Nghiên cứu ảnh hưởng bổ sung các loại đường lên khả năng sinh tổng hợp exopolysaccharids bởi chủng vi khuẩn

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUẾ Khoa Cơ khí - Công nghệ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cứu ảnh hưởng bổ sung loại đường lên khả sinh tổng hợp exopolysaccharids chủng vi khuẩn lactic tuyển chọn từ Lactobacillus farciminis TC25, TC28, TC30 Sinh viên thực Lớp Thời gian thực Địa điểm thực Giáo viên hướng dẫn Bộ môn : Huỳnh Phước Toàn : Bảo Quản Chế Biến 45 : 05/01/2015 đến 08/05/2015 : PTN Khoa Cơ khí – Công nghệ : ThS Trần Bảo Khánh : Công nghệ sau thu hoạch NĂM 2015 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DNS : Dinitrosalisilic ĐC : Đối chứng EPS : Exopolysaccharide L : Lactobacillus LAB : Lactic acid bacteria MRS : The Man, Rogosa and Sharpes MT : Môi trường OD : Mật độ quang TCA : Axit tricloacetic DANH MỤC CÁC BẢNG BẢNG 2.1 TÍNH CHẤT CỦA VI KHUẨN EPS [16] BẢNG 3.1 MÔI TRƯỜNG MRS BROTH 1000ML 21 BẢNG 4.1 BẢNG MÔI TRƯỜNG MRS BORTH BỔ SUNG TỈ LỆ PHẦN TRĂM ĐƯỜNG GLUCOSE CỦA CHỦNG L FARCIMINIS TC30 31 BẢNG 4.2 BẢNG MÔI TRƯỜNG MRS BORTH BỔ SUNG TỈ LỆ PHẦN TRĂM ĐƯỜNG LACTOSE CỦA CHỦNG L FARCIMINIS TC30 34 BẢNG 4.3 BẢNG MÔI TRƯỜNG MRS BORTH BỔ SUNG TỈ LỆ PHẦN TRĂM ĐƯỜNG SACCHAROSE CỦA CHỦNG L FARCIMINIS TC30 37 BẢNG 4.4 BẢNG MÔI TRƯỜNG MRS BORTH BỔ SUNG ĐƯỜNG TRONG NƯỚC DỪA 40 DANH MỤC CÁC HÌNH HÌNH 2.1 VI KHUẨN LACTOBACILLUS SP [55] HÌNH 2.2 VI KHUẨN LACTOBACILLUS FARCIMINIS [50] HÌNH 2.3 CẤU TRÚC SUCCINOGLYCAN TỪ SINORHIZOBIUM MELILOTI [54] 10 HÌNH 2.4 CẤU TẠO EXOPOLYSACCHARIDES 10 HÌNH 2.5 CƠ CHẾ SINH TỔNG HỢP EPS[27] 12 HÌNH 3.1 HÌNH ẢNH KHUẨN LẠC ĐƠN CỦA CHỦNG L FARCIMINIC TC25, TC28, TC30 20 HÌNH 3.2 SƠ ĐỒ BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM [9] 23 HÌNH 4.1 BIỂU ĐỒ KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP EPS CỦA CHỦNG VI KHUẨN LACTOBACILLUS FARCIMINIS TC25, TC28, TC30 TRÊN MÔI TRƯỜNG MRS BỔ SUNG 2% LACTOSE, 1% GLUCOSE 28 HÌNH 4.2 KẾT QUẢ SO MÀU BẰNG PHƯƠNG PHÁP PHENOL-SUNFURIC KHI KHẢO SÁT CHỌN CHỦNG SINH EPS CAO NHẤT 29 HÌNH 4.3 BIỂU ĐỒ KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA HÀM LƯỢNG ĐƯỜNG GLUCOSE BỔ SUNG VÀO MÔI TRƯỜNG MRS BORTH ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP EPS BỞI CHỦNG L FARCIMINIS TC30 .31 HÌNH 4.4 BIỂU ĐỒ KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA HÀM LƯỢNG ĐƯỜNG LACTOSE BỔ SUNG VÀO MÔI TRƯỜNG MRS BORTH ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP EPS BỞI CHỦNG L FARCIMINIS TC30 .34 HÌNH 4.5 BIỂU ĐỒ KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA HÀM LƯỢNG ĐƯỜNG SACCHAROSE BỔ SUNG VÀO MÔI TRƯỜNG MRS BORTH ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP EPS BỞI CHỦNG L FARCIMINIS TC30 .37 HÌNH 4.6 BIỂU ĐỒ KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA HÀM LƯỢNG ĐƯỜNG TRONG NƯỚC DỪA BỔ SUNG VÀO MÔI TRƯỜNG MRS BORTH ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP EPS BỞI CHỦNG L FARCIMINIS TC30 41 HÌNH 4.7 BIỂU ĐỒ KẾT QUẢ SO SÁNH GIỮA CÁC MÔI TRƯỜNG CÓ KHẢ NĂNG SINH EPS CAO CỦA CHỦNG L.FARCIMINIS 43 HÌNH 4.8 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI GIAN NUÔI CẤY LÊN KHẢ NĂNG SINH EPS BỞI CHỦNG L FARCIMINIS TC30 44 Lời Cảm Ơn Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, nỗ lực thân, em nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ hết lòng cá nhân tập thể Em xin gửi lời tri ân chân thành sâu sắc đến tất người Trước tiên, em xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, khoa Cơ Khí – Công Nghệ thầy cô trường Đại học Nông Lâm Huế tận tình giảng dạy, tạo điều kiện cho em suốt năm học qua Những kiến thức kinh nghiệm thầy cô truyền đạt tảng giúp cho em thực tốt đề tài Đặc biệt em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thạc sĩ Trần Bảo Khánh, người cô tận tâm hướng dẫn, trực tiếp dẫn dắt em từ lúc định hướng chọn đề tài suốt trình hoàn thiện đề tài Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ban lãnh đạo toàn thể anh chị em công tác phòng thí nghiệm khoa Chăn Nuôi – Thú Y giúp đỡ, tạo điều kiện cho em suốt trình thực đề tài khóa luận Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè, tập thể lớp BQ45 người thân quan tâm, ủng hộ, khích lệ trình học tập hoàn thành nghiên cứu Do hạn chế thời gian, kiến thức kinh nghiệm nên khóa luận không tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận ý kiến đóng góp thầy, cô bạn để khóa luận hoàn thành tốt Một lần nữa, em xin bày tỏ cảm kích trước tình cảm công lao Huế, tháng năm 2015 Sinh viên Huỳnh Phước Toàn MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC PHẦN ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TỔNG QUAN VỀ LACTOBACILLUS [55] 2.1.1 Giới thiệu Lactobacillus 2.1.1.1 Đặc điểm vi khuẩn Lactobacillus .3 2.1.1.2 Vai trò vi khuẩn Lactobacillus [55] 2.1.2 Giới thiệu Lactobacillus farciminis 2.1.3 Tiềm exopolysaccharides từ vi khuẩn lactic [32] 2.2 TỔNG QUAN VỀ EXOPOLYSACCHARIDES 2.2.1 Giới thiệu exopolysaccharides .8 2.2.2 Cấu tạo, cấu trúc Exopolysaccharides [12],[40] 10 2.2.2.1 Cấu trúc EPS từ chủng Succinoglycan 10 2.2.2.2 Cấu tạo EPS 10 2.2.3 Sinh tổng hợp EPS.[40] .12 2.2.3.1 Homo- EPS sinh tổng hợp 12 2.2.3.2 Hetero-EPS sinh tổng hợp [40] 13 2.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng tới trình sản xuất EPS vi khuẩn lactic 13 2.2.4.1 Thành phần môi trường 14 2.2.4.2 Oxy tự nhiên .15 2.2.4.3 pH .15 2.2.4.4 Nhiệt độ 15 2.2.4.5 Giai đoạn tăng trưởng vi khuẩn 15 2.2.5 Chức năng, ứng dụng Exopolysaccharides 16 2.2.5.1 Ứng dụng EPS công nghiệp, thực phẩm 16 2.2.5.2 Tác dụng exopolysaccharides sức khỏe người 16 2.2.5.3 Một số ứng dụng khác 17 2.