nghiên cứu nhân giống in vitro lan hoàng thảo kèn (dendrobium lituiflorum)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM BÙI DANH CHUNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN HOÀNG THẢO KÈN (DENDROBIUM LITUIFLORUM) LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI, NĂM 2015 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM BÙI DANH CHUNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN HOÀNG THẢO KÈN (DENDROBIUM LITUIFLORUM) Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Mã số : 60.42.02.01 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Lâm Hải HÀ NỘI – NĂM 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 26 tháng 11 năm 2015 Tác giả luận văn Bùi Danh Chung Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thị Lâm Hải tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt trình học tập thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Công nghệ sinh học thực vật, Khoa Công nghệ sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ trình học tập, thực đề tài hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức trường Cao đẳng Nông Lâm Đông Bắc giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích hoàn thành luận văn./ Hà Nội, ngày 26 tháng 11 năm 2015 Học viên Bùi Danh Chung Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam đoan i lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục biểu đồ vii Danh mục sơ đồ viii Danh mục biểu đồ viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract x Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu chung 2.1.1 Vị trí phân bố chi Hoàng Thảo (Dendrobium) 2.1.2 Phân loại chi lan Hoàng Thảo 2.1.3 Đặc điểm hình thái chi lan Hoàng Thảo 2.1.4 Đặc điểm sinh thái học chi lan Hoàng Thảo 2.1.5 Một số đặc điểm loài lan Hoàng Thảo Kèn 2.1.6 Giá trị sử dụng thực trạng khai thác lan Hoàng Thảo Kèn 2.2 Các nghiên cứu nhân giống in vitro lan hoàng thảo 2.2.1 Tình hình nhân giống lan Hoàng Thảo giới 2.2.2 Tình hình nhân giống lan Hoàng Thảo nước 12 2.3 Vai trò chất điều hòa sinh trưởng 13 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 3.1 Địa điểm nghiên cứu Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 15 15 Page iii 3.2 Thời gian nghiên cứu 15 3.3 Vật liệu nghiên cứu 15 3.4 Nội dung nghiên cứu 15 3.5 Phương pháp nghiên cứu 15 3.5.1 Nội dung 1: Gieo hạt điều kiện in vitro 15 3.5.2 Nội dung 2: Nhân nhanh protocorm (thể tiền chồi) 16 3.5.3 Nội dung 3: Nhân nhanh cụm chồi 17 3.5.4 Nội dung 4: Tạo rễ cho chồi 19 3.5.5 Nội dung 5: Ra vườn ươm 19 3.6 Điều kiện thí nghiệm 20 3.7 Các tiêu theo dõi phương pháp đánh giá 20 3.8 Phương pháp xử lý số liệu 21 Phần Kết thảo luận 22 4.1 Kết 22 4.1.1 Gieo hạt điều kiện in vitro 22 4.1.2 Nhân nhanh protocorm từ hạt gieo 23 4.1.3 Nhân nhanh cụm chồi từ protocorm 27 4.1.4 Tạo hoàn chỉnh 31 4.1.5 Thích ứng in vitro vườn ươm 33 4.2 Thảo luận 36 4.2.1 Gieo hạt điều kiện in vitro 36 4.2.2 Nhân nhanh protocorm từ hạt gieo 37 4.2.3 Nhân nhanh cụm chồi từ protocorm 38 4.2.4 Tạo hoàn chỉnh 39 4.2.5 Thích ứng in vitro vườn ươm 40 Phần Kết luận kiến nghị 41 5.1 Kết luận 41 5.2 Kiến nghị 42 Tài liệu tham khảo 44 Phụ lục 47 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BA : Benzyladenine CT : Công thức CTTN : Công thức thí nghiệm CV% : Hệ số biến động (Correlation of Variants) Cs : Cộng ĐC : Đối chứng H : Hyponex HSN : Hệ số nhân IAA : Indoleacetic acid IBA : Indolylbutyrique acid LSD : Sai khác tối thiểu có ý nghĩa P = 0,5 (Least Significant Defference) MS : Murashige & Shoog, 1962 Ki : Kinetin NAA : Naphtylacetique acid ND : Nước dừa TB : Trung bình THT : Than hoạt tính ∑ : Tổng số Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân nhanh protocorm lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Bảng 4.2 23 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh protocorm lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Bảng 4.3 25 Ảnh hưởng BA kết hợp với α-NAA đến khả nhân nhanh protocorm lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Bảng 4.4 26 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân nhanh cụm chồi lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Bảng 4.5 27 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh cụm chồi lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Bảng 4.6 29 Ảnh hưởng Kinetin kết hợp với α-NAA đến khả nhân nhanh cụm chồi lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Bảng 4.7 30 Ảnh hưởng dịch nghiền chất hữu tự nhiên đến khả nhân nhanh cụm chồi lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Bảng 4.8 31 Ảnh hưởng α-NAA đến khả tạo rễ lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Bảng 4.9 32 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống chất lượng lan Hoàng Thảo Kèn vườn ươm 34 Bảng 4.10 Ảnh hưởng chiều cao, số lá, số rễ in vitro đến tỷ lệ sống chất lượng lan Hoàng Thảo Kèn vườn ươm Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 35 Page vi DANH MỤC BIỂU ĐỒ Hình 2.1 Hoa lan Hoàng Thảo Kèn Hình 4.1 Kết gieo hạt lan Hoàng Thảo Kèn Hình 4.2 Kết nhân nhanh protocorm môi trường MS bổ sung Kinetin 22 với nồng độ khác (sau tuần nuôi cấy) Hình 4.3 24 Đồ thị biểu diễn hệ số nhân protocorm môi trường MS bổ sung BA với nồng độ khác (sau tuần nuôi cấy) Hình 4.4 25 Kết nhân nhanh protocorm môi trường MS bổ sung BA với nồng độ khác (sau tuần nuôi cấy) Hình 4.5 26 Kết nhân nhanh protocorm môi trường MS bổ sung 0,5mg/l BA kết hợp với α-NAA đến khả nhân nhanh protocorm lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Hình 4.6 27 Kết nhân nhanh cụm chồi môi trường MS bổ sung Kinetin với nồng độ khác (sau tuần nuôi cấy) Hình 4.7 28 Kết nhân nhanh cụm chồi môi trường MS bổ sung BA với nồng độ khác (sau tuần nuôi cấy) Hình 4.8 29 Kết nhân nhanh cụm chồi môi trường MS bổ sung 0,5mg/l Kinetin kết hợp với α-NAA đến khả nhân nhanh cụm chồi lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) Hình 4.9 30 Kết nhân nhanh cụm chồi môi trường MS bổ sung 0,5mg/l Kinetin kết hợp dịch nghiền chất hữu tự nhiên đến khả nhân nhanh cụm chồi lan Hoàng Thảo Kèn (sau tuần nuôi cấy) 31 Hình 4.10 Kết rễ chồi lan Hoàng Thảo Kèn môi trường MS có bổ sung α-NAA (sau tuần nuôi cấy) Hình 4.11 Cây in vitro vườn ươm Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 33 34 Page vii DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 5.1 Quy trình nhân nhanh in vitro lan Hoàng Thảo Kèn 42 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Hệ số nhân cụm chồi môi trường MS bổ sung Kinetin với nồng độ khác (sau tuần nuôi cấy) 28 Biểu đồ 4.2 Số rễ chồi lan Hoàng Thảo Kèn môi trường MS bổ sung α-NAA với nồng độ khác (sau tuần nuôi cấy) 32 Biểu đồ 4.3 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống lan Hoàng Thảo Kèn vườn ươm (sau 30 ngày trồng) 34 Biểu đồ 4.4 Ảnh hưởng chiều cao, số lá, số rễ in vitro đến tỷ lệ sống lan Hoàng Thảo Kèn vườn ươm (sau 30 ngày trồng) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 36 Page viii Bước 1: Vào mẫu Quả lan tháng khử trùng dung dịch H202 5% + Javen 5% phút, sau nhúng cồn 960 đốt tháng Bước 2: Nhân nhanh protocorm Nhân protocorm môi trường: MS + (20g sacaroza + 7g agar + 100ml ND + 0,5g THT + 0,5mg BA)/lít môi trường tháng Bước 3: Nhân nhanh cụm chồi Nhân cụm chồi môi trường: MS + (20g sacaroza + 7g agar + 100ml ND + 0,5g THT + 0,5mg Kinetin)/lít môi trường tháng Bước 4: Tạo rễ Tạo môi trường: MS + (20g sacaroza + 7g agar + 100ml ND + 0,5g THT + 0,5mg α-NAA)/lít môi trường tháng Bước 5: Trồng Trồng vườn ươm giá thể xở dừa (cây cao 4cm, lá, rễ) Sơ đồ 5.1: Quy trình nhân nhanh in vitro lan Hoàng Thảo Kèn 5.2 KIẾN NGHỊ Để có kết hoàn thiện lan Hoàng Thảo Kèn, có số kiến nghị sau: - Tiếp tục tiến hành thí nghiệm sử dụng loại môi trường gieo hạt khác để tìm môi trường thích hợp cho việc gieo hạt lan Hoàng Thảo Kèn - Tiến hành thí nghiệm nhân nhanh protocorm, cụm chồi Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 42 môi trường khác để tìm môi trường phù cho lan Hoàng Thảo Kèn - Tiến hành nghiên cứu tỷ lệ sống in vitro vườn ươm mùa vụ khác để tìm mùa vụ cấy thích hợp cho lan Hoàng Thảo Kèn - Tiến hành nghiên cứu chế phẩm dinh dưỡng khác đến khả sinh trưởng lan Hoàng Thảo Kèn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2006) Nhân giống lan Dendrobium anosmum, Dendrobium mini phương pháp nuôi cấy mô Nghiên cứu loại giá thể trồng lan Dendrobium mini thích hợp cho hiệu cao Bùi Thu Hiền (2009) Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật nâng cao suất, chất lượng hoa lan Hoàng Thảo lai (Dendrobium hybryd) Luận văn thạc sĩ Nông Nghiệp, Học viện Nông Nghiệp Việt Nam Trần Hợp (1990) Phong lan Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật Trần Hợp (2001) Phong lan Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật Dương Đức Huyến (2007) Thực vật chí Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội Vũ Ngọc Lan, Nguyễn Hữu Cường Nguyễn Văn Giang (2010) Ảnh hưởng giá thể trồng đến trình sinh trưởng lan Hoảng thảo trúc đen (Dendrobium hancockii Rolfe) Tạp chí khoa học phát triển 8(5) tr 757-764 Vũ Ngọc Lan (2011) Nghiên cứu thu thập đánh giá, nhân giống in vitro nuôi trồng số giống lan chi Hoàng thảo (Dendrobium) làm thuốc Báo cáo đề tài trọng điểm cấp Bộ Giáo dục Đào tạo Trần Văn Minh (1999) Giáo trình công nghệ sinh học thực vật, Viện sinh học nhiệt đới Trần Văn Minh, Nguyễn Văn Uyển (2001) Vi nhân giống phong lan nhóm Dendrobium quy mô công nghiệp, nhân giống in vitro Tạp chí Khoa học công nghệ, (1) tr 1-9 10 Đặng Thị Nhàn (2014), xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro giống lan Thạch hộc Thiết bì (Dendrobium officenale Kimura et Migo), Viện Sinh học Nông nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Báo cáo tốt nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam 11 Nguyễn Thị Sơn, Nguyễn Thị Lý Anh, Vũ Ngọc Lan, Trần Thế Mai (2012) Nhân giống in vitro loài lan Dendrobium Fimbriatum Hook (Hoàng Thảo long nhãn) Tạp chí Khoa học Phát triển, 10(2) tr 263-271 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 44 12 Nguyễn Thị Sơn (2014) Nhân giống in vitro Dendrobium officinale Kimura et Migo (Thạch hộc Thiết bì) cung cấp nguyên liệu cho thực phẩm chức Tạp chí Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Việt Nam, (5B): 718-725 13 Mai Thị Tân, Vũ Thị Thu Hiền, Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Trường Sơn (2000) Nghiên cứu tạo nhân nhanh protocorm lan Dendrobium E.R Kỷ yếu kết nghiên cứu khoa học 1997-1999 nữ cán giảng dạy nghiên cứu khoa học Nhà xuất Nông nghiệp 14 Nguyễn Quang Thạch, Vũ Ngọc Lan, Nguyễn Xuân Trường, Nguyễn Công Hoan, Nguyễn Thị Lý Anh (2004) Nghiên cứu nhân nhanh hoa chuông (Sinningia speciosa), Tạp chí Khoa học kỹ thuật Nông nghiệp, (4) tr 239-244 15 Bùi Thị Tường Thu, Trần Văn Minh (2007) Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến trình nuôi cấy phát sinh tế bào soma phôi vô tính hoa lan (Dendrobium, Phalaenophsis, Cymbium), Hội nghị Khoa học Công nghệ tr 503-508 16 Đào Thanh Vân Đặng Thị Tố Nga (2008) Giáo trình hoa lan, NXB Nông nghiệp Hà Nội TIẾNG NƯỚC NGOÀI 17 B Kanjilal (1999) Mass Rapid cloanal propagation of Dendrobium moschatum through the culture of stem disks 18 Chen, J.-T., and W.-C Chang (2000) Efficient plant regenration through somatic embryogenesis from callus cultures of Oncidium (Orchidaceae) Plant Sci 160 pp 87-93 19 George, E.F (1993) Shipment and distribution In: Storing and distributing clonal material In: Plant propagation by tissue culture Part 1, technology Exegetics Ltd., Edington, Wetsbury, Wilts, England 20 LIU Hui-qing, ZHANG Ai-xang, CHANG Mei-hua, LIU Qing, GONG Xuecheng (2008) Study on Stem Section Reproduction of Dendrobe nobile in vitro 21 Luan, H., Peabody, N.C., Vinson, C.R., White, B.H (2006) Refined spatial manipulation of neuronal function by combinatorial restriction of transgene expression 52(3) pp 425 436 22 Manorama P, Rao AN, Goh CJ, Loh CS (1986) Leaf callus development in Aranda and Dendrobium In: Rao AN, ed Proceedings of the 5th ASEAN Orchid Congress, Singapore pp 102–109 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 45 23 M.F Kabir, M.S Rahman, A Jamal, M Rahman and M Khalekuzzaman (2013) Multiple shoot regeneration in Dendrobium fimbriatum Hook an ornamental orchid The Journal of Animal and Plant Sciences Vol 22(4) pp 1140-1145 24 Nayak NR, Rath SP, Patnaik S (1997) In vitro propagation of three epiphytic orchid Cymbidium, Dendrobium, aphyllum and Dendrobium moschatum through TDZ – induced high frequency shoot proliferation Sci Hort 71 pp 243-250 25 Pant, B., and Thapa D (2012) In vitro mass propagation of epiphytic orchid, Dendrobium primulinum Lindll Through shoot tip culture African Journal of Biotechnology Vol 11(42) pp 9970-9974 26 Robert L Dressler (1993) Phylogeny and Classification of the Orchid Family, Cambridge University Press, United States of America 27 Roy J, Naha S, Majumdar M, Banerjee N (2007) Direct and callus mediated protocorm like body induction from shoot tips of Dendrobium chrysotoxum Lindl Plant Cell Tiss Organ Cult, 90 pp 31-39 28 Steward and Simmonds (1954) Growth promoting substances in the ovary and immature fruit of the banana Nature London EngLand, 43 pp 1083-1084 29 Urvashi Sharma, V., Rama Rao, V., Mohan, J S S & Reddy, A S (2007) In vitro propagation of Dendrobium microbulbon A Rich – A rare ethnomedicinal herb Indian J Biotechn pp 381-384 30 Zimmerman, M.C (1993) The use of the biotic index as an indication of water quality Tested studies for laboratory teaching pp 85-98 INTERNET 31 www.caycanhvietnam.com 32 www.hoacaycanh.com 33 http://www.hoalanvietnam.org 34 http://hoalancaycanh.com 35 http://everything-orchids.com/Dendrobium-orchid.html 36 http://orchid.com.vn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 46 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: MÔI TRƯỜNG MS (1962) SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU Thành phần Lượng lấy 1lít dung dịch mẹ Đa lượng (g) NH4NO3 33,00 KNO3 38,00 MgSO4.7H2O 10,00 KH2PO4 3,40 CaCl2 (pha riêng) 6,60 Vi lượng (mg) H3BO4 620,00 MnSO4.4H2O 2230,00 ZnSO4.4H2O 860,00 KI 83,00 MoNa2.2H2O 25,00 CoCl2.6H2O 2,50 CuSO4.5H2O 2,50 Sắt (g) FeSO4.7H2O 5,56 Na2EDTA 7,46 Vitamin (mg) Glycine 400 Axit Nicotinic (B5) 100 Pyridoxin (B6) 100 Thyamin HCl (B1) 20 Inositol 100 lít môi trường sử dụng Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 50ml/lít 10ml/lít 5ml/lít 5ml/lít Page 47 PHỤ LỤC 2: BẢNG XỬ LÝ SỐ LIỆU THÍ NGHIỆM Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến nhân nhanh protocorm BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLP FILE BOOK1 17/ 9/** 13:49 PAGE Anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh Protocorm VARIATE V003 SLP LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2426.04 485.209 17.76 0.000 * RESIDUAL 12 327.787 27.3156 * TOTAL (CORRECTED) 17 2753.83 161.990 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNP FILE BOOK1 17/ 9/** 13:49 PAGE Anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh Protocorm VARIATE V004 HSNP LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 973983 194797 22.77 0.000 * RESIDUAL 12 102675 855623E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.07666 633328E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK1 17/ 9/** 13:49 PAGE Anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh Protocorm MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 SLP 202.733 203.600 232.267 222.733 204.933 203.200 HSNP 4.05133 4.07200 4.64533 4.45417 4.09867 4.06400 SE(N= 3) 3.01748 0.534048E-01 5%LSD 12DF 9.29789 0.164558 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK1 17/ 9/** 13:49 PAGE Anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh Protocorm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLP HSNP GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 211.58 18 4.2310 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 12.728 5.2264 2.5 0.0001 0.25166 0.92500E-01 2.2 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 48 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến nhân nhanh protocorm BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLP FILE BOOK2 17/ 9/** 13:55 PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh Protocorm VARIATE V003 SLP LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 5959.34 1191.87 27.00 0.000 * RESIDUAL 12 529.734 44.1445 * TOTAL (CORRECTED) 17 6489.08 381.711 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNP FILE BOOK2 17/ 9/** 13:55 PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh Protocorm VARIATE V004 HSNP LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2.39751 479502 43.29 0.000 * RESIDUAL 12 132907 110756E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 2.53042 148848 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK2 17/ 9/** 13:55 PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh Protocorm MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 SLP 200.267 248.733 237.067 221.733 212.733 199.400 HSNP 4.00533 4.97427 4.74800 4.43427 4.25427 3.98800 SE(N= 3) 3.83599 0.607606E-01 5%LSD 12DF 11.8200 0.187224 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK2 17/ 9/** 13:55 PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh Protocorm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLP HSNP GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 219.99 18 4.4009 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 19.537 6.6441 3.0 0.0000 0.38581 0.10524 2.4 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 49 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng BA + α-NAA đến nhân nhanh protocorm BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLP FILE BOOK3 17/ 9/** 14: PAGE Anh huong cua BA + α-NAA den kha nang nhan nhanh Protocorm VARIATE V003 SLP LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2041.84 510.460 5.96 0.010 * RESIDUAL 10 855.760 85.5760 * TOTAL (CORRECTED) 14 2897.60 206.971 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNP FILE BOOK3 17/ 9/** 14: PAGE Anh huong cua BA + α-NAA den kha nang nhan nhanh Protocorm VARIATE V004 HSNP LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 806312 201578 7.60 0.005 * RESIDUAL 10 265374 265374E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.07169 765490E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK3 17/ 9/** 14: PAGE Anh huong cua BA + α-NAA den kha nang nhan nhanh Protocorm MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SLP 247.533 226.000 230.200 220.733 212.533 HSNP 4.94633 4.52000 4.60400 4.41427 4.25067 SE(N= 3) 5.34091 0.940521E-01 5%LSD 10DF 16.8294 0.296362 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK3 17/ 9/** 14: PAGE Anh huong cua BA + α-NAA den kha nang nhan nhanh Protocorm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLP HSNP GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 227.40 15 4.5471 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 14.387 9.2507 4.1 0.0104 0.27667 0.16290 3.6 0.0047 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 50 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến nhân nhanh cụm chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLC FILE BOOK4 17/ 9/** 14:29 PAGE Anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh cum choi VARIATE V003 SLC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 15081.2 3016.25 ****** 0.000 * RESIDUAL 12 22.8272 1.90227 * TOTAL (CORRECTED) 17 15104.1 888.475 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BOOK4 17/ 9/** 14:29 PAGE Anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh cum choi VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 6.03250 1.20650 381.69 0.000 * RESIDUAL 12 379314E-01 316095E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 6.07043 357084 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK4 17/ 9/** 14:29 PAGE Anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh cum choi MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS 3 3 3 SLC 162.600 204.267 239.333 214.800 175.067 160.867 HSNC 3.25200 4.08533 4.78667 4.29600 3.50133 3.21733 SE(N= 3) 0.796297 0.324600E-01 5%LSD 12DF 2.45366 0.100020 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK4 17/ 9/** 14:29 PAGE Anh huong cua nong Kinetin den kha nang nhan nhanh cum choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLC HSNC GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 192.82 18 3.8564 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 29.807 1.3792 0.7 0.0000 0.59757 0.56222E-01 1.5 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 51 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến nhân nhanh cụm chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLC FILE BOOK5 17/ 9/** 14:38 PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh cum choi VARIATE V003 SLC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3439.40 687.879 421.72 0.000 * RESIDUAL 12 19.5735 1.63112 * TOTAL (CORRECTED) 17 3458.97 203.469 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BOOK5 17/ 9/** 14:38 PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh cum choi VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.37576 275152 65.74 0.000 * RESIDUAL 12 502293E-01 418577E-02 * TOTAL (CORRECTED) 17 1.42599 838817E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK5 17/ 9/** 14:38 PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh cum choi MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS 3 3 3 SLC 162.800 197.933 201.267 196.733 182.133 175.867 HSNC 3.25600 3.95867 4.02533 3.93427 3.64267 3.51733 SE(N= 3) 0.737365 0.373532E-01 5%LSD 12DF 2.27207 0.115098 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK5 17/ 9/** 14:38 PAGE Anh huong cua nong BA den kha nang nhan nhanh cum choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLC HSNC GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 186.12 18 3.7224 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 14.264 1.2772 0.7 0.0000 0.28962 0.64698E-01 1.7 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 52 Thí nghiệm 6: Nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin + α-NAA đến nhân nhanh cụm chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLC FILE BOOK6 17/ 9/** 14:45 PAGE Anh huong cua Kinetin + α-NAA den kha nang nhan nhanh cum choi VARIATE V003 SLC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2248.67 562.167 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 5.33329 533329 * TOTAL (CORRECTED) 14 2254.00 161.000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BOOK6 17/ 9/** 14:45 PAGE Anh huong cua Kinetin + α-NAA den kha nang nhan nhanh cum choi VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 899467 224867 41.54 0.000 * RESIDUAL 10 541334E-01 541334E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 953601 681143E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK6 17/ 9/** 14:45 PAGE Anh huong cua Kinetin + α-NAA den kha nang nhan nhanh cum choi MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SLC 238.667 207.000 215.000 208.333 206.000 HSNC 4.77333 4.14000 4.30000 4.16667 4.12000 SE(N= 3) 0.421635 0.424788E-01 5%LSD 10DF 1.32859 0.133852 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK6 17/ 9/** 14:45 PAGE Anh huong cua Kinetin + α-NAA den kha nang nhan nhanh cum choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLC HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 215.00 15 4.3000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 12.689 0.73029 0.3 0.0000 0.26099 0.73575E-01 1.7 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 53 Thí nghiệm 7: Nghiên cứu ảnh hưởng dịch nghiền hữu đến nhân nhanh cụm chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLC FILE BOOK7 17/ 9/** 14:53 PAGE Anh huong cua dich nghien huu co den kha nang nhan nhanh cum choi VARIATE V003 SLC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 787.729 262.576 163.68 0.000 * RESIDUAL 12.8333 1.60416 * TOTAL (CORRECTED) 11 800.562 72.7784 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BOOK7 17/ 9/** 14:53 PAGE Anh huong cua dich nghien huu co den kha nang nhan nhanh cum choi VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 315092 105031 63.98 0.000 * RESIDUAL 131333E-01 164166E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 328225 298386E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK7 17/ 9/** 14:53 PAGE Anh huong cua dich nghien huu co den kha nang nhan nhanh cum choi MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SLC 239.167 218.000 221.333 224.000 HSNC 4.78333 4.36000 4.42667 4.48000 SE(N= 3) 0.731246 0.233927E-01 5%LSD 8DF 2.38452 0.762813E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK7 17/ 9/** 14:53 PAGE Anh huong cua dich nghien huu co den kha nang nhan nhanh cum choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLC HSNC GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 225.63 12 4.5125 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 8.5310 1.2666 0.6 0.0000 0.17274 0.40517E-01 0.9 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 54 Thí nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE BOOK8 17/ 9/** 15:50 PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re VARIATE V003 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 69.6000 17.4000 362.50 0.000 * RESIDUAL 10 480000 480000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 70.0800 5.00571 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE BOOK8 17/ 9/** 15:50 PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re VARIATE V004 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 838468 209617 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 149170E-02 149170E-03 * TOTAL (CORRECTED) 14 839960 599971E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BOOK8 17/ 9/** 15:50 PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS 3 3 SR 17.0000 19.0000 23.0000 22.0000 21.0000 CDR 2.76800 2.86900 3.40000 3.13444 2.82556 SE(N= 3) 0.126491 0.705147E-02 5%LSD 10DF 0.398578 0.222194E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BOOK8 17/ 9/** 15:50 PAGE Anh huong cua nong NAA den kha nang re F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SR CDR GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 20.400 15 2.9994 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.2373 0.21909 1.1 0.0000 0.24494 0.12214E-01 0.4 0.0000 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp | | | | Page 55 KHOA: CÔNG NGHỆ SINH HỌC BỘ MÔN: CÔNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh Phúc THỰC VẬT Ngày tháng năm 2015 BẢN NHẬN XÉT THỰC TẬP ĐỀ TÀI LUẬN VĂN Họ tên học viên: Bùi Danh Chung Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Khoá: K22 Tên đề tài: “Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hoàng Thảo Kèn (Dendrobium lituiflorum)” Địa điểm thời gian thực đề tài: - Địa điểm: Bộ môn Công nghệ sinh học – Khoa Nông học – Trường Cao đẳng Nông Lâm Đông Bắc, Minh Thành – Quảng Yên – Quảng Ninh - Thời gian: Từ ngày 1/1/2015 đến ngày 31/10/2015 Tinh thần, thái độ - Ý thức thực đề tài: Nghiêm túc Bình thường Chưa nghiêm túc - Báo cáo kết thực tập lịch: Có Không Mức độ hoàn thành báo cáo tốt nghiệp - Hoàn thành tốt: - Hoàn thành: - Không hoàn thành: + Có lý khách quan: + Không có lý do: Nhận xét lực viết báo cáo khoa học - Nắm cách viết báo cáo khoa học: Tốt TB Dưới TB - Lý giải đầy đủ kết nghiên cứu theo khả bước nâng cao trình độ: Tốt TB Dưới TB Ý kiến cho bảo vệ luận văn - Đồng ý cho bảo vệ, sửa luận văn: - Đồng ý cho bảo vệ phải sửa luận văn nghiêm túc: - Không đồng ý cho bảo vệ: GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 56 [...]... nhanh đối với loài lan Hoàng Thảo Kèn - Nghiên cứu môi trường tối ưu nhân nhanh cụm chồi phát sinh từ protocorm của loài lan Hoàng Thảo Kèn - Nghiên cứu môi trường tối ưu tạo rễ cho chồi của loài lan Hoàng Thảo Kèn - Nghiên cứu giá thể ra cây tối ưu của loài lan Hoàng Thảo Kèn 3.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương pháp nuôi cấy mô quy chuẩn hiện hành được áp dụng để nghiên cứu nhân giống lưu trữ, bảo quản... tài Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hoàng Thảo Kèn (Dendrobium lituiflorum) với mục đích nhân giống và bảo tồn loài lan đặc hữu này một cách hữu hiệu nhất 1.2 MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI 1.2.1 Mục tiêu nghiên cứu Nhân giống được loài lan Hoàng Thảo Kèn bằng phương pháp nuôi cấy mô 1.2.2 Yêu cầu - Xác định được môi trường tối ưu nhân nhanh protocorm lan Hoàng Thảo Kèn - Xác định được môi trường tối ưu nhân. .. Nam cũng đã có nhiều nghiên cứu trên các giống lan Hoàng Thảo khác nhau Viện Sinh học nông nghiệp – Đại học Nông nghiệp Hà Nội đã tiến hành nghiên cứu trên nhiều đối tượng lan Hoàng thảo như: Nghiên cứu nhân nhanh protocorm và chồi lan Dendrobium E.R (Mai Thị Tân và cs., 2000), nghiên cứu nhân giống in vitro giống lan Thạch hộc (D.nobile Lindl.) (Vũ Ngọc Lan và cs, 2011), nhân nhanh lan Dendrobium Hancockii... PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU - Bộ môn Công nghệ sinh học - Khoa Nông học – Trường Cao đẳng Nông Lâm Đông Bắc – Minh Thành – Quảng Yên – Quảng Ninh 3.2 THỜI GIAN NGHIÊN CỨU - Từ tháng 01 năm 2015 đến tháng 10 năm 2015 3.3 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU - Quả lan Hoàng Thảo Kèn (Dendrobium lituiflorum) 5 tháng tuổi thu thập tại Lai Châu 3.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Nghiên cứu lựa chọn môi trường tối ưu nhân. .. sinh từ protocorm của lan Hoàng Thảo Kèn - Xác định được môi trường tối ưu tạo rễ cho chồi của lan Hoàng Thảo Kèn - Xác định được giá thể ra cây tối ưu lan Hoàng Thảo Kèn 1.3 PHẠM VI NGHIÊN CỨU - Lan Hoàng Thảo Kèn tại Miền Bắc Việt Nam 1.4 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI, Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 1.4.1 Ý nghĩa khoa học Kết quả nghiên cứu của đề tài là dẫn liệu khoa học có giá trị về quy trình nhân. .. HSN chồi Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng của Kinetin kết hợp với α-NAA đến khả năng nhân nhanh cụm chồi lan Hoàng Thảo Kèn Nồng độ 0,5mg/l Kinetin là nồng độ tối ưu nhất cho việc nhân nhanh cụm chồi của cây lan Hoàng Thảo thu được trong thí nghiệm 4 và 5 Kinetin ở nồng độ tối ưu đó sẽ được chọn để bổ sung kết hợp với α-NAA vào môi trường nhân nhanh cụm chồi lan Hoàng Thảo Kèn theo các công thức sau: CT1: ĐC...TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hoàng Thảo Kèn (Dendrobium lituiflorum) nhằm mục đích để nhân giống và bảo tồn được lan Hoàng Thảo Kèn Các thí nghiệm thiết kế theo phương pháp khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh (RCB), mỗi công thức tiến hành 3 lần lặp lại Kết quả cho thấy nguyên liệu sử dụng thích hợp là quả lan 5 tháng tuổi; môi trường gieo hạt là MS + (10g... nhiễm và tỷ lệ phát sinh protocorm 3.5.2 Nội dung 2: Nhân nhanh protocorm (thể tiền chồi) Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của Kinetin đến khả năng nhân nhanh protocorm lan Hoàng Thảo Kèn CT1: MS + (20g sacaroza + 7g agar + 100ml ND + 0,5g THT)/lít môi trường (ĐC) CT2: ĐC + 0,1mg/L Kinetin CT3: ĐC + 0,5mg/L Kinetin CT4: ĐC + 1,0mg/L Kinetin CT5: ĐC + 1,5mg/L Kinetin CT6: ĐC + 2,0mg/L Kinetin Thí nghiệm được tiến... 3: Nhân nhanh cụm chồi Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng của Kinetin đến khả năng nhân nhanh cụm chồi lan Hoàng Thảo Kèn CT1: MS + (20g sacaroza + 7g agar + 100ml ND + 0,5g THT)/lít môi trường (ĐC) CT2: ĐC + 0,1mg/L Kinetin CT3: ĐC + 0,5mg/L Kinetin CT4: ĐC + 1,0mg/L Kinetin CT5: ĐC + 1,5mg/L Kinetin CT6: ĐC + 2,0mg/L Kinetin Thí nghiệm được tiến hành cấy vào mỗi bình 5 cụm, mỗi cụm 10 protocorm đã phát sinh... cả cây Chi phí sản xuất ở thái lan khoảng 2.200 – 2.500 đồng 1 cây in vitro và giá bán dao động từ 3.000 – 7.000 đồng Năm nay điều kiện tự nhiên khô hạn nên quả lép và rụng hết từ sớm, còn ở tự nhiên thì rất khó tìm quả 2.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY LAN HOÀNG THẢO 2.2.1 Tình hình nhân giống lan Hoàng Thảo trên thế giới Một số kết quả đạt được trong nhân giống một vài loài Dendrobium