giáo trình thí nghiệm hóa sinh

BÀI 1: KHẢO SÁT HỆ SINH VẬT TRONG NƯỚC THẢI I DỤNG CỤ-MƠI TRƯỜNG-HĨA CHẤT: Dụng cụ: Kính hiển vi quang học Phiến kính, kính Hộp Petri Ống nghiệm Que cấy đầu tròn, đầu nhọn Pipet Đèn cồn Bình tia Mơi trường- hóa chất: Nước muối sinh lý 0,9% Mẫu nước thải Nước cất vô trùng Cồn 960 • Mơi trường ni cấy vi khuẩn: Mơi trường cao thịt – peptone: Cao thịt: 0,6g Peptone: 2g NaCl: 1g Agar: 4g Thêm nước cất đủ 200ml Lắc đều, điều chỉnh pH=7,0±0,2 Nấu sôi nhẹ, phân phối môi trường vào dụng cụ để khử trùng 1210C 30 phút • Mơi trường ni cấy nấm men: Mơi trường Hasen: Glucose, maltose (hoặc đường kính):10g Peptone: 2g K2HPO4: 0,6g MgSO4.7H2O: 0,4-1g Agar: 4g Thêm nước cất đủ: 200ml Lắc đều, điều chỉnh pH= 6,0±0,2 Nấu sôi nhẹ, phân phối môi trường vào dụng cụ để khử trùng 1210C 30 phút • Mơi trường ni cấy nấm mốc: Môi trường czapek: Saccarose: 6g NaNO3: 6g K2HPO4: 0,2g MgSO4: 0,1g FeSO4: 0,1g Agar: 4g pH= 6,0±0,2 khử trùng 1atm/30 phút • Mơi trường ni cấy xạ khuẩn: Mơi trường Gause1: Tinh bột tan: 4g K2HPO4: 0,1g MgSO4.7H2O: 0,1g KNO3: 0,2g NaCl: 0,1g FeSO4: 0,02g Agar: 4g Thêm nước cất đủ: 200ml pH= 7,2 ÷ 7,4 khử trùng 1atm/30 phút • Mơi trường ni cấy tảo: Mơi trường Tamiya: KNO3: 1g MgSO4: 0,5g K2HPO4: 0,25g FeSO4.7H2O : 0,006g EDTA: 0,0074g Agar: 4g Thêm nước cất đủ: 200ml II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: • Chuẩn bị loạt ống nghiệm chứa sẵn 9ml nước muối sinh lí vơ trùng • Hút 1ml mẫu nước ao, hồ, tiến hành pha lỗng đến nồng độ 10-6 • Lấy nồng độ pha lỗng cuối để cấy • Hút 0.1ml mẫu nồng độ nhỏ lên bề mặt môi trường nuôi cấy đĩa petri cấy ria đĩa nồng độ 10-1 để phân lập • Dùng que trang, trải mẫu lên khắp bề mặt thạch • Để khơ lật úp đĩa lại, gói đem ủ Riêng đĩa Petri ni cấy tảo đem ngồi sáng, khơng cần ủ • Sau 3-5 ngày xem kết III KẾT QUẢ: Khuẩn lạc số Hình dạng Đường kính (mm) Độ sáng,độ Màu sắc Bề mặt mép Hình cầu Đục Trắng Phẳng Khơng elip Đục Trắng Phẳng Không 10 Trắng Trắng Lồi Khơng lõm Vẽ hình Đều elip Trắng đục Trắng Hoa Trắng đục Trắng Khơng Hình tham khảo: khuẩn lạc nấm men khuẩn lạc nấm mốc xạ khuẩn BÀI ĐỊNH LƯỢNG TẢO ĐƠN BÀO TRONG NƯỚC AO, HỒ BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM TRỰC TIẾP I DỤNG CỤ- MƠI TRƯỜNG-HĨA CHẤT: Dụng cụ: Kính hiển vi quang học Phiến kính, kính Ống nghiệm Pipet 1ml Đèn cồn Bình tia Mơi trường-hóa chất: Nước muối sinh lý 0,9% Mẫu nước ao, hồ Nước cất vô trùng Cồn 960 II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: Đặt lamelle phủ lên khung đếm Dùng ống nhỏ giọt hút dung dịch mẫu pha loãng, bỏ vài giọt đầu vào rãnh buồng đếm, dung dịch thấm vào kẽ buồng đếm lamelle