BÁO cáo THỰC tập VI SINH

 Que cấy vòng: dung cấy ria vi sinh vật trên mặt thạch hay phân lập vi sinhvật trong môi trường lỏng hoặc môi trường đặc. Que cấy móc: dùng để cấy các loại nấm men, nấm mốc, xạ khuẩn..

Trang 1

BÀI 1 + 2: HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CÁC DỤNG CỤ, THIẾT BỊ VI SINH VÀ CÁC QUY TẮC TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM; CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN

VI VÀ CÁCH LÀM NÚT BÔNG ỐNG NGHIỆM, BÌNH TAM GIÁC, BAO GÓI

VÀ THANH TRÙNG DỤNG CỤ VI SINH

I Cơ sở lý thuyết:

- Ảnh hưởng của các nhân tố vật lý, hóa học đối với sự tồn tại và phát triểncủa vi sinh vật:

 Nhân tố vật lý; nhiệt độ, độ ẩm, ánh sang, pH, độ màu…

 Nhân tố hóa học: axit, base, muối kim loại, cồn…

- Nguyên nhân gây nhiễm các dụng cụ là do sự tiếp xúc với không khí, cácdụng cụ hay vật phẩm có chứa vi sinh vật

II Chuẩn bị:

- Sinh viên: Chuẩn bị báo cũ

- Phòng thí nghiệm: Chuẩn bị 1 kính hiển vi, bông không thấm nước, 20 ốngnghiệm to, 20 đĩa petri, 2 bình tam giác

III Các bước tiến hành:

PHẦN 1: Hướng dẫn sử dụng các dụng cụ, thiết bị vi sinh và các quy tắc trong phòng thí nghiệm

Trang 2

 Que cấy vòng: dung cấy ria vi sinh vật trên mặt thạch hay phân lập vi sinhvật trong môi trường lỏng hoặc môi trường đặc.

 Que cấy móc: dùng để cấy các loại nấm men, nấm mốc, xạ khuẩn

Những loại que cấy này thường làm bằng kim loại không bị oxy hóa ở nhiệt

độ cao

b Tủ ấm: Dùng để ủ vi sinh vật hoặc theo dõi sự tăng trưởng của visinh vật Tủ ấm có thể đặt theo các chế độ nhiệt độ hoặc theo thờigian tùy theo tính chất nuôi cấy của vi sinh vật

c Nồi hấp Pasteur:

Mục đích của nồi hấp Pasteur là tiêu diệt cả tế bào dinh dưỡnglẫn bào tử của vi sinh vật Nồi hấp có cấu tạo 2 vỏ có khả nănggiữ áp suất cao Phía trong nồi là buồng khử trùng, nơi đặt cácvật liệu cần khử trùng Sử dụng nước cất hoặc nước lọc cho nồihấp và cần bổ sung đến mức quy định

d Tủ sấy:

Tủ sấy đươc dùng để sấy khô dụng cụ thủy tinh hoặc để khửtrùng bằng phương pháp nhiệt độ Nhiệt độ bên trong có thể lêntới 2000C Khí nóng được quạt đều trong lò để tránh sự sai biệt

về nhiệt độ

e Tủ cấy vô trùng:

Tủ cấy vô trùng được dùng để đảm bảo tính vô trùng cao khi thaotác với vi sinh vật Đèn tử ngoại có tác dụng khử trùng bề mặtthao tác trong tủ cấy bật đèn tử ngoại trước 30-60 phút Kh bắtđầu thao tác, tắt đèn tử ngoại và bật bơm lọc vô trùng không khí

g Các thiết bị khác: cân phân tích, máy lắc…

2 Các quy tắc trong phòng thí nghiệm:

a Đề phòng bị bỏng hoặc xảy ra cháy nổ khi làm việc với các hóa chấtđậm đặc như: kiềm đặc, brom, photpho, axit sunfuric đặc… khi đốtđèn cồn không được nghiêng đèn, chỉ tắt đèn bằng nắp đậy, khôngthổi tắt

Trang 3

b Phải làm trong tủ hút khi sử dụng các chất dễ bay hơi như: khí clo,nito oxit, thủy ngân, brom lỏng và một số chất hữu cơ…

c Cần đặc biệt chú ý những điểm sau:

- Không đun các chất khí hoặc phát sinh khí trong bình đậy kín.

- Khi đun các chất lỏng phải hướng miệng bình ống nghiệm về phái không có

người

- Khi pha dd H2SO4, HNO3 từ dd axit đặc phải cho từ từ dd axit đặc vào

nước, tuyệt đối không làm ngược lại

- Đổ các chất độc hại vào đúng nơi quy định.

d Thực hành xong cần rửa sạch tay bằng xà phòng

e Sơ cứu khí bị bỏng:

- Bỏng bằng axit phải rửa nhiều lần bằng nước sau đó rửa bằng dd

bicacbonat NaHCO3 1%

- Bỏng kiềm rửa bằng nước sau đó rửa bằng dd axit boric H3B4O7 2%.

- Bỏng phenon rửa bằng dd kiềm loãng hoặc glyxerin cho tới khi phục hồi

màu của da sau đó bôi mỡ glyxerin

f Khi bị bắn axit hay kiềm vào mắt: rửa bằng nước sạch nhiều lần, sau

đó rửa bằng dd bicacbonat 1% (nếu là axit) hay dd axit boric 2%(nếu là kiềm)

g Khi bị axit bắn vào miệng uống 1 lượng lớn dd bicacbonat 5% (nếu

là axit) hay dd axit xitric 5% (nếu là kiềm) Khi bị ngộ độc do thởphải nhiều khí độc như clo, brom, khí hydro sunfua… thì cần phảinhanh chóng đưa ra chỗ thoáng khí ngoài ptn

h Khi bị điện giật phải nhanh chóng đưa nạn nhân ra khỏi hệ thốngđiện bằng cách: cắt cầu giao phòng thí nghiệm, dung vật cách điệnnhư bao tải, vải dày, găng tay cách điện… để kéo nạn nhân ra khiđược cách ly nếu nạn nhân bất tỉnh cần phải hô hấp nhân tạo ngay

i Trong mọi trường hợp, sau khi cấp cứu sơ bộ, nếu thấy cần thiết, đưangay đến bệnh viện

PHẦN 2: Cách sử dụng kính hiển vi và cách làm nút bông ống nghiệm, bình tam giác, bao gói và thanh trùng dụng cụ vi sinh

1 Bao gói dụng cụ:

1.1 Nguyên tắc:

- Dụng cụ được bao gói phải đảm bảo sạch và khô

- Bao gói phải kín và cẩn thận để sau khi khử trùng vẫn đảm bảo sự vô trùngcủa dụng cụ trong lớp giấy gói và lấy ra sử dụng dễ dàng

1.2 Phương pháp bao gói dụng cụ:

Trang 4

Gồm 2 khâu:

- Làm nút bông cho ống nghiệm, bình tam giác, pipet, que trang

- Bao gói cho hầu hết các dụng cụ khác

- Đặc điểm sinh học của các nhóm vi khuẩn:

 Có cấu tạo tế bào nhưng chưa có cấu trúc nhân hoàn chỉnh

 Có 3 hình dạng chính: hình cầu, hình que, hình xoắn

 Kích thước rất nhỏ: 1-8 hoặc 10μm

- Ý nghĩa của việc nghiên cứu các đặc điểm sinh học của các nhóm vi sinhvật: Vi khuẩn chiếm đa số trong các vi sinh vật, đóng vai trò quyết địnhtrong các quá trình chuyển hóa vật chất Vi khuẩn tham gia vào hầu hết các

Trang 5

vòng tuần hoàn trong đất và trong tự nhiên Chúng ta nghiên cứu các đặcđiểm sinh học của chúng để phát triển những vi sinh vật có ích phục vụ chocác hoạt động sống và sản xuất, đồng thời hạn chế tác hại của những vikhuẩn gây bệnh cho con người, động thực vật cũng như trong sản xuất nôngnghiệp.

- Các đặc điểm sinh học đặc trưng của mỗi nhóm vi sinh vật

PHẦN 1: Quan sát hình dạng tế bào vi khuẩn (thịt lợn, bò)

1 Làm tiêu bản tạm thời

1.1 Các đặc điểm của tiêu bản tạm thời:

- Thao tác làm tiêu bản đơn giản, tiến hành nhanh

- Quan sát được các trạng thái sống của tế bào

- Kéo nút bông ra khỏi ống nghiệm và khử trùng miệng ống nghiệm

- Đưa que cấy vào lấy sinh khối vi sinh vật

- Rút que cấy ra, khử trùng miệng ống nghiệm

- Đưa giọt sinh khối vi sinh vật ở đầu que cấy đặt vào giữa phiến kính để làmvết bôi

- Khử trùng lại que cấy

1.3 Cách làm tiêu bản giọt ép:

- Dùng que cấy lấy giống vi sinh vật để làm vết bôi

- Đặt lá kính lên giọt canh trường, tránh tạo bọt khí

- Quan sát trên kính hiển vi

2 Làm tiêu bản cố định

2.1 Các đặc điểm của tiêu bản cố định:

- Thao tác phức tạp nhưng tiêu bản có màu sắc đẹp, giữ được lâu

- Cho phép quan sát rõ ràng hình dạng và cấu tạo của tế bào, dễ dàng đếm sốlượng vi sinh vật

Trang 6

- Không sợ lây nhiễm khi làm việc với vi sinh vật gây bệnh.

2.2 Các bước làm tiêu bản cố định:

2.2.1 Làm vết bôi:

- Lấy phiến kính sạch và khô

- Lấy sinh khối vi sinh vật cho vào giữa phiến kính

- Để vết bôi khô tự nhiên trong không khí

Chú ý: Lượng sinh vật lấy vừa phải, vết bôi tròn, gọn, thật mỏng và các visinh vật được dàn đều dễ quan sát

2.2.2 Cố định vết bôi:

Việc cố định vết bôi để giết chết vi sinh vật để chúng dễ bắt màu và an toànkhi tiếp xúc; gắn chặt vi sinh vật vào phiến kính để lúc rửa không bị trôimàu

- Hơ mặt dưới của phiến kính trên ngọn lửa đèn cồn, cao 15 – 20cm, không

để quá nóng, tránh hiện tượng co nguyên sinh

PHẦN 2: Quan sát hình dạng tế bào vi khuẩn lactic (nước dưa, canh thiu, sữa chua)

Tiến hành tương tự như Phần 1.

Thịt bò Vi khuẩn có dạng hình

cầu và hình oval, kíchthước nhỏ, phát triểnthành từng đám với sốlượng lớn

Trang 7

Nước dưa Không quan sát được rõ

vi khuẩn vì kích thước rấtnhỏ, chỉ thấy được nhữngchấm nhỏ, số lượng lớn

Canh thiu Vi khuẩn có hình cầu,

hình oval, dấu phẩy, kíchthước nhỏ, số lượng nhiều

Sữa chua Vi khuẩn dày, số lượng

lớm, có hình tròn, hìnhque với kích thước nhỏ

BÀI 5 + 6: QUAN SÁT VI KHUẨN NỐT SẦN VÀ HÌNH DẠNG TẾ BÀO NẤM MỐC (MỐC CƠM)

- Đặc điểm sinh học của các nhóm xạ khuẩn, nấm mốc, nấm men

 Vi khuẩn có cấu tạo tế bào nhưng chưa có cấu trúc nhân hoàn chỉnh Có 3hình dạng chính: hình cầu, hình que, hình xoắn Kích thước rất nhỏ: 1-8hoặc 10μm

 Nấm men có cấu tạo đơn bào, không di động, sinh sản chủ yếu bằngphương pháp nảy chồi Nấm men có dạng hình tròn, hình trứng, hình elip,hình quả chanh… Nấm men thường có kích thước từ 4-20μm, chiều rộng tếbào thường là 3-5μm và chiều dài là 5-10μm

Trang 8

 Nấm mốc có cấu tạo hình sợi phân nhánh, phát triển nhanh tạo thành khuẩn

ty hay hệ sợi nấm Chiều ngang của khuẩn ty thay đổi từ 3-10μm Khuẩn lạccủa nấm mốc phát triển rất nhanh và thường to, xốp hơn nhiều so với khuẩnlạc xạ khuẩn

- Ý nghĩa của việc nghiên cứu các đặc điểm sinh học của các nhóm vi sinhvật

 Xạ khuẩn phân bố rộng trong đất, tham gia vào các quá trình phân giải cáchợp chất hữu cơ trong đấy như xenluloza, tinh bột… góp phần khép kínvòng tuần hoàn trong tự nhiên, được ứng dụng trong quá trình chế biếnphân hủy rác Nhiều xạ khuẩn có khả năng sinh chất kháng sinh được sửdụng trong nghiên cứu và sản xuất thuốc kháng sinh

 Nấm men có mặt khắp trong các quá trình chuyển hóa vật chất, phân hủychất hữu cơ trong đất, được ứng dụng trong công nghiệp thực phẩm, trongnông nghiệp và các ngành khác

 Nấm mốc phân bố rộng rãi trong tự nhiên, tham gia tích cực vào các quátrình chuyển hóa vật chất, khép kín các vòng tuần hoàn vật chất, được ứngdụng vào nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp, chế biến thực phẩm (làmrượu, làm tương, nước chấm…) Nhiều loại nấm mốc khi mọc trên cácnguyên liệu vật liệu, đồ dùng, nông sản… gây hỏng hoặc giảm chất lượng,thậm chí một số loại nấm mốc còn gây bệnh cho người, động vật và thựcvật

1.1 Cách lấy giống vi sinh vật để làm tiêu bản:

- Loại bỏ các vi khuẩn khác, chỉ giữ lại vi khuẩn nốt sần: rửa bằng nướcsạch, rửa cồn 900 trong 3 phút, rửa lại bằng dung dịch sát khuẩn (thủy ngânclorua 0,1%) trong 5 phút, rửa bằng nước sạch 3 phút

- Cắt rễ có nốt sần trong đĩa petri có nhỏ nước cất thanh trùng Lấy kẹp sắt đãthanh trùng bằng đèn cồn, dùng kẹp bóp nốt sần

1.2 Cách làm tiêu bản giọt ép:

Trang 9

- Dùng que cấy lấy giống vi sinh vật để làm vết bôi.

- Đặt lá kính lên giọt canh trường, tránh tạo bọt khí

- Quan sát trên kính hiển vi

2.1 Làm vết bôi:

2.2 Cố định vết bôi:

Việc cố định vết bôi để giết chết vi sinh vật để chúng dễ bắt màu và an toànkhi tiếp xúc; gắn chặt vi sinh vật vào phiến kính để lúc rửa không bị trôimàu

PHẦN 2: Quan sát hình dạng tế bào nấm mốc (mốc cơm)

IV Kết quả:

Vi khuẩn nốt sần Có màu xanh sang, hình

que phân nhánh, vi khuẩndàn đều, số lượng vừaphải

Mốc cơm Vi khuẩn có hình cầu, tồn

tại thành từng đám, sốlượng nhỏ

Trang 10

Nước dưa soi dầu Vi khuẩn có hình que

phân nhánh

BÀI 7 + 8: NHUỘM ĐƠN VI KHUẨN VÀ NẤM MỐC (MỐC CƠM)

- Nguyên tắc nhuộm đơn:

 Nhuộm đơn là chỉ sử dụng một loại thuốc nhuộm trên 1 tiêu bản

 Sử dụng thuốc nhuộm có khả năng thẩm thấu qua màng tế bào và kết hợpvới các thành phần khác nhau thành những hợp chất màu đặc trưng bềnvững

 Tùy theo mục đích nghiên cứu và khả năng bắt màu của những thành phần

tế bào mà chọn loại thuốc nhuộm và cách nhuộm cho phù hợp

- Đặc điểm sinh học của các nhóm vi khuẩn, nấm mốc

 Vi khuẩn có cấu tạo tế bào nhưng chưa có cấu trúc nhân hoàn chỉnh Có 3hình dạng chính: hình cầu, hình que, hình xoắn Kích thước rất nhỏ: 1-8hoặc 10μm

 Nấm mốc có cấu tạo hình sợi phân nhánh, phát triển nhanh tạo thành khuẩn

ty hay hệ sợi nấm Chiều ngang của khuẩn ty thay đổi từ 3-10μm Khuẩn lạc

của nấm mốc phát triển rất nhanh và thường to, xốp hơn nhiều so với khuẩnlạc xạ khuẩn

 Vi khuẩn chiếm đa số trong các vi sinh vật, đóng vai trò quyết định trongcác quá trình chuyển hóa vật chất Vi khuẩn tham gia vào hầu hết các vòngtuần hoàn trong đất và trong tự nhiên Chúng ta nghiên cứu các đặc điểmsinh học của chúng để phát triển những vi sinh vật có ích phục vụ cho cáchoạt động sống và sản xuất, đồng thời hạn chế tác hại của những vi khuẩngây bệnh cho con người, động thực vật cũng như trong sản xuất nôngnghiệp

 Nấm mốc phân bố rộng rãi trong tự nhiên, tham gia tích cực vào các quátrình chuyển hóa vật chất, khép kín các vòng tuần hoàn vật chất, được ứngdụng vào nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp, chế biến thực phẩm (làm

Trang 11

rượu, làm tương, nước chấm…) Nhiều loại nấm mốc khi mọc trên cácnguyên liệu vật liệu, đồ dùng, nông sản… gây hỏng hoặc giảm chất lượng,thậm chí một số loại nấm mốc còn gây bệnh cho người, động vật và thựcvật.

PHẦN 1: Nhuộm đơn vi khuẩn nước thịt

1 Làm tiêu bản tạm thời

1.1 Cách lấy giống vi sinh vật để làm tiêu bản:

- Đốt đèn cồn lên

- Một tay cầm cầm que cấy để khử trùng, mở hé hộp đựng nước thịt

- Đưa que cấy vào lấy sinh khối vi sinh vật

- Đưa giọt sinh khối vi sinh vật ở đầu que cấy đặt vào giữa phiến kính để làmvết bôi

- Khử trùng lại que cấy

1.2 Cách làm tiêu bản và nhuộm:

- Dùng que cấy lấy giống vi sinh vật để làm vết bôi

- Nhỏ 1 giọt thuốc nhuộm xanh metylen 0,001% lên vết bôi, để 1 phút đểbám màu vào tế bào

- Rửa bằng bình tia nước cất: tia lên trên để giọt nước chảy qua vết bôi đếnkhi không còn màu nữa

- Đặt lá kính lên, tránh tạo bọt khí

- Quan sát trên kính hiển vi với vật kính 10x, 40x

2.1 Làm vết bôi:

2.2 Cố định vết bôi:

Trang 12

2.3 Nhuộm màu tiêu bản:

- Nhỏ 1 giọt thuốc nhuộm xanh metylen 0,001% lên vết bôi, để 1 phút đểbám màu vào tế bào

- Rửa bằng bình tia nước cất: tia lên trên để giọt nước chảy qua vết bôi đếnkhi không còn màu nữa

- Để khô, đặt lá kính lên, tránh tạo bọt khí

- Quan sát trên kính hiển vi với vật kính 10x và 40x

PHẦN 2: Quan sát hình dạng tế bào nấm mốc (mốc cơm)

IV Kết quả:

Vi khuẩn Vi khuẩn bắt màu xanh,

có dạng hình cầu, hìnhoval, kích thước nhỏ, pháttriển với số lượng lớn

Mốc cơm Nấm bắt màu với thuốc

nhuộm xanh metylen, códạng sợi mảnh tồn tạithành từng đám

BÀI 9 + 10: NHUỘM KÉP VI KHUẨN GRAM ÂM VÀ GRAM DƯƠNG

- Nguyên tắc nhuộm kép:

 Nhuộm kép sử dụng đồng thời 2 hay nhiều loại thuốc nhuộm trên 1 tiêubản

Trang 13

 Dựa trên khả năng bắt màu của tế bào chất và màng tế bào với thuốc nhuộmtím kết tinh và iod hình thành nên hại loại phức chất khác nhau Loại phứcchất thứ nhất vẫn giữ nguyên màu của thuốc nhuộm nên không bị rửa trôikhi xử lý bằng cồn Vi sinh vật có phức chất này là vi khuẩn gram dương.Loại phức chất thứ hai không giữ được màu của thuốc nhuộm nên mất màukhi xử lý bằng cồn và bắt màu của thuốc nhuộm bổ sung và vi sinh vật cóphức chất này thuộc loại gram âm

- Đặc điểm sinh học của các nhóm vi khuẩn

II Chuẩn bị:

- Sinh viên: Chuẩn bị mẫu vi khuẩn nước thịt trước 24 giờ

- Phòng thí nghiệm: Chuẩn bị 2 kính hiển vi, 4 bình nước, 4 que cấy, 2 chậuthủy tinh, 4 đèn cồn 90%, 2 bình cồn 70%, 2 lọ thuốc nhuộm xanh metylen,

2 lọ tím geltian, 2 lọ fucshin, 2 lọ lugol

1 Làm vết bôi:

2 Cố định vết bôi:

3 Nhuộm màu tiêu bản:

- Nhỏ 1 giọt thuốc nhuộm tím gentian lên vết bôi, để 1-2 phút để bám màuvào tế bào

- Rửa bằng bình tia nước cất: tia lên trên để giọt nước chảy qua vết bôi đếnkhi không còn màu nữa, để khô

- Nhuộm lugol trong 1-2 phút

Định dạng
Số trang	25
Dung lượng	4,62 MB