Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài cây bình vôi (stephania rotunda lour) bằng phương pháp giâm hom tại công ty lâm nghiệp sơn động tại xã yên định, huyện sơn động, tỉnh bắc giang

Ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau đến số chồi trên hom .... Ảnh hưởng của Kinetin ở các nồng độ và thể nền khác nhau đến số chồi trên hom.. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởn

TRẦN HUY HÀO

NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG LOÀI CÂY BÌNH VÔI

(STEPHANIA ROTUNDA LOUR) BẰNG PHƯƠNG PHÁP

GIÂM HOM TẠI CÔNG TY LÂM NGHIỆP SƠN ĐỘNG TẠI

XÃ YÊN ĐỊNH, HUYỆN SƠN ĐỘNG, TỈNH BẮC GIANG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

Thái Nguyên, năm 2015

TRẦN HUY HÀO

NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG LOÀI CÂY BÌNH VÔI

(STEPHANIA ROTUNDA LOUR) BẰNG PHƯƠNG PHÁP

GIÂM HOM TẠI CÔNG TY LÂM NGHIỆP SƠN ĐỘNG TẠI

XÃ YÊN ĐỊNH, HUYỆN SƠN ĐỘNG, TỈNH BẮC GIANG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu khoa học của bản thân tôi Các số liệu và kết quả nghiên cứu là quá trình điều tra trên thực địa hoàn toàn trung thực, chưa công bố trên các tài liệu khác, nếu có gì sai tôi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm

Thái Nguyên, ngày tháng năm 2015

Đồng ý cho bảo vệ kết quả

trước hội đồng khoa học!

Ths Lương Thị Anh Trần Huy Hào

XÁC NHẬN CỦA GV CHẤM PHẢN BIỆN

Giáo viên chấm phản biện xác nhận sinh viên

đã sửa chữa sai sót sau khi Hội đồng chấm yêu cầu!

(Ký, họ và tên)

LỜI CẢM ƠN

Để hoàn thành khóa luận này trước tiên tôi xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu Nhà trường, Ban chủ nhiệm Khoa Lâm nghiệp, cảm ơn các thầy cô giáo đã truyền đạt cho tôi những kiến thức quý báu trong suốt quá trình học

tập và rèn luyện tại Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên

Tôi đặc biệt xin trân trọng cảm ơn sự hướng dẫn tận tình, sự quan tâm sâu sắc của cô giáo Ths Nguyễn Thị Tuyên và Ths Lương Thị Anh đã

giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực tập để tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này Đồng thời tôi cũng xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ quý báu của cán bộ và nhân viên công ty Lâm Nghiệp Sơn Động để tôi hoàn thành bài khóa luận này

Cuối cùng tôi xin bày tỏ sự biết ơn tới gia đình, bạn bè và người thân

đã quan tâm giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực tập

Trong quá trình nghiên cứu do có những lý do chủ quan và khách quan nên khóa luận không tránh khỏi những thiếu sót và hạn chế Tôi rất mong nhận được sự đóng góp ý kiến của các thầy cô giáo và các bạn sinh viên để giúp tôi hoàn thành khóa luận được tốt hơn

Tôi xin chân thành cảm ơn!

Thái Nguyên, ngày tháng năm 2015

Sinh viên thực tập

Trần Huy Hào

DANH MỤC CÁC BẢNG TRONG KHÓA LUẬN

nồng độ và thể nền khác nhau 16

Bảng 4.2 Ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau

đến tỷ lệ hom ra chồi 17

Bảng 4.3 Ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau

đến số chồi trên hom 19

Bảng 4.4 Ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau

đến chiều dài chồi 21

Bảng 4.5 Tổng hợp kết quả giâm hom củ loài Bình vôi sử dụng Kinetin ở các nồng độ và thể nền khác nhau 25

Bảng 4.6 Ảnh hưởng của Kinetin ở các nồng độ và thể nền khác nhau

đến tỷ lệ hom ra chồi 25

Bảng 4.7 Ảnh hưởng của Kinetin ở các nồng độ và thể nền khác nhau

đến số chồi trên hom 27

Bảng 4.8 Ảnh hưởng của Kinetin ở các nồng độ và thể nền khác nhau

đến chiều dài chồi 29

Bảng 4.9 So sánh ảnh hưởng của BAP và Kinetin đến tỷ lệ ra chồi 31

Bảng 4.10 So sánh ảnh hưởng của BAP và Kinetin đến

số chồi trung bình/hom 34

Bảng 4.11 So sánh ảnh hưởng của BAP và Kinetin đến chiều dài

chồi trung bình trên hom 36

DANH MỤC CÁC HÌNH TRONG KHÓA LUẬN

Hình 1.1: Biểu đồ ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ 17

Hình 1.2: Biểu đồ ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền

khác nhau đến số chồi trên hom 20

Hình 1.3: Biểu đồ ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền

khác nhau đến chiều dài chồi 22

Hình 1.4: Biểu đồ ảnh hưởng của Kinetin ở các nồng độ và thể nền

khác nhau đến tỷ lệ hom ra chồi 26

Hình 1.5: Biểu đồ ảnh hưởng của Kinetin ở các nồng độ và thể nền

khác nhau đến số chồi trên hom 27

Hình 1.6: Biểu đồ ảnh hưởng của Kinetin ở các nồng độ và thể nền khác nhau đến chiều dài chồi 29