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VÀ SẢN XUẤT EPS TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM [5] 17 2.3.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất EPS giới 17 2.3.2 Tình hình sản xuất EPS Việt Nam [5] .18 PHẦN 20 PHƯƠNG PHÁP VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 20 3.1 NGUYÊN VẬT LIỆU – HÓA CHẤT – THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 20 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 20 3.1.2 Hóa chất, môi trường 20 3.1.2.1 Môi trường 20 3.1.2.2 Hóa chất .21 3.1.3 Dụng cụ thiết bị .21 3.1.3.1 Dụng cụ .21 3.1.3.2 Thiết bị 21 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.2.1 Phương pháp vi sinh 24 3.2.1.1 Hoạt hóa giữ giống [4] 24 3.2.2.2 Phương pháp tăng sinh .25 3.2.2 Phương pháp vật lý 25 3.2.2.1 Phương pháp đo mật độ quang[52] 25 3.2.2.2 Phương pháp xác định pH 25 3.2.2.3 Phương pháp ly tâm 25 3.2.3 Phương pháp hóa học 25 3.2.3.1 Kết tủa protein TCA 25 3.2.3.2 Phương pháp kết tủa EPS dung môi (etanol 99o) [33] .26 3.2.3.3 Phương pháp phenol - sulfuric để định lượng EPS tinh khiết [25],[1] 26 3.2.3.4 Phân tích hàm lượng nước dừa DNS [47] 26 3.2.5 Phương pháp toán học .26 PHẦN 27 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TUYỂN CHỌN CHỦNG VI KHUẨN LACTOBACILLUS FARCIMINIS TC25, TC28, TC30 CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP EPS CAO .27 4.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG THÍCH HỢP ĐỂ CHỦNG VI KHUẨN L FARCIMINIS TC30 ĐÃ ĐƯỢC TUYỂN CHỌN SINH EPS CAO .29 4.2.1 Kết khảo sát ảnh hưởng thành phần môi trường nguồn cacbon để chủng vi khuẩn L farciminis TC30 sinh EPS cao 30 4.2.1.1 Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng glucose khác môi trường MRS borth đến khả sinh tổng hợp EPS chủng Lactobacillus farciminis TC30 .30 4.2.1.2 Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng lactose bổ sung vào môi trường MRS borth đến khả sinh tổng hợp EPS chủng Lactobacillus farciminis TC30 33 4.2.1.3 Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng saccharose bổ sung vào môi trường MRS borth đến khả sinh tổng hợp EPS chủng Lactobacillus farciminis TC30 .36 4.2.1.4 Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng đường nước dừa bổ sung vào môi trường MRS borth đến khả sinh tổng hợp EPS chủng Lactobacillus farciminis TC30 39 4.2.2 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian nuôi cấy lên khả sinh exopolysaccharide chủng L farciminis TC30 tuyển chọn 42 PHẦN 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46 5.1 KẾT LUẬN 46 5.2 KIẾN NGHỊ .46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHẦN ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, với tiến khoa học – công nghệ, người ngày tiếp cận gần hơn, đến giới sinh vật nói chung hệ vi sinh vật nói riêng Và sản phẩm quan trọng exopolysaccharides Exopolysaccharides polymer có trọng