SÀNG LỌC CÁC TÁC NHÂN LÂY NHIỄM QUA ĐƯỜNG TRUYỀN MÁU

BI GING CHO LP O TO BC S NGN HNG MU V BC S LM TRUYN MU SNG LC CC TC NHN LY NHIM QUA NG TRUYN MU BS PHAN BCH LIấN I/ I CNG An ton truyn mỏu l ni dung xuyờn sut chin lc truyn mỏu ca quc gia ú sng lc cỏc tỏc nhõn lõy nhim qua ng truyn mỏu c xem l mt nhng mc tiờu then cht Cỏc tỏc nhõn gõy bnh ny cú th c truyn t mỏu v ch phm mỏu ca ngi cho mỏu ó nhim bnh sang ngỡ nhn Ti nc ta, cụng tỏc sng lc cỏc tỏc nhõn lõy nhim qua ng truyn mỏu c tuõn th theo nhng qui nh iu lnh truyn mỏu B Y T ban hnh, ú l cỏc tỏc nhõn sau: Virus gõy suy gim dch mc phi ngi (HIV), virus viờm gan B (HBV), virus viờm gan C (HCV), giang mai, ký sinh trựng st rột II/ CC TC NHN GY BNH II.1 HIV Virus gõy suy gim dch ngi Virus gõy suy gim dch ngi (Human Immuno Deficiency Virus = HIV) l tỏc nhõn gõy hi chng suy gim dch mc phi ngi: AIDS (Acquired Immuno Deficiency Virus) II.1.1 c im sinh hc: gm tuýp HIV1 v HIV2 a Cu trỳc: Thuc h Retroviridae, nhúm lentivirus dng hỡnh cu ng kớnh khong 100 nm gm cú cỏc thnh phn sau: - Lp v ngoi: l lp lipid kộp + Glycoprotein mng ngoi (gp 120): to thnh gai nhỳ + Glycoprotein xuyờn mng (gp 41) l ni HIV bỏm vo b mt TCD4 vo t bo - Lp v trong: l lp protein gm cú: + Lp ngoi hỡnh cu (p17) = cung cp cht c bn cho cu to virus + Lp hỡnh tr (p24) = l khỏng nguyờn chn oỏn HIV/AIDS p17 v p24 bao bc phiờn bn RNA n xon c (b gen di truyn ca HIV) - Phn lừi: l nhõn virus gm phn chớnh l RNA xon c v cỏc men cn thit ụi dõy RNA n l b gen di truyn ca HIV gm gen cu trỳc: + Gag (Group specific antigen): mó húa protein cu trỳc (p17), protein capsid (p24, p7, p9) + Pol (polymerase): mó húa cỏc men proteaza (p10), men chộp ngc (p66, p51), men integraza (p32) - Trang - + Env (Envelope): mó húa nhng glycoprotein v gp120, gp41 Hai u genome c bao bc bi cỏc liờn kt nucleotid gi l LTRs (Long Terminal Repeat Sequences) gm cỏc tớn hiu cn thit cho s chộp ca virus v giỳp virus xỏc nhp vo genom t bo ký ch b Chu k nhõn lờn ca HIV (vũng sng ca HIV): Chu k nhõn lờn ca virus gm giai an: - Tip cn vi t bo ớch nh gp120 vi th th CD4 ca t bo ớch, gn vo mng t bo ớch - Ho mng virut vi mng bo tng, cỏc men ca virut xõm nhp vo bo tng gii phúng P24, cũn RNA-HIV v cỏc t bo ớch - RNA-HIV liờn kt vi si kộp DNA ca t bo ớch to thnh DNA-RNA/HIV, nh men intergraza - DNA-RNA/HIV vo nhõn chộp RNA/HIV mi, nh men RT (sao chộp ngc) - RNA/HIV mi to v nh men proteaza thnh virut mi i mng bo tng ngoi c Cỏc giai an nhim HIV Cú giai an nhim HIV: - Giai an s nhim: Giai an s nhim cú ý ngha quan trng truyn mỏu Trong nhng ngy u, huyt ngi nhim cha xut hin khỏng nguyờn cng nh khỏng th chng HIV Sau ú khỏng nguyờn P24 mi xut hin v tip ú cú khỏng th khỏng HIV(IgM) Vỡ vy cỏc k thut sng lc HIV tỡm khỏng th HIV m ta ỏp dng u cho kt qu õm tớnh giai an ny, nu ly mỏu ny em truyn cho bnh nhõn thỡ chn chn ngi bnh s b nhim Giai an ny cũn gi l ca s sng lc - Giai an nhim trựng khụng triu chng: Giai an ny cú th kộo di 5-10 nm, c th bỡnh thng cha cú triu chng gỡ ca AIDS giai an ny huyt ch yu cú cỏc khỏng th c hiu i vi tng khỏng nguyờn ca virus Phn ln khỏng nguyờn thuc type IgG, khỏng th ny cú th c phỏt hin d dng, ú sng lc ngi cho mỏu cng m bo hn - Giai on hỡnh thnh AIDS: Do s tn cụng ca HIV vo t bo T4, s lng t bo ny gim nng, thng gim < 200 t bo/1mm 3, lỳc ny ngi bnh cú biu hin nhim trựng c hi suy gim dch, giai on ny phng phỏp huyt hc ta cú th phỏt hin c c khỏng nguyờn P24,gp 120, gp 41v khỏng th c hiu ca chỳng II.1.2 ng lõy nhim HIV: Qua ng truyn mỏu v qua cỏc dch v y t, tiờm truyn, phu thut ngoi khoa, sn khoa, cha rng, lõy chộo bnh nhõn T m sang Qua nghin chớch ma tỳy, nc ta cú gn 70% nhim qua ng ny Qua ng tỡnh dc: xõy xỏt, sang chn giao hp - Trang - Qua cỏc dch v xó hi: ct túc, m vin Qua ni b gia ỡnh: chung bn chi ỏnh rng, co rõu II.1.3 Chn oỏn nhim HIV a Cỏc du n cú giỏ tr chn oỏn: - Anti - HIV1,2 tip IgG (20 -30 ngy) - Anti - HIV1,2 Mix-IgM + IgG (10 - 15 ngy) - Khỏng nguyờn P24 (10 - 15 ngy) - RNA-HIV (6 - 10 ngy) Cỏc dy n ny ng thi cng l cỏc du n dựng sng lc HIV ngi cho mỏu b Cỏc k thut s dng cho sng lc: - Trong thi gian t 6-8 tun k t virut xõm nhp vo c th õy l giai on ca s sinh hc, mt s cỏc k thut sau õy c ỏp dng giai on ny gm cú: - K thut phõn lp virus - K thut phõn t: phn ng chui Polymerase(PCR) phỏt hin genome HIV - K thut phỏt hin khỏng nguyờn p24 Cỏc k thut trờn thng c ỏp dng cỏc trng hp: nhim HIV giai on ca s trng hp ny rt cú ý ngha truyn mỏu, ghộp cỏc c quan, ca nhng ngi m nhim HIV v trng hp ELISA dng tớnh m Western Blot (WB) khụng xỏc nh c Cỏc k thut ỏp dng giai on cú khỏng th: - Nhúm k thut sng lc: Gm cú k thut ngng kt: (SERODIA) phỏt hin khỏng th tip IgG, k thut men dch(ELISA) phỏt hin khỏng th tip IgM + IgG õy l k thut cú nhy cao, tin hnh n gin, giỏ thnh r Rt cú giỏ tr iu tra dch t v sng lc ngi cho mỏu - Nhúm k thut khng nh: Gm cú k thut thm dch Western Blot (WB) v k thut dch phúng x kt ta (Radio Immuno Precipitation Assay :RIPA) Thng dựng xỏc nh cỏc dng tớnh t nhúm k thut sng lc trờn WB thng c ỏp dng hn l k thut RIPA II.2 Vius viờm gan B Virus viờm gan B (HBV = Hepatitis B virus) l nhúm virus cú DNA thuc h Hepadnaviridae, cú ỏc tớnh i vi t bo gan v gõy tn thng t bo gan Ngi nhim HBV cú nguy c viờm gan cp, viờm gan món, s gan v ung th gan II.2.1 c im sinh hc ca virus viờm gan B (HBV) a Cu trỳc: Virus HBV hon chnh hay cũn gi l th Dane cú ng kớnh khong 42 nm HBV cú lp v bc ngoi gm cú loi protein: ln, trung bỡnh v nh; v phn nhõn v cú mng bc protein gi l lp capsid v nhõn l DNA; c nhõn v lp capsid c gi l - Trang - nucleocapsid (cú thnh phn cu to nờn virus) C phn v v nucleocapsid to mt virion tht s - Lp v bc: Dy khong 7nm, gm lp lipoprotein cú cha loi protein: + Protein nh gm 226 acid amin, c mó húa bi gen S (surface = b mt), cu to nờn mt cu trỳc c bn mang y tớnh khỏng nguyờn ca HbsAg, vỡ vy loi protein nh cũn c gi l protein chớnh + Protein trung bỡnh gm 280 acid amin, c mó húa bi tin gen S2 v gen S Protein ny cú vai trũ giỳp virus xõm nhp vo t bo gan + Protein ln gm 380 400 acid amin, c mó húa bi tin gen S1, S2 v gen S Protein ny cú vai trũ quan trng liờn kt v xõm nhp vo t bo gan C thnh phn trờn u l thnh phn c bn ca khỏng nguyờn HBsAg V hỡnh thỏi HBsAg cú hai dng hỡnh cu v hỡnh dng ng Hỡnh cu cú ng kớnh t 24 nm, hỡnh ng cú chiu rng khong 20 nm, chiu di khong 120 200 nm - Lp capsid: L lp mng protein bao bc phn nhõn, lp ny dy khong 28 nm c móhúa bi cỏc gen C (core = lừi) gm 183 acid amin, mang c trng ca khỏng nguyờn HBc (HBcAg); HBcAg khụng xut hin huyt v nu cú thỡ cng rt him - Genome virus (DNA