BÁO cáo THỰC tập VI SINH

khoa học tự nhiên Sinh học Thực tâp vi sinh khoa học tự nhiên Sinh học Thực tâp vi sinh khoa học tự nhiên Sinh học Thực tâp vi sinh khoa học tự nhiên Sinh học Thực tâp vi sinh khoa học tự nhiên Sinh học Thực tâp vi sinh khoa học tự nhiên Sinh học Thực tâp vi sinhkhoa học tự nhiên Sinh học Thực tâp vi sinh

BÁO CÁO THỰC TẬP VI SINH Phương Pháp Định Lượng Vi Sinh Vật Xác định mật độ tế bào phương pháp đếm khuẩn lạc a Nguyên tắc Một tế bào phân chia theo cấp số nhân hình thành khuẩn lạc trơng thấy Đây sở việc định lượng tế bào thạch đĩa, số lượng khuẩn lạc sinh từ thể tích giống vi sinh vật định số lượng tế bào sống trông thể tích giống Thơng thường tất tế bào pha tăng trưởng hay giai đoạn sớm pha ổn định có khả hình thành khuẩn lạc Vì vậy, số lượng khuẩn lạc đếm gần tương tối với số lượng tế bào sống b Quy trình I  Cách pha loãng mẫu  c  Dùng micropipet hút 0,1 mL ống nghiệm ( 10 -5,10-6,10-7) lên hộp petri trải Kết Bậc pha loãng (d) 10-5 10-6 10-7 Số khuẩn lạc đơn 17 19 Mât đô tế bào: N = (CFU/mL) với V = 0,1mL Bậc pha loãng (d) 10-5 10-6 10-7 Số khuẩn lạc đơn 17 19 8 Mật độ tế bào 0,17.10 1,9.10 6,0.108 Kết luận  Ta lấy đĩa có số khuẩn lạc đơn từ 10-300 đĩa tỉ lệ đĩa không -5 -6  Vây: N(cuối cùng)=(17+19)/(10 0,1+10 0,1)=3,3.10 (CFU/mL) Xác định mật độ tế bào phương pháp đo độ đục a Nguyên tắc Khi pha lỏng có chứa nhiều phần tử khơng tan, tạo thành hệ huyền phù có độ đục phân tử diện môi trường lỏng cản ánh sáng, làm phân tán chùm ánh sáng tới Tế bào vi sinh vật thực thể diện môi trường làm cho môi trường đốc Theo phương pháp này,số lượng photon ánh sáng bị phân tán tỉ lệ thuận với lượng sinh khối tế bào có mẫu đem đo (trừ mẫu có tế bào đậm đặc ),hay điều kiện sinh trưởng định tỉ lệ với nồng độ tế bào Tuy nhiên ,lượng ánh sáng lọt vào tách sóng quang máy đo mật độ quang bị qui định hình dạng sinh học máy Vì đường cong chuẩn xác định mối d liên quan mật độ hấp thu nồng độ tế bào phải thiết lập riêng cho máy đo mật độ quang b Quy trình c Kết Mẫu Giá trị OD600nm 0,1 0,130 0,2 0,259 0,3 0,549 0,4 0,522 0,5 0,163  Dựng đường chuẩn Số tế bào vi sinh vật 1,0.108 3,3.107 3,3.108 2,9.109 7,6.108 Log (số VSV) 8,0 7,5 8,5 9,5 8,9 Giá trị OD600nm mẫu phịng thí nghiệm: 0,249 ( pha lỗng lần ) Kết luận  Vì R nên kết khơng đáng tin cậy  Vì số thao tác gây sai số q trình thực thí nghiệm -Thao tác pha lỗng: pha lỗng khơng xác -Thao tác đo OD: cầm cuvette phần thân không lau chùi bề mặt cuvette trước đo ảnh hưởng đến đường truyền ánh sáng -Thao tác chậm làm vi sinh vật bị lắng xuống -Sai số máy đo OD II Phương pháp phát vi sinh vật a Nguyên tắc Phát hiên vi sinh vât cách nuôi cấy mẫu vi sinh vât môi trường chọn lọc khác Trong điều ki ên ni cấy phù hợp, tm vi sinh vât mục tiêu dựa tăng trưởng ưu chúng so với loài vi sinh vât khác b Quy trình d  Cách pha lỗng Kết  Trong môi trường LB xuất khuẩn lạc E.Coli  Trong môi trường PGA xuất nấm mốc d Giải thích  E.coli vi khuẩn hiếu khí kỵ khí khơng bắt buộc, phát triển dễ dàng môi trường nuôi cấy thông thường, số phát triển mơi trường tổng hợp đơn giản Nhiệt độ thích hợp 37℃, pH thích hợp - 7,2 Với môi trường PGA, Hansen, Gause E.coli phát triển khơng phải mơi trường thích hợp pH hay nhiệt độ nên E.coli bị ác chế Vì ta thấy E.coli xuất đĩa LB 37℃ điều kiên pH nhiêt thích hợp để E.coli phát triển  Nấm mốc vi khuẩn hiếu khí bắt bc Phát triển tốt mơi trường có pH khoảng từ 5-6,5 Nhiêt thích hợp từ 22-27 tương đương với nhiêt phịng Nhưng