lượng phân tử cao bao gồm thành phần monosaccharrides, tiếc loại vi sinh vật vào môi trường xung quanh [54] Do đa dạng, phong phú thành phần, exopolysaccharides ứng dụng nhiều ngành công nghiệp thực phẩm dược phẩm Ngoài góp phần quan trọng công nghiệp sản xuất, xử lý môi trường Sự quan tâm vi khuẩn acid lactic sản xuất exopolysaccharides tăng lên gần loại sinh vật thực phẩm sản xuất polymer quan trọng việc xác định đặc tính lưu biến sản phẩm công nghiệp sữa chua, mát tráng miệng làm từ sữa Khi thêm vào sản phẩm thực phẩm exopolysaccharides mang chức chất làm đặc, ổn định, chất chuyển thể sữa, tác nhân làm đông , tác nhân giữ nước Bên cạnh exopolysaccharides vi khuẩn lactic đóng vai trò quan trọng sức khỏe người động vật hoạt tính tăng cường khả miễn dịch, kháng virus, chống oxy hóa, chống ung thư chống cao huyết áp Lactobacillus farciminis nhóm vi khuẩn lactic lên men đồng hình, chúng tìm thấy tự nhiên loại thực phẩm chẳng hạn sản phẩm thịt (đặc biệt xúc xích) men bánh mì [55] Ngoài chúng tìm thấy ăn truyền thống tiếng Hàn Quốc kim chi [38] Do đặc tính vi khuẩn lactic khả sinh sản tổng hợp polysaccharide ngoại bào nhanh Nếu chúng đựợc nuôi cấy điều kiện thích hợp khả sinh polysaccharide chúng cao đem lại nguồn polysaccharide dồi giúp mở tiềm ứng dụng exopolysaccharide từ vi sinh vật vào lĩnh vực khác Để thu exopolysaccharides cao ta phải chọn chủng Lactobacillus farciminis mạnh nuôi điều kiện tốt Vì em chọn đề tài “Nghiên cứu ảnh hưởng bổ sung loại đường lên khả sinh tổng hợp exopolysaccharids chủng vi khuẩn lactic tuyển chọn từ Lactobacillus farciminis TC25, TC28, TC30 ” để làm đề tài khóa luận tốt nghiệp Mục tiêu nghiên cứu - Tuyển chọn chủng Lactobacillus farciminis có tiềm sinh tổng hợp exopolysaccharides cao - Xác định môi trường nuôi cấy bổ sung loại đường để sinh tổng hợp exopolysaccharides cao - Xác định thời gian nuôi cấy để có khả sinh tổng hợp exopolysaccharides cao 43 Vasilean I., cộng sự, (2010), “ Original research paer obtaining fermented dairy products ưith the yogurt culture YF-L 812”, Food Technology 35(1), pp 92-99 44 Yuan B., Chi X., Zhang R., (2012), “Optimization of exopolysaccharides production from a novel strain of Ganoderma lucidum CAU5501 in submerged culture” Brazilian Journal of Microbiology, pp.1517-8382 45 Yuksekdag Z N., Aslim B., (2008), “ Influence of different carbon sources on exopolysaccharide production by Lactobacillus delbrueckii sub sp bulgaricus (B3, G12) andStreptococcus thermophilus (W22)” Brazilian Archives of Biology and Technology, pp 1516-8913 46 Zhang Y., Li S., Zhang C., Luo Y., Zhang H., Yang Z., (2011), “Growth and exopolysaccharide production by Lactobacillus fermentum F6 in skim milk”, African Journal of Biotechnology 10(11), pp 2080-2091 TÀI LIỆU WEB 47 http://www.slideshare.net/nhattamnhattam/phn-tch-glucis