thí nghiệm hóa sinh

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Bộ môn Vi sinh-Hóa sinh- Sinh học phân tử TÓM TẮT THỰC HÀNH THÍ NGHIỆM HÓA SINH Hà nội, 2016 Lịch Thí nghiệm Kỳ II-Năm học 2015-2016 Tuần 29 (22/2-27/2/2016) Bài 1: Xác định hàm lượng nitơ tổng số phương pháp Ken-đan Tuần 30(29/2-5/3) Bài 2: Xác định hàm lượng protein hoà tan phương pháp Lowry Tuần 31(7/3-12/3) Bài Xác định hàm lượng đường khử tổng (theo phương pháp Rodzevich) Tuần 32 (14/3-19/3) Bài Xác định hàm lượng đường không khử (saccarose thủy phân, xác định đường khử theo phương pháp Rodzevich) Tuần 33: Nghỉ Tuần 34 (28/3-2/4) Bài 5: Phân tích thành phần đường/oligosaccharit sắc ký lớp mỏng (TLC) Tuần 35 (4/4-9/4) Bài 6: Xác định hàm lượng vitamin C 2,6 diclophenolindophenol (2,6 DCIP) Tuần 36 (11/4-16/4) Bài 7: Xác định hoạt độ enzym glucoamylase Bài 8: Xác định hoạt độ enzym protease theo phương pháp Anson cải tiến Tuần 37 (18/4-23/4) Bài Xác định số hóa lý chất béo (chỉ số axit, xà phòng peroxyt) Tuần 38 (25/4-30/4) Ôn thi Tuần 39 (18/5-23/5) Thi kết thúc học phần Lịch thí nghiệm: Thời gian Mã lớp GV phụ trách Thứ 13h3017h30 650276 650277 Cô Kim Anh/ Thầy Cương Thứ 13h3017h30 650278 650279 Thứ 13h3017h30 650280 650281 Thầy Cương / Cô Kim Anh Cô Kim Anh/ Thầy Cương Thứ 13h3017h30 650282 650283 Thầy Hòa/thầy Phong Thứ 13h30-17h30 Thứ 7h30-11h30 650284 650285 650286 650287 Thầy Phong/Thày Hòa Thầy Hòa/Thày Phong Địa điểm: C10-Phòng 108A 108B Tài liệu: - Thí nghiệm Hoá sinh công nghiệp - Đặng Thị Thu, Tô Kim Anh, Nguyễn Thị Xuân Sâm Trường Đại học Bách khoa HN 1997 - Tài liệu Hướng dẫn thực hành, Bộ môn Hoá sinh- ĐHBK HN 2015 Yêu cầu: o Trước đến làm thí nghiệm sinh viên tìm hiểu nguyên tắc phương pháp, bước tiến hành thí nghiệm, thiết lập công thức tính toán kết thí nghiệm o Có mặt giờ, tham gia đầy đủ thí nghiệm o Tuân thủ nguyên tắc an toàn phòng thí nghiệm o Làm thí nghiệm theo nhóm báo cáo thí nghiệm theo yêu cầu Bài Xác định hàm lượng nitơ tổng số (theo phương pháp Ken-đan) Yêu cầu chuẩn bị: đọc kỹ tài liệu phần đốt đạm cất đạm Mẫu thí nghiệm: mẫu chứa nitơ, protein , PTN chuẩn bị Giai đoạn vô hoá: xem tài liệu Thí nghiệm Hoá sinh Công nghiệp Giai đoạn cất đạm: thực cất đạm lượng nhỏ Phần chuẩn bị - Kiểm tra mức nước bình tạo nước, bình nước sinh hàn Cho nước chạy qua sinh hàn Kiểm tra khoá cất Đun sôi nước bình tạo nước Cất đạm Mẫu thí nghiệm Chuẩn bị bình hấp thụ: Cho vào bình tam giác (cỡ 100ml): 20 ml H3BO3 3% (dùng ống đong) 2-3 giọt thị Taxiro Lắp bình vào cất đạm (đuôi ống sinh hàn ngập dung dịch ) Cho vào bầu cất (lần lượt) ml mẫu đạm thí nghiệm (dịch vô hoá) (dùng pipet) ml H2O (để tráng phễu) (dùng pipet) ml NaOH 40% (dùng ống đong) đóng khoá bầu cất Tiến hành