Hình 1.7: Biểu đồ tỷ lệ hom ra chồi với BAP và Kinetin

ở các nồng độ khác nhau 32

Hình 1.8: Biểu đồ ảnh hưởng của BAP và Kinetin ở các nồng độ

khác nhau đến số chồi trung bình trên hom 34

Hình 1.9: Biểu đồ ảnh hưởng của BAP và Kinetin ở các nồng độ

khác nhau đến chiều dài chồi trung bình trên hom 36

CÁC HÌNH ẢNH TRONG KHÓA LUẬN Hình ảnh 01: Xử lý bằng BAP 20ppm ở thể nền 1 và 2 18

Hình ảnh 02: Xử lý bằng BAP nồng độ 10ppm và 20ppm 23

Hình ảnh 03: Ảnh hưởng của nồng độ Kinetin đến giâm hom Bình vôi 30

Hình ảnh 04: Ảnh hưởng của BAP và Kinetin ở nồng độ 10pmm ở thể nền 2 33

MỤC LỤC

PHẦN 1.ĐẶT VẤN ĐỀ 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục đích của đề tài 1

1.3 Mục tiêu của đề tài 2

1.4 Ý nghĩa của đề tài 2

PHẦN 2.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Cơ sở khoa học 3

2.2 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước 4

2.2.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới 4

2.2.2 Tình hình nghiên cứu giâm hom tại Việt Nam 6

2.3 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 8

2.3.1 Đặc điểm hình thái 8

2.3.2 Đặc điểm sinh học 9

2.3.3 Đặc điểm phân bố 9

2.3.4 Bộ phận dùng và công dụng 9

2.3.5 Giá trị kinh tế, khoa học, bảo tồn 10

Phần 3 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11

3.1 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 11

3.2 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 11

3.3 Nội dung nghiên cứu 11

3.4 Phương pháp nghiên cứu 11

3.4.1 Phương pháp kế thừa tài liệu 11

3.4.2 Phương pháp ngoại nghiêp 11

3.4.3 Phương pháp nội nghiệp 14

PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 16

4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ và loại chất kích thích

sinh trưởng ở các dạng thể nền khác nhau đến khả năng

hình thành cây hom ở Bình vôi 16

4.1.1 Ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau đến một số

chỉ tiêu giâm hom củ loài Bình Vôi 16

4.1.2 Ảnh hưởng của Kinetin ở các nồng độ và thể nền khác nhau

đến một số chỉ tiêu giâm hom củ loài Bình vôi 24

4.2 So sánh ảnh hưởng của 2 chất điều hòa sinh trưởng BAP và Kinetin

đến kết quả giâm hom loài Bình vôi 31

4.2.1 Ảnh hưởng của BAP và Kinetin đến tỷ lệ hom ra chồi 31

4.2.2 Ảnh hưởng của BAP và Kinetin đến số chồi trung bình trên hom 34

4.2.3 Ảnh hưởng BAP và Kinetin đến chiều dài chồi trung bình trên hom 35

PHẦN 5.KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 38

5.1 Kết luận 38

5.2 Đề nghị 38

TÀI LIỆU THAM KHẢO 39

PHẦN 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Bình vôi thuộc chi Stephania rotunda Lour là loại cây thuốc quý có tác

dụng dụng an thần, chữa ho, sốt, lỵ, dạ dày, chữa mất ngủ, chúng còn được sử

dụng để chữa bệnh ung thư một trong những căn bệnh của thế kỷ Hiểu được tác dụng quý của cây mà hiện nay tình trạng khai thác cây Bình vôi ngày càng

ra tăng dẫn đến tình trạng nguồn Bình vôi tự nhiên đang có nguy cơ tuyệt

chủng mà nguồn nguyên liệu trồng thì chủ yếu trong vườn ươm hoặc phòng thí nghiệm

Hiểu được tầm quan trọng, lợi ích và giúp bảo tồn nguồn Bình vôi thì công tác nhân giống cần được phát huy, đặc biệt là nhân giống sinh dưỡng

giúp cây đạt được cả chất lượng lẫn số lượng Chính vì thế tôi tiến hành thực

hiện đề tài : “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài cây Bình Vôi (Stephania

rotunda Lour) bằng phương pháp giâm hom tại công ty lâm nghiệp Sơn Động tại xã Yên Định, huyện Sơn Động, tỉnh Bắc Giang” Nhằm cung cấp thêm những thông tin về loài cây này nói riêng và công tác bảo tồn và phát triển cây thuốc ở nước ta nói chung

1.2 Mục tiêu của đề tài

- Góp phần xây dựng được quy trình kỹ thuật nhân giống loài cây Bình vôi bằng phương pháp giâm hom

- So sánh được ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng, nồng độ và giá thể đến khả năng ra chồi và chất lượng chồi

