Đánh giá hàm lượng flavonoid trong một số cây họ đậu của việt nam

VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: ĐÁNH GIÁ HÀM LƯỢNG FLAVONOID TRONG MỘT SỐ CÂY HỌ ĐẬU CỦA VIỆT NAM NGƯỜI HƯỚNG DẪN : PGS.TS NGUYỄN VĂN ĐẠO SINH VIÊN THỰC HIỆN : TRẦN THỊ HẠNH LỚP : CNSH 1203-K19 Hà Nội - 2016 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp nhận quan tâm, giúp đỡ nhiều nhà trường, thầy cô bạn Với lòng biết ơn sâu sắc xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Nguyễn Văn Đạo, thầy trực tiếp hướng dẫn giúp đỡ suốt trình thực hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn Khoa Công Nghệ Sinh Học, Viện Đại Học Mở Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành khóa luận Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ suốt trình hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2016 Sinh viên TRẦN THỊ HẠNH MỤC LỤC MỞ ĐẦU PHẦN I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Flavonoid 1.1.1 Giới thiệu 1.1.2 Cấu trúc hóa học 1.1.3 Phân loại flavonoid 1.1.3.1 Eucoflavonoid 1.1.3.2 Isoflavonoid 1.1.3.3 Neoflavonoid 1.1.4 Tính chất flavonoid 1.1.4.1 Eucoflavonoid 1.1.4.2 Isoflavonoid 1.1.5 Lợi ích flavonoid 1.1.5.1 Tác dụng flavonoid đời sống thực vật 1.1.5.2 Tác dụng sinh học 1.1.6 Tình hình nghiên cứu giới nước 10 1.2 Một số nghiên cứu Flavonoid họ đậu 12 1.2.1 Giới thiệu họ đậu 12 1.2.1.1 Nguồn gốc lịch sử phát triển 12 1.2.1.2 Thành phần hóa học flavonoid họ đậu 13 1.2.1.3 Lợi ích flavonoid sức khỏe 16 1.2.1.4 Tình hình nghiên cứu giới 19 1.2.1.5 Tình hình nghiên cứu nước 19 1.2.2 Giới thiệu sắn dây, đậu tương, đậu xanh, đậu đen 20 1.2.2.1 Nguồn gốc lịch sử phát triển 20 1.2.2.2 Đặc điểm trạng sản xuất 24 1.2.2.3 Thành phần hóa học 29 1.2.2.4 Các sản phẩm từ đậu tương, đậu xanh, đậu đen sắn dây 29 1.2.2.5 Tình hình nghiên cứu giới nước 31 PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Vật liệu 33 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 33 2.1.3 Hóa chất 33 2.2 Phương pháp nghiên cứu 33 2.2.1 Phương pháp chiết tách phương pháp dung môi 33 2.2.2 Phương pháp thu nhận flavonoid phương pháp enzyme 35 2.2.3 Phương pháp phân tích 35 2.2.3.1 Phương pháp so màu (UV-spectrum) 35 2.2.3.2 Phương pháp phân tích flavonoid sắc ký lớp mỏng( TLC) 36 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Kết xác định bước sóng hấp thụ quang phổ flavonoid dịch chiết sắn dây, đậu tương, đậu xanh, đậu đen 39 3.1.2 Kết xác định bước sóng hấp thụ quang phổ flavonoid dịch chiết sắn dây 41 3.1.3 Kết xác định bước sóng hấp thụ quang phổ flavonoid dịch chiết đậu tương 42 3.1.4 Kết xác định bước sóng hấp thụ quang phổ flavonoid dịch chiết hạt đậu xanh 43 3.1.5 Kết xác định bước sóng hấp thụ quang phổ flavonoid dịch chiết đậu đen 45 3.1.6 Kết xây dựng đường chuẩn flavonoid 46 3.2 Kết xác định hàm lượng Flavonoid sắn