Luận văn KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG GIÁN TIẾP TRÊN TẾ BÀO HEP 2 TẠI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG của sinh viên PHẠM THỊ CHÚC do Thạc sĩ. Bác sĩ VŨ NGUYỆT MINH hướng dẫn về da liễu trong KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC SĨ Y KHOA. Một luận văn có sự đầu tư thời gian và công sức, rất đáng chú ý
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ***************************** PHẠM THỊ CHÚC KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG GIÁN TIẾP TRÊN TẾ BÀO HEP 2 TẠI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC SĨ Y KHOA KHÓA 2009-2015 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC Thạc sĩ. Bác sĩ VŨ NGUYỆT MINH Hà nội 2015 . LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng kính trọng và cảm ơn tới: Th.s Vũ Nguyệt Minh, người thầy đã trực tiếp dìu dắt, tận tình hướng dẫn và cho tôi những kinh nghiệm quý báu, giúp đỡ tôi vượt qua những khó khăn, trở ngại để tôi hoàn thành tốt luận văn này. Tôi xin trân trọng cảm ơn đảng ủy, ban giám hiệu, phòng đào tạo trường Đại học Y Hà Nội, bộ môn Da liễu trường Đại học Y Hà Nội, các cán bộ nhân viên bệnh viện Da liễu trung ương, đặc biệt khoa chuyên đề đã tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận này. Cuối cùng tôi xin gửi lời cảm ơn đến Bố Mẹ, gia đình, bạn bè và những người thân đã động viên giúp đỡ tôi tiếp thêm cho tôi sức mạnh để vượt qua mọi khó khăn trong suốt quá trình học tập cũng như viết bản khóa luận này! **************************************** Hà Nội, ngày 5 tháng 5 năm 2015 PHẠM THỊ CHÚC CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự do - Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Kính gửi: • Phòng đào tạo đại học – trường Đại học Y Hà Nội. • Hội đồng chấm khóa luận tốt nghiệp. • Bộ môn Da liễu – trường Đại học Y Hà Nội. Tôi xin cam đoan toàn bộ số liệu và kết quả thu thập được trong luận văn này là trung thực, chưa từng công bố trong bất kỳ tài liệu nào khác.Tôi xin chịu mọi trách nhiệm về tính chính xác của những thông tin và số liệu đưa ra. Hà Nội, ngày 5 tháng 5 năm 2015 Phạm Thị Chúc DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT SLE Systemic lupus erythematosus ( bệnh lupus ban đỏ hệ thống) XCB Xơ cứng bì VBC/VĐC Viêm bì cơ/ Viêm đa cơ MDHQGT Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp TB Tế bảo DANH MỤC HÌNH VẼ- BẢNG BIỂU Hình 1.1: Một số dạng lắng đọng huỳnh quang thường gặp Hình 2.1 Quy trình xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2 Bảng 3.1: Số xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên TB hep 2 được chỉ định (N=1209) Bảng 3.2: Tỷ lệ mức độ lắng đọng huỳnh quang trên TB hep 2 Bảng 3.3: Phân bố bệnh nhân theo nhóm bệnh (n=279) Bảng 3.4: Tỷ lệ các dạng lắng đọng và mức độ lắng đọng huỳnh quang trên TB hep 2 của BN mô liên kết hệ thống(N=279) Bảng 3.5: Tỷ lệ các dạng lắng đọng và mức độ lắng đọng huỳnh quang trên TB hep 2 của BN SLE (N=189) Bảng 3.6: Tỷ lệ các dạng lắng đọng và mức độ lắng đọng huỳnh quang trên TB hep 2 theo số lượng tiêu chuẩn chẩn đoán SLE(N=189) Bảng 3.7: Tỷ lệ các dạng lắng đọng và mức độ lắng đọng huỳnh quang trên TB hep 2 theo số lượng tiêu chuẩn chẩn đoán XCB(N=77) Bảng 3.8: Tỷ lệ các dạng lắng đọng và mức độ lắng đọng huỳnh quang trên TB hep 2 theo số lượng tiêu chuẩn chẩn đoán VBC-VĐC (N=13) Biểu đồ 3.: Phân bố theo giới tính Biểu đồ 3.2: Phân bố dạng lắng đọng huỳnh quang của bệnh XCB Biểu đồ 3.3: Phân bố mức độ lắng đọng huỳnh quang của bệnh XCB Biểu đồ 3.4 : Phân bố dạng lắng đọng huỳnh quang của bệnh VBC-VĐC Biểu đồ 3.5: Phân bố mức độ lắng đọng huỳnh quang của bệnh VBC-VĐC ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh mô liên kết tự miễn (autoimmune connective tissue diseases - ACTDs) hay còn gọi là các bệnh tự miễn hệ thống là một trạng thái bệnh lý do có sự kết hợp của tự kháng thể với tự kháng nguyên gây ra viêm và dẫn đến tổn thương thực thể và chức năng tại tế bào, mô hay cơ quan [1]. Đó là bệnh nguy hiểm, gây tổn thương đa cơ quan và đe dọa tính mạng người bệnh. Nguyên nhân và cơ chế bệnh sinh còn chưa rõ ràng. Ngày nay, với sự tiến bộ của khoa học kỹ thuật, người ta đã phát hiện được hơn 100 loại tự kháng thể kháng lại nhiều thành phần của tế bào: kháng thể kháng nhân, kháng thể kháng tương bào, kháng ty, lạp thể, kháng màng tế bào [2] Trong đó kháng thể kháng nhân (ANA: Antinuclear antibodies) là những globulin miễn dịch đặc hiệu đối với các cấu trúc khác nhau của nhân tế bào: axit nhân, histon, ribonucleoprotein chiếm tỷ lệ cao. ANA có tỉ lệ dương tính cao ở một số bệnh mô liên kết tự miễn như bệnh lupus ban đỏ hệ thống, xơ cứng bì, viêm bì cơ, bệnh mô liên kết phối hợp, hội chứng Sjögren. Những tự kháng thể này được coi là tiêu chuẩn vàng trong chẩn đoán các bệnh mô liên kết tự miễn. Hiện nay tỉ lệ mắc bệnh ngày càng tăng vì vậy việc ứng dụng những thành tựu về kĩ thuật miễn dịch để phát hiện các tự kháng thể là một yêu cầu cấp thiết để chẩn đoán sớm và điều trị kịp thời. Với nền y học tiến bộ hiện nay có rất nhiều kĩ thuật miễn dịch giúp phát hiện các tự kháng thể, trong đó kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào Hep-2 cho phép phát hiện nhiều loại kháng thể như kháng thể kháng nhân, kháng thể kháng lại nhiều thành phần cấu trúc tế bào và là phương pháp mới được đưa vào áp dụng tại bệnh viện Da Liễu Trung Ương gần 2 năm nay. 7 Chính vì kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào Hep-2 là một kĩ thuật mới được áp dụng và có vai trò rất quan trọng trong chẩn đoán bệnh nên chúng tôi thực hiện đề tài này với 2 mục tiêu: Khảo sát kết quả xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2 tại bệnh viện Da liễu trung ương. Tổng kết kết quả xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2 của các bệnh nhân mắc bệnh mô liên kết tự miễn đủ tiêu chuẩn tại bệnh viện Da liễu trung ương. 8 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan về bệnh mô liên kết tự miễn 1.1.1 Khái niệm Bệnh mô liên kết tự miễn (autoimmune connective tissue diseases - ACTDs) là một nhóm bệnh tự miễn có các biểu hiện lâm sàng đa dạng, tổn thương nhiều cơ quan. Các bệnh thuộc nhóm này gồm: [3] - Lupus ban đỏ hệ thống. - Xơ cứng bì hệ thống. - Viêm bì cơ/viêm đa cơ. - Bệnh tổ chức liên kết phối hợp. - Và các bệnh khác như viêm khớp dạng thấp, viêm mạch, hội chứng Sjögren, hội chứng kháng phospholipid 1.1.2 Bệnh Lupus ban đỏ hệ thống (SLE) Lupus ban đỏ hệ thống (Systemic lupus erythematosus - SLE) là một bệnh tự miễn có tổn thương đa cơ quan được đặc trưng bởi sự có mặt của kháng thể kháng nhân và nhiều tự kháng thể khác. Cơ chế bệnh sinh của SLE rất phức tạp, bệnh là hậu quả của sự tương tác giữa yếu tố di truyền (gen bệnh), nội tiết và yếu tố môi trường (thuốc, tia cực tím, virus ) dẫn đến đáp ứng miễn dịch bất thường sản xuất không ngừng ra các tự kháng thể bệnh lý,các tự kháng thể này kết hợp với kháng nguyên tạo phức hợp miễn dịch 9 gắn vào các mô đích gây tổn thương [4], [5]. Ở Mỹ, theo thống kê hàng năm của CDC (Centers for disease control) có khoảng 1.8-7.6 trường hợp mắc mới trên 100.000 dân, tỉ lệ mắc bệnh khoảng 52/100.000 dân. Bệnh gặp chủ yếu ở nữ giới, tỷ lệ nữ/nam là 9/1[1], [2]. Biểu hiện lâm sàng của SLE gồm: [1], [4] - Tổn thương ở da và niêm mạc (70% các trường hợp) - Tổn thương cơ xương khớp gặp 90-100% - Các tổn thương nội tạng như viêm cầu thận, viêm màng phổi, tim mạch, tổn thương thần kinh trung ương, thiếu máu, giảm bạch cầu, loét miệng Tiêu chuẩn chẩn đoán SLE của hội Khớp học của Mỹ năm 1997 gồm:[3][4] 1. Nổi hồng ban có dạng hình cánh bướm ở hai bên má, phía dưới 2 mắt, sang thương có thể phẳng hoặc gồ lên mặt da. 2. Ban hình đĩa: những mảng màu đỏ, nổi gồ lên kèm theo nổi vảy ở phần da phủ phía trên. 3. Nhạy cảm với ánh sáng, nổi ban do phản ứng với ánh sáng mặt trời. 4. Loét ở miệng, mũi hầu: thường ít đau 5. Viêm khớp, thường không gây biến dạng khớp, có thể sưng khớp và ấn đau. 6. Viêm thanh mạc là tình trạng viêm của các túi hoặc màng bao bọc phổi, tim và lát khoang ổ bụng. 7. Bệnh tổn thương cầu thận: Protein niệu >500mg/24h hoặc tế bào niệu. 8. Rối loạn về thần kinh, biểu hiện bằng cơn động kinh hoặc rối loạn tâm thần không do các nguyên nhân khác 9. Rối loạn về máu, giảm số lượng các thành phần trong máu. 10 [...]... hep 2 tại bệnh viện Da liễu trung ương 3.1.1 Tình hình tiến hành xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên TB hep 2 Bảng 3.1: Số xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên TB hep 2 được chỉ định (N= 120 9) Kết quả 120 9 Tổng số BN làm xét nghiệm 27 Tỷ lệ % 100% Số BN do phòng chuyên đề chỉ định 6 72 55,58% Số BN do bác sĩ khác chỉ định 537 44, 42% 3.1 .2 Đặc điểm nhóm nghiên cứu được làm xét nghiệm. .. giàu kinh nghiệm tại bệnh viện da liễu trung ương 25 2. 2.3 Kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào Hep- 2 Các xét nghiệm được thực hiện tại phòng xét nghiệm bệnh viện Da Liễu Trung Ương với kit FLUORO HEPANA của hãng MBL – Nhật bản - Chuẩn bị bệnh phẩm: Huyết thanh Huyết thanh bệnh nhân được pha loãng với dung dịch PBS theo tỷ lệ 1:40 - Chuẩn bị lam kính có gắn tế bào Hep2 : Lam kính được để... dung dịch PBS, các lần rửa cách nhau 5 phút - Làm khô xung quanh lam, nhỏ một giọt glycerin vào mỗi giếng, đậy lam nhẹ nhàng tránh tạo bọt - Đọc kết quả dưới kính hiển vi huỳnh Làm khô quang glycerin đọc bằng kính hiển vi Hình 2. 1 Quy trình xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2 26 Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết quả xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2. .. tin bệnh cảnh lâm sàng từ hồ sơ bệnh án + Thống kê kết quả xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2 của các bệnh nhân nêu trên + Xử lý số liệu thu được và đưa ra nhận định 24 - Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân: Bệnh nhân không đồng ý tham gia nghiên cứu Bệnh nhân không có kết quả xét nghiệm hoặc kết quả chưa rõ ràng 2. 1 .2 Bệnh phẩm nghiên cứu - Lấy bệnh phẩm: Lấy máu tĩnh mạch 3ml... đọc 23 Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2. 1 Đối tượng nghiên cứu 2. 1.1 Bệnh nhân nghiên cứu Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân • Lựa chọn bệnh nhân phục vụ mục tiêu 1 - Đối tượng: tất cả bệnh nhân được chỉ định làm xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2 từ phòng khám chuyên đề và từ các bác sĩ khác tại bệnh viện da liễu trung ương • Lựa chọn bệnh nhân phục vụ mục tiêu 2 - Đối... của các bác sĩ khác là 28 ,1% Điều này có thể do những BN đến phòng chuyên đề khám có biểu hiện lâm sàng rõ ràng và rầm rộ hơn 3 .2 Kết quả xét nghiệm MDHQGT trên TB hep 2 của các bệnh nhân mắc bệnh mô liên kết tự miễn đủ tiêu chuẩn tại bệnh viện Da liễu trung ương 3 .2. 1 Kết quả xét nghiệm MDHQGT trên TB hep 2 chung của các bệnh nhân đủ tiêu chuẩn chẩn đoán SLE, XCB, VBC-VĐC 3 .2. 1.1 Đặc điểm nhóm nghiên... total 2 5 3 2 3 7 27 9 0,7 1,8 1,0 0,7 1,0 2, 5 100 Nhận xét: Kết quả xét nghiệm dương tính là 27 5 trên 27 9 bệnh nhân nên độ nhạy của xét nghiệm đối với bệnh SLE, XCB và VBC-VĐC là 98,56%, dạng lắng đọng chủ yếu là dạng đồng nhất chiếm 33,7%, dạng đốm 24 ,4%, dạng đồng nhất- hạt nhân 22 ,9% Một bệnh nhân có thể chỉ xuất hiện một kiểu lắng đọng huỳnh quang hoặc có thể phối hợp nhiều kiểu 3 .2. 2 Kết quả xét nghiệm. .. đọng huỳnh quang trên TB hep 2 theo số lượng tiêu chuẩn chẩn đoán XCB(N=77) Dạn g lắng đọng Mức 1c N Tỷ lệ % 2 40 homo nu speck honu 3 60 peri Homo speck dis khác 1+ 1 20 1c1p 1c2p 1c3p 2p 3p N Tỷ lệ N Tỷ lệ N Tỷ lệ N Tỷ lệ N T % % % % 2 1 2 4 18 ,2 9,1 18 ,2 36,4 6 1 2 29 15 2, 5 5,0 72, 5 2 13,3 1 12 4 6,7 80 1 1 1 2 2,5 18 ,2 1 34 2, 5 1 2. 5 80 20 1 độ 2+ lắng đọng 3+ 2 40 4+ 2 40 Tổng 5 10 0 3 3 5 11 27 ... chọn những bệnh nhân đủ tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh mô liên kết miễn dịch bao gồm SLE, bệnh xơ cứng bì và bệnh viêm bì cơ/viêm đa cơ do các bác sĩ chuyên khoa da liễu chẩn đoán và có kết quả xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2 • Phương pháp tiến hành: + Thu thập thông tin hành chính của các bệnh nhân đã được lựa chọn để phục vụ mục tiêu 1 và 2 + Thu thập thông tin bệnh cảnh lâm... 1.3.4 Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp Nguyên lý: Kháng thể (nếu có) trong huyết thanh bệnh nhân sẽ kết hợp với kháng nguyên nhân (nhân tế bào Hep- 2) , phức hợp kháng nguyên-kháng thể được phát hiện bằng kính hiển vi huỳnh quang nhờ kết hợp với kháng thể kháng IgG của người đã gắn huỳnh quang (anti IgG-FITC) Tế bào HEp- 2 là tế bào được ly trích từ các tế bào ung thư thanh quản của người Nhân tế bào rất . đoán bệnh nên chúng tôi thực hiện đề tài này với 2 mục tiêu: Khảo sát kết quả xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2 tại bệnh viện Da liễu trung ương. Tổng kết kết quả. Tổng kết kết quả xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trên tế bào hep 2 của các bệnh nhân mắc bệnh mô liên kết tự miễn đủ tiêu chuẩn tại bệnh viện Da liễu trung ương. 8 Chương 1 TỔNG QUAN. ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ***************************** PHẠM THỊ CHÚC KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG GIÁN TIẾP TRÊN TẾ BÀO HEP 2 TẠI BỆNH VIỆN DA LIỄU TRUNG ƯƠNG KHÓA LUẬN