình, oxy hóa alcol thành aldehyd không oxy hóa ceton Cũng giống nhiều hợp chất dị vòng chứa nitơ khác, pyridin có mùi khó chịu (tương tự mùi cá ươn) Ngoài tính base yếu dị tố định, phân tử trạng thái liên hợp kín, pyridin thể hóa tính gần giống với hydrocacbon thơm (phản ứng thế, phản ứng cộng hợp) Trimethylsilylation silyl hóa tức thay H nhóm -OH hay -NH hợp chất nhóm trimethylsilyl -Si(CH3)3 nhằm làm giảm độ phân cực hợp chất này, qua làm tăng độ bền nhiệt (điểm quan trọng nhất), (có thể) làm giảm nhiệt độ bay hợp chất tạo thành (so với hợp chất chưa silyl hóa) Sự silyl hóa thường sử dụng nhiều sắc ký khí để phân tích hợp chất có chứa nhóm phân cực