virus) Genome ca HBV, gm si DNA xp thnh hỡnh trũn; nhng cú mt hai si cú chiu di khong t 10 50% so vi tng chiu di DNA (vi u tn v khụng ni liờn nhau); si ny cũn c gi l si ngn (ký hiu l S); si cũn li l si di (ký hiu l L) gm cú 3200 nucleotid v gn nh khộp kớn; tt c cỏc thụng tin di truyn sn xut cỏc khỏng nguyờn lp v v lừi u si DNA di Ngoi cũn cú men DNA polymeraza iu khin s tng hp DNA virus t RNA thụng tin b Cu trỳc ca h thng gen iu hũa: Cỏc gen iu hũa gm cú: gen C v gen tin C; cỏc gen ny mó húa cỏc protein nhõn (capsid) nh HBeAg v HBcAg Cũn cỏc gen S, tin gen S1, tin gen S2 cú nhim v mó húa khỏng nguyờn v HBsAg v gen P mó húa DNA polymeraza c Cỏc du n (marker) ca HBV: - Khỏng nguyờn b mt virus viờm gan B (HBsAg): Huyt chn oỏn u tiờn tỡnh trng nhim HBV l phỏt hin HBsAg; HBsAg l protein cu to v ca virus, s cú mt ca HBsAg ch im ca HBV cp tớnh hoc tớnh HBsAg cú mt thnh phn quyt nh khỏng nguyờn chung (determinant antigen) mang ký hiu a v hin ó tỡm thy a1, a2, a3 ngoi cũn cú d, y, w r Hin cú tớp ph (subtypes) nh sau: adw, adr, ayw, ayr S phõn b tớp ph cú liờn quan n a d v chng tc Tớp ph adw v ayw chim u th trờn th gii, ngoi tr vựng ụng Nam Chõu v Cc ụng ni m adw thng gp; ayr thỡ him gp nht HBsAg xut hin sm huyt thanh, trc men transaminaza t nh cao S hi phc v lõm sng ca bnh nhõn v s gim m men transaminaza s song hnh cựng vi s gim hiu giỏ HBsAg v tip theo l s bin mt HBsAg - Trang - - Khỏng th c hiu vi khỏng nguyờn b mt (Anti HBs): Khỏng th ny xut hin mun sau thỏng k t HBV xõm nhp c th, lỳc ú HbsAg ó bin mt huyt Anti HBs cú vai trũ bo v c th chng tỏi nhim HBV, nờn HBsAg c ng dng lm vcxin chng viờm gan B Anti HBs cũn cú giỏ tr ỏnh giỏ kh nng bo v ca c th, ỏnh giỏ hiu qu ca vcxin - Khỏng nguyờn lừi (HBcAg): HBcAg cú nhõn t bo gan m khụng cú huyt v nu cú thỡ cng rt him HBcAg ớt cú giỏ tr chn oỏn nhim HBV, vỡ xut hin rt ngn mỏu, khú phỏt hin Trong viờm gan tớnh sau nhim HBV th tn cụng thng thy HBcAg nhõn t bo gan v HBsAg trờn mng t bo gan - Khỏng th c hiu vi khỏng nguyờn lừi (Anti HBc): Khỏng th ny gm cú tớp: + Anti HBc IgM: xut hin sm ca thi k cp ca lõm sng kộo di tun thỡ ht, ú nu phỏt hin cú Anti HBc IgM thỡ chc chn l viờm gan cp; nờn c xem nh chn oỏn viờm gan cp + Anti HBc IgG: khỏng th ny xut hin mun v tn ti lõu mc cao, cho nờn chn oỏn cng nh sng lc ngi cho mỏu, ngoi HBsAg l ch im chớnh, ngi ta cũn dựng anti HBc b sung cỏc trng hp HBsAg õm tớnh giai on ca s Giai on ca s cú th kộo di vi tun, vi thỏng hoc c nm, thi gian ny anti HBc l ch im nht, anti-HBc cú giỏ tr iu tra dch t hc - Khỏng nguyờn HBeAg: L khỏng nguyờn nhõn ca HBV, xut hin sau HBsAg v mt i sm HBeAg xut hin cú liờn quan n s nhõn lờn ca virus c th v kh nng lõy nhim ca bnh nhõn rt cao - Khỏng th c hiu vi khỏng nguyờn HbeAg (Anti HBe): S xut hin ca Anti HBe trng hp viờm gan cp tớnh l du hiu huyt u tiờn ca thi k hi phc bnh, ớt cú kh nng lõy nhim II.2.2 ng lõy truyn: Con ng lõy truyốn ca viờm gan B thỡ tng t nh i vi HIV Trong ú ng lõy t m sang l quan trng nht, ng ny lm gim ngi cho mỏu tng lai II.2.3 Chn úan viờm gan B: phỏt hin HBsAg, DNA-HBV, Anti HBc IgM, IgG bng cỏc k thut sau õy: - K thut ta trờn gel thch (Ouchterlony) - K thut ngng kt ht latex hoc ht gelatin - K thut chn oỏn nhanh nhanh HBsAg - K thut dch gn men ( ELISA) - K thut phúng