Hàm lượng chất khô thu được qua các phân đoạn tách polysaccharide: Bảng 1: Hàm lượng chất khô thu được trong các phân đoạn tách chiết.. Phân đoạn Hàm lượng thu được trong nấm Linh Chi %
Trang 1CHIẾT XUẤT CÁC POLYSACCHARIDE TỪ NẤM LINH CHI, NẤM HẦU THỦ NUÔI TRỒNG Ở VIỆT NAM VÀ THỬ HOẠT
TÍNH KHÁNG OXY-HOÁ
NGUYỄN CỬU KHOA, HOÀNG THỊ KIM DUNG.
I MỞ ĐẦU:
1 Polysaccharide:
Polysaccharide là nhóm hợp chất có cấu trúc đại phân tử gồm các monosaccharide liên kết với nhau bằng cầu nối glycoside Nhiều công trình nghiên cứu đã chứng minh hầu hết các polysaccharide tách từ nấm đều là polysaccharide liên kết với protein [2],[3],[4],[5]
Các công trình nghiên cứu [2], [5] đã khẳng định polysaccharide chiết từ nấm Hầu Thủ không những điều trị hiệu quả bệnh ung thư thực quản, dạ dày và ung thư da mà còn làm tăng hệ miễn dịch và chống lại ung thư phổi di căn Polysaccharide có hoạt tính dược lý rộng như: điều hòa hệ thống miễn nhiễm của cơ thể, có tác dụng chống phóng xạ, giải độc, nâng cao chức năng gan, tủy xương, máu, tăng sinh tổng hợp các thành tố: DNA, RNA, protein, kéo dài tuổi thọ và chống u ác tính
2 Nấm Hầu Thủ và giá trị thực phẩm-dược phẩm:
Nấm Hầu Thủ có tên khoa học là Hericium erinaceus, thường mọc
hoang ở Bắc Mỹ và Châu Á (Trung Quốc, Nhật Bản) trên nhiều loại cây gỗ như sồi, dẻ và các loại cây lá rộng Quả thể Hầu Thủ có dạng hình cầu hay hình trứng, mọc riêng rẽ hoặc thành chùm có tua nấm dày đặc, rũ xuống Lúc già tua dài chuyển sang màu vàng Nấm Hầu Thủ khi còn non có màu trắng ngà, thịt màu trắng đến khi già nấm ngả sang màu vàng
Trang 2Hình 1,2 : Thể quả nấm Hầu Thủ nuôi trồng tại
Tp.HCM
Việc nuôi trồng nấm mới phát triển gần 20 năm, sản lượng nuôi trồng trên thế giới khoảng 66.000 tấn nấm tươi, còn thấp so với nhu cầu Ở nước
ta nấm này đã được trồng thử nghiệm nhưng quy mô còn rất nhỏ Do đó,
khả năng phát triển nấm Hầu Thủ là rất lớn
Nấm Hầu Thủ là một loại thực phẩm bổ dưỡng, giàu khoáng và vitamin Nó có tác dụng nâng cao khả năng miễn dịch, phục hồi niêm mạc
dạ dày, chữa loét ruột, nâng cao sức đề kháng với tình trạng thiếu oxy, làm giảm mỡ máu, tăng cường tuần hoàn máu, chống lão hóa, ức chế sinh trưởng của tế bào ung thư [2],[5]
3 Nấm Linh Chi:
Linh Chi là loại nấm gỗ có tên khoa học Ganoderma lucium Đây là
loại nấm có mũ đính bên, khi non thường có màu trắng sau thành màu vàng đến màu nâu nhạt Nấm Linh Chi có các loại Thanh chi, Hồng chi, Hoàng chi, Bạch chi, Hắc chi, Từ chi [3],[4]
Trang 3II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP:
1 Nguyên liệu:
Nấm Hầu Thủ và nấm Linh Chi được cung cấp bởi Trung tâm nghiên cứu Linh chi và nấm Dược liệu thuộc Công ty cổ phần Dược liệu TW2
Các loại thuốc thử sử dụng gồm thuốc thử Mayer, Dragendorff, Bouchardat…
2 Phương pháp tách chiết các phân đoạn Polysaccharide.
Được thực hiện theo quy trình chiết tách của giáo sư Mizuno[3] Quy trình tách chiết được mô tả ở sơ đồ hình 1
Hình 3: Nấm Linh Chi (Ganoderma lucidum)
Chiết với nước nóng 100 o C x 4giờ x 8 lần, lọc
Thêm 5V EtOH.