dây, đậu tương, đậu xanh, đậu đen 47 3.2.1 Kết xác định hàm lượng flavonoid nguyên liệu sắn dây 47 3.2.1.1: Kết chiết tách flavonoid từ củ sắn dây dung môi cồn 50% 48 3.2.1.2: Kết chiết tách flavonoid từ củ sắn dây dung môi nước 49 3.2.1.3: Kết chiết tách flavonoid từ củ sắn dây enzyme 50 3.2.2 Kết xác định hàm lượng flavonoid có đậu tương, đậu xanh, đậu đen 52 3.2.2.1: Nguyên liệu để vỏ 52 3.2.2.2: Nguyên liệu tách bỏ vỏ 53 3.3 Kết phân tích định tính phương pháp sắn ký mỏng (TLC) 54 3.4 Xác định hàm lượng Flavonoid số sản phẩm thực phẩm 55 KẾT LUẬN 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Danh pháp số hợp chất thuộc nhóm Isoflavones 15 Bảng 3.1: Kết chiết mẫu sắn dây cồn 50% ……48 Bảng 3.2: Kết chiết mẫu sắn dây nước 49 Bảng 3.3: Kết chiết mẫu sắn dây phương pháp enzyme 50 Bảng 3.4: Bảng so sánh kết tách chiết mẫu sắn dây theo phương pháp chiết 50 Bảng 3.5: Bảng so sánh phương pháp tách chiết 51 Bảng 3.6: Kết tách chiết nguyên liệu để vỏ 53 Bảng 3.7: Kết tách chiết nguyên liệu tách loại bỏ vỏ 53 Bảng 3.8: So sánh hàm lượng flavonoid nguyên liệu có vỏ nguyên liệu bỏ vỏ 54 Bảng 3.9: Hàm lượng flavonoid số sản phẩm thực phẩm 56 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cấu trúc hóa học số isoflavone 13 Hình 1.2: Cấu trúc hóa học chất thuộc nhóm isoflavone 15 Hình 1.3: Cây sắn dây 21 Hình 1.4: Cây đậu nành 22 Hình 1.5: Cây đậu xanh 23 Hình 1.6: Cây đậu đen 24 Hình 1.7: Một số sản phẩm từ sắn dây, đậu nành, đậu xanh, đậu đen 30 Hình 3.1: Hình ảnh quét quang phổ sản phẩm thuốc Kudzu USA… …40 Hình 3.2: Hình ảnh biểu diễn đỉnh quang phổ sản phẩm thuốc Kudzu USA……………………………………………………….…………………40 Hình 3.3: Hình ảnh quét quang phổ dịch chiết xuất từ củ sắn dây tươi 41 Hình 3.4 : Hình ảnh biểu diễn đỉnh quang phổ dịch chiết xuất từ củ sắn dây tươi 42 Hình 3.5: Hình ảnh quét quang phổ dịch chiết xuất từ đậu tương 43 Hình 3.6: Hình ảnh biểu diễn đỉnh quang phổ dịch chiết từ đậu tương 43 Hình 3.7: Hình ảnh quét quang phổ dịch chiết xuất từ đậu xanh 44 Hình 3.8: Hình ảnh biểu diễn đỉnh quang phổ dịch chiết từ đậu xanh 44 Hình 3.9: Hình ảnh quét quang phổ dịch chiết xuất từ đậu đen 45 Hình 3.10: Hình ảnh biểu diễn đỉnh quang phổ dịch chiết từ đậu đen 45 Hình 3.11: Đồ thị biểu diễn đường chuẩn flavonoid 46 Hình 3.12: Mặt cắt ngang củ sắn dây 47 Hình 3.13: Sắc ký TLC phân tích ánh sáng UV 55 Hình 3.14: Hàm lượng flavonoid mẫu nguyên liệu nghiên cứu (chiết tách flavonoid phương pháp enzyme) 57 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC MỞ ĐẦU Trong nhiều năm qua, nhà khoa học giới tìm hợp chất flavonoid chất chống oxy hóa, có nhiều loại thực phẩm khác trái cây, rau củ, thảo mộc, ngũ cốc chocolate, tốt cho sức khỏe Flavonoid nhóm chất lớn đựơc tổng hợp tế bào thực vật, chúng đóng vai trò quan trọng việc tạo màu sắc loại hoa quả, phát triển khả