x dch (Radio Immuno Assay-RIA) - K thut khuch i chui(PCR) phỏt hin DNA-HBV II.3 Virus viờn gan C: - Trang - Virus viờm gan C (Hepatitis C virus = HCV), m trc nm 1989 cũn gi l virus viờm gan non A- non B, cú kh nng gõy viờm gan, tn thng t bo gan, lm tng men gan v cú th dn n viờm gan mn, ung th gan, x gan II.3.1 c im sinh hc a Cu trỳc virus viờm gan C (HCV): HCV thuc h Flaviridae, nhúm B ca arbovirus Cu trỳc gm phn: v v nhõn (capsid) cú chc genome virus l si n RNA - Phn v: Gm cú lp lipid v cỏc protein xuyờn mng Protein mng giỳp virus tip cn t bo ớch - Phn nhõn: Nhõn (capsid) gm cỏc protein ó c phosphoryl húa, ú l nhng protein cú nhim v iu hũa chộp gen Genome ca HCV l si n RNA, c cu to bi 9400 acid amin v cỏc gen mó húa (gen C, E1, E2 / NS1), giỳp mó húa cỏc protein virus: gen E1 mó húa glycoprotein 33 (gp 33), gen E2 / NS1 mó húa gp 70; gen C mó húa protein ca nucleocapsid p22, gn vi RNA virus, gen NS3 mó húa men proteaza, gen NS5a mó húa men polymeraza, gen NS5b mó húa men replicaza Hai men sau cn thit cho s chộp ca HCV II.3.2 ng lõy truyn: Con ng lõy truyn viờm gan C tng t nh i vi HIV, ú ng truyn mỏu rt nhy v ng nghin chớch ma tuý gõy ng nhim vi HIV II.3.3 Biu hin lõm sng: Cỏc biu hin lõm sng ca viờm gan C rt thay i Cú th l biu hin nh nhng, thoỏng qua v khụng cú triu chng hoc l biu hin nng, kộo di v a n t vong Hai hỡnh thỏi lõm sng thng gp l viờm gan C cp (thi gian bnh t n tun) v viờm gan C mn (t n thỏng hay lõu hn) - Hi chng lõm sng: cú th gp l mt mi, chỏn n, gim cõn, vng da (ch khong 25%) Viờm gan C cp kch phỏt him gp - Xột nghim: men gm ALT tng cao v giao ng t 250-1000 UI/L kộo di 2-4 thỏng; nu men gan tng kộo di trờn thỏng v giao ng, bnh nhõn d chuyn sang th mn tớnh HCV cú th gõy viờm gan cp, viờm gan mn, t ú dn n x gan v ung th gan So vi virus viờm gan B, HCV cũn nguy him hn vỡ tc lõy nhim ngy cng tng v cha cú bin phỏp ngn nga c hiu, t l tr thnh viờm gan mn cao 50-70% (viờm gan B ch khong 10-20%) khong 30% x gan viờm gan C tr thnh ung th gan nguyờn phỏt õy l mi e da i vi sc khe cng ng II.3.4 Chn oỏn viờm gan C: a Phỏt hin anti HCV: - T nm 1989 viờm gan C c lm sỏng t v cỏc nh khoa hc ó phõn lp c virus viờm gan C v tip theo l thnh cụng vic lai to RNA-virus C T ú n cụng ngh lai to phỏt trin sn xut nhiu khỏng nguyờn tng hp cú - Trang - nhy v c hiu ngy cng cao gúp phn vic chn oỏn HCV v sng lc HCV ngi cho mỏu K thut men dch ELISA th h (s dng gen NS4) ch phỏt hin nhim HCV sau 125 ngy; ELISA th h th hai (s dng gen core, NS3, NS4) phỏt hin HCV sau 100 ngy nhim HCV; tin b hn gn õy ELISA th h i (s dng gen: core, NS3, NS4, NS5) ó rỳt ngn giai on ca s cũn 75 ngy sau nhim (õy l nghiờn cu ca Decker 1997) Nh vy giai on ca s ca nhim HCV l thi gian di (75-100 ngy) ta khụng phỏt hin c anti HCV, v õy l giai on quan trng i vi sng lc HCV ngi cho mỏu b Chn oỏn genome HCV: - Vi phng phỏp khuch i chui (PCR), phỏt hin c RNA-HCV huyt tng ca 80% bnh nhõn cú anti HCV Phng phỏp ny c s dng chn chn oỏn viờm gan C - Hin mt s nc tiờn tin ỏp dng phng phỏp PCR sng lc ngi cho mỏu ln chn oỏn bnh Ngoi k thut m s lng bn virus (viral load) cng c ỏp dng ỏnh giỏ mc nhõn lờn ca virus, kh nng lõy truyn v tiờn lng bnh II Giang mai II.4.1 c im sinh hc a Cu trỳc Vi khun cú hỡnh xon nh lũ xo, cú khong 6-12 vũng xon u n