1.3 Ý nghĩa của đề tài

- Ý nghĩa trong học tập và nghiên cứu khoa học: Giúp sinh viên vận dụng được những kiến thức về giâm hom đã được học vào trong thực tế

- Ý nghĩa trong thực tiễn: Xác định kỹ thuật nhân giống loài cây Bình vôi

bằng phương pháp giâm hom có thể áp dụng trong thực tiễn để sản xuất

PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Cơ sở khoa học

- Thực vật có hai hình thức sinh sản chủ yếu, là sinh sản hữu tính và sinh sản vô tính Sinh sản hữu tính là hình thức sinh sản có cơ sở dựa trên phân bào giảm nhiễm Hợp tử hình thành do sự kết hợp giữa hai giao tử đực và giao tử cái của hai cơ thể bố và mẹ Do vậy trong sinh sản hữu tính

có sự phân ly và tái tổ hợp gen, nên ở cơ thể con thường không giữ được các đặc tính di truyền của cơ thể bố mẹ một cách nguyên vẹn

- Sinh sản sinh dưỡng là hình thức sinh sản có cơ sở dựa vào phân bào nguyên nhiễm Tế bào mẹ sinh ra tế bào con có bộ nhiễm sắc thể giống hệt mình Do vậy mà thực vật sinh sản sinh dưỡng duy trì được các đặc điểm di truyền của cơ thể mẹ và ổn định qua nhiều thế hệ

- Nhân giống sinh dưỡng (vegatative propagation) là kĩ thuật tạo cây con từ một bộ phận sinh dưỡng của cây như lá, cành, củ, thân, mô phân sinh hoặc sự tiếp hợp các bộ phận dinh dưỡng (ghép) để tạo thành cây mới Theo nghĩa rộng thì nhân giống sinh dưỡng bao gồm nhân giống

bằng hom, chiết cành, ghép cây và nuôi cấy mô – tế bào

+ Phương pháp chiết là việc tạo ra rễ cho một đoạn cành (thân) trên cây mẹ rồi mới tách cành (thân) ra khỏi thân cây mẹ để nhân giống

Phương pháp này có ưu điểm cây chiết ra quả sớm Tuy nhiên, hệ số nhân

giống thấp, cây chiết nhanh bị cỗi

+ Phương pháp ghép là dùng bộ phân sinh dưỡng của cây mẹ định thân giống ghép lên cây khác (gốc ghép) để tạo nên một cây hoàn chỉnh Phương pháp này cho hệ số nhân giống cao, cây ghép sinh trưởng tốt, tuổi thọ cao Nhưng phương pháp này yêu cầu ghép phức tạp, phương pháp

này đòi hỏi người có kinh nghiệm để lựa chon cành mắt chiết đạt yêu cầu

để đảm bảo chất lượng cây con tốt

+ Phương pháp nhân giống bằng nuôi cấy mô – tế bào là phương pháp tạo cây con từ các bộ phân rất nhỏ của cây (các cơ quan, mô, tế bào)

bằng cách nuôi chúng trong bình nuôi ở điều kiện vô trùng có môi trường thích hợp và được kiểm soát nghiêm ngặt Đây là phương pháp nhân giống vô tính mang lại hiệu quả cao nhất, chất lượng cây con tốt, đồng đều Tuy nhiên, việc nuôi cấy mô được thực hiện với quy trình thật nghiêm túc và tỉ mỉ, điều kiện trang thiết bị đầy đủ và mô chỉ phát triển trên một môi trường hoàn toàn vô trùng, do vậy việc nhân giống chỉ thực hiện với quy mô nhỏ hoặc phục vụ cho nghiên cứu

+ Phương pháp nhân giống bằng hom là phương pháp dùng một

phần lá, một đoạn thân, một đoạn cành hoặc đoạn rễ để tạo ra cây mới gọi

là cây hom là phương pháp nhân giống giữ nguyên được tính trạng của cây mẹ (do có kiểu gen hoàn toàn giống cây mẹ ban đầu), đơn giản có hệ

số nhân lớn, tương đối rẻ tiền nên ngày càng được sử dụng rộng rãi trong nhân giống cây rừng, cây ăn quả, cây cảnh…

- Tuỳ thuộc vào loại hom được sử dụng mà các bộ phận còn thiếu

đó có sự khác nhau nhưng nhìn chung các bộ phận còn thiếu là rễ cây (phần dưới mặt đất) và các bộ phận trên mặt đất như thân, cành, lá… Khả năng ra rễ có ỹ nghĩa quyết định thành bại trong giâm hom, tuy nhiên sự hình thành rễ lại phụ thuộc vào các đặc điểm di truyền của loài cây, bộ

phận lấy làm giống và dòng cây mẹ, chất điều hoà sinh trưởng, điều kiện giâm hom, giá thể… Do đó người ta phải tạo điều kiện thuận lợi nhất cho hom ra rễ