phòng bệnh cho Hơn 4000 hợp chất flavonoid đựơc xác định phân lập từ thực vật, chúng có nhiều tác dụng sinh học quan trọng, tác dụng trực tiếp hay gián tiếp lên biến đổi sinh hóa tham gia hoạt động enzym hay hoạt động hệ thần kinh nội tiết, có tác dụng hiệu việc điều trị ngăn ngừa bệnh lý thể kháng viêm, kháng dị ứng, chống virus chống ung thư Nhờ tính chất chống oxy hóa mạnh mà flavonoid giúp thể chống lại tổn thương gây gốc tự cách hữu hiệu Khả chống oxy hóa flavonoid mạnh vitamin C, E, kẽm Vì vậy, flavonoid có tác dụng bảo vệ tim mạch, chống lại bệnh cao huyết áp, nhồi máu tim, xơ vữa động mạch Các nhà nghiên cứu phát hợp chất flavonoid với hàm lượng cao họ đậu sắn dây Tại Việt Nam, với điều kiện thuận lợi vị trí địa lý khí hậu nên họ đậu sắn dây trồng phổ biến có giá trị sinh học cao Trong đề tài nghiên cứu tập trung khảo sát hàm lượng flavonoid số họ đậu sắn dây nhằm tạo hướng nghiên cứu mong muốn tận dụng nguồn nguyên liệu phong phú sẵn có để tạo sản phẩm chất lượng với giá thành hợp lý Từ lý tiến hành nghiên cứu thực đề tài:” ĐÁNH GIÁ HÀM LƯỢNG FLAVONOID TRONG MỘT SỐ CÂY HỌ ĐẬU CỦA VIỆT NAM” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mục tiêu đề tài: ĐÁNH GIÁ HÀM LƯỢNG FLAVONOID TRONG MỘT SỐ CÂY HỌ ĐẬU CỦA VIỆT NAM Nội dung nghiên cứu: - Đánh giá hàm lượng flavonoid có hạt đậu tương, đậu xanh, đậu đen; củ sắn dây để làm sở cho nghiên cứu ứng dụng - Đánh giá hàm lượng flavonoid số sản phẩm thực phẩm KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC 3.1.5 Kết xác định bước sóng hấp thụ quang phổ flavonoid dịch chiết đậu đen Với mục đích tương tự thí nghiệm 3.1 3.1.2, thí nghiệm với nguyên liệu từ hạt đậu đen bán thị trường Việt nam Kết quét dịch chiết đậu đen thể hình 3.9 xử lý số liệu excel hình 3.10 Giá trị OD Hình 3.11: Hình ảnh quét quang phổ dịch chiết xuất từ đậu đen 1.000 0.900 0.800 0.700 0.600 0.500 0.400 0.300 0.200 0.100 0.000 250.0 270.0 290.0 310.0 Bước sóng (nm) 330.0 350.0 Hình 3.12: Hình ảnh biểu diễn đỉnh quang phổ dịch chiết từ đậu đen VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC Từ hình 3.9 3.10 ta thấy đỉnh hấp thụ flavonoid dịch chiết từ đậu đen xác nhận 272nm Thông qua bước quét quang phổ nguyên liệu lựa chọn để nghiên cứu ta tìm bước sóng hấp thụ cao flavonoid nguyên liệu cụ thể sau: flavonoid hấp thụ tối ưu 250nm dịch chiết sắn dây; 260nm dịch chiết đậu nành; 270nm dịch chiết đậu xanh dịch chiết đậu đen 272nm Xác định bước sóng hấp thụ tối ưu để tiến hành đo OD mẫu nguyên liệu tính hàm lượng flavonoid mẫu nguyên liệu 3.1.6 Kết xây dựng đường chuẩn flavonoid Bằng cách xác định độ hấp thụ A thời điểm bước sóng 250nm, mối quan hệ tuyến tính độ hấp thụ flavonoid nồng độ C (mg/ml) thành lập Lấy nồng độ dung dịch chuẩn trục hoành, giá trị OD tương ứng trục tung, đường chuẩn flavonoid thu theo hình sau: Hình 3.13: Đồ thị biểu diễn đường chuẩn flavonoid Từ đồ thị hình 3.11 ta có phương trình đường chuẩn Flavonoid thu là: y=84.083x+0.1169; R2=0.999 Đường chuẩn sử dụng để tính hàm lượng flavonoid nguyên liệu mà nghiên cứu VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC 3.2 Kết xác định hàm lượng Flavonoid sắn dây, đậu tương, đậu xanh, đậu đen Flavonoid có sắn dây thuộc họ Đậu đậu tương, đậu xanh, đậu đen,…có nhiều tác dụng sức khỏe; đặc biệt khả chống oxy hóa Chính lý ta tiến hành nghiên cứu xác định hàm lượng flavonoid có nguyên liệu sắn dây, đậu tương, đậu xanh, đậu đen Việt Nam 3.2.1 Kết xác định hàm lượng flavonoid nguyên liệu sắn dây Isoflavone hoạt chất sinh học có nhiều lợi ích đời sống có nhiều phần củ sắn dây Để xác định xem định vị isoflavone củ sắn nào, tiến hành thí nghiệm xác định isoflavone lớp củ sắn hình 3.12 Mục ta tiến hành thí nghiệm với phần củ sắn chia nhỏ để đánh giá hàm lượng flavonoid nằm phần củ sắn có đồng không Tiếp đánh giá hàm lượng flavonoid toàn củ sắn tươi sắn khô Hình 3.14: Mặt cắt ngang củ sắn dây VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hình 3.12 thể mặt cắt ngang củ sắn dây, đó: Vòng Vòng tiếp giáp với lớp Vòng Vòng lõi 3.2.1.1: Kết chiết tách flavonoid từ củ sắn dây dung môi cồn 50% Cồn hòa tan nhiều nhóm chất, không độc, rẻ tiền dễ kiếm, dung môi phân cực tốt Do ta chọn cồn 50% dung môi để ngâm chiết tách flavonoid Từ phương trình đường chuẩn phần 3.1.6 kết đo OD bước sóng 250nm mẫu xử lý tách lấy flavonoid phương pháp sử dụng dung môi cồn 50% ta thu bảng 3.1 kết hàm lượng Flavonoid có 1g nguyên liệu cụ thể sau: Bảng 1: Kết chiết mẫu sắn dây cồn 50% Hàm lượng flavonoid (mg/g) Tên mẫu Chiết lần Chiết lần Sau lần Vòng sắn 3,67 0,25 3,92 Vòng sắn tiếp giáp với lớp 1,66 0,11 1,77 Vòng sắn 1,48 0,22 1,70 Vòng lõi sắn 1,44 0,20 1,64 Củ sắn tươi 2,67 0,68 3,35 Sắn khô 4,03 2,64 6,67 Qua bảng 3.1 ta thấy hàm lượng flavonoid dịch chiết sắn để vỏ cao dịch chiết sắn bỏ vỏ Theo vòng sắn từ vào hàm lượng flavonoid giảm dần Trong 1g nguyên liệu sắn khô ta thu KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 48 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC lượng flavonoid 6,67 mg/g, cao nhiều hàm lượng flavonoid thu mẫu sắn tươi 3.2.1.2: Kết chiết tách flavonoid từ củ sắn dây dung môi nước Nước dung môi rẻ, dễ kiếm, không độc, đặc biệt sử dụng nước dung môi chiết tách flavonoid tạo sản phẩm chiết tách sử dụng rộng rãi phù hợp với đa số người sử dụng; sử dụng dung môi cồn sản phẩm phù hợp với người dùng chịu nồng độ cồn Do mục ta chọn nước dung môi tách chiết Từ phương trình đường chuẩn phần 3.1.6 kết đo OD bước sóng 250nm mẫu sắn xử lý tách lấy flavonoid phương pháp sử dụng dung môi nước ta thu kết hàm lượng Flavonoid có 1g nguyên liệu cụ thể bảng 3.2 Bảng 2: Kết chiết mẫu sắn dây nước Hàm lượng