khong cỏch gia cỏc vũng xon lỏ 1àm, cú u nhn, hi thng , mnh mai khụng lụng Thõn vi khun cú lp : - Lp ngoi cựng l mucopolysaccharide giỳp vi khun chng hiờn tng thc bo - Lp gia l nhng si Fibrin cú t 6-10 si un quanh thõn vi khun - Lp l lp peptidoglycan Cú nhúm chớnh cú liờn quan cht ch c mụ t l di nhúm ca T.pallidum - T.Pallidum-pallidum - T.Pallidum- pertenuve - T.pallidum-carateum - T.Pallidum- endemicum Pallidum-pallidum(gi tt l T.Pallidum) l tỏc nhõn gõy bnh quan trng nht II.4.2 ng lõy nhim - Bnh ch yu lõy qua ng tỡnh dc mc dự cú th lan truyn bi tip xỳc dch niờm mc Ngũai bnh cũn cú th lõy qua dng truyn mỏu II.4.3 Biu hin lõm sng Bnh giang mai cú biu hin lõm sng thay i v c xỏc nh cỏc giai on bnh khỏc Cú trung hp: giang mai mc phi v giang mai bm sinh Giang mai mc phi: Gp ngỡ ln Bnh kộo di qua thi k: - Trang - - Giang mai thi k 1: sau thi gian bnh 10-60 ngy bnh bt u l nhng vt loột nụng gi l h cam cng Thng thỡ h cam c tỡm thy ng sinh dc: vt loột trũn khụng au, khụng chy mỏu Nu khụng iu tr, h cam cng t lnh vi tun - Giang mai thi k 2: bt u t 1-2 tun sau h cam lnh nhng cú th chm hn mt nm nhng bnh nhõn khụng iu tr y Cỏc tn thng ngoi da xut hin ú l nhng m khp c th Hch bch huyt sng lờn nhiu ni - Giang mai thi k 3: Trong giang mai mun cú nhng tn thng sõu hn nh: + Gụm da v xng + Tn thng h tim mch + Tn thng h thn kinh lm bnh nhõn st, nhc u, au khp Giang mai bm sinh: Xon khun giang mai cú th truyn cho thai nhi khong thỏng th ca thai k Do ú cú th trỏnh giang mai bm sinh nu iu tr ngi m khong 18 tun mang thai, nu iu tr sau 18 tun thỡ coi nh iu tr luụn ỏ bộ, nu ngi m khụng iu tr thỡ ỏ b giang mai bm sinh Giang mai bm sinh cú th lm ngng phỏt triờn thai nhi, lm sinh non hoc thai cht sau sinh Triu chng sm: ỏ sinh cú mn lũng bn tay, bn chõn Triu chng mun: phỏt hin vo khong 5-6 tui, ỏ b ic, viờm giỏc mc, viờm mng mt dn n mự lo II.4.4 Chn oỏn giang mai - Dựng kớnh hin vi nn en quan sỏt trc tip t dch ly vt xc, iu ny ch cú th tin hnh giai on nhim trựng chc chn Th nghim VDRL Th nghim TPHA K thut EIA cng c ỏp dng phỏt hin khỏng th c hiu II.5 Ký sinh trựng st rột II.5.1 c im sinh hc: - Ký sinh trựng st rột thuc lp protozoa gi l sporozoa, cú kh nng truyn bnh cho ngi qua trung gian mui anopheles Cú loi ký sinh trựng st rột: Plasmodium vivax Plasmodium ovale Plasmodium malariae Plasmodium falciparum Thng gp ta l Plasmodium falciparum v Plasmodium vivax Ch cú P.falciparum cú th gõy st rột nng a n t vong - Chu k nhõn ca ký sinh trựng st rột bao gm chu k: c th ngi (trong gan v hng cu) v c th mui (sporozoit) II.5.2 ng lõy nhim: - Qua trung gian mui anopheles - Trang - - Lõy truyn qua ng truyn mỏu, ngi cho mỏu b nhim ký sinh trựng st rột II.5.3 Chỷn oỏn ký sinh trựng st rột: - K thut git mỏu n, git mỏu c tỡm ký sinh trựng st rột giai on hng cu - K thut hunh quang-min dch: dựng khỏng th c hiu phỏt hin ký sinh trựng st rột, hoc dựng khỏng nguyờn phỏt hin khỏng th - K thut ngng kt ht latex v EIA phỏt hin khỏng the,ồ tng t nh k thut hunh quang nhng li th l cú th sng lc mt s lng ln ngi cho mỏu - K thut QBC (Quantity of blood cells): k thut ny cho phộp trung ký sinh trựng st rột gp 50 ln III/ CC K THUT C NG DNG TRONG PHềNG XẫT NGHIM SNG LC NGI CHO MU HIN NAY III.1 K? thu?t sng l?c HIV III.1.1 K thut dch gn men (ELISA) Th