2.2 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước

2.2.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới

- Trên thế giới, phương pháp nhân giống bằng hom đã có những nghiên cứu từ rất sớm và được ứng dụng ở nhiều nước, từ đó mà chất

lượng cây giống, năng suất cây trồng, trong đó có cả cây rừng hàng năm

của các nước tăng lên rất nhiều Hiện nay, nhân giống bằng hom các loài cây rừng trên thế giới đang được nghiên cứu và ứng dụng ở mức sâu hơn

và rộng hơn

- Năm 1883, Velenski.A.H đã công bố công trình nhân giống một số cây lá kim và cây lá thường xanh bằng hom

- Từ năm 1961 việc nhân giống thành công Bạch đàn (Eucalyptus

camaldulensis) bằng phương pháp giâm hom (được coi là rất khó thực hiện trước đó) chính là bước tiến mới trong giâm hom cây giống lâm nghiệp Sau đó vào năm 1963, một nhà nghiên cứu người Pháp đưa ra danh sánh gồm 58 loài Bạch đàn thử nghiệm giâm hom thành công với kết quả khác nhau Từ đó các công trình nghiên cứu và ứng dụng vào thực tiễn sản xuất vẫn tiếp tục và đưa ra nhiều kết quả mới đem lại hiệu quả trong cuộc sống Có thể kể ra một số công trình tiêu biểu:

- Bhatragan thí nghiệm giâm hom cây Tếch (Tectona grandis) đạt tỷ

lệ ra rễ cao nhất là 65,8% năm 1972

- Bhatragan và Jocky (Ấn Độ) đã tiến hành giâm hom chồi gốc

Bạch đàn Eucalyptus bằng thuốc IBA nồng độ 100ppm, thời gian xử lý 24

giờ cho kết quả tỷ lệ ra rễ đạt 60% năm 1973

- Martin và Quilet thử nghiệm nhân giống giâm hom đối với Bạch đàn, kết quả chứng minh chất kích thích ra rễ làm ảnh hưởng đến tỷ lệ ra

rễ của hom, thấy IBA làm tăng tỷ lệ ra rễ của Bạch đàn tăng lên 12% - 15% so với đối chứng, nhưng tỷ lệ chết vẫn còn cao (năm 1974)

- Sach (Đức) năm 1982 đã cho rằng chồi và lá có tác dụng tổng hợp Auxin và chất kích thích ra rễ, những chất này ảnh hưởng đến sự hình thành rễ bất định ở hom Ngoài ra chúng còn có tác dụng tổng hợp Hydrat cacbon rất cần thiết cho sự hình thành và phát triển cuả rễ Vì vậy khi

giâm hom nhất thiết phải để lại một số lá cần thiết, không có lá hom không thể ra rễ xong để lại số lá quá lớn thì hom sẽ héo và chết trước khi

ra rễ do quá trình thoát hơi nước mạnh

- Theo nghiên cứu của Darsin năm 1983 ở Viện di truyền và chọn giống cây gỗ Liên Xô, đã tiến hành thí nghiệm với cây Sồi ở giai đoạn 3 tuổi cho thấy kết quả là 12 cây có tỷ lệ 100% hom ra rễ, 28 cây có tỷ lệ ra rễ là 50% và 10 cây không ra rễ Điều này chứng tỏ rằng, đặc điểm di truyền của từng cá thể có ảnh

hưởng rất khác nhau đến khả năng ra rễ của hom

2.2.2 Tình hình nghiên cứu giâm hom tại Việt Nam

Trong quá trình phát triển của lĩnh vực nhân giống cây trồng đặc biệt là cây rừng ở nước ta đã có một số nghiên cứu liên quan đến việc giâm hom như sau:

- Nghiên cứu về tạo cây hom đã được tiến hành từ những năm cuối

thập kỷ 70 của thế kỷ XX Cho đến nay đã có thể sản xuất được số lượng lớn cây hom các loài như Bạch đàn trắng, Sở, Mỡ, Thông đuôi ngựa, Phi lao, Keo lá tràm… phục vụ công tác trồng rừng Việc giâm hom thành công các loài cây phủ thuộc vào việc sử dụng các loại chất kích thích ra rễ

ở nồng độ phù hợp

- Theo kết quả nghiên cứu của Dương Mộng Hùng, các hom Phi lao được

xử lý IBA ở nồng độ 200pm có tỷ lệ ra rễ là 76,6% còn công thức đối chứng chỉ đạt 18,3% Đối với nhân giống hom cây Sao đen bằng thuốc bột TTG (Trung tâm

giống – Lê Đình Khả và cộng sự, 2002) theo kết quả nghiên cứu cho thấy xử lý hom giâm cho Sao đen ở giai đoạn 9 tháng tuổi bằng thuốc TTG (đặc biệt ở nồng

độ 0,5%) cho hiệu quả ra rễ cao nhất 96,7%

- Năm 1995, Nguyễn Hoàng Nghĩa và Trần Cự thí nghiệm giâm hom cây Thông đỏ tại trạm Ba Vì với thời gian nghiên cứu 4 tháng, kết

quả giâm hom với 3 loại thuốc ABT, IBA, IAA dạng bột ở nồng độ 0,5%; 1%; 1,5% và 2% cho thấy IBA 1% đạt tỷ lệ ra rễ cao nhất với 100%