cất Sau thấy dung dịch bình hấp thụ chuyển từ màu tím hồng xanh màu xanh đợi khoảng phút Hạ bình hấp thụ, dùng giấy quì tím hứng giọt nước ngưng chảy từ ống sinh hàn Nếu thấy giấy đổi màu, đặt bình hấp thụ vào vị trí cũ Trái lại, lấy bình hấp thụ khỏi cất (tia nước, tráng đầu cuối ống sinh hàn nước cất) Mẫu kiểm chứng Chuẩn bị bình hấp thụ: Cho vào bình tam giác (cỡ 100ml): 20 ml H3BO3 3% 2-3 giọt thị Taxiro Lắp bình vào cất đạm (đầu cuối ống sinh hàn ngập dung dịch !) Cho vào bầu cất: ml H2O (thay cho dịch vô hoá) ml H2O (để tráng phễu) ml NaOH 40% (dùng ống đong) đóng khoá bầu cất Tiến hành cất khoảng 3-5 phút dùng giấy quì tím thử điểm kết thúc trình cất kiểm tra tương tự mẫu thí nghiệm Rửa cất đạm: theo hướng dẫn trực tiếp phòng thí nghiệm 4 Định phân Định phân lượng (NH4)2B4O7 tạo bình hấp thụ H2SO4 0,1N Điểm tương đương phản ứng xác định dung dịch chuyển từ màu xanh qua màu tím hồng Ghi lượng H2SO4 0,1N dùng định phân cho mẫu thí nghiệm mẫu kiểm chứng Yêu cầu tính toán - tính tổng hàm lượng nitơ dịch cất đạm (%) biết ml H2SO4 0,1N tiêu tốn cho định phân tương ứng với 1,4 mg nitơ có mẫu cất; - giả thiết mẫu thí nghiệm dịch vô hoá protein kết tủa từ g mẫu định mức lên 100 ml Hãy tính hàm lượng protein (%) mẫu đầu Bài Xác định hàm lượng protein hòa tan (theo phương pháp Lowry) Mẫu thí nghiệm: mẫu thực phẩm chứa protein PTN chuẩn bị Chuẩn bị dịch protein phân tích - chuẩn bị 20 ml NaOH 0,1N vào cốc dung tích 100 ml - cân xác 0,3 g mẫu, chuyển mẫu vào cối, cho dung dịch NaOH 0,1N từ cốc vào để làm ẩm - nghiền mẫu - chuyển toàn mẫu vào bình tam giác dung tích 100 ml tráng cối chày dung dịch NaOH 0,1N lại - đặt bình mẫu vào nồi cách thuỷ để chiết protein 15 phút - lấy mẫu ra, làm nguội, trung hoà mẫu tới pH HCl 5%, dùng giấy pH làm thị - chuyển mẫu sang bình định mức 100 ml, định mức nước cất tới vạch Lắc - lọc trong, thu dịch lọc protein phân tích Làm phản ứng màu Chuẩn bị ống nghiệm khô, Mẫu thí nghiệm Lấy vào ống nghiệm 1: 0,3 ml dịch lọc protein (dùng pipet) ml dung dịch C (hỗn hợp dung dịch A:B=50:1 pha) (dùng pipet) Trộn Để yên phản ứng 10 phút Cho tiếp 0,3 ml dung dịch Folin Trộn Để phản ứng 30 phút Mẫu kiểm chứng (làm song song với mẫu thí nghiệm ) Lấy vào ống nghiệm 2: 0,3 ml nước cất (dùng pipet) ml dung dịch C (hỗn hợp dung dịch A:B=50:1 pha) (dùng pipet) Trộn Để yên phản ứng 10 phút Cho tiếp 0,3 ml dung dịch Folin Trộn Để phản ứng 30 phút Đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch phản ứng Đọc kỹ hướng dẫn sử dụng máy đo quang PTN Đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch màu ống thí nghiệm 750 nm, so sánh với mẫu kiểm chứng (có thể đo riêng dùng mẫu kiểm chứng để chỉnh máy) Ghi kết Sử dụng đường chuẩn protein để xác