Dung dịch chảy tràn từ từ vào rãnh, lan tỏa lắp đầy khắp lamelle, thừa Nếu bị giọt mắc lại lamelle phải làm lại Đặt buồng đếm lên bàn kẹp kính hiển vi, dùng kẹp cố định buồng đếm Thao tác kính hiển vi, dùng vật kính x10 để điều chỉnh sơ trước, sau dùng kính x40 để đếm Đếm số tế bào ô lớn (4 ô cạnh, ô giữa), đếm ô nhỏ ô lớn Trong tất ô nhỏ cần đếm số tế bào nằm hẳn ô trước, sau đếm số tế bào nằm cạnh phía cạnh bên phải ô Đếm tất 80 ô nhỏ có ô lớn (trường hợp: ô lớn có 16 ô nhỏ) Hoặc đếm 125 ô nhỏ có lớn (trường hợp: lớn có 25 nhỏ) Cơng thức tính: Số tế bào/1 ml mẫu = (a x 4.000 x 1.000)/H a: Số tế bào trung bình có nhỏ (V = 1/4.000 mm3) 4.000 = Số qui đổi từ 1/4.000 mm3 thành mm3 1.000 = Số qui đổi từ mm3 thành ml (1ml = 1.000 mm3) H= hệ số pha lỗng ( ví dụ: H= 10-2) II KẾT QUẢ: Số tế bào/1 ml mẫu = (a x 4.000 x 1.000)/H =11×4000 ×103=44×106 tế bào/1ml mẫu Một số lồi tảo có nước Tảo Chlorella Sunyra Tảo Oocystis Chrysosphaerella Tảo Schroederia Gloeobotrys Peranema Euglena Chaetoceros muelleri Một số loài tảo tiêu biểu BÀI PHÂN LẬP VI SINH CỐ ĐỊNH ĐẠM TRONG ĐẤT I DỤNG CỤ - MƠI TRƯỜNG - HĨA CHẤT: Dụng cụ: Kính hiển vi quang học Phiến kính, kính Hộp Petri Ống nghiệm Que cấy đầu tròn, đầu nhọn Pipet 1ml, 10ml Đèn cồn Bình tia Mơi trường,hóa chất: Nước muối sinh lý 0,9% Mẫu đất vườn Nước cất vô trùng Cồn 960 Môi trường phân lập Azotobacter Môi trường asby: Glucose: 2g K2HPO4: 0,1g MgSO4: 0,04g NaCl: 0,04g K2SO4: 0,02g CaCO3: 1g Agar: 3-4g Thêm nước cất đủ 200ml Điều chỉnh pH = Nấu sôi nhẹ cho tan agar Phân phối mơi trường vào bình tam giác Hấp tiệt trùng 1210C 30 phút , để ấm (50-600C) phân phối vào đĩa petri III TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: Phân lập Azotobacter: Cân 10g đất, cho vào erlen 100ml có chứa sẵn 90ml nước muối sinh lý vô trùng, lắc 20 phút cho đất tan Dùng que cấy vòng lấy dung dịch từ erlen cấy ria lên bề mặt môi trường Asby chứa sẵn đĩa petri Các đĩa petri lật úp ủ nhiệt độ 26-28 0C 2-3 ngày xem kết II KẾT QUẢ: Khuẩn lạc số Hình dạng Đường kính (mm) Độ sáng,độ Màu sắc Bề mặt mép Hình cầu Đục Trắng Phẳng Khơng trịn Đục Trắng đỏ lõm Đều 10 Sáng, Trắng Lồi,có màng nhầy Khơng Trắng Lồi, có Đều màng nhầy trịn Sáng, Số tám Sáng Bong hoa 10 Đục Trắng tròn Đục trịn hoa Có màng nhầy Đều Trắng Phẳng Đều Đục Trắng Lõm Đều Đục Trắng Đều Vẽ hình BÀI 6.PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH TỔNG NẤM MEN, NẤM MỐCTRONG ĐẤT I DỤNG CỤ - MƠI TRƯỜNG - HĨA CHẤT: Dụng cụ: Kính hiển vi quang học Phiến kính, kính Hộp Petri Ống nghiệm Qua cấy đầu trịn, đầu nhọn Pipet 1ml, 10ml Đèn cồn Bình tia Bình tam giác Que trải Mơi trường-hóa chất: - Nước muối