KẾT QUẢ xét NGHIỆM tìm KHÁNG THỂ KHÁNG NHÂN BẰNG kĩ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG GIÁN TIẾP TRÊN tế bào HEP 2 tại BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI **************************** PHẠM THỊ CHÚC KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM TÌM KHÁNG THỂ KHÁNG NHÂN BẰNG KĨ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG GIÁN TIẾP TRÊN TẾ BÀO HEP-2 TẠI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC SĨ Y KHOA KHÓA 2009-2015 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC Bác sĩ VŨ NGUYỆT MINH Hà Nội - 2015 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng cảm ơn tới: Cơ Vũ Nguyệt Minh, người thầy trực tiếp dìu dắt, tận tình hướng dẫn cho kinh nghiệm quý báu, giúp đỡ tơi vượt qua khó khăn, trở ngại để tơi hồn thành tốt luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn đảng ủy, ban giám hiệu, phòng đào tạo trường Đại học Y Hà Nội, môn Da liễu trường Đại học Y Hà Nội, cán nhân viên Bệnh viện Da liễu Trung ương, đặc biệt Phòng khám chuyên đề tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Cuối tơi xin gửi lời cảm ơn đến Bố Mẹ, gia đình, bạn bè người thân động viên giúp đỡ tiếp thêm cho sức mạnh để vượt qua khó khăn suốt q trình học tập viết khóa luận này! *************************************** Hà Nội, ngày 11 tháng năm 2015 Sinh viên PHẠM THỊ CHÚC CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Kính gửi: • • • Phòng đào tạo đại học – Trường Đại học Y Hà Nội Hội đồng chấm khóa luận tốt nghiệp Bộ môn Da liễu – Trường Đại học Y Hà Nội Tơi xin cam đoan tồn số liệu kết thu thập luận văn trung thực, chưa công bố tài liệu khác.Tôi xin chịu trách nhiệm tính xác thơng tin số liệu đưa Hà Nội, ngày 11 tháng năm 2015 Sinh viên Phạm Thị Chúc DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ANA Antinuclear antibody Anti IgG-FITC Kháng thể kháng nhân Kháng thể kháng IgG người gắn Anti- phospholipid Anti- Sm Anti SSA huỳnh quang Kháng thể kháng phospholipid Kháng thể kháng Smith Kháng thể kháng Ro Anti-DNP Anti ENA Anti-Jo-1 DNA ELISA Anti-Sjögren's-syndrome-related antigen A Anti Dinitrophenyl Anti-extractable nuclear antigens Antihistidyl transfer RNA synthetase Axit Deoxyribo Nucleic Enzyme linked immunosorbent assay- FITC (Miễn dịch gắn men) Fluorescein Isothiocyanate HEp-2 Hội chứng CREST (phức hợp huỳnh quang) Human Epithelial type Calcinosis Raynaud Esophalageal Sclero- IF dactylic Telangiectasis Immunofluorescence MDHQGT PBS RIA (kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang) Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp Phosphate buffer saline Radioimmunoassay SLE (kỹ thuật miễn dịch phóng xạ) Systemic lupus erythematosus SS Tif 1γ VBC XCBHT ( bệnh lupus ban đỏ hệ thống) Hội chứng Sjögren Transcriptional intermediary factor Viêm bì Xơ cứng bì hệ thống MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh tổ chức liên kết tự miễn bệnh lý có kết hợp tự kháng thể với tự kháng nguyên dẫn đến tổn thương thực thể chức tế bào, tổ chức hay quan [1], [2] Ngày nay, với tiến khoa học kỹ thuật, người ta phát 100 loại tự kháng thể kháng lại nhiều thành phần tế bào: kháng thể kháng nhân, kháng thể kháng tương bào, kháng ty lạp thể, kháng màng tế bào [3] Trong kháng thể kháng nhân globulin miễn dịch đặc hiệu cấu trúc khác nhân tế bào: axit nhân, histon, ribonucleoprotein chiếm tỷ lệ cao Kháng thể kháng nhân có tỉ lệ dương tính cao số bệnh tổ chức liên kết tự miễn bệnh lupus ban đỏ hệ thống, xơ cứng bì, viêm bì cơ, bệnh tổ chức liên kết hỗn hợp, hội chứng Sjögren [4], [5] Những tự kháng thể tiêu chuẩn quan trọng chẩn đoán bệnh tổ chức liên kết tự miễn Với y học tiến có nhiều kĩ thuật miễn dịch giúp phát tự kháng thể kĩ thuật miễn dịch gắn men, kĩ thuật kết tủa khuếch tán kép thạch Trong đó, xét nghiệm tìm kháng thể kháng nhân kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp-2 (Human Epithelial type 2) kĩ thuật áp dụng Bệnh viện Da liễu Trung ương, cho phép phát nhiều loại kháng thể kháng thể kháng nhân kháng thể kháng lại nhiều thành phần cấu trúc tế bào Tế bào HEp-2 tế bào ly trích từ tế bào ung thư quản người, có nhân tế bào lớn, hình thái dễ quan sát Việc sử dụng tế bào HEp-2 làm kháng nguyên miễn dịch huỳnh quang gián tiếp để phát kháng thể kháng nhân sử dụng từ năm 1980, cho kết độ nhạy độ đặc hiệu cao Theo nghiên cứu Henrique A Mariz (2011) 153 bệnh nhân mắc bệnh tổ chức liên kết tự miễn kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp-2 cho thấy tỷ lệ kháng thể kháng nhân dương tính 90,2 % [6] Xét nghiệm tìm kháng thể kháng nhân kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp-2 áp dụng giới từ năm 1980, nhiên Bệnh viện Da liễu Trung ương kĩ thuật triển khai từ tháng 5/2013 Mặt khác, Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu cụ thể kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp-2 Vì vậy, chúng tơi thực đề tài "Kết xét nghiệm tìm kháng thể kháng nhân kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp-2 Bệnh viện Da liễu Trung ương" với mục tiêu: Khảo sát định xét nghiệm tìm kháng thể kháng nhân kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp- Bệnh viện Da liễu Trung ương từ 5/2013- 12/2014 Đánh giá kết xét nghiệm tìm kháng thể kháng nhân kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp- bệnh nhân mắc bệnh tổ chức liên kết tự miễn đủ tiêu chuẩn 10 Chương TỔNG QUAN 1.1 Các kĩ thuật xét nghiệm phát tự kháng thể 1.1.1 Xét nghiệm tìm kháng thể kháng nhân kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp-2 1.1.1.1 Lịch sử Kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp (MDHQGT) Coons đề xướng năm 1942, bước ngoặt nghiên cứu miễn dịch học, miễn dịch bệnh học nghiên cứu bệnh sinh số bệnh Năm 1954, Coons weller áp dụng kỹ thuật MDHQGT để nghiên cứu chẩn đoán tự kháng thể Sau năm, Weir Johson dùng kĩ thuật để phát kháng thể kháng nhân (antinuclear antibody- ANA) huyết bệnh nhân lupus ban đỏ hệ thống (Systemic lupus erythematosus - SLE) Trước đây, kháng nguyên thường dùng xét nghiệm cắt lát quan loài gậm nhấm, tổ chức hay dùng gan thận chuột Do tỉ lệ dương tính ANA SLE thường thấp Theo nghiên cứu Rowell gặp 37% ANA dương tính bệnh nhân SLE Mai Trọng Khoa nghiên cứu 38 bệnh nhân SLE cho thấy tỉ lệ dương tính ANA 60,5% [7] Để khắc phục hạn chế kháng nguyên cắt lát mỏng tổ chức chuột, ngày tế bào HEp-2 sử dụng thay Tế bào HEp-2 tế bào ly trích từ tế bào ung thư quản người Nhân tế bào lớn hình thái dễ quan sát Do ni cấy nên tế bào HEp-2 xuất tiêu nhiều giai đoạn phát triển khác giúp xác định dễ dàng kháng thể mà mảnh cắt tổ chức khơng cho phép 54 • Phân bố kết lắng đọng huỳnh quang tế bào HEp-2 so với số lượng tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh VBC Kết nghiên cứu 14 bệnh nhân VBC đủ tiêu chuẩn cho thấy mức độ lắng đọng 4+ tăng dần theo số lượng tiêu chuẩn chẩn đoán Với bệnh nhân chẩn đốn với tiêu chuẩn mức độ lắng đọng 4+ 0%, với tiêu chuẩn mức dộ lắng đọng 11,1% cịn với tiêu chuẩn 25% KẾT LUẬN Khảo sát định xét nghiệm tìm kháng thể kháng nhân kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp tế bào HEp- Bệnh viện Da liễu Trung ương từ 5/2013- 12/2014 (N1=1267) - Trong thời gian từ 5/2013-12/2014, Bệnh viện Da liễu Trung ương tiến hành 1267 xét nghiệm tìm ANA kĩ thuật MDHQGT tế bào HEp-2, phịng khám chun đề định 727 xét nghiệm tương ứng 57,4% - Nhóm tuổi 21-40 tuổi (42%), tỷ lệ nữ/nam=3/1 - Tỷ lệ âm tính phịng khám chuyên đề thấp phòng khám khác (8,9% so với 29,8%) có ý nghĩa thống kê (p