- Năm 1999, theo Nguyễn Hoàng Nghĩa trong đề án nghiên cứu bảo

tồn gen cây rừng quý hiếm cho biết sau khi giâm hom cây Bách xanh

(Calocedrus macrolepis K.) và cây P ơmu (Fokinea mdginsii Henri et

Thomas) như sau: Cây Bách xanh 7 – 8 tuổi với chất IBA, ABT 1% thì tỷ

lệ hom ra rễ cao nhất đạt 85%; cây 2 tuổi tỷ lệ hom ra rễ cao nhất đạt 95%

với IBA 1% và 1,5%, ABT 1,5% Cây Pơmu đạt tỷ lệ ra rễ cao nhất với NAA 1% và 1,5% là 90% tỷ lệ hom ra rễ

- Năm 2006, Đặng Thái Dương nghiên cứu giâm hom cành cây Sở,

đã xác định 2 nhân tố ảnh hưởng là chất kích thích và điều kiện giâm hom, sau khi so sánh kết quả thấy giâm hom với thuốc NAA nồng độ 0,04% và 0,05%, trong nhà giâm hom đạt tỷ lệ ra rễ cao nhất là 85,19%

- Theo tài liệu của Phạm Đức Tuấn và Hoàng Vũ Thơ (2009) thực hiện nghiên cứu khả năng ra rễ của hom Tràm cajuputi (Melaleuca

cajuputi Powell) với cành hom được cắt từ cây trội có tỷ lệ 1,8 –cineole cao trong tinh dầu (65 – 72%) ở quần thể tràm tự nhiên thuộc khu vực hồ Đại Lải, tỉnh Vĩnh Phúc Các hoormone được sử dụng là NAA, IBA và thuốc bột TGG 1% kết quả cho thấy trong các loại hoocmone được sử

dụng để nhân hom Tràm cajuputi thì IBA 1000ppm có tỷ lệ ra rễ và chỉ số

ra rễ là lớn nhất (tương ứng là 75% và 27%) Thời gian cần thiết để hom Tràm có thể ra rễ trong điều kiện thí nghiệm khoảng từ 20 – 28 ngày tính

từ khi bắt đầu giâm hom Tốc độ sinh trưởng trung bình chiều dài rễ trong quá trình giâm hom Tràm tương đối nhanh (đạt giá trị là 0,56 cm/ngày với công thức sử sụng – IBA 1000pm) Vì vậy khi giâm hom trong điều kiện thuận lợi nên giâm hom trực tiếp vào bầu đất

- Từ trước tới nay, ở Việt Nam cũng như trên Thế Giới đã có rất nhiều nghiên vứu về giâm hom các loài cây khác nhau, cả các loài cây Lâm nghiệp (cây gỗ cũng như các loài lâm sản ngoài gỗ), cây ăn quả hay

các loài cây nông nghiệp Tuy nhiên, nghiên cứu về giâm hom cây Bình vôi còn hạn chế hoặc chưa được công bố

- Đối với các dân tộc vùng Đông Bắc thì việc bảo tồn và phát huy giá trị truyền thống của loài Bình vôi là vô cùng quan trọng, việc nhân

giống Bình vôi vẫn được đồng bào vùng này thực hiện theo phương pháp truyền thống đó là nhân giống bằng hạt Việc nhân giống loài này theo phương pháp nhân giống sinh dưỡng chưa được ghi nhận Do vậy, việc nhân giống Bình vôi bằng phương pháp sinh sản sinh dưỡng là cần thiết

2.3 Tổng quan đối tượng nghiên cứu

- Như trên đã đề cập, cây Bình vôi (Stephania rotunda Lour.) thuộc chi

Bình vôi (Stephania) Ở Việt Nam hiện biết gần 15 loài, trong đó có khoảng

10 loài có rễ phình thành củ, nhìn hình thái bên ngoài chúng tương đối giống nhau, vì vậy có tên chung gọi là “Bình vôi”, gồm các loài S brachyandra Diels; S cambodia Gagnep; S cepharantha Hayta; S dielsiana Y.C.Wu; S

kwangsiensis H S Lo; S pierrei Dield; S rotunda Lour; S venosa (Blume)

Spreng v.v… tất cả đều có thể được dùng làm thuốc

2.3.1 Đặc điểm hình thái

- Bình vôi là dây leo, sống hàng năm Thân non nhẵn, khi già có nhiều bì khổng, hơi hóa gỗ có khi xoắn vặn Rễ củ to, vỏ ngoài xù xì, màu nâu xám Lá mọc so le, có cuống dài, đính khoảng 1/3 vào trong phiến lá, phiến lá mỏng, gân hình tròn hoặc tam giác, gốc bằng, đầu tù, mép hơi

lượn sóng, hai mép nhẵn, gân lá xuất phát từ chỗ đính của cuống lá, tỏa ra hình chân vịt nổi rõ ở mặt dưới

