Bai8-Sang-loc-cac-tac-nhan-lay-nhiem

www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn BÀI GIẢNG CHO LỚP ĐÀO TẠO BÁC SĨ NGÂN HÀNG MÁU VÀ BÁC SỸ LÀM TRUYỊN MÁU SÀNG LỌC CÁC TÁC NHÂN LÂY NHIỄM QUA ĐƯỜNG TRUYỀN MÁU BS PHAN BÍCH LIÊN I/ ĐẠI CƯƠNG An toàn truyền máu nội dung xuyên suốt chiến lược truyền máu quốc gia sàng lọc tác nhân lây nhiễm qua đường truyền máu xem mục tiêu then chốt Các tác nhân gây bệnh truyền từ máu chế phẩm máu người cho máu nhiễm bệnh sang ngươì nhận Tại nước ta, cơng tác sàng lọc tác nhân lây nhiễm qua đường truyền máu tuân thủ theo qui định Điều lệnh truyền máu Bộ Y Tế ban hành, tác nhân sau: Virus gây suy giảm miễn dịch mắc phải người (HIV), virus viêm gan B (HBV), virus viêm gan C (HCV), giang mai, ký sinh trùng sốt rét II/ CÁC TÁC NHÂN GÂY BỆNH II.1 HIV Virus gây suy giảm miễn dịch người Virus gây suy giảm miễn dịch người (Human Immuno Deficiency Virus = HIV) tác nhân gây hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải người: AIDS (Acquired Immuno Deficiency Virus) II.1.1 Đặc điểm sinh học: gồm tuýp HIV1 HIV2 a Cấu trúc: Thuộc họ Retroviridae, nhóm lentivirus dạng hình cầu đường kính khoảng 100 nm gồm có thành phần sau: - Lớp vỏ ngồi: lớp lipid kép + Glycoprotein màng (gp 120): tạo thành gai nhú + Glycoprotein xuyên màng (gp 41) nơi HIV bám vào bề mặt TCD4 để vào tế bào - Lớp vỏ trong: lớp protein gồm có: + Lớp ngồi hình cầu (p17) = cung cấp chất cho cấu tạo virus + Lớp hình trụ (p24) = kháng ngun chẩn đốn HIV/AIDS p17 p24 bao bọc phiên RNA đơn xoắn ốc (bộ gen di truyền HIV) - Phần lõi: nhân virus gồm phần RNA xoắn ốc men cần thiết Đôi dây RNA đơn gen di truyền HIV gồm gen cấu trúc: + Gag (Group specific antigen): mã hóa protein cấu trúc (p17), protein capsid (p24, p7, p9) + Pol (polymerase): mã hóa men proteaza (p10), men chép ngược (p66, p51), men integraza (p32) - Trang – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn + Env (Envelope): mã hóa glycoprotein vỏ gp120, gp41 Hai đầu genome bao bọc liên kết nucleotid gọi LTRs (Long Terminal Repeat Sequences) gồm tín hiệu cần thiết cho chép virus giúp virus xác nhập vào genom tế bào ký chủ b Chu kỳ nhân lên HIV (vòng sống cđa HIV): Chu kỳ nhân lên virus gồm giai đọan: - Tiếp cận với tế bào đích nhờ gp120 với thơ thĨ CD4 cđa tế bào đích, gắn vào màng tế bào đích - Hồ màng virut với màng bào tương, men cđa virut xâm nhập vào bào tương giải phóng P24, cịn RNA-HIV tế bào đích - RNA-HIV liên kết với sỵi kép DNA cđa tế bào đích tạo thành DNA-RNA/HIV, nhờ men intergraza - DNA-RNA/HIV vào nhân chép RNA/HIV mới, nhờ men RT (sao chép ngưỵc) - RNA/HIV tạo vỏ nhờ men proteaza thành virut đội màng bào tương c Các giai đọan nhiễm HIV Có giai đọan nhiễm HIV: - Giai đọan sơ nhiễm: Giai đọan sơ nhiễm có ý nghĩa quan trọng truyền máu Trong ngày đầu, huyết người nhiễm chưa xuất kháng nguyên kháng thể chống HIV Sau kháng nguyên P24 xuất tiếp có kháng thể kháng HIV(IgM) Vì kỹ thuật sàng lọc HIV tìm kháng thể HIV mà ta áp dụng cho kết âm tính giai đọan này, lấy máu đem truyền cho bệnh nhân chắn chắn người bệnh bị nhiễm Giai đọan gọi cửa sổ sàng lọc - Giai đọan nhiễm trùng khơng triệu chứng: Giai đọan kéo dài 5-10 năm, thể bình thường chưa có triệu chứng AIDS Ở giai đọan huyết chủ yếu có kháng thể đặc hiệu kháng nguyên virus Phần lớn kháng nguyên