sinh lý 0,9% - Mẫu đất vườn - Nước cất vô trùng - Cồn 960 Môi trường : • Môi trường nuôi cấy nấm men: Môi trường Hasen: Glucose, maltose (hoặc đường kính):10g Peptone: 2g K2HPO4: 0,6g MgSO4.7H2O: 0,4-1g Agar: 4g Thêm nước cất đủ: 200ml Lắc đều, điều chỉnh pH= 6,0±0,2 Nấu sôi nhẹ, phân phối môi trường vào dụng cụ để khử trùng 121 C 30 phút • Mơi trường ni cấy nấm mốc: Môi trường czapek: Bài 7: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI SINH VẬT TRONG NƯỚC THẢI I DỤNG CỤ - MƠI TRƯỜNG - HĨA CHẤT: Dụng cụ: Ống nghiệm Pipet 1ml,10ml Erlen 250ml Đèn cồn Bình tia Que trang Nồi đun cách thủy Bếp đun Đĩa petri Môi trường-hóa chất: Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu đất Nước cất Giấy lọc thấm acetate chì Giấy quỳ Mơi trường canh thịt – peptone: Cao thit 1.95g Peptone 6.5g NaCl 3.25g Thêm nước cất cho đủ 650ml Đo pH =7±0.2 Chia làm phần Phần 1: 200ml môi trường lỏng, phân phối vào ống nghiệm để hấp khử trùng Phần 2: 450ml cân 0.9g aga trộn vào môi trường lỏng để môi trường thạch II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: • Lấy 10g đất cho vào erlen chứa sẵn 90ml nước muối sinh lí 0.9%, lắc 10-1 • Để lắng 10 phút pha lỗng mẫu thành độ pha lỗng 10-6, 10-7, 10-8 • Môi trường sau nấu xong cho vào erlen (đối với môi trường thạch) ống nghiệm (đối với môi trường lỏng) đem hấp khử trùng • Giấy lọc thấm vào acetate chì để khơ • Lấy dây đồng cột giấy lọc giấy quỳ lại với đem hấp khử trùng 1210C 30 phút • Hấp xong, đem môi trường thạch làm nguội bớt đổ vào đĩa Petri điều kiện vô trùng • Để thạch đơng • Hút 1ml mẫu dịch pha lỗng vào ống nghiệm điều kiện vơ trùng • Dùng kẹp lấy dây đồng có giấy quỳ giấy lọc thấm acetate chì gài vào thành ống nghiệm không giấy quỳ đụng vào thành ống • Ủ 72 • Mơi trường thạch đơng lại hút 0.1ml mẫu cho vào hộp Petri, dùng que trang trải lên bề mặt thạch • Ủ 72 III KẾT QUẢ: Định tính vi sinh vật amon: Độ pha lỗng Đục mơi trường Tạo Tạo cặn Sinh NH3 Sinh H2S 10-5 có có có Có Có 10-6 có có có có có 10-7 có có có Khơng có Khơng có Định lượng vi sinh vật amon: • Ở nồng độ pha lỗng 10-5, 10-6 khơng xác định tất ống nghiệm có biểu dương tính • Ở nồng độ 10-7 có ống nghiệm mà số ml mẫu sử dụng 0.1ml khơng có tượng hết • Tra bảng MPN ta a=460 nên N= 460 ×107 MPN/100ml Độ pha lỗng MPN/100ml MPN/g 10-5 Không xác định Không xác định 10-6 Không xác định Khơng xác định 10-7 460×107 460×106 BÀI 8: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN NITRAT HĨA I DỤNG CỤ - MƠI TRƯỜNG - HÓA CHẤT: Dụng cụ: Ống nghiệm Pipet 1ml,10ml Erlen 250ml Đèn cồn Bình tia Mơi trường-hóa chất: Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu đất Nước cất Cồn 900 Môi trường winogradski: (NH4)2SO4 0.4g K2HPO4 0.2g MgSO4 0.1g NaCl 0.4g FeSO4 0.08g CaCO3 Để riêng FeSO4 sau hấp khử trùng cho vào để tránh tượng kết tủa môi trường Sau phân phối môi trường vào ống nghiệm ta cho hột CaCO3 II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: • Cân 10g đất cho vào erlen chứa sẵn 90ml nước muối sinh lí 0.9% vơ trùng, lắc 10-1 • Để lắng 10 phút pha loãng mẫu thành độ pha lỗng 10-4, 10-5, 10-6 • Mơi trường sau pha xong cho vào ống nghiệm đem hấp khử trùng • Hấp xong, đem mơi trường làm nguội bớt cấy • Chọn nồng độ pha lỗng cuối, nồng độ hút 1ml mẫu dịch pha loãng cấy vào ống nghiệm điều kiện vô trùng Thực ống cho nồng độ • Ủ 3-5 ngày • Làm ống nghiệm đối chứng II KẾT QUẢ: Số ml mẫu sử Độ pha loãng dụng (ml) 10-4 10-5 10-6 10 ống dương tính ống dương tính ống dương tính ống dương tính ống dương tính ống dương tính 0.1 ống dương tính ống dương tính ống dương tính Tra bảng ta được: Ở nồng độ 10-5: N=1100×105MPN/100ml=160×104MPN/g Ở nồng độ 10-6:N=120×106MPN/100ml=14×105MPN/g N: mật độ vi khuẩn phản nitrat diện MPN/100ml mẫu BÀI 9: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN PHẢN NITRAT TRONG ĐẤT I DỤNG CỤ - MƠI TRƯỜNG - HĨA CHẤT: Dụng cụ: Ống nghiệm Pipet 1ml,10ml Erlen 250ml Đèn cồn Bình tia Mơi trường-hóa chất: Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu đất Cồn 900 Nước cất Môi trường Giltay: • Dung dịch A: Asparagine 0.2g KNO3 0.2g Nước máy 0.05l • Dung dịch B: KNO3 1.7g K2HPO4 0.2g MgSO4 0.2g CaCl2 0.04g Nước máy 0.05l Hòa tan 0.05l dung dịch A 0.05l dung dịch B, sau thêm nước cất cho đủ 200ml II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: • Cân 10g đất cho vào erlen chứa sẵn 90ml nước muối sinh lí 0.9% vơ trùng, lắc 10-1 • Để lắng 10 phút pha lỗng mẫu thành độ pha lỗng 10-4, 10-5, 10-6 • Môi trường sau pha xong cho vào ống nghiệm đem hấp khử trùng • Hấp xong, đem mơi trường làm nguội bớt cấy • Chọn nồng độ pha loãng cuối, nồng độ hút 1ml mẫu dịch pha loãng cấy vào ống nghiệm điều kiện vô trùng Chú ý phải cắm pipet xuống sâu đáy ống nghiệm.Thực ống cho nồng độ.nhỏ vài giọt dầu lên dung dịch để dịch khơng có hội tiếp xúc với mơi trưởng bên ngồi • Ủ 3-5 ngày • Làm ống nghiệm đối chứng III KẾT QUẢ: Định lượng vi khuẩn phản nitrat: Số ml mẫu sử dụng (ml) Độ pha loãng 10-4 10-5 10-6 10 ống dương tính ống dương tính ống dương tính ống dương tính ống dương tính ống dương tính 0.1 ống dương tính ống dương tính ống dương tính Tra bảng ta được: Ở nồng độ 10-5: N=160×105MPN/100ml =160×104MPN/g Ở nồng độ 10-6:N=14×106MPN/100ml =14×105MPN/g N: mật độ vi khuẩn phản nitrat diện MPN/100ml mẫu Định tính vi