Nghiên cứu sự hấp thu Acid salicylic trên thỏ được gây bỏng thực nghiệm có sử dụng thuốc mỡ Acid salicylic 40 - Hoàng Việt Dũng

Bộ quốc phòng Học viện quân y ********* Hoàng việt dũng Nghiên cứu hấp thu acid salicylic Thỏ đợc gây bỏng thực nghiệm Có sử dụng thuốc mỡ acid salicylic 40% ( khoá luận tốt nghiệp dợc sĩ đại học khoá 1999 - 2005) Cán hớng dẫn: TS Nguyễn Thị Lộc Nơi thực hiện: Bộ môn Dợc Học Quân Sự Bộ môn Sinh lý bệnh Thời gian thực hiện: 8/2005 đặt vấn đề Acid salicylic hoạt chất đợc ngời ta tìm từ sớm Acid salicylic gây kích ứng mạnh niêm mạc đờng tiêu hoá mô Trong chuyên khoa bỏng, ngời ta sử dụng chế phẩm thuốc mỡ acid salicylic 40% để làm bong lớp da hoại tử khô Tuy nhiên, bệnh nhân sử dụng thuốc mỡ bị ngộ độc Vì thế, tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu hấp thu acid salicylic thỏ đợc gây bỏng thực nghiệm có sử dụng thuốc mỡ acid salicylic 40% nhằm mục tiêu: Nghiên cứu phơng pháp định lợng acid salicylic huyết thỏ Nghiên cứu hấp thu acid salicylic thỏ đợc gây bỏng thực nghiệm Chơng Tổng quan tài liệu 1.1 Các yếu tố ảnh hởng đến hấp thu thuốc mỡ a) Yếu tố sinh lý - Loại da: da khô nghèo mỡ nớc; da trơn, nhờn - Lứa tuổi: khác bề dầy lớp sừng, diện tích da - Tình trạng da: nguyên vẹn tổn thơng - Nhiệt độ bề mặt da - Mức độ hydrat hoá lớp sừng b) Các yếu tố công thức, kỹ thuật - Dợc chất: độ tan, hệ số phân bố, hệ số khuyếch tán, mức độ ion hoá, nồng độ dợc chất - Tá dợc: tá dợc ảnh hởng đến trình hydrat hoá lớp sừng, nhiệt độ bề mặt da, độ bám dính thuốc da - Chất làm tăng hấp thu: chất diện hoạt, alkyl methyl sulfoxid - Kỹ thuật bào chế 1.2/ Acid salicylic - Công thức phân tử: C7H6O3 - Công thức cấu tạo: COOH OH Hình 1: Công thức cấu tạo acid salicylic Tên khoa học: acid - hydroxy benzoic TLPT: 138,12 1.3/ Thuốc mỡ acid salicylic a) Chỉ định: Acid salicylic dùng chỗ dới dạng đơn chất phối hợp với thuốc khác để điều trị triệu chứng trờng hợp sau: + Các trờng hợp bệnh da tróc vẩy + Loại bỏ mụn cơm + Chứng tăng sừng khu trú gan bàn tay bàn chân + Loại bỏ da hoại tử chuyên khoa bỏng b) Tác dụng không mong muốn Lú lẫn, chóng mặt, đau đầu, thở nhanh, ù tai, giãn mạch, toát mồ hôi 1.4/ Phơng pháp định lợng a) Phơng pháp trung hoà acid base b) Phơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) c) Phơng pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại-khả kiến - Nguyên tắc: Dựa sở định luật Lambert Beer: A=D=E= k.C.l khoảng nồng độ định, mật độ quang tuyến tính bậc với nồng độ acid salicylic Phần Đối tợng phơng pháp nghiên cứu 2.1/ Đối tợng nghiên cứu - Huyết thỏ - Thỏ trởng thành khoẻ mạnh 2.2/ Phơng pháp nghiên cứu 2.2.1/ Khảo sát cực đại hấp thụ acid salicylic CHCl3 50 mg A.S chuẩn Hoà tan / CHCl3 Bđm 100 ml dd 500 mcg/ml Lấy cx 2ml + CHCl3 vđ Bđm 50 ml dd 20 mcg/ml Ghi phổ 230-330 nm Xác định cực đại hấp thụ 1% 2.2.2/ Xác định giá trị E 1cm acid salicylic CHCl3 50 mg A.S chuẩn Hoà tan/CHCl3 Bđm 100 ml dd 500 mcg/ml Lấy cx 1, 2, 3, ml + CHCl3 vđ Bđm 50 ml đợc dd 10, 20, 30, 40 mcg/ml Đo mật độ quang 1% Xác định E 1% , E 1cm 1cm Xây dựng đờng chuẩn 2.2.4/ Xây dựng đờng chuẩn định lợng acid salicylic huyết thỏ phơng pháp QPHTTNKK Huyết thỏ dd A.S 1500mcg/ml nớc Hoà tan dd A.S nồng độ: 30, 45, 60, 75 mcg/ml Cho vào bình nón ml dd nồng độ HCl 1N (pH=2) ml CHCl3 Lắc 20 Dịch chiết Na2SO4 khan Dịch Đo mật độ quang Xây dựng đờng chuẩn 2.2.5/ Nghiên cứu hấp thu hoạt chất từ thuốc mỡ acid salicylic 40% thỏ đợc gây bỏng thực nghiệm Gây bỏng thực nghiệm cho thỏ Bôi thuốc mỡ A.S 40% Lấy máu thời điểm nghiên cứu Xử lý mẫu máu Đo mật độ quang Vẽ đồ thị Phần Kết bàn luận 3.1/ Khảo sát cực đại hấp thụ acid salicylic CHCl3 2.0 Abs 1.5 239.6 1.0 308.3 0.5 0.0 240.0 260.0 Quang Pho 280.0 300.0 320.0 340.0 360.0 380.0 Hình 1: Phổ acid salicylic CHCl3 400.0 nm 1% 3.2/ Xác định giá trị E1cm acid salicylic CHCl3 1% Bảng 1: Giá trị E1cm thực nghiệm acid salicylic CHCl3 (n=5): C(mcg/ml) 10 20 30 40 0,2778 0,5569 0,8307 1,195 0,2803 0,5617 0,8366 0,0987 0,2714 0,5512 0,8495 1,143 0,2818 0,5602 0,8441 1,162 0,2783 0,5541 0,8416 1,023 X 0,2779 0,5568 0,8405 1,112 RSD 1,44 0,77 0,86 0,89 1% E1cm 277,9 278,4 280,2 278,1 E 1% E1cm 279 r = 0,9994 Phơng trình biểu diễn tơng quan E C nh sau: E = 0,02786.C + 0,00030 E 1.2 E = 0,02786.C + 0,00030 0.8 0.6 0.4 0.2 0 10 20 30 40 50 C(mcg/ml) Hình 2: Đồ thị biểu diễn tơng quan nồng độ acid salicylic CHCl3 mật độ quang bớc sóng 308 nm 3.3/ Nghiên cứu ảnh hởng pH đến hệ số phân bố hiệu suất chiết acid salicylic hai pha CHCl3 / H2O Bảng 2: pH ảnh hởng đến K H (n=5): pH 0,0562 0,0917 0,2062 0,3615 0,5516 0,0585 0,0954 0,2269 0,3793 0,5397 0,0527 0,0948 0,2291 0,3745 0,5644 0,0538 0,0934 0,2225 0,3701 0,5738 0,0543 0,0998 0,1928 0,3629 0,5450 X 0,0551 0,0952 0,2215 0,3747 0,5569 RSD 4,25 3,15 2,35 2,03 2,55 C(mcg/ml) 1,97 3,41 7,94 13,43 19,96 K 0,07 0,17 0,36 0,81 1,98 H 6,58 11,37 26,47 44,77 66,54 E K 2.5 1.98 1.5 0.81 0.5 0.36 0.17 0.07 pH Hình 3: ảnh hởng pH đến hệ số phân bố acid salicylic hai pha CHCl3 /H2O H 70 66.54 60 50 44.77 40 30 26.47 20 11.37 10 6.58 pH Hình 4: ảnh hởng pH đến hiệu suất chiết acid salicylic hai pha CHCl3 /H2O 3.4/ Xây dựng đờng chuẩn định lợng acid salicylic huyết thỏ phơng pháp QPHTTNKK Bảng 3:Tơng quan nồng độ acid salicylic mật độ quang (n=5): C(mcg/ml) 30 45 60 75 0,1553 0,2260 0,3201 0,3713 0,1682 0,2192 0,3173 0,3877 0,1625 0,2138 0,3039 0,3943 0,1499 0,2302 0,3147 0,3784 0,1565 0,2119 0,2988 0,3798 X 0,1585 0,2202 0,3114 0,3821 RSD 4,41 3,55 3,11 2,56 E r = 0,997 Phơng trình biểu thị mối tơng quan tuyến tính E C nh sau: E = 0,0051.C + 0,0019 E 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 E = 0,0051.C + 0,0019 15 30 45 60 75 90 C(mcg/ml) Hình 5: Đồ thị biểu diễn tơng quan nồng độ acid salicylic huyết thỏ mật độ quang 3.5/ Nghiên cứu hấp thu hoạt chất từ thuốc mỡ acid salicylic 40% thỏ đợc gây bỏng thực nghiệm Bảng 4: Nồng độ acid salicylic máu thỏ thời điểm nghiên cứu (n=5): t 4h 8h 12h 16h 20h 28h 0,2517 0,3696 0,4337 0,2587 0,1523 0,0166 0,2405 0,3738 0,4415 0,2453 0,1637 0,0155 0,1743 0,3021 0,3765 0,2048 0,0987 0,0602 0,1992 0,3543 0,3782 0,1962 0,1291 0,0690 0,1838 0,3287 0,3991 0,2165 0,1012 0,0317 0,2099 C(mcg/ml) 40,79 0,3457 0,2243 0,1290 0,0386 67,41 0,4058 79,19 43,60 24,92 7,19 5,53 5,62 4,86 5,37 4,49 Thỏ X SD 6,37 C(mcg/ml) 90 80 70 60 50 40 30 20 10 79.19 : độ lệch chuẩn 67.41 43.6 40.97 24.92 7.19 0 12 16 20 24 28 32 t(h) Hình 6: Sự biến đổi nồng độ acid salicylic máu thỏ theo thời gian Phần Kết luận Nghiên cứu phơng pháp định lợng acid salicylic đợc kết sau: - Trong khoảng bớc sóng 230 330 nm, có hai đỉnh cực đại hấp thụ 239,6 308,3 nm Chọn bớc sóng 308 nm để khảo sát nghiên cứu - Giá trị 1% E 1cm = 279 - pH = 2, K H acid salicylic hai pha CHCl3 / H2O cao - Phơng trình đờng chuẩn biểu thị tơng quan E C là: E = 0,0051.C + 0,0019 Kết nghiên cứu hấp thu hoạt chất từ thuốc mỡ acid salicylic 40% thỏ đợc gây bỏng thực nghiệm nh sau: - Acid salicylic hấp thu mạnh qua da thỏ đợc gây bỏng thực nghiệm - Acid salicylic máu thỏ đạt nồng độ đỉnh thời điểm 12 sau bôi thuốc - pha thải trừ, acid salicylic đợc đào thải nhanh khỏi thể