1 Sấy khô ở 80 o C, nghiền
2 Chiết với EtOH 85%, lọc
Chiết với NaOH 5%, ở
30 o Cx 12-30h, lọc
Chiết với ammonium oxalate 3%, đun hoàn lưu 3h, 5 lần, lọc
Thêm 5V EtOH
Kết tủa
Dịch lọc 4 Cặn 4
Kết tủa Dịch lọc
Kết tủa Dịch lọc
F3-2
F2
F3-1
Thêm 5V EtOH, lọc
Sấy chân không
Sấy chân không
Sấy chân không AcOH, pH 5-6, lọc
Kết tủa Dịch lọc
F1
Dịch lọc 3 Cặn 3
Sấy chân
không
Dịch lọc 1 Cặn 1
Quả thể nấm
Dịch lọc
Trang 4Hình 1: Sơ đồ tách chiết polysaccharide của nấm Linh chi và nấm Hầu thủ
Trang 53 Khảo sát một số thành phần hóa học hữu cơ trong nấm bằng phương pháp hóa sơ bộ thực vật [1], [7].
Sử dụng các thuốc thử khác nhau để xác định sự hiện diện của các cấu tử hữu cơ có trong dịch chiết
4 Xác định hàm lượng đường
a/ Xác định hàm lượng đường tổng: bằng phương pháp Phenol-H2SO4
[1]
b/ Xác định hàm lượng đường khử: theo phương pháp Schaffer-Hartmann [1]
5 Xác định tính kháng oxy hóa của các phân đoạn Polysaccharide bằng phương pháp DPPH và MDA [9], [10].
III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
1 Hàm lượng chất khô thu được qua các phân đoạn tách polysaccharide:
Bảng 1: Hàm lượng chất khô thu được trong các phân đoạn tách chiết
Phân
đoạn
Hàm lượng thu được trong nấm Linh Chi (%)
Hàm lượng thu được trong nấm Hầu Thủ (%)
2 Kết quả khảo sát một số thành phần hóa học hữu cơ của nấm
Bảng 2: Thành phần hóa học có trong nấm Hầu Thủ và nấm Linh Chi
Các thành phần hữu cơ Kết luận
Trang 6Hầu Thủ
Linh Chi
Các hợp
chất tan
trong dịch
ether
Phân tích dung dịch kiềm
Phân tích dung dịch ether
Alcaloid trong dịch acid
Các hợp chất tan
trong dịch cồn
Nhận xét: Trong nấm Hầu Thủ và Linh Chi có chứa các thành phần
acid béo, tinh dầu, carotenoid, phytosterol, steroid, alkaloid, saponin steroid, acid hữu cơ, saponin triterpen Kết quả phân tích cho thấy nấm
Trang 7Linh Chi nuôi trồng ở quận 12 có các thành phần hữu cơ tương tự nấm Linh Chi nuôi trồng ở Nhật Bản, Hàn Quốc và ở Đà Lạt
3 Kết quả xác định hàm lượng đường
a/ Kết quả xác định hàm lượng đường tổng
Chúng tôi tiến hành phân tích hàm lượng đường tổng bằng cách đo quang phổ kế trên các phân đoạn tách chiết Đo cường độ hấp thụ trên máy quang phổ DR-2000 ở bước sóng 490nm Kết quả đo được ghi nhận trong bảng 3
Bảng 3: Hàm lượng đường tổng ở các phân đoạn của nấm
Hàm lượng đường tổng
Các phân đoạn tách chiết Nấm
khô
F3-2 Hàm lượng đường nấm Linh
Chi (%)
Hàm lượng đường nấm Hầu
Thủ (%)
Nhận xét: theo các tài liệu đã công bố mà chúng tôi thu thập được thì
đây là lần đầu tiên có các số liệu về hàm lượng đường tổng của các phân đoạn thu được trên nấm Hầu Thủ Tổng hàm lượng đường ở các phân đoạn thu được của nấm Linh Chi của Việt Nam so với các tài liệu nước ngoài đã công bố thì thấp hơn so với nấm Nhật Bản Hàm lượng đường tổng của nấm Linh Chi cao hơn hàm lượng đường tổng của nấm Hầu Thủ
b/ Kết quả xác định hàm lượng đường khử
Chúng tôi tiến hành xác định hàm lượng đường khử trên các phân đoạn tách chiết Kết quả được ghi nhận trong bảng 4
Bảng 4: Hàm lượng đường khử ở các phân đoạn của nấm
Trang 8Nấm khô
Hàm lượng đường nấm Linh