khuẩn phản nitrat: Độ pha lỗng Đục mơi trường Sinh khí pH mơi trường 10-4 có Có Giảm 10-5 Có Khơng thấy Giảm 10-6 có Không thấy Giảm BÀI 10: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN PHÂN GIẢI CÁC HỢP CHẤT KHÓ TAN TRONG ĐẤT I MƠI TRƯỜNG, HĨA CHẤT, DỤNG CỤ: Dụng cụ: Hộp petri Bình tia Bình tam giác Que trải Đèn cồn Pipet ml, 10ml Mơi trường, hóa chất: Nước muối sinh lý 0.9%, Mẫu đất Nước cất vô trùng Môi trường nuôi cấy: + Môi trường kiểm tra vi sinh vật phân giải hợp chất phospho vô khó tan Glucoza 4g Ca3(PO4)2 2g (NH4)2SO4 0.2g KCl 0.08g MgSO4.7H2O 0.04g MnSO4 0.004g FeSO4 0.004g Nấm men 0.2g Agar 8g Nước cất đủ 400ml pH 6.8 – 7.0 + Môi trường kiểm tra vi sinh vật phân giải hợp chất phospho hữu khó tan Glucose 4g (NH4)2SO4 0.2g KCl 0.08g MgSO4.7H2O 0.04g MnSO4 0.004g FeSO4 0.004g Leicithin 2g Agar 8g Nước cất đủ 400ml pH 6.8 – 7.0 Leicithin bổ sung vào mơi trường lấy trực tiếp từ lòng đỏ trứng tươi II Tiến hành thí nghiệm: • Cân 10g mẫu đất cho vào erlen vô trùng, thêm 90ml dịch nước muối sinh lý 0.9% • Lắc erlen cho có dung dịch có phân bố đồng • Để lắng khoảng 15 phút ta có độ pha lỗng 10-1 • Dùng pipet vô trùng lấy 1ml dịch mẫu ban đầu (độ pha loãng 10-1) cho vào ống nghiệm chứa 9ml nước muối sinh lý 0.9% vô trùng chẩn bị sẵn nhiệt độ phòng Trộn kỹ cách hút – thả khoảng 10 lần với pipet khác có nút bơng đầu hút vơ trùng, để dịch pha lỗng mẫu có nồng độ 10-2 • Quá trình lặp lại liên tục đến nồng độ pha lỗng 10-6 • Lấy nồng độ cuối 10-4, 10-5, 10-6 hút 0.05ml cấy vào petri, nồng độ cấy hộp môi trường phospho vô khơng tan phospho hữu khơng tan • Dùng que trang thủy tinh, trải mẫu lên khắp bề mặt mơi trường • Cấy xong, úp ngược hộp lồng petri đưa vào tủ ấm, sau đến ngày xem kết III KẾT QUẢ: Vi sinh vật phân giải hợp chất phospho vơ khó tan Vi sinh vật phân giải hợp chất phospho hữu khó tan Do lượng vi sinh vật nhiều nên đếm BÀI 12: ĐỊNH LƯỢNG COLIFORMS TRONG NƯỚC BẰNG PHƯƠNG PHÁP DÙNG PETRIFILM I DỤNG CỤ - MƠI TRƯỜNG – HĨA CHẤT: Dụng cụ: Hộp petri ống nghiệm Tấm petrifilm Pipet 1ml 10 ml Đèn cồn Bình tia Hóa chất – mơi trường: II Mẫu nước Nước cất vô trùng Nước muối sinh lý TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: • Dùng pipet vơ trùng hút 1ml dung dịch mẫu nước cần phân tích cho vào ống nghiệm có chứa 9ml nước muối sinh lí điều kiện vơ trùng • Lắc ống nghiệm phút • Đặt petrifilm lên mặt bàn phẳng • Dùng kẹp inox lật màng film nilon phủ bề mặt đĩa petrifilm • Dùng pipet hút 1ml dung dịch mẫu nhỏ lên màng môi trường petrifilm • Lật cuộn màng nilon trở lại cẩn thận tránh tạo bọt khí khơng để màng nilon rơi xuống • Dùng nhựa chặn có mặt phẳng bên