nghim ELISA l k thut sng lc c ng dng ph bin cỏc phũng xột nghim hin Cú loi nguyờn lý c bn: III.1.1.1 Phng phỏp ELISA khỏng globulin õy l phng phỏp n gin nht, ú khỏng th virus no cú mu xột nghim cng s gn vi khỏng nguyờn virus ó c nh v s c phỏt hin nh khỏng th chng ngi gn men Xột nghim ny c thc hin theo tin trỡnh sau: - Khỏng nguyờn ó c gn sn trờn ging th - Nh huyt hay huyt ho loóng vo ging th - Cui giai on , ging loi b huyt Quỏ trỡnh s loi b huyt tha ging m khụng lm bong hay hay loi b khỏng th c hiu ó gn - Thờm dung dch cng hp vo tt c cỏc ging, ri nhit nht nh thi gian nht nh Dung dch cng hp cú cha khỏng th globulin chng ngi gn men Khỏng th thng IgG chng ngi v men thng c s dng lứ peroxidase horseradish Hot ng ca men ny lm cho c cht khụng mu dng bt hot s cú mu chuyn sang dng hot húa - Cui giai on , ging loi b thnh phn tha, cng hp khụng gn - Thờm c cht vo tt c cỏc ging v nhit nht nh Dung dch c cht cha mt cht húa hc l cht hin mu Cht hin mu l hp cht hũa tan tng hp cú th i mu sau b oxy húa, b kh hoc b bin i húa hc khỏc men Khi thờm dung dch c cht vo ging cú cha cỏc thnh phn gn cng hp, men s hot húa c cht v vy hỡnh thnh cht mu ging Cỏc ging khụng cha thnh phn gn cng hp s khụng xut hin mu cho c cht vo ging - Cui giai on , cho vo dung dch axit hũa loóng vo tt c cỏc ging dng phn ng Axit cú tỏc dng bt hot men v c nh mu - Trang - - c mt quang (giỏ tr OD) ca dung dch ging v ỏnh giỏ kt qu th nghim III.1.1.2 Phng phỏp ELISA cnh tranh - Nguyờn lý c bn ca phng phỏp ELISA cnh tranh cng ging nh kiu ELISA khỏng globulin Khỏng th HIV gn vi khỏng nguyờn c nh v sau ú s cú mt ca khỏng nguyờn c phỏt hin - Th nghim ny khỏc chỳt ớt v cỏch phỏt hin khỏng th HIV Khỏng nguyờn gn trờn mt ging cho mu huyt vo Thờm vo cựng lỳc cng hp v nh vy huyt v cng hp cựng lỳc vi Cng hp l mt khỏng th chng HIV gn men, nhng ỳng hn l mt khỏng th chng ngi khụng c hiu Cng hp chng HIV cnh tranh v trớ gn khỏng nguyờn vi khỏng th chng HIV t nhiờn Nng cng hp chng HIV c t mc cho lng khỏng th HIV nh nht cú mu xột nghim cng vt quỏ chỳng c u tiờn gn vi khỏng nguyờn so vớ khỏng th cng hp III.1.1.3 Phng phỏp ELISA kp ch (san-wich) - Khỏng nguyờn (thng l cỏc peptide tng hp) c gn trờn b mt ging Huyt v cht cng hp c thờm vo ging cựng mt lỳc s cnh tranh v trớ gn khỏng nguyờn vi khỏng nguyờn ó c gn sn trờn ging Cui giai on , loi b huyt thanh, thờm cng hp ri tip tc Cng hp l khỏng nguyờn tng hp gn men ch khụng phi l khỏng th chng IgG ngi gn men (nh ELISA khỏng globulin) Trong thi gian , khỏng nguyờn cng hp gn vi phc hp khỏng th chng HIV ó gn vi khỏng nguyờn c nh ging Mt phc hp kp khỏng nguyờn khỏng th khỏng nguyờn gn men c to thnh Ra b cng hp tha v thờm cht cng hp mu ging nh khỏng globulin Xột nghim ny mang tớnh c hiu cao v t l dng tớnh gi gim i - Cỏch tớnh kt qu s da vo mt quang hc (OD) v giỏ tr ngng Mt quang hc ca mi ging c xỏc nh chựm tia ỏnh sỏng bc súng thớch hp chiu qua ỏy ging v o mc hp thu ỏnh sỏng ca dung dch s dng cỏc gia! tr OD, ngi ta phi so sỏnh chỳng vi kt qu chun ó bit Kt qu ny hp cỏc chng v mu xột nghim Cú nhiu cỏch tớnh kt qu khỏc nhau, ti thiu cn im cho mi xột nghim Trong ú, im l giỏ tr trung bỡnh gia chng õm v chng dng xỏc nh xột nghim l cú ý ngha v chỳng phi nm khong quy nh ca nh sn xut Cui cựng ỏnh giỏ kt qu phn ng hay khụng