nấm mốc khơng có diêp lục tố nên cần phải cung cấp chất dinh dưỡng từ bên ngồi Chính yếu tố mơi trường PGA phù hợp cho nấm mốc phát triển c III Kiểm soát tăng trưởng kháng sinh a Nguyên tắc Kháng sinh tẩm vào đĩa giấy với nồng độ thích hợp khuếch tán mặt thạch xung quanh, ngăn chặn phát triển vi khuẩn (càng xa đĩa KS giảm) Đường kính vịng vơ khuẩn diễn đạt mức độ nhạy cảm vi khuẩn với kháng sinh Khơng có vịng vơ khuẩn, vi khuẩn kháng kháng sinh b Quy trình Kết  Cả hai đĩa giấy xuất hiên vòng kháng sinh Kháng sinh Ampicilin có đường kính vịng kháng sinh 1mm Kháng sinh Kanamycin có đường kính vịng kháng sinh 1.9mm d Giải thích  Ampicilin ức chế tổng hợp thành tế bào vi khuẩn khơng có lớp thành tế bào peptidoglycan bảo vệ dễ dàng bị phá vỡ áp suất Vì mà mà ta khơng thấy vi khuẩn sinh trưởng quanh đĩa kháng sinh  Kanamycin ức chế tổng hợp protein gắn vào tiểu phần 30S làm sai lệch tổng hợp protein nên tiêu diệt tế bào Vì mà ta khơng thấy vi khuẩn sinh trưởng xung quanh đĩa kháng sinh  Từ kết thực nghiệm ta kết luận Amp Kan kháng E.coli khả đề kháng sinh Kan mạnh Amp IV Biến dưỡng vi sinh vật Phát hoạt tính catalase c Nguyên tắc Enzyme catalase xúc tác trình thủy phân hydrogen peroxide H 2O2 thành H2O O2 Hầu hết sinh vật hiếu khí có catalase nhầm loại trừ tích tụ phân tử H2O2 có độc tính với tế bào Hoạt tính catalase phát hiên cách bổ sinh vài giọt H 2O2 lên khuẩn lạc để theo dõi sủi bọt phân tử O2 phóng thích b Quy trình a Kết  Ơ phần đĩa có ni cấy E Coli có hi ên tượng sủi bọt khí  Ơ phần đĩa cịn lại ni cấy Bacillus subtilis Lactobacillus acidophilus khơng có hiên tượng sủi bọt khí d Giải thích  Vì Lactobacillus acidophilus vi khuẩn kị khí nên khơng có hoạt tính catalase nên khơng thể phân giải H2O2 nên khơng có tượng sủi bọt khí  Nhưng E.coli Bacillus hai vi khuẩn hiếu khí điều có hoạt tính catalase có E.coli sủi bọt khí q trình cấy vi khuẩn Lactobacillus acidophilus bị nhiễm vào Bacillus subtilis nên ta thấy tượng Phát hoạt tính amylase a Nguyên tắc c Enzyme ngoại bào -amylase xúc tác q trình thủy phân tinh b ơt thành đường maltose Tinh bơt polysaccharide có cấu trúc mạng không gian tương đối phức tạp môi trường chứa tinh bột nhuộm iod , iod bị giữ lại cấu trúc mạng không gian tinh bột, làm mơi trường có màu xanh đậm Nếu sinh vật có enzyme amylase sau nhỏ iod môi trường không thay đổi màu thành xanh đậm b Quy trình  Tương tự quy trình phát catalase Nhưng cấy lên môi trường LB-tinh bột thuốc thử iod c Kết  Ơ phần đĩa nuôi cấy E Coli xuất hiên màu xanh đ âm  Ơ phần đĩa nuôi cấy Bacillus subtilis Lactobacillus không xuất hiên màu xanh đâm d Giải thích  Vì Bacillus subtills Lactobacillus có enzyme -amylase nên có khả phân giải tinh bột thành maltose nên cho thuốc thử iod vào khơng có màu xanh đậm  Vì E.coli khơng có enzyme α-amylase nên không phân giải tinh bột nên choi od vào môi trường xuất màu xanh đậm ... ánh sáng -Thao tác chậm làm vi sinh vật bị lắng xuống -Sai số máy đo OD II Phương pháp phát vi sinh vật a Nguyên tắc Phát hiên vi sinh vât cách nuôi cấy mẫu vi sinh vât môi trường chọn lọc khác... nhạy cảm vi khuẩn với kháng sinh Khơng có vịng vơ khuẩn, vi khuẩn kháng kháng sinh b Quy trình Kết  Cả hai đĩa giấy xuất hiên vòng kháng sinh Kháng sinh Ampicilin có đường kính vịng kháng sinh 1mm... thấy vi khuẩn sinh trưởng quanh đĩa kháng sinh  Kanamycin ức chế tổng hợp protein gắn vào tiểu phần 30S làm sai lệch tổng hợp protein nên tiêu diệt tế bào Vì mà ta không thấy vi khuẩn sinh trưởng