Cập nhật ngày 21/3/2015 48 http://caythuocquy.info.vn/QU%E1%BA%A2-D%E1%BB%AAA-n %C6%B0%E1%BB%9Bc-mat-cui-gion-th%C6%A1m-ngon-b%E1%BB %95-kh%E1%BB%8Fe-1600.html Cập nhật ngày 24/3/2015 49 http://123doc.org/document/322797-vi-khuan-lactic.htm Cập nhật ngày 28/2/2015 50 http://www.inra.fr/en/Partners-and-Agribusiness/Results-InnovationsTransfer/All-the-news/Mechanisms-of-action-of-the-probioticLactobacillus-farciminisn Cập nhật ngày 21/4/2015 51 http://webcache.googleusercontent.com/search? q=cache:aHQIQkQuDzgJ:lib.lhu.edu.vn/ViewFile/9529+&cd=2&hl=vi&ct= clnk Cập nhật ngày 22/4/2015 52 http://vi.scribd.com/doc/58146447/%C4%90%E1%BB%8ANH-L%C6%AF %E1%BB%A2NG-VI-SINH-V%E1%BA%ACT-B%E1%BA%B0NG-PH %C6%AF%C6%A0NG-PHAP-%C4%90O-M%E1%BA%ACT%C4%90%E1%BB%98-QUANG#scribd Cập nhật ngày 24/4/2015 53 http://www.hcmbiotech.com.vn/technology_detail.php?cateid=8&id=32 Cập nhật ngày 08/3/2015 54 http://vi.scribd.com/doc/98371235/TI%E1%BB%82U-LU%E1%BA%ACNEXOPOLYSACCHARIDES#scribd Cập nhật ngày 29/342015 51 55 http://truyenngan.123doc.vn/document/2300335-luan-van-thac-si-cong-nghe- sinh-hoc-phan-lap-va-dinh-danh-vi-khuan-lactic-len-men-nem-chuatinhdong-thap-va-thanh-pho-can-tho.htm?page=9 Cập nhật ngày 14/5/2015 toanbqcb45@gmail.com 52 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phương trình đường chuẩn glucose Phương trình đường chuẩn glucose với phenol – sunfuric Phương trình đường chuẩn glucose với thuốc thử DNS Phụ lục Kết xác định hàm lượng EPS nuôi điều kiện khác phương pháp phenol-sunfuric Ảnh hưởng đường glucose 3.Ảnh hưởng đường saccharose Ảnh hưởng lactose Ảnh hưởng đường nước dừa Ảnh hưởng thời gian Phụ lục Số liệu thô Kết đo OD 490 nm chủng TC25, TC28, TC30 TC25 OD 0,76 TC28 TC30 3 0,712 0,736 0,943 0,978 0,956 1,271 1,265 1,279 Kết đo OD 490 nm môi trường MRS bổ sung glucose Nồng độ glucose(g) Mẫu 20 30 40 50 60 0,754 1,234 1,396 1,453 1,629 1,406 0,724 1,265 1,404 1,476 1,663 1,424 0,762 1,247 1,399 1,442 1,673 1,487 Kết đo OD 490 nm môi trường MRS bổ sung lactose Nồng độ lactose(g) Mẫu 20 30 40 50 60 0,701 0,973 1,254 1,431 1,782 1,613 0,717 0,992 1,287 1,402 1,767 1,623 0,711 1,014 1,292 1,416 1,771 1,626 Kết đo OD 490 nm môi trường MRS bổ sung saccharose Nồng độ saccharose(g) Mẫu 20 30 40 50 60 0,673 0,731 0,928 0,992 1,184 0,808 0,702 0,757 0,924 0,987 1,167 0,819 0,694 0,761 0,941 1,012 1,179 0,799 Kết đo OD 490 nm môi trường MRS bổ sung đường nước dừa Nồng độ đường nước dừa(g) Mẫu 10 15 20 0,721 1,035 1,119 1,255 1,411 0,747 1,003 1,124 1,263 1,402 0,754 1,016 1,104 1,247 1,416 Kết đo OD 490 nm thời gian nuôi Thời gian Mẫu 12h 24h 36h 48h 60h 72h 0,646 1,064 1,235 1,734 1,834 1,323 0,685 1,036 1,287 1,698 1,814 1,367 0,692 1,097 1,302 1,726 1,843 1,322 Kết đo OD 540 nm tính hàm lượng đường nước dừa DNS Nước dừa OD (540nm) OD1 OD2 OD3 Thủy phân 0.421 0.421 0.422 