flavonoid (mg/g) Tên mẫu Chiết nước Chiết cồn 50% Vòng sắn 1,50 3,92 Vòng sắn tiếp giáp với lớp 0,54 1,77 Vòng sắn 0,32 1,70 Vòng lõi sắn 0,15 1,64 Củ sắn tươi 1,42 3,35 Sắn khô 4,63 6,67 Qua bảng 3.2 ta thấy sử dụng dung môi cồn 50% cho hiệu suất cao nhiều so với chiết nước thông thường Hàm lượng flavonoid chiết từ sắn khô cao gấp đôi lượng flavonoid thu từ củ sắn tươi chiết KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 49 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC cồn 50%; cao gấp lần chiết nước thông thường 1,7kg củ sắn tươi sau sấy khô ta thu 0,7kg sắn khô Lượng nước hao hụt 59%, lượng chất khô lại 41% 3.2.1.3: Kết chiết tách flavonoid từ củ sắn dây enzyme Phương pháp thu nhận flavonoid phương pháp enzyme: sử dụng enzyme Termamyl nhằm phân giải hoàn toàn tinh bột nguyên liệu, ta bổ sung trực tiếp enzyme vào dịch nguyên liệu trình chiết nhằm thúc đẩy trình phân giải tạo sản phẩm Sử dụng phương pháp bổ sung enzyme ta thu kết hàm lượng flavonoid có 1g nguyên liệu bảng 3.3 sau: Bảng 3: Kết chiết mẫu sắn dây phương pháp enzyme Tên mẫu Hàm lượng flavonoid (mg/g) Vòng sắn 4,35 Vòng sắn tiếp giáp với lớp 1,88 Vòng sắn 1,86 Vòng lõi sắn 1,84 Củ sắn tươi 3,82 Sắn khô 6,95 Bảng 4: Bảng so sánh kết tách chiết mẫu sắn dây theo phương pháp chiết Hàm lượng flavonoid (mg/g) Nguyên liệu Chiết với nước Vòng sắn KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 1,50 Chiết với cồn Chiết có bổ 50% sung enzyme 3,92 4,35 50 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI Vòng sắn tiếp giáp với KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC 0,54 1,77 1,88 Vòng sắn 0,32 1,70 1,86 Vòng lõi sắn 0,15 1,64 1,84 Củ sắn tươi 1,42 3,35 3,82 Sắn khô 4,63 6,67 6,95 lớp Từ bảng 3.4 thấy phương pháp sử dụng enzyme cho hiệu tách chiết triệt để nhất, hàm lượng flavonoid thu cao so với phương pháp chiết nguyên liệu dung môi Hàm lượng flavonoid vòng sắn khác Ở vòng có hàm lượng flavonoid cao Hàm lượng flavonoid giảm dần theo số vòng sắn từ vòng vào lõi sắn Vỏ sắn chứa hàm lượng Flavonoid đáng kể Củ sắn để vỏ cho hàm lượng Flavonoid cao loại bỏ vỏ Bảng 5: Bảng so sánh phương pháp tách chiết STT Tiêu chí so sánh Quá trình tách chiết Thời gian Tách chiết dung môi Hiệu suất enzyme Qua nhiều công đoạn Đơn giản Chỉ Tách chiết nhiều bước, lần bổ sung nhiều lần để thu dịch chiết enzyme Tốn nhiều thời gian Độ an toàn Dễ nhiễm tạp nhiều dịch chiết Chiết tách công đoạn Nhanh Độ an toàn cao Thấp khó loại bỏ Cao tác dụng hoàn toàn sản phẩm phụ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP triệt để enzyme 51 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC Qua bảng 3.5 ta thầy việc sử dụng enzyme trình tách chiết đạt hiệu suất cao Phương pháp tăng hiệu suất cho trình, lượng sản phẩm tạo nhiều hơn, nhanh có độ an toàn cao tránh lẫn tạp sản phẩm cuối