Chi (%)
Hàm lượng đường nấm Hầu
Thủ (%)
Nhận xét: Hàm lượng đường khử của nấm Hầu Thủ luôn cao hơn
hàm lượng đường khử của nấm Linh Chi
4 Kết quả khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro
Các mẫu khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa in vitro được thực hiện
trên các phân đoạn F1, F2, F3-1, F3-2 của nấm Linh Chi và nấm Hầu Thủ
Kết quả được ghi nhận trong bảng 5 và bảng 6
Bảng 5: Hoạt tính kháng oxy hóa của các mẫu trong thử nghiệm DPPH so sánh với Vitamin C
hóa (%)
Hầu Thủ
Trang 9Linh Chi
F1
F2
F3-1
F3-2
Bảng 6: Hoạt tính kháng oxy hóa của các mẫu trong thử nghiệm định lượng MDA
hóa (%)
-Hầu Thủ
F1
F2
F3-1
Trang 10Linh Chi
F3-2
Nhận xét:
- Mẫu Linh Chi thể hiện tác động kháng oxy hóa in vitro trên cả hai
thử nghiệm DPPH và MDA
- Mẫu F1của nấm Linh Chi có hoạt tính kháng oxy hóa in vitro trên thử
nghiệm MDA
- Các mẫu còn lại có hoạt tính kháng oxy hóa trong thử nghiệm DPPH
và gần như không thể hiện hoạt tính kháng oxy hóa trong thử nghiệm MDA
- Hoạt tính kháng oxy hóa của các mẫu thử đều thấp hơn so với vitamin C
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Lâm Thị Kim Châu, Nguyễn Thượng Lệch, Văn Đức Chín, Thực tập lớn sinh hóa, Tủ sách khoa học Đại học Khoa học Tự Nhiên.
2 Cun Zhuang, Takashi Mizuno et al., Biotech Biochem., 57 (6),
901-906, 1993
3 Takashi Mizuno, Eri Suzuki, Kohjimaki & Hideo Tamaki,
Fractination, Chemical Modification and Antitumor Activity of Water – Insoluble Polysaccharides of the Fungi Bodies of
Ganoderma lucidum, 1985.
4 TS Lê Xuân Thám, Nấm Linh Chi nguồn dược liệu quý ở Việt Nam,
NXB Mũi Cà mau, 1998
Trang 115 Yi-Wei Chang and Ting-Jang Lu, Journal of Food and drug Analysis,
Pages 59-67, 2004
6 Trần Đình Toại, Vũ Ngọc Bản, Lê Cẩm Tú, Nguyễn Thanh Hạnh, Tạp chí hóa học tập 2, trang 258-262, tháng 5 năm 2005.
7 TS Nguyễn Kim Phi Phụng, Các phương pháp cô lập các hợp chất hữu cơ, Tủ sách ĐHKHTN.
8 TS Lê Xuân Thám, Nấm trong công nghệ và chuyển hóa môi trường.
I Nấm tua (Nấm đầu khỉ, nấm đầu rồng,…
9 Henry Jay Forman and Alberto Boveris, Superoxide radical and hydrogen peroxid in mito chondria In “Free radicals in biology” vol
5, edited by W A Pryor, Acad Press, NewYork, 1982
10 Võ Duy Huấn, Study on the saponin composition of Vietnamese medicinal plant: Polycias fruticosa and Achyran theo aspera Luân
văn tốt nghiệp thạc sĩ trường Đại học Hirosima, Nhật Bản, 2/1998, page 9-24
SUMMARY
EXTRACTION OF POLYSACCHARIDES FROM VIETNAMESE
GANODERMA LUCIDUM AND HERICIUM ERINACEUS AND
ANTIOXIDANT ASSAY OF THEM
From Vietnamese Ganoderma lucidum and Hericium erinaceus, we
extracted hot-water soluble polysaccharides by the method of Prof Mizuno and determined some chemical constituents presenting in both such as alkaloid, carotenoid, steroid….In addition, we determined total sugar content and tested the antioxidant ability of these polysaccharides by using MDA and DPPH method [9], [10]
Địa chỉ:
Nguyễn Cửu Khoa, Hoàng Thị Kim Dung
Trang 12Viện Công nghệ Hóa học – Viện Khoa Học và Công Nghệ Việt Nam