thuộc type IgG, kháng thể phát dễ dàng, sàng lọc người cho máu đảm bảo - Giai đoạn hình thành AIDS: Do công HIV vào tế bào T4, số lượng tế bào giảm nặng, thường giảm < 200 tế bào/1mm3, lúc người bệnh có biểu nhiễm trùng hội suy giảm miễn dịch, giai đoạn phương pháp huyết học ta phát kháng nguyên P24,gp 120, gp 41và kháng thể đặc hiệu chúng II.1.2 Đường lây nhiễm HIV: Qua đường truyền máu qua dịch vụ y tế, tiêm truyền, phẩu thuật ngoại khoa, sản khoa, chữa răng, lây chéo bệnh nhân Từ mẹ sang Qua nghiện chích ma túy, nước ta có gần 70% nhiễm qua đường Qua đường tình dục: xây xát, sang chấn giao hợp… - Trang – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn Qua dịch vụ xã hội: cắt tóc, mỹ viện… Qua nội gia đình: chung bàn chải đánh răng, cạo râu… II.1.3 Chẩn đoán nhiễm HIV a Các dấu ấn có giá trị chẩn đốn: - Anti - HIV1,2 tip IgG (20 -30 ngày) - Anti - HIV1,2 Mix-IgM + IgG (10 - 15 ngày) - Kháng nguyên P24 (10 - 15 ngày) - RNA-HIV (6 - 10 ngày) Các dấy ấn đồng thời cịng dấu ấn dùng sàng lọc HIV người cho máu b Các kỹ thuật sư dơng cho sàng lọc: - Trong thời gian từ 6-8 tuần kể từ virut xâm nhập vào thể “giai đoạn cửa sổ sinh học”, số kỹ thuật sau áp dụng giai đoạn gồm có: - Kỹ thuật phân lập virus - Kỹ thuật phân tử: phản ứng chuỗi Polymerase(PCR) phát genome HIV - Kỹ thuật phát kháng nguyên p24 Các kỹ thuật thường áp dụng trường hợp: nhiễm HIV giai đoạn cửa sổ trường hợp có ý nghĩa truyền máu, ghép quan, người mẹ nhiễm HIV trường hợp ELISA dương tính mà Western Blot (WB) không xác định c Các kỹ thuật áp dụng giai đoạn có kháng thể: - Nhóm kỹ thuật sàng lọc: Gồm có kỹ thuật ngưng kết: (SERODIA) phát hiƯn kháng thĨ tip IgG, kỹ thuật men miễn dịch(ELISA) phát hiƯn kháng thĨ tip IgM + IgG Đây kỹ thuật có độ nhạy cao, tiến hành đơn giản, giá thành rẻ Rất có giá trị điều tra dịch tể sàng lọc người cho máu - Nhóm kỹ thuật khẳng định: Gồm có kỹ thuật thấm miễn dịch Western Blot (WB) kỹ thuật miễn dịch phóng xạ kết tủa (Radio Immuno Precipitation Assay :RIPA) Thường dùng để xác định dương tính từ nhóm kỹ thuật sàng lọc WB thường áp dụng kỹ thuật RIPA II.2 Vius viêm gan B Virus viêm gan B (HBV = Hepatitis B virus) nhóm virus có DNA thuộc họ Hepadnaviridae, có ác tính tế bào gan gây tổn thương tế bào gan Người nhiễm HBV có nguy viêm gan cấp, viêm gan mãn, sơ gan ung thư gan II.2.1 Đặc điểm sinh học virus viêm gan B (HBV) a Cấu trúc: Virus HBV hoàn chỉnh hay cịn gọi thể Dane có đường kính khoảng 42 nm HBV có lớp vỏ bọc ngồi gồm có loại protein: lớn, trung bình nhỏ; phần nhân có màng bọc protein gọi lớp capsid nhân DNA; nhân lớp capsid gọi nucleocapsid (có đủ thành phần cấu tạo nên virus) Cả phần vỏ nucleocapsid tạo virion thật - Trang – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn - Lớp vỏ bọc: Dày khoảng 7nm, gồm lớp lipoprotein có chứa loại protein: + Protein nhỏ gồm 226 acid amin, mã hóa gen S (surface = bề mặt), cấu tạo nên cấu trúc mang đầy đủ tính kháng nguyên HbsAg, loại protein nhỏ cịn gọi protein + Protein trung bình gồm 280 acid amin, mã hóa tiền gen S2 gen S Protein có vai trị giúp virus xâm nhập vào tế bào gan + Protein lớn gồm 380 – 400 acid amin, mã hóa tiền gen S1, S2 gen S Protein có vai trị quan trọng liên kết xâm nhập vào tế bào gan Cả thành phần thành phần kháng nguyên HBsAg Về hình thái HBsAg có hai dạng hình cầu hình dạng ống Hình cầu có đường kính từ – 24 nm, hình ống có chiều rộng khoảng 20 nm, chiều dài khoảng 120 – 200 nm - Lớp capsid: Là lớp màng protein bao bọc phần nhân, lớp dày khoảng 28 nm mãhóa gen C (core = lõi) gồm 183 acid amin, mang đặc trưng kháng nguyên HBc (HBcAg); HBcAg không xuất huyết có - Genome virus (DNA virus) Genome HBV, gồm sợi DNA xếp thành hình trịn; có hai sợi có chiều dài khoảng từ 10 – 50% so với tổng chiều dài DNA (với đầu tận 3’ 5’ không nối liên nhau); sợi gọi sợi ngắn (ký hiệu S); sợi lại sợi dài (ký hiệu L) gồm có 3200 nucleotid gần khép kín; tất thơng tin di truyền để sản xuất kháng nguyên lớp vỏ lõi sợi DNA dài Ngồi cịn có men DNA polymeraza điều khiển tổng hợp DNA virus từ RNA thông tin b Cấu trúc hệ thống gen điều hịa: Các gen điều hịa gồm có: gen C gen tiền C; gen mã hóa protein nhân (capsid) HBeAg HBcAg Còn gen S, tiền gen S1, tiền gen S2 có nhiệm vụ mã hóa kháng nguyên vỏ HBsAg gen P mã hóa DNA polymeraza c Các dấu ấn (marker) HBV: - Kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B (HBsAg): Huyết chẩn đốn tình trạng nhiễm HBV phát HBsAg; HBsAg protein cấu tạo vỏ virus, có mặt HBsAg điểm HBV cấp tính mãn tính HBsAg có thành phần định kháng nguyên chung (determinant antigen) mang ký hiệu a tìm thấy a1, a2, a3 ngồi cịn có d, y, w r Hiện có típ phụ (subtypes) sau: adw, adr, ayw, ayr … Sự phân bố típ phụ có liên quan đến địa dư chủng tộc Típ phụ adw ayw chiếm ưu giới, ngoại trừ vùng Đông Nam Châu Á Cực Đông nơi mà adw thường gặp; ayr gặp HBsAg xuất sớm huyết thanh, trước men transaminaza đạt đỉnh cao Sự hồi phục lâm sàng bệnh nhân giảm đậm độ men transaminaza song hành với giảm hiệu giá HBsAg biến HBsAg - Kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên bề mặt (Anti – HBs): - Trang – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn Kháng thể xuất muộn sau – tháng kể từ HBV xâm nhập thể, lúc HbsAg biến huyết Anti HBs có vai trị bảo vệ thể chống tái nhiễm HBV, nên HBsAg ứng dụng để làm văcxin chống viêm gan B – Anti HBs cịn có giá trị đánh giá khả bảo vệ thể, đánh giá hiệu văcxin - Kháng nguyên lõi (HBcAg): HBcAg có nhân tế bào gan mà khơng có huyết có HBcAg có giá trị chẩn đốn nhiễm HBV, xuất hiƯn ngắn máu, khó phát hiƯn Trong viêm gan mãn tính sau nhiễm HBV thể công thường thấy HBcAg nhân tế bào gan HBsAg màng tế bào gan - Kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên lõi (Anti – HBc): Kháng thể gồm có típ: + Anti HBc IgM: xuất sớm thời kỳ cấp lâm sàng kéo dài –8 tuần hết, phát có Anti HBc IgM chắn viêm gan cấp; nên xem để chẩn đoán viêm gan cấp + Anti HBc IgG: kháng thể xuất muộn tồn lâu mức độ cao, chẩn đoán sàng lọc người cho máu, HBsAg điểm chính, người ta cịn dùng anti HBc để bổ sung trường hợp HBsAg âm tính giai đoạn cửa sổ Giai đoạn cửa sổ kéo dài vài tuần, vài tháng năm, thời gian anti HBc điểm nhất, anti-HBc có giá trị điỊu tra dịch tế học - Kháng nguyên HBeAg: Là kháng nguyên nhân HBV, xuất sau HBsAg sớm HBeAg xuất có liên quan đến nhân lên virus thể khả lây nhiễm bệnh nhân cao - Kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên HbeAg (Anti HBe): Sự xuất Anti HBe trường hợp viêm gan cấp tính dấu hiệu huyết thời kỳ hồi phục bệnh, có khả lây nhiƠm II.2.2 Đường lây truyền: Con đường lây truyèn viêm gan B tương tự HIV Trong đường lây