phn ng thỡ phi tớnh toỏn giỏ tr ngng III.1.2 K thut chn oỏn HIV bng xột nghim nhanh Cú mt s xột nghim nhanh c bit khỏc nhau, hỡnh thc chung l khỏng nguyờn HIV c c nh trờn mt mng d thm hay bỏn thm hoc trờn mt th n l v cỏc loi thuc th dựng chung Cỏc loi th nghim ny cho kt qu vũng 20 phỳt, thng c s dng sng lc trng hp khn cp III.1.2 K thut ngng kt ht gelatin gn khỏng nguyờn HIV (k thut Serodia) III.2 K thut sng lc virus viờm gan B III.2.1 K thut dch gn men (ELISA) - Trang 10 - õy l xột nghim ELISA da trờn nguyờn tc k thut kp ch thỡ (one step sandwich) Cỏc ging c ph bng khỏng th khỏng HBsAg Cht cng hp ó nm sn ging dng ng thnh cu Khi cu cht cng hp ny s ho tan cho huyt th nghim vo Cht cng hp khỏng th khỏng HBsAg c ỏnh du bng men peroxidase Nu huyt th cú khỏng th khỏng HBsAg thỡ mt phc hp khỏng th khỏng nguyờn-khỏng th gn men peroxidase hỡnh thnh Khi cho c cht hin mu TMB vo thỡ phn ng trờn s cú mu o m cht mu qua mt quang hc bc súng 450 nm xỏc nh phc hp khỏng nguyờn khỏng th tng ng III.2.2 K thut chn oỏn virus viờm gan B bng xột nghim nhanh Cú mt s xột nghim nhanh c bit khỏc nhau, hỡnh thc chung l khỏng th khỏng HBsAg c c nh trờn mt mng d thm hay bỏn thm hoc trờn mt th n l v cỏc loi thuc th dựng chung Cỏc loi th nghim ny cho kt qu vũng 20 phỳt, thng c s dng sng lc trng hp khn cp III.3 K thut sng lc virus viờm gan C III.3.1 K thut dch gn men (ELISA) (phỏt hin khỏng th khỏng HCV) õy l k thut phỏt hin giỏn tip HCV Xột nghim ny da trờn nguyờn tc sau: khỏng nguyờn ca virus c gn sn trờn ging th Nu huyt cú khỏng th khỏng HCV thỡ khỏng nguyờn kt hp vi khỏng th to nờn phc hp khỏng nguyờn-khỏng th Phc hp ny s c nhn bit bi cht cng hp Dung dch cng hp cú cha khỏng th globulin chng ngi gn men Phc hp ny c phỏt hin qua phn ng mu cho c cht thớch hp Cng mu ca phn ng t l vi lng khỏng th hin din huyt th nghim c mt quang (giỏ tr OD) ca dung dch ging v ỏnh giỏ kt qu th nghim III.3.2 Chn oỏn virus viờm gan C bng xột nghim nhanh Cú mt s xột nghim nhanh c bit khỏc nhau, hỡnh thc chung l khỏng nguyờn HCV c c nh trờn mt mng d thm hay bỏn thm hoc trờn mt th n l v cỏc loi thuc th dựng chung Cỏc loi th nghim ny cho kt qu vũng 20 phỳt, thng c s dng sng lc trng hp khn cp III.4 K thut sng lc giang mai Phng phỏp huyt hc chn oỏn bnh giang mai gm cú th nghim vi Reagin hoc th nghim vi khỏng nguyờn c hiu Th nghim vi Reagin: hin thng c dựng sng lc ngi cho mỏu phỏt hin khỏng th IgG hoc IgM cú huyt s kt hp h tng gia lipid ca ký ch hoc vi khun giang mai, hoc c hai vi h dch ca ký ch Dng tớnh th nghim ny cú th xy mt s bnh lý khỏc nh hi, lupus, ban h thng v st rột Hin th nghim ny cú tờn thng mi l VDRL v RPR - Trang 11 - Th nghim vi khỏng nguyờn c hiu: thng dựng chn oỏn Gm cú th nghim hp th khỏng th Treponema hunh quang (The Fluorescent Treponema antibody absorption test=FTA-ABS) dựng khỏng nguyờn l T.pallidum, ngoi cũn cú th nghim vi ngng kt hng cu (microhemagglutination) th nghim ny d trờn phn ng ngng kt phỏt hin khỏng th c hiu cú huyt bnh nhõn lm ngng kt hng cu cu c mn cm vi T.pallidum III.5 K thut sng lc ký sinh trựng st rột - Cỏch chn oỏn chc chn nht lphỏt hin ký sinh trựng st rột chu k hng cu bng k thut nhum lam mỏu (git dy) v quan sỏt di kớnh hin vi tỡm ký sinh trựng st rột 100 vi trng - K thut QBC trung ký sinh trựng st rột gp 