Bài : NUÔI CẤY VI SINH VẬT THU CHẾ PHẨM ENZYM Bài thí nghiệm ni cấy mơi trường nào>? Phương pháp nuôi cấy bề mặt môi trường cám trấu Phương pháp ni cấy chìm mơi trường lỏng Môi trường Shapec tinh bột môi trường hutchinson có thành phần nào? Mơi trường Hutchinson : KNO3 2,5 K2HPO4 1,0 MgSO4 0,3 CaCl2 0,1 NaCl 0,1 FeCl3 0,01 Agar 3% Nước máy 1000ml nguyên tắc xác định định tính hoạt lực enzim? enzim từ vi sinh vật so với động vật thực vật khác lấy dẫn chứng? Enzyme từ vi sinh vật có hoạt lực cao nhiều so với enzyme từ động thực vật Vd Trong 24h VSV chuyển hóa lg gấp 30-40 lần trọng lượng thể enzyme lơn 50kg chuyển hóa đc vài ba kg thức ăn ngày enzim gì? Enzyme chất xúc tác có chất protein thể tổng hợp tham gia vào phản ứng sinh học protein coi enzim? Protein coi enzyme protein hoạt hóa Protein hoạt hóa protein có tâm hoạt động tạo lớp vỏ hydrat hóa Khi khơng hoạt hóa khơng nhận biết chất nên không hoạt động phân loại enzim? Theo nguồn gốc enzyme chia làm loại - từ động vật, thực vật vsv Theo cấu trúc hệ enzyme: enzyme thành phần thành phần Theo loại phản ứng mà enzyme xúc tác: có loại : oxydoreductase, transferase, lyase , isomerase, ligase,hidroase Theo đặc hiệu enzyme: đặc hiệu phản ứng đặc hiệu chất Theo mơi trường có theo nhiệt độ theo pH asp usami, asp oryzae, End, asp niger chứa loại enzim vd usami cho amylaza amylaza có glucoza, dextrinaza anpha beta usami cho cụ thể enzym gì? Asp usami: dextrinase, glucoamylase asp oryzae : alpha amylase có phương pháp pháp ni cấy đối tượng, đặc điểm, ưu nhược điểm phương pháp Có phương pháp ni cấy : phương pháp nuôi cấy bề mặt phương pháp nuôi cấy bề sâu phương pháp phương pháp chìm - Phương pháp bề mặt: * đối tượng ( môi trường ) : cám gạo cám mì - Đặc điểm : vsv phát triển bao phủ bề mặt hạt chất dinh dưỡng rắn làm ẩm, dung làm môi trường, VSV lấy thức ăn từ chất chứa môi trường sd phân tử oxy kk để hô hấp VSV phát triển nhanh chóng nấm mốc k thu nuôi dưỡng dồi nên tân tạo enzyme hồn thành nhanh chóng : 36-48 tiếng - Phương pháp nuôi cấy bề sâu: : đối tượng : vsv phát triển môi trường lỏng - Đặc điểm: thơi đọc trang 412 hóa sinh cơng nghiệp nhé: dài ))))))))))))))) Khi so sánh phương pháp người ta thấy phương pháp ni cấy bề mặt có số ưu điểm sau: nồng độ enzyme tạo thành canh trường bề mặt lớn bề sâu nhiều Dù bị pha lỗng dịch trích ly từ canh trường bề mặt nấm mốc vấn có hoạt độ enzyme cao Một ưu điểm canh trường nấm mốc bề mặt sấy khơ dễ dàng nhanh chóng mà k gây tổn thất đáng kể đến hoạt độ enzyme( dễ dàng chuyên chở trường hợp mà chất lượng k bị giảm sút ) Ngoài canh trường bề mặt xảy mơi trường khơng thật trùng Đó ưu nhược điểm canh trường bề sâu sai sót nhỏ làm nhiễm trùng hoàng loạt ngừng vc tạo enzyme Tuy nhiên pp chìm xét tính chất kỹ thuật đại dễ dàng khí hóa tự động hóa.chuyển sang quy mơ lớn dễ dàng 10 vai trò cám gạo, trấu, ngơ, gelatin? Tạo cho môi trường cấu trúc cần thiết trạng thái ẩm cung cấp lượng tinh bột cần thiết cho tổng hợp enzyme Nếu hàm lượng tinh bột cám 20% hoạt lực enzyme bị giảm 11 nhóm tơi bảo cám, nguồn cung cấp dinh dưỡng vs tinh bột sao? Thấy bảo vsv dị dưỡng ak nên phải cung cấp tinh bột :v Bài : Xác định hoạt lực HdG chế phẩm nuôi cấy bề mặt Câu : Mục đích thí nghiệm : Xác định hoạt lực Glucoamilaza chế phẩm nuôi cấy bề mặt Cụ thể xác định enzyme glucoamylaza lấy từ môi trường cám trấu( định lượng )) môi trường Hutchinson ( định tính) Câu : Khuẩn lạc gì? Khuẩn lạc tập hợp sợi nấm dc hình thành từ TB ni cấy ban đầu Câu 3: Cách tiến hành Tự đọc Câu : Tại phải nghiền nhỏ chế phẩm enzyme? Phải nghiền nhỏ emzyme để phá vỡ cấu trúc sợi nấm , giải phóng tồn enzyme, giúp hòa tan hết lượng enzyme Câu : Tại nghiền 5g? thiếu có k? Nếu 5g nồng độ enzyme nhỏ => khó phân tích ( rõ đặc trưng Nếu nhiều 5g tỉ lệ thu hồi nhỏ Dù lượng enzyme nhiều => khơng đánh giá xác hoạt lực enzyme ( lượng enzyme hòa tan vào dd bão hòa ko tan => mát lượng enzyme) Câu : tác dụng dung dịch đệm? Trong dung dịch đệm sử dụng lần : Lân : thu dịch chiết (5ml) Được sử dụng để ổn định pH tạo môi trường tốt cho vsv phát triển từ đầu Nếu không tạo cho chúng điều kiện tốt để phát triển giai đoạn sau dù tạo điều kiện chúng k thể phát triển hồn tồn( khơng tạo hoạt lực mong đợi) Lần : Khi thực phản ứng thủy phân (2ml) Câu 7: Enzyme amilaza có loại? loại : α-amilaza, β- amilaza, γ-amilaza, dextrinaza, amylopectin, dextrin-1,6glucosidaza Tính chất có đầy đủ tính chất enzyme Câu : câu hỏi liên quan đến dextrin Dextrin sản phẩm trung gian q úa trình phân giải tính bột Dextrin phân tử lượng lớn tạo màu với Iot phân tử lượng nhỏ khơng Dextrin có khả hoạt hóa cao, tham gia vào hình thành ổn định cấu trúc bâc protein Câu câu hỏi j mà liên quan đến phân cắt enzyme - α- amilaza nấm mơc thủy phân tinh bột có giai đoạn cắt • Dextrin hóa • Đường hóa Cắt gốc - > glucoza Cắt gốc -> Maltoza Cắt nhiều gốc -> dextrin Enzyme α-amilaza cắt liên kết α-1,4-glicozit tinh bột khơng có trật tự, cắt ngẫu nhiên, Giai đoạn dextrin hóa độ nhớt tinh bột giảm Từ α- amilaza có sản phẩm chủ yếu dextrin , phần glucoza - - Enzyme β-amilaza cắt liên kết α1,4 glicozit từ đầu khử, cắt theo trật tự gốc glucoza Thành phần chủ yếu Maltoza ( 54-58%) phần dextrin có PTL lớn có màu tím đỏ với iot Ezyme γ amylaza ( glucoamilaza) Cắt α1,4 1,6 glicozit từ đầu k khử, cắt gốc Sản phẩm glucoza Câu 17: Phương trình phản ứng : tự tìm Câu 18 :Hoạt lực ? lượng chất hoăc sản phẩm tạo thành enzyme đơn vị tg trọng lượng enzyme sử dụng đkiện t0, pH… xác định Câu 19: Có cần thiết vơ hoạt hồn tồn không? Không cần thiết ( không ) Các yếu tố ảnh hưởng đến vô hoạt: To, lượng enzyme, thời gian vô hoạt Câu 20: Tại phải sử dụng mẫu kiểm chứng? Để xem tác dụng tác nhân vly hóa học hoạt lực enzyme bị ảnh hưởng ntn? Câu 21 Ca2+ , Mg2+ ảnh hưởng j đến hoạt lực enzyme α-amilaza? Câu 22: chế thủy phân enzyme amilaza thí nghiệm hóa sinh hay hỏi câu thí nghiệm nuôi cấy môi trường môi trường shapec tinh bột, hutchinson có thành phần 3.nguyên tắc xác định định tính hoạt lực enzim có shapec tinh bột thaafy chuẩn bị vs hutchinson tinh bột lại lại enzim từ vi sinh vật so với động vật thực vật khác lấy dẫn chứng 5.enzim protein coi enzim phân loại enzim 8.asp usami, asp oryzae, End, asp niger chứa loại enzim vd usami cho amylaza amylaza có glucoza, dextrinaza anpha beta usami cho cụ thể enzym Biểu tượng cảm xúc smile có phương pháp pháp nuôi cấy đối tượng, đặc điểm, ưu nhược điểm phương pháp 10 môi trương tiệt trùng xong làm nguội có nước ngưng đem cấy xong lật lại nước ngưng sử dụng để làm 11.vai trò cám gạo, trấu, ngơ, gelatin 12 nhóm tơi bảo cám, ngoo cung cấp dinh dưỡng vs tinh bột 13 có bốn cốc riêng biệt để cân lại cần cốc Một số gợi ý trả lời • So sánh hoạt lực enzym: Không so sánh thực phản ứng thủy phân đối tượng chất enzym khác (đã nói từ đầu) Ai trả lời hoạt lực enzym mạnh (cao) khơng tính (câu hỏi so sánh ko phải đánh giá) • Xác định chất protein hay hết theo thời gian: Dựa phản ứng protein fehling I môi trường kiềm (hóa chất sử dụng) • Tại phải đun sôi phản ứng đường khử Phản ứng oxi hóa khử đường tạo fehling I phản ứng thu nhiệt, ko phải tỏa nhiệt • Vai trò nước phản ứng đường khử Ngăn phản ứng chuyển hóa Cu(OH)2 thành Cu2O • So sánh hoạt lực enzym tiến hành định tính So sánh Endo Usami • Các a xít aamin làm cho protein có khả xúc tác Aspatic, systein, serin, glutamic….(đã nói 2) • Dùng cuvet Các cuvet làm vật liệu có khác độ chiết quang, dùng hay nhiều cuvet khác làm cho kết ko xác khác độ chiết quang gây • • • • • • Vật liệu làm môi trường nuôi cấy thu enzym Dựa đặc điểm sinh lý loại cấy để tổng hợp enzym Các thành phần sử dụng phải đám bảo cung cấp thành phần dinh dưỡng cần thiết cho sinh tổng hợp enzym Khơng có chứa độc tố (chất ức chế) q trình sinh tổng hợp enzym (đã nói rõ 1) Hiện tượng quan sát thủy phân protein - Mẫu thủy phân: màu sắc hỗn hợp dịch chiết chất ban đầu cho TCA thay đổi giải thích - Mẫu kiểm chứng: Màu sắc hỗn dịch chiết TAC cho chất vào thay đổi giải thích Hiện tượng quan sát thủy phân tinh bột - Mẫu thủy phân lượng chất thay đổi sau thời gian phản ứng - Mẫu kiểm chứng mầu sắc thực phản ứng tinh bột I theo thời gian Mục đích mẫu kiểm chứng - Để đánh giá ảnh hưởng yếu tố ảnh hưởng đến hoạt lực enzym (nhiệt độ (bài 2), chất kìm hãm, ức chế (bài 3)) Vắn tắt đặc điểm enzym - Tối thiểu nêu enzym nhóm enzym (nội, ngoại) có khả phân cắt liên kết gì, cắt nào, cho sản phẩm Nếu nói thêm tính đặc hiệu, đánh giá cao hơn) Khi dùng định tính, định lượng - Định tính muốn đánh giá nhanh hoạt lực enzym Định lượng muốn đánh giá xác khả chuyển hóa chất enzym đến đâu - Về mối quan hệ định tính định lượng: Định tính tảng để thực định lượng (đã nói rõ 1) Các yếu tố ảnh hưởng - Dựa khả nhận thức đánh giá người giống kết xảy - • ... điểm sinh lý loại cấy để tổng hợp enzym Các thành phần sử dụng phải đám bảo cung cấp thành phần dinh dưỡng cần thi t cho sinh tổng hợp enzym Khơng có chứa độc tố (chất ức chế) trình sinh. .. enzyme đơn vị tg trọng lượng enzyme sử dụng đkiện t0, pH… xác định Câu 19: Có cần thi t vơ hoạt hồn tồn khơng? Khơng cần thi t ( không ) Các yếu tố ảnh hưởng đến vô hoạt: To, lượng enzyme, thời gian... α-amilaza? Câu 22: chế thủy phân enzyme amilaza thí nghiệm hóa sinh hay hỏi câu thí nghiệm ni cấy mơi trường mơi trường shapec tinh bột, hutchinson có thành phần 3.nguyên tắc xác định định tính hoạt lực