từ mĐ sang quan trọng nhất, đường làm giảm người cho máu tương lai II.2.3 Chẩn đóan viêm gan B: phát hiƯn HBsAg, DNA-HBV, Anti HBc IgM, IgG kỹ thuật sau đây: - Kỹ thuật tủa gel thạch (Ouchterlony) - Kỹ thuật ngưng kết hạt latex hạt gelatin - Kỹ thuật chẩn đoán nhanh nhanh HBsAg - Kỹ thuật miễn dịch gắn men ( ELISA) - Kỹ thuật phóng xạ miễn dịch (Radio Immuno Assay-RIA) - Kỹ thuật khuếch đại chuỗi(PCR) để phát DNA-HBV II.3 Virus viên gan C: - Trang – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn Virus viêm gan C (Hepatitis C virus = HCV), mà trước năm 1989 gọi virus viêm gan non A- non B, có khả gây viêm gan, tổn thương tế bào gan, làm tăng men gan dẫn đến viêm gan mạn, ung thư gan, xơ gan… II.3.1 Đặc điểm sinh học a Cấu trúc virus viêm gan C (HCV): HCV thuộc họ Flaviridae, nhóm B arbovirus Cấu trúc gồm phần: vỏ nhân (capsid) có chức genome virus sợi đơn RNA - Phần vỏ: Gồm có lớp lipid protein xuyên màng – Protein màng giúp virus tiếp cận tế bào đích - Phần nhân: Nhân (capsid) gồm protein phosphoryl hóa, protein có nhiệm vụ điều hòa chép gen Genome HCV sợi đơn RNA, cấu tạo 9400 acid amin gen mã hóa (gen C, E1, E2 / NS1…), giúp mã hóa protein virus: gen E1 mã hóa glycoprotein 33 (gp 33), gen E2 / NS1 mã hóa gp 70; gen C mã hóa protein nucleocapsid p22, gắn với RNA virus, gen NS3 mã hóa men proteaza, gen NS5a mã hóa men polymeraza, gen NS5b mã hóa men replicaza Hai men sau cần thiết cho chép HCV II.3.2 Đường lây truyền: Con đường lây truyền viêm gan C tương tự HIV, đường truyỊn máu nhạy đường nghiƯn chích ma tuý gây đồng nhiƠm với HIV II.3.3 Biểu lâm sàng: Các biểu lâm sàng viêm gan C thay đổi Có thể biểu nhẹ nhàng, thống qua khơng có triệu chứng biểu nặng, kéo dài đưa đến tử vong Hai hình thái lâm sàng thường gặp viêm gan C cấp (thời gian ủ bệnh từ đến tuần) viêm gan C mạn (từ đến tháng hay lâu hơn) - Hội chứng lâm sàng: gặp mệt mỏi, chán ăn, giảm cân, vàng da (chỉ khoảng 25%) Viêm gan C cấp kịch phát gặp - Xét nghiệm: men gồm ALT tăng cao giao động từ 250-1000 UI/L kéo dài 2-4 tháng; men gan tăng kéo dài tháng giao động, bệnh nhân dễ chuyển sang thể mạn tính HCV gây viêm gan cấp, viêm gan mạn, từ dẫn đến xơ gan ung thư gan So với virus viêm gan B, HCV nguy hiểm tốc độ lây nhiễm ngày tăng chưa có biện pháp ngăn ngừa đặc hiệu, tỷ lệ trở thành viêm gan mạn cao 50-70% (viêm gan B khoảng 10-20%) khoảng 30% xơ gan viêm gan C trở thành ung thư gan nguyên phát Đây mối đe dọa sức khỏe cộng đồng II.3.4 Chẩn đoán viêm gan C: a Phát anti HCV: - Từ năm 1989 viêm gan C làm sáng tỏ nhà khoa học phân lập virus viêm gan C để thành công việc lai tạo RNA-virus C Từ đến cơng nghệ lai tạo phát triển sản xuất nhiều kháng nguyên tổng hợp có độ - Trang – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn nhạy độ đặc hiệu ngày cao góp phần việc chẩn đoán HCV sàng lọc HCV người cho máu Kỹ thuật men miễn dịch ELISA hệ (sử dụng gen NS4) phát nhiễm HCV sau 125 ngày; ELISA hệ thứ hai (sử dụng gen core, NS3, NS4) phát HCV sau 100 ngày nhiễm HCV; tiến gần ELISA hệ đời (sử dụng gen: core, NS3, NS4, NS5) rút ngắn giai đoạn cửa sổ 75 ngày sau nhiễm (đây nghiên cứu Decker 1997) Như giai đoạn cửa sổ nhiễm HCV thời gian dài (75-100 ngày) ta không phát anti HCV, giai đoạn quan trọng sàng lọc HCV người cho máu b Chẩn đoán genome HCV: - Với phương