- Cụm hoa mọc ở kẽ lá hoặc những cành già đã rụng lá thành sim tán Hoa đực và hoa cái khác gốc, hoa đực có 5-6 lá đài, 3-4 cánh hoa màu vàng cam, 3-6

nhị, thường lá 4; hoa cái có 1 lá đài, 2 cánh hoa; bầu hình trứng

- Quả hạch, hình cầu, hơi dẹt, màu đỏ khi chín; hạt cứng, hình móng ngựa với những hàng vân ngang dạng gai, hai mặt bên lõm, ở giữa không

có lỗ thủng

2.3.2 Đặc điểm sinh học

- Bình vôi là loại cây ưa sáng hoặc chịu bóng hoặc hơi chịu bóng Cây thường mọc ở các kẽ đá, leo trùm lên các loại cây khác hoặc phủ lên

đá, ở loại hình rừng ẩm trên núi đá vôi Độ cao phân bố của loài S sinia

Diels thường từ vài chục đến vài trăm mét và chưa phát hiện thấy ở khoảng 100m so với mặt biển

- Bình vôi có hiện tượng rụng lá vào mùa đông, mọc lại vào mùa xuân và hoa xuất hiện sau khi ra lá non Mùa hoa quả vào tháng 4-8, cá

biệt thấy quả chín vào tháng 10 Cây tái sinh tự nhiên chủ yếu từ hạt hoặc

từ các phần khác còn lại sau khi cắt Ngoài ra, từ củ Bình vôi đem vùi 1/3 xuống đất hoặc chỉ cần đặt phần gốc tiếp xúc với đất ẩm cũng mọc thành cây mới

2.3.3 Đặc điểm phân bố

- Thế giới: Trung Quốc, Lào

- Việt Nam: Trong các loài Bình vôi kể trên, có một số loài như S

sinica Diels, S kwangsiensis H S Lo, S rotunda Lour thường mọc lẫn với nhau ở rừng núi đá vôi tại các tỉnh Ninh Bình, Hà Nam, Thanh Hóa, Quảng Bình, Hải Phòng(Cát Bà), Lạng Sơn,Bắc Giang, Cao Bằng, Hà Tây (cũ)

2.3.4 Bộ phận dùng và công dụng

- Bộ phận dùng: Củ thái lát phơi hay sấy khô, dùng làm thuốc theo

y học cổ truyền Để chiết xuất hoạt tính làm thuốc thì dùng củ tươi

- Thành phần hóa học: Trong củ các loài Bình vôi nói chung thường

có một số nhóm hoạt chất, trong đó thành phần chủ yếu là các alkaloid như: L-tetrahydropamatin, stepharin, cycleanin, tuduranin, palmatin, dihydropalmatin, dicentrin…

- Công dụng: Trong y học cổ truyền dùng củ Bình vôi thái lát phơi khô sắc uống có tác dụng an thần, chữa ho, sốt, lỵ, dạ dày… Liều dùng 3-

6 g/ngày Tuy nhiên, cách dùng này hiện nay ít được áp dụng, vì dễ bị ngộ độc (gây nôn) do có alkaloid Bình vôi là nguyên liệu chiết alcalid làm thuốc

an thần, chữa mất ngủ Thuốc được làm dưới dạng viên có tên là Rotunda,

mỗi viên chứa 0,05g L-tetrahydropalmatin clohydrat Liều dùng mỗi viên 1-2 viên trước khi đi ngủ

2.3.5 Giá trị kinh tế, khoa học, bảo tồn

- Bình vôi là cây thuốc quý Do nguồn nguyên liệu tương đối dồi dào nên giá thu mua rẻ Tại nơi khai thác, giá mua khoảng 4.000 – 4.500 đ/kg

tươi Bởi vậy giá thành thuốc cũng rất rẻ (3.000- 3.500 đồng một vỉ 10 viên)

- Tuy nhiên, do phát động khai thác ồ ạt (từ năm 1992 đến nay) nhằm cung cấp cho thị trường trong nước và xuất khẩu nên nguồn Bình vôi ở các tỉnh miền núi phía Bắc mau cạn kiệt Bên cạnh đó, ở Việt Nam còn có một số loài Bình vôi được coi là quý hiếm, như: Stephania brachyandra Diels có

hàm lượng L-tetrahydropalmatin cao nhất trong một số những loài đã biết (khoảng 2,3-3,5%), chỉ phân bố ở một số vùng núi cao trên 1.000m Hoặc loài

Stephania cepharantha Hayta chứa hợp chất Cepharantin, có tác dụng làm thuốc chữa ung thư, mới chỉ phát hiện ở 2 điểm tại Quảng Ninh và Hòa Bình

… Những loài này đã được đưa vào danh mục Sách đỏ và Danh lục đỏ cây thuốc Việt Nam để bảo vệ, do mức đe dọa tuyệt chủng cao

- Để khai thác lâu dài nguồn Bình vôi ở Việt Nam, trước mắt nên khai thác hạn chế, với khối lượng vừa đủ cho nhu cầu sử dụng trong nước (ước tính 50-100 tấn/năm) Bên cạnh đó, cần hoàn tất việc nghiên cứu, phát triển

một số loài có hàm lượng cao như Stephania brachyandra Diels và Stephania

kwangsienssis H S Lo tại các tỉnh phía Bắc

Phần 3 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

- Đối tượng nghiên cứu của đề tài là chồi từ củ Bình vôi

- Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích,

nồng độ và giá thể đến khả năng ra chồi và chất lượng chồi của Bình vôi 3.2 Địa điểm và thời gian nghiên cứu