40 -50 ln IV / CC BIN PHP PHềNG NGA Tuyn chn ngi cho mỏu l khõu quan trng nht mt lat cỏc bin phỏp nhm ngn nga cỏc bnh lõy nhim qua ng truyn mỏu Ngi cho mỏu an tũan nht hin l ngi cho mỏu t nguyn vnhc li Nh vy cn phi t chc cuc ng hin mỏu nhõn o kt hp chm súc sc khe cng ng trỡ ngun ngi hin mỏu an tũan Thc hin nghiờm tỳc cỏc xột nghim sng lc tt c cỏc mu mỏu trc truyn cho bnh nhõn Chn la cỏc xột nghim sng lc m bo v nhy v c hiu Cú ch nh truyn mỏu ỳng, truyn mỏu tng phn, ỏp dng phung chõm Thiu gỡ truyn ny, khụng cn khụng truyn Aựp dng truyn mỏu t thõn cỏc bnh vin trng hp phu thut cú k hachv tỡnh trng sc khe ca bnh nhõn cho phộp: chỳng ta cú th ly mỏu bnh nhõn, lu tr, v truyn tr li cho bnh nhõn sau phu thut õy l mt bin phỏp hiu qu nht hn ch s lõy nhim ca tỏc nhõn gõy bnh qua ng truyn mỏu Cn phi ỏp dng bin phỏp lc bch cu trc truyn mỏu Vỡ bch cu l t bo ớch ca HIV, l ni tớch cha HIV Nh vy kh nng lõy nhim ca bch cu l ln nht nu ly mỏu giai an ca s T chc o to chuyờn mụn cho cỏn b v k thut viờn Cỏc c s truyn mỏu phi c trang b y cỏc phng tin mỏy múc, cỏc húa cht sinh phm y thc hin cỏc xột nghim sng lc ph bin Dựng nhng dng c ly mỏu ch s dng mt ln nh tỳi mỏu, kim rỳt mỏu Tng bc ỏp dng cỏc phng phỏp kh trựng cỏc thnh phn mỏu nh phng phỏp nhit hoc tia x hoc cỏc húa cht quỏ trỡnh sn xut cỏc thnh phn mỏu Quỏ trỡnh ny hin nc ta cha ỏp dng 10 Tiờm chng nga viờm gan siờu vi B cho nhõn viờn y t v cho tr em 11 ỏnh giỏ kt qu trin khai chng trỡnh truyn mỏu trờn ba lnh vc: ng hin mỏu, tin hnh sng lc cỏc bnh nhim trựng, i mi c s v thit b cho phự hp - Trang 12 - - Trang 13 - TI LIU THAM KHO - Trang 14 - Trung Phn An ton truyn mỏu- Nh xut bn khoa hc k thut-Nm 2000 Denise M.Harmening Modern Blood Banking and Transfusion Practices rd- F.A David Company.Philadelphia- 1994 Mary Louise Turgeon Fundamentals of Immunohematology 2nd - Nh xut bn William and Wilkins- Nm 1995 Mỏu v cỏc sn phm mỏu an ton T chc y t th gii-Nh xut bn Y hc Nm 2001 Technical manual 13th American Association Of Blood Bank (AABB)- 1999 - Trang 15 - [...]... trên sẽ có màu Đo đậm độ chất màu qua một độ quang học ở bước sóng 450 nm để xác định phức hợp kháng nguyên kháng thể tương ứng III.2.2 Kỹ thuật chẩn đoán virus viêm gan B bằng xét nghiệm nhanh Có một số xét nghiệm nhanh đặc biệt khác nhau, hình thức chung là kháng thể kháng HBsAg được cố định trên một màng dễ thấm hay bán thấm hoặc trên một thanh thử đơn lẻ và các loại thuốc thử dùng chung Các loại... kháng thể hiện diện trong huyết thanh thử nghiệm Đọc mật độ quang (giá trị OD) của dung dịch trong giếng và đánh giá kết quả thử nghiệm III.3.2 Chẩn đoán virus viêm gan C bằng xét nghiệm nhanh Có một số xét nghiệm nhanh đặc biệt khác nhau, hình thức chung là kháng nguyên HCV được cố định trên một màng dễ thấm hay bán thấm hoặc trên một thanh thử đơn lẻ và các loại thuốc thử dùng chung Các loại thử... chức đào tạo chuyên môn cho cán bộ và kỹ thuật viên 7 Các cơ sở truyền máu phải được trang bị đẩy đủ các phương tiện máy móc, các hóa chất sinh phẩm đầy đủ để thực hiện các xét nghiệm sàng lọc phổ biến 8 Dùng những dụng cụ lấy máu chỉ sử dụng một lần như túi máu, kim rút máu… 9 Từng bứơc áp dụng các phương pháp khử trùng các thành phần máu như phương pháp nhiệt hoặc tia xạ hoặc các hóa chất trong quá