định hàm lượng protein dung dịch nghiên cứu Yêu cầu tính toán: - tính hàm lượng protein mẫu thí nghiệm theo % (w/w) Hướng dẫn xây dựng đồ thị đường chuẩn protein Dung dịch Albumin huyết thành bò (BSA) gốc: 0,5mg/ml Làm phản ứng màu: Chuẩn bị dãy ống nghiệm sạch, khô Lấy vào ống dung dịch với lượng tương ứng bảng sau Bảng chuẩn bị dung dịch (xây dựng đồ thị chuẩn cho phương pháp Lowry) Ống nghiệm BSA gốc 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,5mg/ml (ml) Nước cất (ml) 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 Dung dịch C ml) 5 5 5 Trộn để yên phản ứng 10 phút Dung dịch Folin 0.5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 (ml) Đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch phản ứng Trộn hỗn hợp phản ứng vortex, để yên phản ứng 30 phút Đo độ hấp thụ ánh sáng dung dịch phản ứng bước sóng 750nm với mẫu đối sánh mẫu ống nghiệm số Dựng đồ thị đường chuẩn theo số liệu đo 0.5 y = 0.8674x + 0.0045 R2 = 0.9994 0.45 0.4 OD 750nm 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 Nồng độ protein (mg/ml) Đồ thị đường chuẩn protein (BSA) Bài Xác định hàm lượng đường khử tổng số (theo phương pháp Rodzevich) Mẫu thí nghiệm: mẫu chứa đường khử (hoa quả, đường glucose ) Chuẩn bị dung dịch đường phân tích - Cân xác g mẫu cho vào cối nghiền nhỏ với lượng nhỏ nước cất - Chuyển mẫu vào bình tam giác 100 ml Tráng rửa cối, chày (khoảng 30 ml) - Trung hoà mẫu đến pH7 NaOH 5% với thị phenolphtalein - Đặt bình mẫu vào bình ổn nhiệt 70-80oC 15 phút để chiết đường - Làm nguội, kết tủa protein dịch mẫu axetat chì 10% Loại chì dư NaH2PO4 bão hoà - Chuyển hỗn dịch vào bình định mức 100 ml, định mức tới 100 ml nước cất - Lắc đều, lọc thu dịch lọc: dịch đường phân tích Xác định đường khử Mẫu kiểm chứng: Bình tam giác (bình 50ml): ml nước cất ml Felin 1 ml Felin Trộn mẫu Đun sôi phút, tính từ lúc xuất bọt khí Làm nguội ml H2SO425%, trộn mẫu ml KI 30%, trộn mẫu Để phản ứng 20 phút Chuẩn độ Na2S2O30,1N đến hết màu iốt (xuất màu trắng sữa toàn bình) Mẫu thí nghiệm: Bình tam giác (bình 50ml): ml dịch đường phân tích ml Felin 1 ml Felin 2 ml nước Trộn mẫu Đun sôi phút, tính từ lúc xuất bọt khí Làm nguội ml H2SO425%, trộn mẫu ml KI 30%, trộn mẫu Để phản ứng 20 phút Chuẩn độ Na2S2O30,1N đến hết màu iốt (xuất màu trắng sữa toàn bình) Yêu cầu tính toán: Tính hàm lượng đường khử tổng số (%), Biết ml Na2S2O3 0,1N tiêu tốn cho chuẩn độ tương đương với 3,3 mg đường khử có mẫu phân tích Bài Xác định hàm lượng saccarose (đường không khử) (theo phương pháp thủy phân với axit định lượng đường khử phương pháp DNS) Mẫu thí nghiệm: nước chứa saccarose Chuẩn bị dịch đường khử trước thuỷ phân Dùng pipet cho ml dịch mẫu nước vào bình định mức cỡ 100 ml Định mức nước