- Địa điểm nghiên cứu: Vườn ươm của công ty Lâm nghiệp Sơn Động

xã Yên Định huyện Sơn Động tỉnh Bắc Giang

- Thời gian nghiên cứu: 18/08/2014 – 30/12/2014

3.3 Nội dung nghiên cứu

- Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ và loại chất kích thích sinh trưởng (BAP và Kinetin) ở các dạng giá thể khác nhau đến khả năng hình thành cây hom Bình vôi (tỷ lệ nảy chồi, số lượng chồi, và chiều dài chồi)

- So sánh ảnh hưởng của 2 chất điều hòa sinh trưởng BAP và Kinetin đến kết quả giâm hom loài cây Bình vôi (tỷ lệ hom ra chồi, số chồi trung bình trên hom và chiều dài trung bình chồi trên hom)

3.4 Phương pháp nghiên cứu

3.4.1 Phương pháp kế thừa tài liệu

- Kế thừa tài liệu kết quả nghiên cứu về giâm hom của các loại cây của các tác giả trước đây

- Kế thừa tài liệu cơ sở vật chất tại nơi làm thí nghiệm, điều kiện khu

Giá thể giâm hom là cát sông và tầng đất B Trước khi cấy hom vào luống giâm tiến hành xử lý thể nền (phun dung dịch Benlate nồng độ 6g/11 lít nước cho 50m2, hoặc thuốc tím 0,1%) để giảm thiểu nguy cơ của nấm bệnh hại

+ Vật liệu giâm hom: Phần đầu của củ cây Bình vôi

+ Phương pháp lấy mẫu cắt hom: Hom được lấy từ cây mẹ sinh trưởng

tốt, không sâu bệnh Hom được cắt ngâm vào dung dịch thuốc Benlate nồng

độ 0,3% thời gian 15 phút, sau đó vớt vật liệu hom ra khay cho ráo nước Khi giâm hom chấm gốc hom vào dung dịch thuốc kích thích sao cho phủ kín mặt gốc của hom và cấy ngay vào luống

+ Chất điều hòa sinh trưởng được sử dụng là chất kích thích ra chồi BAP và Kinetin ở các nồng độ 10ppm, 20ppm và 30ppm dạng nước Hom sau khi xử lý được cắm vào 2 loại thể nền sau: thể nền 1: 100% là cát đã được làm sạch, thể nền 2: 70% cát sạch + 30% đất tầng B

- Tiến hành thí nghiệm và chăm sóc thí nghiệm:

+ Tiến hành thí nghiệm: tiến hành bố trí 10 công thức với các chất điều hòa sinh trưởng khác nhau, ở các nồng độ khác nhau và công thức đối chứng

Việc bố trí thí nghiệm như sau:

Nội dung 1:

+ Ảnh hưởng của nồng độ chất điều hòa sinh trưởng BAP ở các

dạng thể nền đến kết quả giâm hom:

Công thức 1 (CT1): Công thức đối chứng (thể nền 1, thể nền 2)

Công thức 2 (CT2): Hom giâm được xử lý bằng dung dịch BAP, nồng

độ 10 ppm (thể nền 1, thể nền 2)

Công thức 3 (CT3): Hom giâm được xử lý bằng dung dịch BAP, nồng

độ 20 ppm (thể nền 1, thể nền 2)

Công thức 4 (CT4): Hom giâm được xử lý bằng dung dịch BAP, nồng

độ 30 ppm (thể nền 1, thể nền 2)

+ Ảnh hưởng của nồng độ chất điều hòa sinh trưởng Kinetin ở các dạng thể nền đến kết quả giâm hom

Công thức 5 (CT5): Công thức đối chứng (thể nền 1, thể nền 2)

Công thức 6 (CT6): Hom giâm được xử lý bằng dung dịch Kinetin,

Lập bảng theo dõi các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình giâm hom và số

liệu thu thập cho nghiên cứu giâm hom được ghi vào các biểu sau:

Mẫu biểu 01: Ảnh hưởng của BAP đến kết quả thí nghiệm

Công thức

Thí nghiệm

(CTTN)

Loại thể nền

Số hom

TN

Số hom ra chồi Số chồi

/hom

Chiều dài chồi /hom

N %

ĐC Thể nền 1 45

Thể nền 2 45 10ppm Thể nền 1 45

Thể nền 2 45 20ppm Thể nền 1 45

Thể nền 2 45 30ppm Thể nền 1 45

N %

ĐC Thể nền 1 45

Thể nền 2 45 10ppm Thể nền 1 45

Thể nền 2 45 20ppm Thể nền 1 45

Thể nền 2 45 30ppm Thể nền 1 45

Thể nền 2 45

3.4.3 Phương pháp nội nghiệp

Các số liệu được thu thập, đo đếm được xử lý theo phương pháp thống kê toán học và bằng phần mềm Excel trên máy tính

Một số chỉ tiêu được xác định như sau:

- Tính các đặc trưng mẫu tỷ lệ (X%): Hom sống, hom chết, hom ra

chồi theo công thức:

- Tính giá trị trung bình và các đặc trưng mẫu cho các chỉ tiêu: Số chồi trung bình/hom, chiều dài chồi Sử dụng chương trình Excel để tính toán

- Kiểm tra ảnh hưởng của chất điều hòa sinh trưởng đến khả năng ra chồi bằng phương pháp phân tích phương sai 2 nhân tố và tiêu chuẩn χ2

của Pearson

Giả thuyết: Ho: Các mẫu thuần nhất về chất

H1: Có sự sai khác về chỉ tiêu so sánh giữa các mẫu quan sát

χ2 được so sánh với χ2

05 tra trong bảng χ2

α theo bậc tự do K [ K = (a-1) x (b-1)

PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN

4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ và loại chất kích thích sinh trưởng ở các dạng thể nền khác nhau đến khả năng hình thành cây hom ở Bình vôi

4.1.1 Ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau đến một số chỉ tiêu giâm hom củ loài Bình Vôi

4.1.1.1 Ảnh hưởng của BAP đến tỷ lệ hom ra chồi

Từ bảng tổng hợp 4.1 rút ra kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khách nhau đến tỷ lệ hom ra chồi của Bình vôi trong bảng 4.2 và hình 1.1 như sau:

Bảng 4.2 Ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau

đến tỷ lệ hom ra chồi

Loại thể

nền

Kết quả giâm hom

Nồng độ Đối chứng 10ppm 20ppm 30ppm

Hình ảnh 01: Xử lý bằng BAP 20ppm ở thể nền 1 và 2

Qua bảng 4.2 và hình 1.1 cho thấy, khi xử lý củ Bình vôi bằng BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau cho tỷ lệ hom ra chồi có sự khác biệt rõ rệt Trong đó công thức xử lý cho tỷ lệ hom ra chồi cao nhất là BAP nồng độ 20ppm ở thể nền 1 với 35 hom ra chồi đạt 77,78%, tiếp đó là BAP nồng độ 10ppm ở thể nền 2 với 34 hom ra chồi đạt 75,60% Còn 2 công thức là BAP nồng độ 30ppm ở cả 2 thể nền đều cho ra tỷ lệ hom ra chồi thấp chỉ có 18

hom ra chồi tương ứng với 40% Khi kiểm tra ảnh hưởng của thể nền và nồng

độ BAP đến tỷ lệ hom ra chồi bằng mô hình phân tích phương sai 2 nhân tố,

ta thấy:

- Với ảnh hưởng của thể nền ta có FA = 3,17 < F05 (k1=1, k2=3) =10,13

như vậy thể nền khác nhau chưa cho thấy sự ảnh hưởng khác nhau đến tỷ lệ hom ra chồi

- Với công thức ảnh hưởng của nồng độ BAP ta có FB = 35,1 > F05

(k1=3, k2=3) = 10,13 Như vậy nồng độ BAP khác nhau đã có ảnh hưởng rất khác nhau đến tỷ lệ hom ra chồi Dựa vào tiêu chuẩn Duncan ở bảng cuối cùng ta thấy BAP ở nồng độ 20ppm thể nền 1 cho tỷ lệ hom ra chồi 77,8%

là công thức cho kết quả tốt nhất

4.1.1.2 Ảnh hưởng của BAP đến số chồi trên hom

- Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau đến số lượng chồi của Bình vôi được tổng hợp trong bảng 4.3 và hình 1.2 sau:

Bảng 4.3 Ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác nhau

đến số chồi trên hom Nồng độ

Hình 1.2: Biểu đồ ảnh hưởng của BAP ở các nồng độ và thể nền khác

nhau đến số chồi trên hom

Qua bảng 4.3 và biểu đồ 1.2 ta thấy số lượng chồi trung bình trên một hom dao động từ 1,78 – 3,55 chồi/hom Hai công thức có số chồi trung bình trên hom tốt nhất là công thức thí nghiệm BAP nồng độ 10ppm, thể nền 1 cho

số chồi trung bình trên hom cao nhất có 3,55 chồi /hom, tiếp đó là công thức thí nghiệm BAP nồng độ 20ppm ở thể nền 1 có 3,17 chồi/hom Trong khi đó công thức đối chứng và xử lý BAP ở nồng độ 30ppm ở thể nền 1 cho số

chồi/hom thấp có 2,17 và 1,78 chồi/hom

Kiểm tra ảnh hưởng của thể nền và nồng độ BAP đến số lượng chồi trên hom, mô hình phân tích phương sai 2 nhân tố, ta thấy:

- Với ảnh hưởng của thể nền ta có FA = 0,734< F05 =10,13 như vậy ảnh

hưởng của công thức thể nền là không rõ ràng

- Với công thức ảnh hưởng của nồng độ BAP ta có FB = 0,041 < F05 = 10,13 Như vậy ảnh hưởng của nồng độ BAP khác nhau là khác nhau không

rõ ràng Dựa vào tiêu chuẩn Duncan ở bảng cuối cùng ta thấy BAP ở nồng