pháp khuếch đại chuỗi (PCR), phát RNA-HCV huyết tương 80% bệnh nhân có anti HCV Phương pháp sử dụng chẩn chẩn đoán viêm gan C - Hiện số nước tiên tiến để áp dụng phương pháp PCR sàng lọc người cho máu lẫn chẩn đốn bệnh Ngồi kỹ thuật đếm số lượng virus (viral load) áp dụng để đánh giá mức độ nhân lên virus, khả lây truyền tiên lượng bệnh II Giang mai II.4.1 Đặc điểm sinh học a Cấu trúc Vi khuẩn có hình xoắn lị xo, có khoảng 6-12 vịng xoắn đặn khoảng cách vịng xoắn 1µm, có đầu nhọn, thẳng , mảnh mai không lông Thân vi khuẩn có lớp : - Lớp ngồi mucopolysaccharide giúp vi khuẩn chống hiên tượng thực bào - Lớp sợi Fibrin có từ 6-10 sợi uốn quanh thân vi khuẩn - Lớp lớp peptidoglycan Có nhóm có liên quan chặt chẽ mơ tả nhóm T.pallidum - T.Pallidum-pallidum - T.Pallidum- pertenuve - T.pallidum-carateum - T.Pallidum- endemicum Pallidum-pallidum(gọi tắt T.Pallidum) tác nhân gây bệnh quan trọng II.4.2 Đường lây nhiễm - Bệnh chủ yếu lây qua đường tình dục lan truyền tiếp xúc dịch niêm mạc Ngịai bệnh cịn lây qua dường truyền máu II.4.3 Biểu lâm sàng Bệnh giang mai có biểu lâm sàng thay đổi xác định giai đoạn bệnh khác Có truờng hợp: giang mai mắc phải giang mai bẩm sinh Giang mai mắc phải: Gặp ngươì lớn Bệnh kéo dài qua thời kỳ: - Trang – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn - Giang mai thời kỳ 1: sau thời gian ủ bệnh 10-60 ngày bệnh bắt đầu vết lt nơng gọi hạ cam cứng Thường hạ cam tìm thấy đường sinh dục: vết lt trịn khơng đau, khơng chảy máu Nếu khơng điều trị, hạ cam tự lành vài tuần - Giang mai thời kỳ 2: 1-2 tuần sau hạ cam lành chậm năm bệnh nhân không điều trị đầy đủ Các tổn thương ngồi da xuất đốm đỏ khắp thể Hạch bạch huyết sưng lên nhiều nơi - Giang mai thời kỳ 3: Trong giang mai muộn có tổn thương sâu như: + Gôm da xương + Tổn thương hệ tim mạch + Tổn thương hệ thần kinh làm bệnh nhân sốt, nhức đầu, đau khớp Giang mai bẩm sinh: Xoắn khuẩn giang mai truyền cho thai nhi khoảng tháng thứ thai kỳ Do tránh khỏi giang mai bẩm sinh điều trị người mẹ khoảng 18 tuần mang thai, điều trị sau 18 tuần coi điều trị đưá bé, người mẹ khơng điều trị đưá bé bị giang mai bẩm sinh Giang mai bẩm sinh làm ngưng phát triên thai nhi, làm sinh non thai chết sau sinh Triệu chứng sớm: đưá bé sinh có mụn đỏ lòng bàn tay, bàn chân Triệu chứng muộn: phát vào khoảng 5-6 tuổi, đưá bé bị điếc, viêm giác mạc, viêm mống mắt dẫn đến mù lồ II.4.4 Chẩn đốn giang mai - Dùng kính hiển vi đen để quan sát trực tiếp từ dịch lấy vết xứơc, điều tiến hành giai đoạn nhiễm trùng chắn - Thử nghiệm VDRL - Thử nghiệm TPHA - Kỹ thuật EIA áp dụng để phát kháng thể đặc hiệu II.5 Ký sinh trùng sốt rét II.5.1 Đặc điểm sinh học: - Ký sinh trùng sốt rét thuộc lớp protozoa gọi sporozoa, có khả truyền bệnh cho người qua trung gian muỗi anopheles Có loại ký sinh trùng sốt rét:  Plasmodium vivax  Plasmodium ovale  Plasmodium malariae  Plasmodium falciparum  Thường gỈp ta Plasmodium falciparum Plasmodium vivax Chỉ có P.falciparum gây sốt rét nặng đưa đến tử vong - Chu kỳ nhân ký sinh trùng sốt rét bao gồm chu kỳ: thể người (trong gan hồng cầu) thể muỗi (sporozoit) II.5.2 Đường lây nhiễm: - Qua trung gian muỗi anopheles - Lây truyền qua đường truyền máu, người cho máu bị nhiƠm ký sinh trùng sốt rét - Trang – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn II.5.3 Chẩûn đoán ký sinh trùng sốt rét: - Kỹ thuật giọt máu đàn, giọt máu đặc tìm ký sinh trùng sốt rét giai đoạn hồng cầu - Kỹ thuật huỳnh quang-miễn dịch: dùng kháng thể đặc hiệu để phát ký sinh trùng sốt rét, dùng kháng nguyên để phát kháng thể - Kỹ thuật ngưng kết hạt latex EIA để phát kháng the,å tương tự kỹ thuật huỳnh quang lợi sàng lọc số lượng lớn người cho máu - Kỹ thuật QBC (Quantity of blood cells): kỹ thuật cho phép tập trung ký sinh trùng sốt rét gấp 50 lần III/ CÁC KỸ THUẬT ĐƯỢC ỨNG DỤNG TRONG PHÒNG XÉT NGHIỆM SÀNG LỌC NGƯỜI CHO MÁU HIỆN NAY III.1 K? thu?t sàng l?c HIV III.1.1 Kỹ thuật miễn dịch gắn men (ELISA) Thử nghiệm ELISA kỹ thuật sàng lọc ứng dụng phổ biến phịng xét nghiệm Có loại nguyên lý bản: III.1.1.1 Phương pháp ELISA kháng globulin Đây phương pháp đơn giản nhất, kháng thể virus có mẫu xét nghiệm gắn với kháng nguyên virus cố định phát nhờ kháng thể chống người gắn men Xét nghiệm thực theo tiến trình sau: - Kháng nguyên gắn sẵn giếng thử - Nhỏ huyết hay huyết hồ lỗng vào giếng thử - Cuối giai đoạn ủ, rửa giếng để loại bỏ huyết Quá trình rửa loại bỏ huyết thừa giếng mà không làm bong hay hay loại bỏ kháng thể đặc hiệu gắn - Thêm dung dịch cộng hợp vào tất giếng, ủ nhiệt độ định thời gian định Dung dịch cộng hợp có chứa kháng thể globulin chống người gắn men Kháng thể thường IgG chống người men thường sử dụng làø peroxidase horseradish Hoạt động men làm cho chất không màu dạng bất hoạt có màu chuyển sang dạng hoạt hóa - Cuối giai đoạn ủ, rửa giếng để loại bỏ thành phần thừa, cộng hợp không gắn - Thêm chất vào tất giếng ủ nhiệt độ định Dung dịch chất chứa chất hóa học chất màu Chất màu hợp chất hịa tan tổng hợp đổi màu sau bị oxy hóa, bị khử bị biến đổi hóa học khác men Khi thêm dung dịch chất vào giếng có chứa thành phần gắn cộng hợp, men hoạt hóa chất hình thành chất màu giếng Các giếng không chứa thành phần gắn cộng hợp không xuất màu cho chất vào giếng - Cuối giai đoạn ủ, cho vào dung dịch axit hịa lỗng vào tất giếng để dừng phản ứng Axit có tác dụng bất hoạt men cố định màu - Đọc mật độ quang (giá trị OD) dung dịch giếng đánh giá kết thử nghiệm - Trang – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn III.1.1.2 Phương pháp ELISA cạnh tranh - Nguyên lý phương pháp ELISA cạnh tranh giống kiểu ELISA kháng globulin Kháng thể HIV gắn với kháng nguyên cố định sau có mặt kháng nguyên phát - Thử nghiệm khác chút cách phát kháng thể HIV Kháng nguyên gắn mặt giếng cho mẫu huyết vào Thêm vào lúc cộng hợp huyết cộng hợp ủ lúc với Cộng hợp kháng thể chống HIV gắn men, kháng thể chống người không đặc hiệu Cộng hợp chống HIV cạnh tranh vị trí gắn kháng nguyên với kháng thể chống HIV tự nhiên Nồng độ cộng hợp chống HIV đặt mức cho lượng kháng thể HIV nhỏ có mẫu xét nghiệm đủ vượt để chúng ưu tiên gắn với kháng nguyên so vơí kháng thể cộng hợp III.1.1.3 Phương pháp ELISA “kẹp chả” (san-wich) - Kháng nguyên (thường peptide tổng hợp) gắn bề mặt giếng Huyết chất cộng hợp thêm vào giếng lúc cạnh tranh vị trí gắn kháng nguyên với kháng nguyên gắn sẵn giếng Cuối giai đoạn ủ, rửa loại bỏ huyết thanh, thêm cộng hợp tiếp tục ủ Cộng hợp kháng nguyên tổng hợp gắn men kháng thể chống IgG người gắn men (như ELISA kháng globulin) Trong thời gian ủ, kháng nguyên cộng hợp gắn với phức hợp kháng thể chống HIV gắn với kháng