cất tới vạch mức Trộn đều, dịch đường khử trước thuỷ phân Chuẩn bị dịch đường khử sau thuỷ phân saccarose Cho ml mẫu vào bình 100 ml (dùng pipet), thêm 19 ml nước cất (dùng ống đong) 10 ml HCl 5% (dùng ống đong) Lắp sinh hàn khí đun sôi cách thuỷ 30 phút để thuỷ phân saccarose Làm nguội trung hoà mẫu NaOH 5% với giấy thị pH Chuyển toàn hỗn hợp vào bình định mức cỡ 100 ml, định mức nước cất tới vạch mức Trộn đều, dịch đường khử sau thuỷ phân Xác định đường khử theo phương pháp Rodzevich (xem 3) Tính toán: Tính hàm lượng saccarose mẫu ban đầu theo % Bài Phân tích thành phần đường/oligosaccharit phương pháp sắc kí mỏng (Thin Layer Chromatography-TLC) - Mẫu phân tích: Hỗn hợp đường (môn- oligosaccharit) (PTN chuẩn bị) - Hệ dung môi: hỗn hợp n-propanol: nitromethan: nước = 7:1:2 (v/v/v) - Bản sắc ký: Sắc ký mỏng loại Silicagel 20x20cm - Chuẩn bị sắc ký: Cắt sắc ký theo kích thước hình dưới, lưu ý găng tay giữ mỏng Đường chấm mẫu mẫ umẫ ummẫ u - Chấm mẫu Đánh dấu vị trí tên mẫu Thao tác mang mẫu lên sắc ký thực sau: - Lấy mẫu ống mao quản thuỷ tinh Lưu ý không để lẫn ống/mẫu - Chấm mẫu vào vị trí chấm mẫu, đường kính vết loang không vượt mm - Chạy sắc kí - Đặt sắc kí chấm mẫu vào bình sắc ký có chứa dung môi hữu bão hoà dung môi, mép sắc kí nhúng vào dung môi (sao cho không ngâm ngập mẫu dung môi), mặt chấm mẫu hướng xuống phía - Quá trình chạy kết thúc vệt chạy dung môi cách mép tờ sắc kí 1cm - Lấy sắc kí ra, đánh dấu vị trí vệt dung môi - Sấy khô sắc kí - Phát mẫu - phun dung dịch H2SO4 5% cồn tuyệt đối lên sắc ký (hoặc nhúng nhanh sắc ký vào khay đựng dung dịch màu trên) - sấy khô sắc ký 1100C phút (hoặc hơ mỏng bếp điện), xuất dần vết màu - Ghi kết - xác định hệ số Rf vị trí mẫu đường/oligosaccharit - xác định tên vị trí đường/oligosaccharit có mẫu phân tích dựa mẫu chuẩn Ghi chú: Nguyên tắc chung phương pháp TLC trình bày chương Lipit Sách Thí nghiệm Hoá sinh công nghiệp 10 Bài Xác định hàm lượng vitamin C (phương pháp chuẩn độ 2,6 DCIP) Mẫu thí nghiệm: loại rau, hoa Chuẩn bị dịch chiết vitamin C phân tích Cân xác 10 g mẫu, cho vào cối, nghiền ngập axit HCl 1% Chuyển mẫu vào bình định mức cỡ 100 ml Định mức tới vạch HCl 1% Lắc đều, lọc thu dịch lọc vitamin C phân tích (Lượng mẫu lấy cho nồng độ vitamin C nằm khoảng 0,5 mg/ml) Chuẩn độ Mẫu thí nghiệm: Bình tam giác (cỡ 50 ml): 10 ml dịch lọc vitamin C phân tích (dùng pipet) ml Oxalatamon bão hoà (dùng pipet) Chuẩn độ 2,6 DCIP phân tích xuất màu hồng bền phút, (a ml) Mẫu kiểm chứng: Bình tam giác (cỡ 50ml): 10 ml HCl 1% (dùng pipet) ml Oxalatamon bão hoà Chuẩn độ 2,6 DCIP phân tích xuất màu hồng bền phút, (b ml) Xác định hệ số f Bình tam giác (cỡ 50ml): ml dịch vitamin C tinh khiết pha H2SO4 2% (dùng pipet) 