Phương pháp tách chiết nguyên liệu dung môi đạt hiệu suất thấp so với phương pháp bổ sung enzyme có nhược điểm nhiều thời gian có nhiều công đoạn tách chiết 3.2.2 Kết xác định hàm lượng flavonoid có đậu tương, đậu xanh, đậu đen Isoflavone có loại họ đậu có công dụng tương tự kích thích tố nữ estrogen, có tác dụng việc điều trị ngăn ngừa số bệnh, đặc biệt bệnh liên quan đến sức khỏe phụ nữ Mục ta nghiên cứu đánh gía hàm lượng isoflavone có hạt đậu tương, đậu xanh, đậu đen Việt Nam Qua bảng 3.5 ta thu kết sử dụng phương pháp bổ sung enzyme trình tách chiết đạt hiệu cao Do nguyên liệu đậu tương, đậu xanh, đậu đen mục ta tiến hành khảo sát hàm lượng flavonoid chúng thông qua phương pháp enzyme Vì nguyên liệu có chứa hàm lượng tinh bột cao, ta sử dụng enzyme Termamyl nhằm phân giải hoàn toàn tinh bột nguyên liệu 3.2.2.1: Nguyên liệu để vỏ Flavonoid có tác dụng việc tạo màu cho nguyên liệu, màu sắc bật nằm phần vỏ nguyên liệu, phần nghiên cứu ta đánh giá hàm lượng flavonoid nguyên liệu để vỏ nhằm xác định hàm lượng flavonoid nguyên liệu hàm lượng flavonoid có vỏ nguyên liệu Từ phương trình đường chuẩn phần 3.6 kết đo OD bước sóng 260nm đậu tương, đậu xanh 270nm đậu đen 272nm Trong mẫu xử lý tách lấy flavonoid phương pháp enzyme ta thu bảng kết hàm lượng Flavonoid có 1g nguyên liệu cụ thể sau: KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 52 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC Bảng 6: Kết tách chiết nguyên liệu để vỏ Nguyên liệu Hàm lượng flavonoid (mg/g) Đậu tương 1,91 Đậu đen 0,96 Đậu xanh 0,79 Qua bảng kết 3.6 cho ta thấy mẫu nguyên liệu đậu tương cho hàm lượng flavonoid cao (1,91mg/g) Hàm lượng flavonoid thu mẫu dịch chiết ta hợp lý so với sản phẩm từ đậu nành nghiên, hạt đậu bột đậu chứa hàm lượng cao (tương ứng 1400 - 1530 mg/kg 1310 - 1980 mg/kg) Các sản phẩm lên men đậu nành bao gồm tương đặc (miso) đậu phụ có hàm lượng isoflavon cao (290 - 530 mg/kg) 3.2.2.2: Nguyên liệu tách bỏ vỏ Mục đích thí nghiệm sử dụng nguyên liệu tách vỏ để thí nghiệm nhằm xác định hàm lượng flavonoid nguyên liệu tách vỏ, so sánh với hàm lượng flavonoid nguyên liệu để vỏ xác định hàm lượng flavonoid có vỏ nguyên liệu Bảng 7: Kết tách chiết nguyên liệu tách loại bỏ vỏ Nguyên liệu Hàm lượng flavonoid (mg/g) Đậu tương 1,80 Đậu đen 0,72 Đậu xanh 0,54 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 53 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC Bảng 8: So sánh hàm lượng flavonoid nguyên liệu có vỏ nguyên liệu bỏ vỏ Hàm lượng flavonoid (mg/g) Nguyên liệu Nguyên liệu Nguyên liệu Vỏ nguyên liệu để vỏ loại bỏ vỏ Đậu tương 1,91 1,80 0,11 Đậu xanh 0,96 0,72 0,24 Đậu đen 0,79 0,54 0,25 Qua bảng 3.8 ta thấy vỏ nguyên liệu chứa hàm lượng flavonoid tương đối cao Việc sử dụng nguyên liệu để vỏ, để chiết tách thu hàm lượng flavonoid cao sử dụng nguyên