nguyên cố định giếng Một phức hợp kẹp kháng nguyên – kháng thể – kháng nguyên gắn men tạo thành Rửa bỏ cộng hợp thừa thêm chất cộng hợp màu giống kháng globulin Xét nghiệm mang tính đặc hiệu cao tỷ lệ dương tính giả giảm - Cách tính kết dựa vào mật độ quang học (OD) giá trị ngưỡng Mật độ quang học giếng xác định chùm tia ánh sáng bước sóng thích hợp chiếu qua đáy giếng đo mức độ hấp thu ánh sáng dung dịch Để sử dụng gia! trị OD, người ta phải so sánh chúng với kết chuẩn biết Kết tập hợp chứng mẫu xét nghiệm Có nhiều cách tính kết khác nhau, tối thiểu cần điểm cho xét nghiệm Trong đó, điểm giá trị trung bình chứng âm chứng dương để xác định xét nghiệm có ý nghĩa chúng phải nằm khoảng quy định nhà sản xuất Cuối để đánh giá kết phản ứng hay không phản ứng phải tính tốn giá trị ngưỡng III.1.2 Kỹ thuật chẩn đốn HIV xét nghiệm nhanh Có số xét nghiệm nhanh đặc biệt khác nhau, hình thức chung kháng nguyên HIV cố định màng dễ thấm hay bán thấm thử đơn lẻ loại thuốc thử dùng chung Các loại thử nghiệm cho kết vòng 20 phút, thường sử dụng để sàng lọc trường hợp khẩn cấp III.1.2 Kỹ thuật ngưng kết hạt gelatin gắn kháng nguyên HIV (kỹ thuật Serodia) III.2 Kỹ thuật sàng lọc virus viêm gan B III.2.1 Kỹ thuật miễn dịch gắn men (ELISA) Đây xét nghiệm ELISA dựa nguyên tắc kỹ thuật “kẹp chả” (one step “sandwich”) Các giếng phủ kháng thể kháng HBsAg Chất cộng hợp nằm - Trang 10 – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn sẵn giếng dạng động thành khối cầu Khối cầu chất cộng hợp hoà tan cho huyết thử nghiệm vào Chất cộng hợp kháng thể kháng HBsAg đánh dấu men peroxidase Nếu huyết thử có kháng thể kháng HBsAg phức hợp kháng thể –kháng nguyên-kháng thể gắn men peroxidase hình thành Khi cho chất màu TMB vào phản ứng có màu Đo đậm độ chất màu qua độ quang học bước sóng 450 nm để xác định phức hợp kháng nguyên kháng thể tương ứng III.2.2 Kỹ thuật chẩn đoán virus viêm gan B xét nghiệm nhanh Có số xét nghiệm nhanh đặc biệt khác nhau, hình thức chung kháng thể kháng HBsAg cố định màng dễ thấm hay bán thấm thử đơn lẻ loại thuốc thử dùng chung Các loại thử nghiệm cho kết vòng 20 phút, thường sử dụng để sàng lọc trường hợp khẩn cấp III.3 Kỹ thuật sàng lọc virus viêm gan C III.3.1 Kỹ thuật miễn dịch gắn men (ELISA) (phát kháng thể kháng HCV) Đây kỹ thuật phát gián tiếp HCV Xét nghiệm dựa nguyên tắc sau: kháng nguyên virus gắn sẵn giếng thử Nếu huyết có kháng thể kháng HCV kháng nguyên kết hợp với kháng thể tạo nên phức hợp kháng nguyên-kháng thể Phức hợp nhận biết chất cộng hợp Dung dịch cộng hợp có chứa kháng thể globulin chống người gắn men Phức hợp phát qua phản ứng màu cho chất thích hợp Cường độ màu phản ứng tỷ lệ với lượng kháng thể diện huyết thử nghiệm Đọc mật độ quang (giá trị OD) dung dịch giếng đánh giá kết thử nghiệm III.3.2 Chẩn đoán virus viêm gan C xét nghiệm nhanh Có số xét nghiệm nhanh đặc biệt khác nhau, hình thức chung kháng nguyên HCV cố định màng dễ thấm hay bán thấm thử đơn lẻ loại thuốc thử dùng chung Các loại thử nghiệm cho kết vòng 20 phút, thường sử dụng để sàng lọc trường hợp khẩn cấp III.4 Kỹ thuật sàng lọc giang mai Phương pháp huyết học chẩn đốn bệnh giang mai gồm có thử nghiệm với Reagin thử nghiệm với kháng nguyên đặc hiệu Thử nghiệm với Reagin: thường dùng để sàng lọc người cho máu để phát kháng thể IgG IgM có