2,5 ml Oxalatamon bão hoà Chuẩn độ 2,6 DCIP phân tích xuất màu hồng bền phút, (a1 ml) Bình tam giác (cỡ 50ml): ml dịch vitamin C tinh khiết (pha H2SO4 1%) Vài hạt tinh thể KI giọt hồ tinh bột Chuẩn độ KIO3 0,001N dung dịch xuất màu xanh, (b1 ml) Yêu cầu tính toán - tính hệ số f xác định nồng độ 2,6 DCIP dùng phân tích Hệ số f tính : f = b1 / a1 - Tính hàm lượng vitamin C mẫu thí nghiệm theo mg% Biết ml 2,6 DCIP 0,001 N tiêu tốn tương ứng với 0,088 mg vitamin C có mẫu phân tích 11 Bài Xác định hoạt độ protease (Theo phương pháp Anson cải tiến) Nguồn enzym: chế phẩm Alcalase 2,4L Novozyme , pH tối ưu Cơ chất: dung dịch casein 1% Đặt dung dịch chất enzym vào bình ổn nhiệt 300C 10 phút trước làm thí nghiệm Phản ứng enzym với chất (Làm song song mẫu thí nghiệm mẫu kiểm chứng) Mẫu thí nghiệm Mẫu kiểm chứng ống ống 2 ml dung dịch chất casein 1% pha ml dịch enzym pha đệm pH đệm pH (dùng pipet) để yên 10 phút nhiệt độ phòng ml dịch enzym pha đệm pH (dùng Bổ sung ml TCA 0,3M, trộn pipet) ml dung dịch chất casein 1% pha Trộn đều, để phản ứng 10 phút đệm pH 30oC (trong bình ổn nhiệt) Trộn đều, để yên hỗn hợp 20 Dừng phản ứng enzym ml TCA 0,3M phút (dùng pipet) Lọc, thu dịch lọc kiểm chứng Trộn để yên hỗn hợp 20 phút Lọc, thu dịch lọc thí nghiệm Xác định lượng axit amin giải phóng phản ứng (Làm song song mẫu thí nghiệm mẫu kiểm chứng) Mẫu sau thuỷ phân Mẫu đối chứng ống 0,3 ml dịch lọc thí nghiệm (dùng pipet) ống 0,3 ml dịch lọc kiểm chứng 1,5 ml Na2CO3 0,5M (dùng pipet) 1,5 ml Na2CO3 0,5M Trộn đều, để 10 phút Trộn đều, để 10 phút Thêm 0.3 ml dung dịch Folin (dùng Thêm 0.3 ml dung dịch Folin pipet) Để phản ứng 20 phút Để phản ứng 20 phút Đo DO (=750 nm) đối ngược với mẫu đối chứng Yêu cầu tính toán - Tra đồ thị đường chuẩn hàm lượng tyrosin mật độ quang - Thành lập công thức tính hoạt độ proteaza chế phẩm enzym (U/ml ) Định nghĩa: đơn vị hoạt độ protease lượng enzym cần thiết thời gian phút 30oC thủy phân casein thành lượng sản phẩm không bị kết tủa axit tricloaxetic tương đương với mol tyrosin 12 XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN TYROSIN Pha dãy nồng độ dung dịch tyrosin chuẩn Pha dung dịch tyrosin gốc µmol/ml (cân 1,81 mg pha 10 ml nước cất) Pha dung dịch tyrosin 0,5 µmol/ml (lấy ml dung dịch tyrosin gốc + ml TCA 0.3M) Pha dãy nồng độ theo bảng sau: Ống Tyrosine 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,5µmol/ml (ml) Nước cất 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 (ml) Trộn Nồng độ 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 tyrosine đem làm phản ứng màu (µmol/ml) Làm phản ứng màu Dung dịch 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Tyrosine (ml) Dung dịch 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 Na2CO3 (ml) Dung dịch Folin 0.5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 (ml) Trộn đều, Để phản ứng 20 phút Đo OD 750 nm Dựng đường chuẩn 13 Bài Xác định hoạt độ glucoamylase (Theo phương pháp DNS) Nguồn enzym: chế phẩm Glucoamylase (AMG) Novozyme Cơ chất: dung dịch hồ tinh bột 1% Đặt dung dịch chất enzym vào bình ổn nhiệt 300C 10 phút trước làm thí nghiệm Tiến hành (Làm song song mẫu thí nghiệm mẫu kiểm chứng) Các bước tiến hành Ống nghiệm (mẫu thí nghiệm) Bước 1: phản - 0,25ml dịch enzym phân tích (đã ứng xúc tác 30oC) thủy phân tinh - 0.25 ml dung dịch hồ tinh bột 1% bột (đã 30oC) - Trộn để phản ứng 10 phút 30oC Bước Vô - Dừng phản ứng enzym 1,5 hoạt enzyme, ml DNS dừng phản ứng - Trộn Bước 3: Định - Đun sôi cách thuỷ dung dịch lượng sản phản ứng phút (khi nồi cách phẩm tạo thủy sôi cho mẫu vào) thành - Làm nguội nhanh Thêm 10 ml nước cất (dùng pipet) Trộn mẫu - Đo mật độ quang (=540 nm) đối ngược với mẫu kiểm chứng Ống nghiệm (mẫu kiểm chứng) 0.25ml dịch enzym phân tích Dừng phản ứng enzym 1.5 ml DNS Trộn 0.25 ml dung dịch hồ tinh bột 1%, Trộn Đun sôi cách thuỷ dung dịch phản ứng phút (khi nồi cách thủy sôi cho mẫu vào) Làm nguội nhanh Thêm 10 ml nước cất (dùng pipet) Trộn mẫu Yêu cầu xác định hoạt độ glucoamylase (HĐGA) theo số đơn vị hoạt độ ml chế phẩm enzym kỹ thuật (U/ml) Định nghĩa: - đơn vị hoạt độ glucoamylase lượng enzym cần thiết thời gian 30oC thủy phân tinh bột tan giải phóng mg glucose 14 Xây dựng đường chuẩn cho phương pháp DNS Dung dịch glucose gốc: 2mg/ml Tiến hành: Chuẩn bị dãy ống nghiệm sạch, khô Bổ sung dung dịch theo thứ tự bảng sau Ống Dung dịch glucose gốc 2mg/ml (ml) Nước cất (ml) Dung dịch DNS (ml) 0,5 1.5 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 Đun sôi phút, làm nguội nhanh nước lạnh Thêm 10ml nước cất Trộn dung dịch phản ứng vortex Đo độ hấp phụ ánh sáng dung dịch bước sóng 540nm với mẫu đối sánh mẫu ống nghiệm số Đường chuẩn DNS ( 1/2015) y = 0.7739x - 0.0061 R2 = 0.9997 1.8 1.6 OD 540nm 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.5 1.5 2.5 Nồng độ đường (mg/ml) 15 Bài Xác định số hoá lý dầu thực vật (Theo sách Thí nghiệm Hoá sinh Công nghiệp) 16 [...]... phẩm Glucoamylase (AMG) của Novozyme Cơ chất: dung dịch hồ tinh bột 1% Đặt dung dịch cơ chất và enzym vào bình ổn nhiệt 300C 10 phút trước khi làm thí nghiệm Tiến hành (Làm song song mẫu thí nghiệm và mẫu kiểm chứng) Các bước tiến hành Ống nghiệm 1 (mẫu thí nghiệm) Bước 1: phản - 0,25ml dịch enzym phân tích (đã ở ứng xúc tác 30oC) thủy phân tinh - 0.25 ml dung dịch hồ tinh bột 1% bột (đã ở 30oC) - Trộn... TCA 0,3M phút (dùng pipet) Lọc, thu dịch lọc kiểm chứng Trộn đều và để yên hỗn hợp trong 20 phút Lọc, thu dịch lọc thí nghiệm 2 Xác định lượng axit amin giải phóng ra trong phản ứng (Làm song song mẫu thí nghiệm và mẫu kiểm chứng) Mẫu sau thuỷ phân Mẫu đối chứng ống 3 0,3 ml dịch lọc thí nghiệm (dùng pipet) ống 4 0,3 ml dịch lọc kiểm chứng 1,5 ml Na2CO3 0,5M (dùng pipet) 1,5 ml Na2CO3 0,5M Trộn đều,... Novozyme , pH tối ưu 7 Cơ chất: dung dịch casein 1% Đặt dung dịch cơ chất và enzym vào bình ổn nhiệt 300C 10 phút trước khi làm thí nghiệm 1 Phản ứng enzym với cơ chất (Làm song song mẫu thí nghiệm và mẫu kiểm chứng) Mẫu thí nghiệm Mẫu kiểm chứng ống 1 ống 2 2 ml dung dịch cơ chất casein 1% pha trong 2 ml dịch enzym pha trong đệm pH 7 đệm pH 7 (dùng pipet) để yên trong 10 phút ở nhiệt độ phòng 2 ml dịch... chuẩn độ bằng 2,6 DCIP) Mẫu thí nghiệm: các loại rau, hoa quả 1 Chuẩn bị dịch chiết vitamin C phân tích Cân chính xác 10 g mẫu, cho vào cối, nghiền ngập trong axit HCl 1% Chuyển mẫu vào bình định mức cỡ 100 ml Định mức tới vạch bằng HCl 1% Lắc đều, lọc và thu dịch lọc vitamin C phân tích (Lượng mẫu được lấy sao cho nồng độ vitamin C nằm trong khoảng 0,5 mg/ml) 2 Chuẩn độ Mẫu thí nghiệm: Bình tam giác 1... lượng vitamin C trong mẫu thí nghiệm theo mg% Biết 1 ml 2,6 DCIP 0,001 N tiêu tốn tương ứng với 0,088 mg vitamin C có trong mẫu phân tích 11 Bài 7 Xác định hoạt độ protease (Theo phương pháp Anson cải tiến) Nguồn enzym: chế phẩm Alcalase 2,4L của Novozyme , pH tối ưu 7 Cơ chất: dung dịch casein 1% Đặt dung dịch cơ chất và enzym vào bình ổn nhiệt 300C 10 phút trước khi làm thí nghiệm 1 Phản ứng enzym... hấp phụ ánh sáng của dung dịch tại bước sóng 540nm với mẫu đối sánh là mẫu trong ống nghiệm số 1 Đường chuẩn DNS ( 1/2015) y = 0.7739x - 0.0061 R2 = 0.9997 1.8 1.6 OD 540nm 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 Nồng độ đường (mg/ml) 15 Bài 9 Xác định các chỉ số hoá lý của dầu thực vật (Theo sách Thí nghiệm Hoá sinh Công nghiệp) 16 ... cần thiết trong thời gian 1 giờ ở 30oC thủy phân tinh bột tan giải phóng được 1 mg glucose 14 Xây dựng đường chuẩn cho phương pháp DNS 1 Dung dịch glucose gốc: 2mg/ml 2 Tiến hành: Chuẩn bị 1 dãy 6 ống nghiệm sạch, khô Bổ sung lần lượt các dung dịch theo thứ tự trong bảng sau Ống Dung dịch glucose gốc 2mg/ml (ml) Nước cất (ml) Dung dịch DNS (ml) 1 0 0,5 1.5 2 0,1 3 0,2 4 0,3 5 0,4 6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1... sản phản ứng 5 phút (khi nồi cách phẩm tạo thủy sôi mới cho mẫu vào) thành - Làm nguội nhanh Thêm 10 ml nước cất (dùng pipet) Trộn đều mẫu - Đo mật độ quang (=540 nm) đối ngược với mẫu kiểm chứng Ống nghiệm 2 (mẫu kiểm chứng) 0.25ml dịch enzym phân tích Dừng phản ứng enzym bằng 1.5 ml DNS Trộn đều 0.25 ml dung dịch hồ tinh bột 1%, Trộn đều Đun sôi cách thuỷ dung dịch phản ứng 5 phút (khi nồi cách thủy