liệu tách bỏ vỏ 3.3 Kết phân tích định tính phương pháp sắn ký mỏng (TLC) Dịch chiết chứa flavonoid tách từ sắn dây, đậu tương đậu xanh, đậu đen ta đem phân tích sắc ký lớp mỏng, để kiểm tra xem mẫu triết tách có flavonoid hay không đồng thời đoán sơ hàm lượng flavonoid có mẫu có nhiều hay thông qua so sánh tương nồng độ chất đối chứng Kết phân tích sắc ký mỏng ánh sáng UV cho thấy rõ hàm lượng flavonoid có mẫu tương đối nhiều so với dung dịch flavonoid đối chứng (nồng độ 0.1%) Chiếu sáng tia UV ta thu hình ảnh bên dưới: KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 54 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC Puerarin Hình 3.15: Sắc ký TLC phân tích ánh sáng UV Đường chạy 1- dịch viên Kudzu Mỹ Đường chạy 2- dịch chiết sắn dây Đường chạy 3- dịch chiết đậu tương Đường chạy 4- dịch chiết đậu đen Đường chạy 5- dịch chiết đậu xanh 3.4 Xác định hàm lượng Flavonoid số sản phẩm thực phẩm Giá đỗ đậu nành loại thực phẩm phổ biến châu Á Thông thường có hai loại giá đỗ giá đậu xanh nhiều, phổ biến giá đỗ tương Có nhiều loại thực phẩm đậu nành chế biến sẵn theo phương pháp lên men không lên men Các sản phẩm chứa flavonoid bán rộng rãi thị trường Vì xác định hàm lượng flavonoid sản phẩm thực phẩm trở thành mục tiêu nghiên cứu thí nghiệm Tiến hành lấy mẫu riêng biệt loại sản phẩm thực phẩm tách chiết flavonoid phương pháp enzyme phương pháp sử dụng dung môi KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 55 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC cồn 50% phù hợp với loại nguyên liệu Mẫu chiết tách flavonoid đưa vào máy đo quang phổ Lấy kết OD bước sóng 250nm sau sử dụng phương trình đường chuẩn có ta thu bảng kết cụ thể sau: Bảng 9: Hàm lượng flavonoid số sản phẩm thực phẩm Nguyên liệu Hệ số pha loãng OD (lần) Hàm lượng flavonoid (mg/g) Giá đỗ 1,281 0,14 Giá đỗ khô 0,769 0,38 Đậu phụ 1,602 0,17 Bột đậu phụ 0,845 0,43 Bột đậu đen 10 0,750 0,85 Qua bảng 3.9 ta thấy hàm lượng lượng flavonoid giá đậu xanh đậu phụ gần tương đương Hàm lượng flavonoid giá đậu xanh 0,14 mg/g hàm lượng flavonoid đậu phụ 0,17 mg/g Kết sản phẩm dạng bột chúng sau: 100g giá đậu xanh tươi sau sấy khô công đoạn xay nghiền thu 7g bột giá khô Hàm lượng chất khô lại giá đậu xanh 7%; lượng nước hoa hụt 93% Đối với 100g đậu phụ sau sấy khô công đoạn nghiền bột thu 18g bột đậu Sau sấy, sản phẩm nước 82%, lượng chất khô lại đậu phụ 18% Hàm lượng flavonoid thu bột giá đậu xanh 0,38 mg/g cao gấp 2,7 lần so với giá đậu xanh tươi; bột đậu phụ 0,43 mg/g, cao gấp 2,5 lần với đậu phụ chưa sấy khô KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 56 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI N I KHOA CÔNG NGH NGHỆ SINH HỌC 6,95 Hàm lượng flavonoid (mg/g) 1,91 0,79 0,96 0,85 0,38 0,43 giá đỗ khô bột đậu phụ sắn khô đậ đậu tương tươ đậu xanh đậu đen Mẫu