huyết kết hợp hổ tương lipid ký chủ vi khuẩn giang mai, hai với hệ miễn dịch ký chủ Dương tính thử nghiệm xảy số bệnh lý khác hủi, lupus, ban đỏ hệ thống sốt rét Hiện thử nghiệm có tên thương mại VDRL RPR Thử nghiệm với kháng nguyên đặc hiệu: thường dùng chẩn đốn Gồm có thử nghiệm hấp thụ kháng thể Treponema huỳnh quang (The Fluorescent - Trang 11 – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn Treponema antibody absorption test=FTA-ABS) dùng kháng nguyên T.pallidum, cịn có thử nghiệm vi ngưng kết hồng cầu (microhemagglutination) thử nghiệm dự phản ứng ngưng kết phát kháng thể đặc hiệu có huyết bệnh nhân làm ngưng kết hồng cầu cừu mẫn cảm với T.pallidum III.5 Kỹ thuật sàng lọc ký sinh trùng sốt rét - Cách chẩn đoán chắn làphát ký sinh trùng sốt rét chu kỳ hồng cầu kỹ thuật nhuộm lam máu (giọt dày) quan sát kính hiển vi để tìm ký sinh trùng sốt rét 100 vi trường - Kỹ thuật QBC tập trung ký sinh trùng sốt rét gấp 40 -50 lần IV / CÁC BIỆN PHÁP PHÒNG NGỪA Tuyển chọn người cho máu khâu quan trọng lọat biện pháp nhằm ngăn ngừa bệnh lây nhiễm qua đường truyền máu Người cho máu an tòan người cho máu tự nguyện vànhắc lại Như cần phải tổ chức vận động hiến máu nhân đạo kết hợp chăm sóc sức khỏe cộng đồng để trì nguồn người hiến máu an tòan Thực nghiêm túc xét nghiệm sàng lọc tất mẫu máu trứơc truyền cho bệnh nhân Chọn lựa xét nghiệm sàng lọc đảm bảo độ nhạy độ đặc hiệu Có định truyền máu đúng, truyền máu phần, áp dụng phuơng châm “Thiếu truyền nấy, không cần không truyền” Aùp dụng truyền máu tự thân bệnh viện trường hợp phẩu thuật có kế họachvà tình trạng sức khỏe bệnh nhân cho phép: lấy máu bệnh nhân, lưu trữ, truyền trả lại cho bệnh nhân sau phẫu thuật Đây biện pháp hiệu hạn chế lây nhiễm tác nhân gây bệnh qua đường truyền máu Cần phải áp dụng biện pháp lọc bạch cầu trước truyền máu Vì bạch cầu tế bào đích HIV, nơi tích chứa HIV Như khả lây nhiễm bạch cầu lớn lấy máu giai đọan cửa sổ Tổ chức đào tạo chuyên môn cho cán kỹ thuật viên Các sở truyền máu phải trang bị đẩy đủ phương tiện máy móc, hóa chất sinh phẩm đầy đủ để thực xét nghiệm sàng lọc phổ biến Dùng dụng cụ lấy máu sử dụng lần túi máu, kim rút máu… Từng bứơc áp dụng phương pháp khử trùng thành phần máu phương pháp nhiệt tia xạ hóa chất q trình sản xuất thành phần máu Quá trình nứớc ta chưa áp dụng 10 Tiêm chủng ngừa viêm gan siêu vi B cho nhân viên y tế cho trỴ em 11 Đánh giá kết triển khai chương trình truyền máu ba lĩnh vực: vận động hiến máu, tiến hành sàng lọc bệnh nhiễm trùng, đổi sở thiết bị cho phù hợp - Trang 12 – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn TÀI LIỆU THAM KHẢO - Trang 13 – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu www.thaiduonghealth.vn – www.thenhommau.vn – www.nhommau.vn Đỗ Trung Phấn “ An toàn truyền máu”- Nhà xuất khoa học kỹ thuật-Năm 2000 Denise M.Harmening “Modern Blood Banking and Transfusion Practices 3rd”- F.A David Company.Philadelphia- 1994 Mary Louise Turgeon “Fundamentals of Immunohematology 2nd “- Nhà xuất William and Wilkins- Năm 1995 Máu sản phẩm máu an toàn Tổ chức y tế giới-Nhà xuất Y học –Năm 2001 Technical manual 13th American Association Of Blood Bank (AABB)- 1999 - Trang 14 – Tài liệu sưu tầm từ nhiều nguồn khác mang tính tham khảo NhómMáu.vn khơng chịu trách nhiệm tính pháp lý tính xác tài liệu