dàn mỏng dung dịch kháp màng môi trường vùng cấy Dùng lực nhẹ ấn lên nhựa trải vùng cấy lấy nhựa chặn khỏi • Cẩn thận cho petrifilm lên đĩa petri cho vào tủ ấm nhiệt độ khoảng 350C 24h • Đếm số lượng khuẩn lạc tính kết III KẾT QUẢ: BÀI 13: PHÂN TÍCH COLIFORMS TRONG NƯỚC THẢI THEO PHƯƠNG PHÁP MPN I DỤNG CỤ, MƠI TRƯỜNG, HĨA CHẤT: Dụng cụ: Hộp petri Ống nghiệm Ống Durham Pipet ml, 10ml Đèn cồn Bình tia Mơi trường, hóa chất: + Môi trường BGBL Peptone 2g Lactose 2g Nước cất đủ 200ml Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu nước thải II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: • Nấu mơi trường xong, ta phân phối môi trường vào ống nghiệm thả ống duham vào đem hấp • Lấy pipet 10ml hút 2ml mẫu nước thải cho vào ống nghiệm chứa 18ml nước muối sinh lí Đảo ta độ pha lỗng 10-1 • Tiến hành pha lỗng mẫu tiếp tục theo phương pháp pha loãng bậc 10 thành nồng độ pha lỗng 10-3, 10-4, 10-5 • Dùng pipet vơ trùng hút mẫu pha lỗng có nồng độ 10-3, 10-4, 10-5 cho vào ống nghiệm (loạt ống 15 ống phân thành nhóm cho nồng độ) có chứa mơi trường thích hợp cho tăng trưởng đối tượng vi sinh vật cần định lượng • Các ống nghiệm mơi trường ủ tủ từ 24 – 36h đọc kết III Kết quả: Xác định MPN loạt ống nghiệm: 10 0.1 Độ pha loãng 3 Có vsv 10-5 Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Khơng có vsv Có vsv Mật độ coliforms diện 100ml mẫu : N= a×105 (MPN/100ml) =1100 × 105 MPN/100ml Xác định MPN loạt 15 ống nghiệm: Độ pha loãng 10-5 10 0.1 5 Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Có vsv Khơng có vsv Khơng có vsv Khơng có vsv Mật độ coliforms diện 100ml mẫu: BÀI 16: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI SINH VẬT TRONG KHƠNG KHÍ Ngày thực hành 02/08/2010 I DỤNG CỤ-MƠI TRƯỜNG-HÓA CHẤT: Dụng cụ: Hộp petri Ống nghiệm Tăm bơng Pipet ml, 10ml Đèn cồn Bình tia Mơi trường-hóa chất: Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu đất Nước cất • Mơi trường kiểm tra vi sinh vật bề mặt (môi trường czapek): Môi trường czapek: Saccarose: 6g NaNO3: 6g K2HPO4: 0,2g MgSO4: 0,1g FeSO4: 0,1g Agar: 4g pH= 6,0±0,2 khử trùng 1atm/30 phút • Mơi trường kiểm tra vi sinh vật khơng khí (mơi trường PCA): Cân 4.8g pha 200ml nước cất.đem nấu hấp khử trùng II TIẾN TRÌNH THÍ NGHIỆM: • Chuẩn bị ống nghiệm chứa 10ml nước muối sinh lí • Trong điều kiện vô trùng nhúng tăm vào nước muối sinh lí để tẩm ướt • Quẹt bong lên bề mặt tủ lạnh với diện tích 100 cm2 • Cho bơng vào ống nghiệm có sẵn nước muối sinh lí khốy • Pha lỗng nống độ 10-4 • Lấy nồng độ cuối cho 0.1ml vào đĩa Petri có mơi trường thạch rắn • Ủ tủ ấm sau ngày đọc kết • Mơi trường PCA sau đổ xong, để nguội đem hành lang (có thể tích 77.76m3), dở nắp hộp petri cho khong khí vào • Sau 10 phút đậy nắp lại đem ủ • Sau ngày đọc kết III KẾT QUẢ: Vi sinh vật khơng khí Vi sinh vật bề mặt BÀI LÀM LẠI: ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN PHẢN NITRAT TRONG ĐẤT III DỤNG CỤ-MƠI TRƯỜNG-HĨA CHẤT: Dụng cụ: Ống nghiệm Pipet 1ml,10ml Erlen 250ml Đèn cồn Bình tia Mơi trường-hóa chất: Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu đất Nước cất Cồn 900 Mơi trường Giltay: • Dung dịch A: Asparagine 0.2g KNO3 0.2g Nước máy 0.05l • Dung dịch B: KNO3 1.7g MgSO4 K2HPO4 0.2g 0.2g CaCl2 0.04g Nước máy 0.05l Agar 1,4g Hòa tan 0.05l dung dịch A 0.05l dung dịch B, sau thêm nước cất cho đủ 200ml khoáy cho 1.4g aga vào dung dịch Giltay.đem đun Môi trường agar: Agar 2.55g 150ml nước II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: • Phân phối môi trường vào ống nghiệm đem hấp khử trùng • Cho 2.55 g agar vào 150ml nước cất khuấy đun bếp Sau sôi đem cho vào erlen đem hấp khử trùng • Cân 10g mẫu đất cho vào bình tam giác chứa 90ml nước muối 0.9% lắc mẫu 20 phút, sau để lắng lấy phần nước phía ta dung dịch mẫu 10-1 • Tiếp tục pha lỗng mẫu đến nồng độ 10-7 • Mơi trường Giltay sau hấp khử trùng xong để nguội khoảng 50oC • Cấy 1ml dịch mẫu chứa vi sinh vật vào môi trường, ý đặt đầu pipet phần đáy ống nghiệm để đưa vi sinh vật vào phần đáy mơi trường, lắc • Mỗi nồng độ mẫu cấy ống nghiệm từ 10-2 đến 10-7 • Đem chưng cách thủy 42oC 10 phút, để môi trường đơng đặc • Cho 4ml mơi trường agar vào ống nghiệm • Gói kĩ cho vào tủ ấm ủ – ngày III KẾT QUẢ: Số ml mẫu Độ pha loãng sử dụng 10-2 10-3 (ml) 10-4 10-5 10-6 10-7 có có có có khơng khơng có có có khơng khơng khơng có không không không không không Tra bảng ta được: Ở nồng độ 10-3: N=1100×103MPN/100ml =1100×102MPN/g Ở nồng độ 10-4:N=28×104MPN/100ml =28×103MPN/g Ở nồng độ 10-5: N=15×105MPN/100ml =15×104MPN/g Ở nồng độ 10-6:N=4×106MPN/100ml =4×105MPN/g N: mật độ vi khuẩn phản nitrat diện MPN/100ml mẫu ... cất.đem nấu hấp khử trùng II TIẾN TRÌNH THÍ NGHIỆM: • Chuẩn bị ống nghiệm chứa 10ml nước muối sinh lí • Trong điều kiện vơ trùng nhúng tăm bơng vào nước muối sinh lí để tẩm ướt • Quẹt bong lên... CHẤT: Dụng cụ: Hộp petri ống nghiệm Tấm petrifilm Pipet 1ml 10 ml Đèn cồn Bình tia Hóa chất – môi trường: II Mẫu nước Nước cất vô trùng Nước muối sinh lý TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: • Dùng pipet vô trùng... Ống nghiệm Ống Durham Pipet ml, 10ml Đèn cồn Bình tia Mơi trường, hóa chất: + Mơi trường BGBL Peptone 2g Lactose 2g Nước cất đủ 200ml Nước muối sinh lý 0.9% Mẫu nước thải II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM: