báo cáo thực tập vi sinh

MỤC LỤC Bài 1: Hướng dẫn sử dụng dụng cụ, thiết bị vi sinh quy tắc phòng thí nghiệm - Các quy tắc an toàn phòng thí nghiệm: Nắm vững nguyên tắc, phương pháp làm việc với vi sinh vật Không ăn uống, hút thuốc phòng thí nghiệm, mang trang thao tác - với vi sinh vật Mặc áo blouse thời gian làm thí nghiệm Cần ghi tên chủng, ngày, tháng làm thí nghiệm lên tất hộp petri, ống - nghiệm môi trường, bình nuôi cấy Khi lỡ tay làm đổ, nhiễm vi sinh vật nơi làm việc, dùng khăn giấy tẩm chất diệt - khuẩn lau kĩ, sau thực khử trùng lại bàn làm việc Cẩn thận thao tác với đèn cồn Tắt lửa chưa có nhu cầu sử dụng - sau thực xong thao tác Khi làm vỡ dụng cụ thủy tinh, cẩn thận mang găng tay thu gom tất mảnh vỡ - vào túi rác riêng Không mở hộp petri dùng mũi ngửi để tránh nhiễm vi sinh vật vào đường hô - hấp Khi đốt que cấy có dính sinh khối vi sinh vật, cần đặt vòng đầu que cấy vào a b - chân lửa để tránh văng nhiễm vi sinh vật vào không khí Sát trùng rửa tay xà phòng trước rời phòng thí nghiệm Một số dụng cụ thiết bị phòng thí nghiệm vi sinh: Các dụng cụ thủy tinh: Ống nghiệm: chứa môi trường nuôi cấy vi sinh vật Đĩa petri Ống hút (pipet) Các dụng cụ thủy tinh khác: đèn cồn, bình tam giác, cốc thủy tinh,… Các dụng cụ thiết bị khác: Que cấy Tủ ẩm: Dùng để ủ vi sinh vật theo dõi tăng trưởng chúng Nồi hấp: Để tiêu diệt tế bào dinh dưỡng lẫn bào tử vi sinh vật Tủ sấy: Sấy khô dụng cụ thủy tinh để khử trùng phương pháp nhiệt khô Tủ cấy vô trùng: Đảm bảo tính vô trùng cao thao tác với vi sinh vật Bài 2: Cách sử dụng kính hiển vi cách làm nút ống nghiệm, bình tam giác, bao gói trùng dụng cụ vi sinh Kính hiển vi: Kính hiển vi dùng để quan sát vi sinh vật Kính hiển vi cần đặt nơi tránh bụi, ẩm, chấn động Để tránh bị két dầu soi bị mốc kính sau dùng kính với dầu soi, dùng giấy lau kính chuyên dụng Khi không dùng kính cần phải đậy kín a b - lại Bao gói dụng cụ: Cách làm nút bông: Với ống nghiệm Lấy không thấm nước cuộn tròn lại Dùng que ấn vào cuộn Đẩy cuộn gập đôi từ từ vào miệng ống nghiệm Với chai lọ, bình tam giác có kích thước lớn: Làm tương tự sử dụng lượng nhiều Cách bao gói dụng cụ: Cắt đoạn băng giấy hình chữ nhật với kích thước tùy theo dụng cụ cần bao gói Quấn quanh phần đầu có nút Quấn lại thật chặt Với dụng cụ pipet, que trang phải dùng giấy bao kín toàn 3.Các phương pháp khử trùng dụng cụ: a b - Khử trùng tủ sấy: Đặt dụng cụ bao gói vào tủ sấy Bật công tắc tủ hoạt động Điều chỉnh thời gian nhiệt độ thích hợp Tắt tủ sấy, để nguội tới 60oC mở tủ lấy dụng cụ Khử trùng cách đốt que lửa nóng đỏ: Hơ dụng cụ lửa đèn cồn, đưa qua đưa lại 3-4 lần Với dây mayxo - đầu que cấy phải nung cho thật đỏ hết chiều dài dây cấy Đợi dụng cụ nguội sử dụng để tránh vỡ vi khuẩn không bị tiêu diệt lấy giống Bài 3: Quan sát hình dạng tế bào vi khuẩn ( thịt lợn, bò) I/ Cơ sở lý thuyết a b - Nguyên liệu – Dụng cụ thí nghiệm Nguyên liệu Thịt lợn, bò (không rửa) ngâm vào 30 ml nước để 24 Nước canh thiu Dụng cụ thí nghiệm Que cấy, đèn cồn 90° a - Phiến kính( lame), kính Kính hiển vi Nước cất Cách tiến hành Làm vết bôi Chọn lame khô Đốt đèn cồn, hơ que cấy ( nghiêng 45°) lửa đèn cồn để trùng Dùng que cấy lấy mẫu thịt lợn, thịt bò, canh thiu vào lame, ghi tên loại b - lên lame Hơ lại que cấy Để vết bôi khô tự nhiên không khí Chú ý: Lượng vi sinh vật lấy vừa phải Vết bôi tròn gọn, thật mỏng Các tế bào vi sinh vật dàn dễ quan sát Cố định vết bôi Dùng kẹp gỗ kẹp sắt kẹp lame Hơ mặt lame lửa đèn cồn, tránh không để nóng Việc cố định vết bôi nhằm mục đích giết chết vi sinh vật để dễ dàng quan sát, c - tránh khỏi vi sinh vật độc hại Quan sát hình dạng vi khuẩn Chỉnh vật kính 4X soi ba mẫu thịt lợn, thịt bò - II/ Kết - Nhận xét Thịt bò Thịt lợn Hình vẽ: Thịt bò Thịt lợn Tên vi khuẩn: chostridium Mô tả hình dạng: hình bầu dục,hình que, không rõ nhân, màng nhày rộng Nhận xét: mẫu vi sinh vật khó quan sát, có nhiều cặn lơ lửng nên tiêu khó quan sát Bài 4: Quan sát hình dạng vi khuẩn lactic ( nước dưa, sữa chua) I/ Cơ sở lý thuyết a b a - Nguyên liệu – Dụng cụ thí nghiệm Nguyên liệu Sữa chua ( hộp) Nước dưa chua ( nước thơm, vàng, không bị khú) Dụng cụ thí nghiệm Que cấy, đèn cồn 90° Phiến kính( lame), kính Kính hiển vi Nước cất Cách tiến hành Làm vết bôi Chọn lame khô Đốt đèn cồn, hơ qua cấy ( nghiêng 45°) lửa đèn cồn để trùng Dùng que cấy lấy mẫu nước dưa chua sữa chua (khi lấy mẫu sữa chua, ta để giọt nước lên phiến kính, dùng que cấy cẩn thẩn lấy sữa chua để lên b - giọt nước) cho vào lame, ghi tên lên lame Hơ lại que cấy Để vết bôi khô tự nhiên không khí Chú ý: Lượng vi sinh vật lấy vừa phải Vết bôi tròn gọn, thật mỏng Các tế bào vi sinh vật dàn dễ quan sát Cố định vết bôi Dùng kẹp gỗ kẹp sắt kẹp lame Hơ mặt lame lửa đèn cồn, tránh không để nóng Việc cố định vết bôi nhằm mục đích giết chết vi sinh vật để dễ dàng quan sát, c - tránh khỏi vi sinh vật độc hại Quan sát hình dạng vi khuẩn Chỉnh vật kính 4X soi nước dưa sữa chua - II/ Kết - Nhận xét Nước dưa Sữa chua Hình vẽ: Nước dưa Sữa chua Tên vi khuẩn: Latic Mô tả hình dạng: - Nước dưa: liên cầu khuẩn, quan sát thấy hình que, sợi - Sữa chua: song cầu khuẩn tròn,trắng liên kết nhóm Nhận xét: - Nước dưa: soi vật kính 10X dạng sơi liền, vật kĩnh 40X thầy cầu khuẩn liên kết thành sợi - Sữa chua: khó nhìn thấy dễ nhầm với váng sữa chua mầu đục đường, vi khuẩn có kích thước nhỏ phải dung vật kính 100X sử dụng dầu soi Bài 5: Quan sát vi khuẩn nốt sần I/ Cơ sở lý thuyết Nguyên liệu – Dụng cụ thí nghiệm a - Nguyên liệu Nốt sần họ đậu b c Dụng cụ thí nghiệm Que cấy, đèn cồn 95° Dung dịch HgCl2 Phiến kính( lame), kính Kính hiển vi Nước cất Cách tiến hành Làm vết bôi - d e - Rửa đỗ cho trôi hết đất đá Rửa cồn 95° phút Rửa lại dung dịch sát khuẩn HgCl2 0.1% phút Rửa lại nước Lấy kẹp sắt ( lau cồn) hơ lửa đèn cồn, dầm nốt sần nước, vi khuẩn nốt sần tan nước Dùng que cấy trùng lấy mẫu lên phiến kính Để mẫu khô tự nhiên không khí Chú ý: Lượng vi sinh vật lấy vừa phải Vết bôi tròn gọn, thật mỏng Các tế bào vi sinh vật dàn dễ quan sát Quan sát hình dạng vi khuẩn Chỉnh vật kính 4X soi mẫu Cất trữ mẫu vi khuẩn nốt sần Hơ hộp petri lửa đèn cồn ( xoay vòng quanh) - Thanh trùng miệng ống đựng nước cất, đổ khoảng 5-7 giọt vào hộp petri, đậy nắp - ống Hơ que cấy 45°C đến đầu que cấy đỏ để vi sinh vật chết hết Cho que cấy vào hộp petri để giảm nhiệt độ Lấy mẫu, mở hộp petri, để mẫu vào chỗ có nước ( miệng hộp) Thanh trùng lại hộp, cho vào bao giấy, bảo quản II/ Kết - Nhận xét Mô tả hình dạng: Có mầu xanh Đơn cầu khuẩn hình tròn, ovan, màng nhầy rộng, khó quan sát Bài 6: Quan sát hình dạng tế bào nấm mốc, nấm men I/ Cơ sở lý thuyết a b a - Nguyên liệu – Dụng cụ thí nghiệm Nguyên liệu Cơm ngô lên mốc ( để ngày) Nho (có phẩn vỏ) Dụng cụ thí nghiệm Que cấy, đèn cồn 90° Phiến kính( lame), kính Kính hiển vi Nước cất Cách tiến hành Làm vết bôi Chọn lame khô Đốt đèn cồn, hơ qua cấy ( nghiêng 45°) lửa đèn cồn để trùng Dùng que cấy lấy mẫu thịt, cơm, ngô nho vào lame, ghi tên loại lên - lame Mẫu ngô, cơm: lấy hạt ngô, cơm lên mốc, hòa vào nước Mẫu nho: lấy giọt nước lên phiến kính, dùng que cấy trùng, lấy b - nước phết lên phấn nho Hơ lại que cấy Để vết bôi khô tự nhiên không khí Chú ý: Lượng vi sinh vật lấy vừa phải Vết bôi tròn gọn, thật mỏng Các tế bào vi sinh vật dàn dễ quan sát Cố định vết bôi Dùng kẹp gỗ kẹp sắt kẹp lame Hơ mặt lame lửa đèn cồn, tránh không để nóng Việc cố định vết bôi nhằm mục đích giết chết vi sinh vật để dễ dàng quan sát, c - tránh khỏi vi sinh vật độc hại Quan sát hình dạng vi khuẩn Chỉnh vật kính 4X soi ba mẫu mốc cơm, mốc ngô nho - II/ Kết - Nhận xét 10 Bài - 10: Nhuộm kép vi khuẩn Gram – Gram + I/ Cơ sở lý thuyết - Nguyên tắc: Dựa khả bắt màu tế bào chất màng tế bào với thuốc nhuộm tím kết tinh iod mà hình thành nên loại phức chất khác nhau: + Loại phức chất thứ giữ nguyên màu thuốc nhuộm nên không bị rửa trôi xử lý cồn Vi sinh vật có phức chất vi khuẩn gram dương + Loại phức chất thứ hai không giữ màu thuốc nhuộm nên màu xử lý cồn bắt màu thuốc nhuộm bổ sung Vi sinh vật có phức chất b - thuộc loại gram âm Nguyên liệu – Dụng cụ thí nghiệm Nguyên liệu Thịt lợn (không rửa) ngâm vào 30 ml nước để 24 Dụng cụ thí nghiệm Que cấy, đèn cồn 90° Phiến kính( lame), kính Kính hiển vi Thuốc tím Geltian, dung dịch Lugol, thuốc nhuộm Fucshin Nước cất Cách tiến hành Làm tiêu ( tạo vết bôi) Dùng que cấy lấy nước vô trùng để vết bôi lame kính Dùng que cấy lấy sinh khối làm vết bôi theo thứ tự: + Bên trái nấm men + Bên phải nấm mốc Để khô vết bôi không khí cố định nhẹ đèn cồn Nhuộm tiêu Nhuộm thuốc tím geltian từ 1-2 phút Rửa nước đến trôi hết màu, để khô Nhuộm dung dịch Lugol từ 1-2 phút Rửa nước, để khô Tẩy màu cồn khoảng 20 giây, để nghiêng tiêu bản, nhỏ từ từ giọt c - đến màu Rửa lại nước Nhuộm bổ sung Fuchsin từ 30-60 giây Rửa nước, để khô Quan sát hình dạng tế bào vi khuẩn Quan sát tiêu vật kính X40 X100 dùng dầu soi a b a - II/ Kết - Nhận xét 16 Thịt lợn Nhận xét: mẫu bắt mầu hồng tím, hình que, sợi dài Bài 11: Kiểm tra quan sát mẫu vi sinh vật 17 Bài 12: Lên men sữa chua I/ Cơ sở lý thuyết Nguyên liệu – Dụng cụ thí nghiệm STT Mẫu, dụng cụ Sữa ông thọ Nước lọc Sữa chua Vinamilk Bình đựng 2l Hộp đựng sữa chua có nắp Nước sôi Muôi Số lượng hộp lít hộp bình hộp lít - Cách tiến hành: B1: Đổ nước sôi vào bình đựng có chứa hộp sữa đặc theo tỉ lệ 1:1 B2: Khuấy hỗn hợp B3: Cho nước nguội vào bình theo tỉ lệ sữa tươi: nước sôi 2:1 để giảm lượng - đường khoảng 15-20% nhiệt độ hỗn hợp 35-40oC khuấy B4: Cho vào hộp sữa chua B5: Khuấy đều, tránh tạo bọt, cho cốc đậy nắp lại B6: Cho vào tủ ủ 40oC khoảng thời gian mang ủ lạnh II/ Kết - Nhận xét - Sữa chua ủ giờ: đông đặc, mầu trắng đục có vị chua đậm Sữa chua ủ giờ: đông đặc, mầu trắng đục có vị chua sữa chua 4giờ, - mùi chua nhẹ Sữa chua ủ giờ: đông đặc, mầu trắng đục vị chua vừa phải, mùi chua nhẹ 18 - Đã làm thành công sữa chua Đưa thời gian ủ phù hợp Men giống Ba Thời gian Màu sắc Độ đục Độ Độ chua Mùi ủ(300C) 4h Trắng + +++ + +++ 6h 8h đục Đục vừa Trắng ++ +++ ++ + ++ +++ ++ ++ đục 19 Bài 13: Phương pháp chuẩn bị môi trường lỏng đặc để phân tích tiêu VSV Phương pháp cấy vi sinh vật môi trường thạch đĩa ống thạch I/ Cơ sở lý thuyết a b a - - Nguyên liệu – Dụng cụ thí nghiệm Nguyên liệu Nấm men, nấm mốc Sữa chua Dụng cụ thí nghiệm Bếp điện, xoong, muôi Đũa thủy tinh, nồi hấp trùng Tủ sấy, tủ ấm ống nghiệm ( ống cấy nấm men, ống cấy nấm mốc, ống cấy vi khuẩn) Đĩa petri ( trùng, bọc giấy) Môi trường nuôi cấy Nước cất Chuẩn bị môi trường nuôi cấy Môi trường nuôi cấy vi khuẩn Môi trường cao thịt – Pepton Chuẩn bị: + ống cấy vi khuẩn + đĩa petri: trùng, bọc giấy + Bình tam giác 250ml Công thức: + Pepton: 2,5g + Cao thịt: 1,25g + Agar: 5g + Nước 250ml 20 b - - - c - - - Môi trường nuôi cấy nấm men Chuẩn bị: + ống cấy nấm men + đĩa petri: trùng, bọc giấy + Bình tam giác 250ml Môi trường Sabouraud Công thức: 1000ml nước có: + 0,05g MnSO4.H2O + 0,2g Sislêin + 0,2g MgSO4.7H2O + 2g Sistrat amoni + 5g CH3COONa + 20g Glucozơ +10g Peptôn + 20g Agar Cho thêm 2- 5g dịch chiết nấm men Môi trường Hansen Công thức: + 12,5g Glucozơ + 2,5g Peptôn + 0,75g K2HPO4 + 0,75g MgSO4.7H2O + 5g Agar + 250ml nước cất Môi trường nuôi cấy nấm mốc Chuẩn bị: + ống cấy nấm mốc + đĩa petri: trùng, bọc giấy + Bình tam giác 250ml Môi trường Czapek Công thức: + 7,5g Saccarozơ + 7,5g NaNO3 + 0,25g K2HPO4 + 0,125g MgSO4 + 0,0025g FeSO4 + 5g Agar + 250ml nước cất Cách tiến hành: Chuẩn bị môi trường nuôi cấy B1: Cân hóa chất cho môi trường vào bình tam giác khác B2: Cho vào bình 250ml nước cất, khuấy 21 - B3: Đặt bình tam giác có chứa môi trường vào bếp điện đun, dùng đũa thủy - tinh khuấy thường xuyên B4: Đung dung dịch đến dung dịch lăn tăn sôi dừng B5: Để nguội dung dịch vừa đun khoảng 40oC B6: Rót dung dịch môi trường vào ống nghiệm (chiếm khoảng 1/3 ống) B7: Đậy nút vào ống nghiệm bình tam giác, để nghiêng ống nghiệm, đem trùng với đĩa peptri bao gói Cấy vi sinh vật Các bước thực nuôi cấy vi khuẩn, nâm men, nấm mốc vào môi trường tương ứng giống a Trong ống nghiệm Ống nghiệm chứa môi trường thạch nghiêng loại vi sinh vật trùng dùng để nuôi cấy Các bước nuôi cấy vi sinh vật: - B1: Lau cồn bàn tủ trùng, tay, để khô B2: Châm đèn cồn, trùng que cấy B3: Hơ nhẹ miệng đĩa peptri có chứa mẫu đèn cồn B4: Dùng que cấy trùng để lấy mẫu B5: Mở nút ống nghiệm, hơ nhẹ miệng ống nghiệm có chứa môi trường B6: Cho que cấy vào ống nghiệm, cấy theo hình zik zak từ xuống B7: Thanh trùng que cấy, đậy nút ống nghiệm, ghi rõ loại vi sinh vật, ngày B8: Để vào tủ ủ 30oC b Trong đĩa peptri Cấy nấm men vi khuẩn - B1: Đun nóng dung dịch môi trường vi khuẩn nấm men bình tam giác - trùng B2: Để nguội dung dịch xuống khoảng 40oC B3: Hơ nhẹ miệng bình tam giác đĩa peptri B4: Mở nhẹ đĩa peptri, đổ dung dịch vào đĩa, dày khoảng 0,3-0,5cm B5: Thanh trùng miệng bình tam giác, đậy nút lại B6: Lắc cho dung dịch tràn đĩa peptri để thạch đông đặc B7: Cấy vi sinh vật (quy trình giống cấy ống nghiệm) B8: Đặt đĩa peptri ngược lại cho vào tủ ủ II/ Kết - Nhận xét Sau ngày ta có kết nuôi cấy Nấm men 22 Có mầu trắng đục phát triển tốt 23 Nấm mốc Có ba mầu vàng trắng đen phát triển tốt Vi khuẩn Có mầu trắng đục phát triển tốt 24 Bài 14: Phương pháp phân lập chọn giống vi sinh vật Phương pháp giữ giống VSV cấy truyền VSV I/ Cơ sở lý thuyết Vi khuẩn nốt sần thuộc loại háo khí, ưa pH trung tính kiềm, phát triển tốt a nhiệt độ 28-30oC, độ ẩm 60-80% Chuẩn bị Bảng : Hóa chất chuẩn bị cho môi trường Pochon nuôi cấy vi khuẩn nốt sần STT Hóa chất Glucozo MgSO4 Cao nấm men Cônggô đỏ(thiếu, bỏ) K2HPO4 NaCl CaCO3 Agar Nước cất Khối lượng (g) 0,04 0,1 (ml) 0,1 0,04 0,2 200(ml) Bảng : Dụng cụ chuẩn bị STT Dụng cụ Bếp điện , đèn cồn Bình tam giác 250ml Ông nghiệm, Đũa thủy tinh Nồi hấp trùng Tủ ủ Đĩa peptri Que cấy 25 a I.Tiến hành Chuẩn bị môi trường nuôi cấy Bước 1: Cân hóa chất cho vào bình tam giác b - Bước 2: Thêm vào 250ml nước cất, dùng đũa thủy tinh khuấy Bước 3: Đun dung dịch bếp điện, dùng đũa thủy tinh khuấy thường xuyên Bước 4: Dung dịch lăn tăn sôi dừng lại, để nguội đến khoảng 40oC Bước 5: Đổ dung dịch vào đĩa peptri, dày khoảng 0,3-0,5cm Bước 6: Lắc nhẹ cho dung dich tràn đĩa Bước 7: Để cho môi trường đông đặc Bước 8: Bao gói đem trùng với ống nghiệm chứa 10ml nước cất Phân lập vi khuẩn nốt sần Bước 1: Lấy đĩa peptri có chứa vi khuẩn nốt sần tủ lạnh Bước 2: Để cho nhiệt độ đĩa peptri nhiệt độ phòng Bước 3: Thanh trùng que cấy đèn cồn Bước 4: Cho giọt nước vô trùng vào mẫu vi khuẩn nốt sần, dùng que cấy dầm - nhẹ Bước 5: Hơ nhẹ đĩa peptri có chứa môi trường Bước 6: Mở nhẹ đĩa, dùng que cấy, cấy vi khuẩn theo hình zik zak, sau quay - ngược lại tiếp tục cấy theo hình zik zak Bước 7: Đậy nắp, trùng que cấy, ghi rõ loại vi sinh vật, ngày thực Bước 8: Mang ủ 35oC II/ Kết nhận xét: Vi khuẩn nốt sần có mầu trắng đục, riêng rẽ, phát triển tốt Bài 15: Phân tích số E Coli, Coliforms Fecal coliforms phương pháp CFU - I Cơ sở lý thuyết: Bước 1: Pha loãng mẫu theo dãy thập phân: 1/10, 1/100, 1/1000,… Bước 2: Mỗi độ pha loãng lấy 0.1ml mẫu pha loãng vào đĩa thạch Bước 3: Dùng que trang trùng trang mặt thạch Trang - quay đĩa thạch trình trang Bước 4: Chuyển đĩa thạch có mẫu đem nuôi tủ ẩm điều kiện thích hợp Chú ý: lắc độ pha loãng trước lấy 1ml vào độ pha loãng lắc kĩ trước lấy 0.1ml vào môi trường đĩa thạch 26 - Bước 5: Đếm mẫu pha loãng tối đa từ 30-300 khuẩn lạc, sau tính kết theo - công thức sau: M(CFU/ml)= A x D/V A: số khuẩn lạc trung bình đĩa D: độ pha loãng V: dinh tích huyền phù tế bào cho vào đĩa (ml) ∑M: trung bình cộng M nồng độ pha loãng khác II Kết nhận xét: Nấm men: 106 Đĩa1: 981, đĩa 2: 1011 107 đĩa 1: 145, đĩa 2: 173 108 đãi 1: 14, đĩa 2: 16 Đất: Đĩa 104: Đĩa 105: Đĩa 106: Số lượng vi sinh vật mẫu nấm men Số lượng vi sinh vật mẫu đất • Nhận xét: Đối với mẫu nấm men: mẫu có phát triển tương đối tốt, số lượng khuẩn lạc phân bố đĩa Tuy nhiên số lượng khuẩn lạc đĩa thạch tương đối cao • với đĩa có độ pha loãng 106 Đối với mẫu đất: Sauk hi nuôi cấy mẫu đất gần xuất khuẩn lạc Điều môi trường nuôi cấy điều kiện nuôi cấy không phù hợp 27 Bài 16: Phân tích số vi sinh vật – phân tích tổng coliform phương pháp MPN Lý thuyết Kỹ thuyết MPN phương páp đĩa đếm tiêu chuẩn để đánh giá số lượng vi khuẩn I II - có xác suất lớn đơn vị thể tích mẫu môi trường Tiến hành Có bước B1: Kiểm tra sở: Pha loãng mẫu theo dãy thập phân vào ống nghệm có ống duleharm Nuôi tủ ấm 24h – 35oC Những ống nghiệm có 10%khí nhiều cho số dương tính Những ống có số dương tính lần pha loãng dung để tính số lượng vi khuẩn có xác suất lớn mẫu B2: Kiểm tra lại mẫu Lựa chọn ống có số dương tính dung để cấy lên đĩa thạch có môi trường thạch Levine’s EBM endo Những đĩa thạch sau cấy nuôi 24h tủ ấm 35oC quan sát khuẩn lạc coliform B3: Hoàn thành kiểm tra: Các mẫu sau đếm ghi lại kết tra bảng theo TCVN 648:2007 III Kết quả: Do điều kiện thí nghiệm kông cho phép nên chưa có kết 28 Tổng kết: Thực hành thực tập vi sinh vật môi trường nhằm giúp cho chúng em làm quen với phương pháp tính ,khảo sát vi sinh vật ứng dụng xử lý môi trường bị ô nhiễm Các vi sinh ứng dụng thường phân tích từ môi trường tự nhiên ,chúng có khả sử dụng chất khác nhau,chuyển hóa vật chất tự nhiên Nguồn vi sinh vật gây ô nhiễm từ đất nước ,không khí ,động vật ,thực vật hay thực phẩm Phân tích xác định chức ,định danh chúng bứơc dầu tiên đưa chúng vào ứng dụng Hoạt động vi sinh vật có liên quan đén nhiều trình xảy đất nước ,trước hết vòng tuần hoàn vật chất tự nhiên chu trình cácbon ,chu trình nito ,photpho lưu huỳnh sau tham gia vào trình phân hủy gây ô nhiễm đến môi trường sống người 29 Tài liệu tham khảo -Giáo trình vi sinh kỹ thuật môi trường cô giáo Lê Thanh Huyền & Nguyễn Khắc Thành - Đỗ Hồng Lan Chi – Lâm Minh Triết, Vi sinh vật môi trường, NXB Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh - Nguyễn Lân Dũng – Nguyễn Đình Quyến - Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, NXB Giáo Dục - Nguyễn Đức Lượng, Nguyễn Thị Thùy Dương, Công nghệ sinh học môi trường, Tập 1,2 NXB Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh, 2003 30 [...]... kết: Thực hành và thực tập vi sinh vật môi trường nhằm giúp cho chúng em làm quen với các phương pháp tính ,khảo sát các vi sinh vật được ứng dụng trong xử lý môi trường bị ô nhiễm Các vi sinh ứng dụng thường được phân tích từ môi trường tự nhiên ,chúng có khả năng sử dụng các cơ chất khác nhau,chuyển hóa vật chất trong tự nhiên Nguồn vi sinh vật gây ô nhiễm có thể từ đất nước ,không khí ,động vật ,thực. .. nghiêng ống nghiệm, đem đi thanh trùng cùng với đĩa peptri đã bao gói Cấy vi sinh vật Các bước thực hiện nuôi cấy vi khuẩn, nâm men, nấm mốc vào các môi trường tương ứng là giống nhau a Trong ống nghiệm Ống nghiệm chứa môi trường thạch nghiêng của từng loại vi sinh vật đã thanh trùng sẽ dùng để nuôi cấy Các bước nuôi cấy vi sinh vật: - B1: Lau cồn bàn của tủ thanh trùng, tay, để khô B2: Châm đèn cồn,... người 29 Tài liệu tham khảo -Giáo trình vi sinh kỹ thuật môi trường của cô giáo Lê Thanh Huyền & Nguyễn Khắc Thành - Đỗ Hồng Lan Chi – Lâm Minh Triết, Vi sinh vật môi trường, NXB Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh - Nguyễn Lân Dũng – Nguyễn Đình Quyến - Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, NXB Giáo Dục - Nguyễn Đức Lượng, Nguyễn Thị Thùy Dương, Công nghệ sinh học môi trường, Tập 1,2 NXB Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí... tiêu bản trên đèn cồn Chú ý: Lượng vi sinh vật lấy vừa phải Vết bôi tròn gọn, thật mỏng Các tế bào vi sinh vật được dàn đều dễ quan sát Quan sát hình dạng tế bào vi khuẩn Quan sát tiêu bản ở vật kính X40 và X100 dùng dầu soi II/ Kết quả - Nhận xét 14 Mốc cơm Nhận xét: bắt mầu xanh dương, mốc có hình dạng que có đầu tròn chứa bào tử 15 Bài 9 - 10: Nhuộm kép đối với vi khuẩn Gram – và Gram + I/ Cơ sở... bản trên đèn cồn Quan sát tiêu bản ở vật kính X40 và X100 dùng dầu soi Chú ý: Lượng vi sinh vật lấy vừa phải Vết bôi tròn gọn, thật mỏng Các tế bào vi sinh vật được dàn đều dễ quan sát 12 b - Quan sát hình dạng tế bào vi khuẩn Quan sát tiêu bản ở vật kính X40 và X100 dùng dầu soi II/ Kết quả - Nhận xét Thịt bò Nhận xét: vi khuẩn bắt mầu xanh, hình bầu dục 13 Bài 8: Nhuộm đơn nấm mốc I/ Cơ sở lý thuyết... khác nhau: + Loại phức chất thứ nhất vẫn giữ nguyên màu của thuốc nhuộm nên không bị rửa trôi khi xử lý bằng cồn Vi sinh vật có phức chất này là vi khuẩn gram dương + Loại phức chất thứ hai không giữ được màu của thuốc nhuộm nên mất màu khi xử lý bằng cồn và bắt màu của thuốc nhuộm bổ sung Vi sinh vật có phức chất này b - thuộc loại gram âm Nguyên liệu – Dụng cụ thí nghiệm Nguyên liệu Thịt lợn (không... rồi để thạch đông đặc B7: Cấy vi sinh vật (quy trình giống như cấy trong ống nghiệm) B8: Đặt đĩa peptri ngược lại và cho vào tủ ủ II/ Kết quả - Nhận xét Sau 2 ngày ta có kết quả nuôi cấy 1 Nấm men 22 Có mầu trắng đục phát triển tốt 23 2 Nấm mốc Có ba mầu vàng trắng đen phát triển tốt 3 Vi khuẩn Có mầu trắng đục phát triển tốt 24 Bài 14: Phương pháp phân lập và chọn giống vi sinh vật Phương pháp giữ giống... Quan sát hình dạng tế bào vi khuẩn Quan sát tiêu bản ở vật kính X40 và X100 dùng dầu soi 2 a b 3 a - II/ Kết quả - Nhận xét 16 Thịt lợn Nhận xét: mẫu bắt mầu hồng tím, hình que, sợi dài Bài 11: Kiểm tra quan sát mẫu vi sinh vật 17 Bài 12: Lên men sữa chua I/ Cơ sở lý thuyết 1 Nguyên liệu – Dụng cụ thí nghiệm STT 1 2 3 4 5 6 7 Mẫu, dụng cụ Sữa ông thọ Nước lọc Sữa chua Vinamilk Bình đựng 2l Hộp đựng... chứa 10ml nước cất Phân lập vi khuẩn nốt sần Bước 1: Lấy đĩa peptri có chứa vi khuẩn nốt sần trong tủ lạnh ra Bước 2: Để cho nhiệt độ của đĩa peptri về nhiệt độ phòng Bước 3: Thanh trùng que cấy bằng đèn cồn Bước 4: Cho một giọt nước vô trùng vào mẫu vi khuẩn nốt sần, dùng que cấy dầm - nhẹ Bước 5: Hơ nhẹ đĩa peptri có chứa môi trường Bước 6: Mở nhẹ đĩa, dùng que cấy, cấy vi khuẩn theo hình zik zak,... nhẹ đĩa, dùng que cấy, cấy vi khuẩn theo hình zik zak, sau đó quay - ngược lại và tiếp tục cấy theo hình zik zak Bước 7: Đậy nắp, thanh trùng que cấy, ghi rõ loại vi sinh vật, ngày thực hiện Bước 8: Mang đi ủ ở 35oC II/ Kết quả và nhận xét: Vi khuẩn nốt sần có mầu trắng đục, riêng rẽ, phát triển tốt Bài 15: Phân tích chỉ số E Coli, Coliforms và Fecal coliforms bằng phương pháp CFU - I Cơ sở lý thuyết: ... tác với vi sinh vật Bài 2: Cách sử dụng kính hiển vi cách làm nút ống nghiệm, bình tam giác, bao gói trùng dụng cụ vi sinh Kính hiển vi: Kính hiển vi dùng để quan sát vi sinh vật Kính hiển vi cần... kết 28 Tổng kết: Thực hành thực tập vi sinh vật môi trường nhằm giúp cho chúng em làm quen với phương pháp tính ,khảo sát vi sinh vật ứng dụng xử lý môi trường bị ô nhiễm Các vi sinh ứng dụng... peptri bao gói Cấy vi sinh vật Các bước thực nuôi cấy vi khuẩn, nâm men, nấm mốc vào môi trường tương ứng giống a Trong ống nghiệm Ống nghiệm chứa môi trường thạch nghiêng loại vi sinh vật trùng