nguyên liệu bột đậu đen Hình 3.16: Hàm lượng ng flavonoid mẫu nguyên liệu đãã nghiên ccứu (chiết tách Flavonoid b phương pháp enzyme) Từ đồ thị th thấy mẫu nguyên liệuu đ nghiên cứu, hàm lượng ng flavonoid củ sắn dây cao (6,95 mg/g) cao nhiều so vớii nguyên liệu li khác Tiếp đến đậu tương ng (1,91 mg/g) Các sản phẩm thị trường ng Vi Việt Nam có hàm lượng ng flavonoid cao Thông qua trình nghiên cứu c mở hướng ng tách chi chiết hợp chất Flavonoid theo quy mô công nghi nghiệp phương pháp sử dụụng enzyme để đạt hiệu suất cao Tạo T sản phẩm tốt nhất, giàu flavonoid, lavonoid, giá thành rẻ r so với việc phảii nh nhập sản phẩm từ nước nhằm m phục vụ thị trường nướcc xu xuất Ngòai tạo điều kiện phát triểển canh tác nguồn nguyên liệu dồii flavonoid Việt Nam KHÓA LUẬN TỐT T NGHI NGHIỆP 57 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KẾT LUẬN Sau trình thực nghiên cứu tới kết luận sau: Xác định bước sóng hấp thụ quang phổ cao flavonoid dịch chiết từ nguyên liệu số họ đậu Việt Nam sau: dịch chiết củ sắn dây 250nm; dịch chiết đậu tương 260nm, dịch chiết đậu xanh 270nm xác nhận dịch chiết đậu đen 272nm Qua việc nghiên cứu sử dụng phương pháp khác để tách chiết flavonoid phương pháp sử dụng enzyme cho hiệu suất cao Phương pháp sử dụng dung môi đạt hiệu thấp tốn nhiều thời gian Trong số nguyên liệu nghiên cứu, hàm lượng flavonoid sắn dây cao nhất; 3,82 mg/g củ sắn tươi 6,95 mg/g sắn khô Hàm lượng flavonoid phần củ sắn không giống nhau, hàm lượng flavonoid tập trung nhiều vòng giảm dần vào đến phần lõi sắn Nguồn flavonoid đậu nành (1,91mg/g) đối tượng cho flavonoid cao so với đậu xanh (0,79mg/g) đậu đen (0,96mg/g) Sau trình chiết tách thu nhận flavonoid nguyên liệu để vỏ thu hàm lượng flavonoid cao so với nguyên liệu tách bỏ vỏ Xác định hàm lượng flavonoid đáng kể vỏ nguyên liệu Các sản phẩm thị trường cho hàm lượng flavonoid cao so với nguyên liệu ban đầu chúng KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 58 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC TÀI LIỆU THAM KHẢO Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học- Phan Quốc Kinh Hóa sinh công nghiệp- Lê Ngọc Tú Hóa sinh học- Nguyễn Thị Hiền, Vũ Thy Thư- Nhà xuất Đại học sư phạm 2004 http://www.duoclieu.org/2012/02/khai-niem-chung-ve-flavonoid.html http://doc.edu.vn/tai-lieu/de-tai-tong-hop-flavonoid-49419/ https://vi.wikipedia.org/wiki/ http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/240816 http://cayluongthuc.blogspot.com/2008/01/v-tr-kinh-t-ca-cy-sn.html https://sites.google.com/site/kysuhodhinhhai/cay-ho-dhau/ 10 http://123doc.org/document/1892394-luan-van-tot-nghiep-tong-quan-vecay-dau-xanh-cac-san-pham.htm?page=7 11 http://www.bitruyen.com/2016/03/28/flavonoid-la-gi-cong-dung-cuaflavonoid-doi-voi-suc-khoerr/ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP 59