Không thủy phân 0,389 0,388 0,388 Phụ lục Số liệu xử lý SPSS Kết khảo sát tuyển chọn chủng vi khuẩn Lactobacillus farciminis TC25, TC28, TC30 có khả sinh tổng hợp EPS cao, Hàm lượng EPS Chủng L,farciminis TC25 TC28 TC30 Sig, 1,00 2,00 3,00 Sig, Tukey HSDa Duncana N 3 3 3 Subset for alpha = 0,05 85,458 113,000 152,083 1,000 1,000 1,000 85,458 113,000 151,911 1,000 1,000 1,000 Kết khảo sát chủng TC30 môi trường MRS có bổ sung glucose, Hàm lương EPS (µg/ml) Môi trường N Tukey HSDa ĐC MT1 MT2 MT5 MT3 MT4 Sig, a Duncan ĐC MT1 MT2 MT5 MT3 MT4 Sig, 3 3 3 3 3 3 Subset for alpha = 0,05 86,458 149,208 168,083 173,000 175,250 200,000 1,000 1,000 ,092 1,000 86,458 149,208 168,083 173,000 173,000 175,250 200,000 1,000 1,000 ,062 ,366 1,000 Kết khảo sát chủng TC30 môi trường MRS có bổ sung lactose, Hàm lượng EPS (µg/ml) N Môi Trường ĐC MT6 MT7 MT8 MT10 MT9 Sig, ĐC MT6 MT7 MT8 MT10 MT9 Sig, Tukey HSDa Duncan a 3 3 3 Subset for alpha = 0,05 81,833 117,250 152,833 170,167 195,708 1,000 81,833 3 3 3 1,000 1,000 1,000 214,792 1,000 1,000 117,250 152,833 170,167 195,708 1,000 1,000 1,000 1,000 214,792 1,000 1,000 Kết khảo sát chủng TC30 môi trường MRS có bổ sung saccharose Hàm lượng EPS (µg/ml) N Môi trường Tukey HSDa Duncan a ĐC MT11 MT15 MT12 MT13 MT14 Sig, ĐC MT11 MT15 MT12 MT13 MT14 Sig, 3 3 3 3 3 3 Subset for alpha = 0,05 79,333 86,833 94,208 109,500 117,750 1,000 79,333 1,000 1,000 1,000 1,000 140,208 1,000 86,833 94,208 109,500 117,750 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 140,208 1,000 Kết khảo sát chủng TC30 môi trường MRS có bổ sung đường nước dừa Hàm lượng EPS (µg/ml) N Môi trường Tukey HSDa Duncana ĐC MT16 MT17 MT18 MT19 Sig, ĐC MT16 MT17 MT18 MT19 Sig, 3 3 3 3 3 Subset for alpha = 0,05 85,708 120,375 132,583 150,000 1,000 85,708 1,000 1,000 1,000 169,333 1,000 120,375 132,583 150,000 1,000 1,000 1,000 1,000 169,333 1,000 Kết so sánh khả sinh tổng hợp EPS chủng TC30 môi trường MRS có bổ sung đường, Hàm lượng EPS (µg/ml) N Subset for alpha = 0,05 Môi trường 3,00 140,208 151,911 Tukey HSDa 5,00 4,00 169,333 1,00 2,00 Sig, 1,000 1,000 1,000 3,00 140,208 5,00 151,911 Duncana 4,00 169,333 1,00 2,00 Sig, 1,000 1,000 1,000 200,000 1,000 214,792 1,000 200,000 1,000 214,792 1,000 Kết khảo sát thời gian để sinh tổng hợp EPS cao, Hàm lượng EPS (µg/ml) N Subset for alpha = 0,05 Thời gian Tukey 12h 77,417 a 24h 126,333 HSD 36h 152,458 72h 160,292 48h 60h Sig, 1,000 1,000 0,096 12h 77,417 Duncana 24h 126,333 36h 152,458 72h 48h 60h Sig, 1,000 1,000 1,000 208,042 1,000 221,917 1,000 160,292 208,042 1,000 1,000 221,917 1,000 Phụ lục Số liệu tinh Kết khảo sát tuyển chọn chủng vi khuẩn Lactobacillus farciminis (TC25, TC28, TC30)có khả sinh tổng hợp EPS cao Chủng vi khuẩn L, fermentum HLĐ1 HLĐ2 HLĐ3 TC25 85,658 83,458 87,285 85,458c TC28 110,216 113,424 116,360 113,000b TC30 145,421 150,332 159,980 151,911a HLĐ Kết khảo sát chủng MC3 môi trường MRS có bổ sung glucose HLĐ (µg/ml) HLĐ1 HLĐ2 HLĐ3 Hàm lượng EPS (µg/ml) ĐC 87,375 83,625 88,375 86,458e MT1 147,375 151,250 149,000 149,208d MT2 167,625 168,625 168,000 168,083c MT3 174,750 177,625 173,375 173,000bc MT4 196,750 201,000 202,250 175,250b MT5 168,875 171,125 179,000 200,000a Môi trường Kết khảo sát chủng MC3 môi trường MRS có bổ sung lactose HLĐ (µg/ml) HLĐ1 HLĐ2 HLĐ3 Hàm lượng EPS (µg/ml) ĐC 80,750 82,750 82,000 81,833f MT6 114,750 117,125 119,875 117,250e MT7 149,875 154,000 154,625 152,833d MT8 172,000 168,375 170,125 170,167c MT9 215,875 214,000 214,500 195,708b MT10 194,750 196,000 196,375 214,792a Môi trường Kết khảo sát chủng MC3 môi trường MRS có bổ sung saccharose HLĐ (µg/ml) HLĐ1 HLĐ2 HLĐ3 Hàm lượng EPS (µg/ml) ĐC 84,500 87,750 88,250 79,333f MT11 77,250 80,875 79,875 86,833e MT12 109,125 108,625 110,750 109,500c MT13 117,125 116,500 119,625 117,750b MT14 141,125 139,000 140,500 140,208a MT15 94,125 95,500 93,000 94,208d Môi trường Kết khảo sát chủng MC3 môi trường MRS bổ sung nước dừa HLĐ (µg/ml) HLĐ1 HLĐ2 HLĐ3 Hàm lượng EPS (µg/ml) ĐC 83,250 86,500 87,375 85,708e MT16 122,500 118,500 120,125 120,375d MT17 133,000 133,625 131,125 132,583c MT18 150,000 151,000 149,000 150,000b MT19 169,500 168,375 170,125 169,333a Môi trường So sánh kết khảo sát hàm lượng EPS môi trường bổ sung HLĐ (µg/ml) HLĐ1 HLĐ2 HLĐ3 Hàm lượng EPS (µg/ml) 1% glucose + 2% lactose 145,421 150,332 159,980 151,911d 5% glucose 196,750 201,000 202,250 200,000b 5% lactose 215,875 214,000 214,500 214,792a 5% saccharose 141,125 139,000 140,500 140,208e 100% nước dừa 169,500 168,375 170,125 169,333c Môi trường Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả sinh EPS chủng TC30 Thời gian HLĐ (µg/ml) Hàm lượng EPS (µg/ml) HLĐ1 HLĐ2 HLĐ3 12 73,875 78,750 79,625 77,417f 24 126,125 122,625 130,25 126,333e 36 147,500 154,000 155,875 152,458d 48 209,875 205,375 208,875 208,042b 60 222,375 219,875 223,500 221,917a 72 158,500 164,000 158,375 160,292c Kết khảo sát hàm lượng đường nước dừa Nước dừa HLĐ (mg/ml) HLĐ1 HLĐ2 HLĐ3 Thủy phân 22.117 22.117 22.167 22.134 Không thủy phân 20.523 20.473 20.473 20.489 Phụ lục 6: Thao tác thí nghiệm khảo sát khả sinh tổng hợp EPS 1.Bắt khuẩn lạc đơn Vontex Nuôi 48 tủ ấm Kết tủa etanol lạnh Nuôi 24 tủ ấm Đưa mật độ 106CFU/ml Ly tâm Do OD bước sóng 490 nm [...]... sinh tổng hợp bởi vi khuẩn lactic ở Vi t Nam Tuy nhiên ở nước ta hiện nay cũng có nhiều tổ chức khoa học đã tiến hành nghiên cứu sản xuất và ứng dụng các sản phẩm của EPS vào các lĩnh vực nông nghiệp, công nghiệp dầu khí và y học từ các chủng vi sinh khác Vi n Công nghệ sinh học, Vi n Khoa học và Công nghệ Vi t Nam cũng đã có một số đề tài về nghiên cứu về sinh tổng hợp và ứng dụng 18 các chủng vi sinh. .. lệ 4:3 [46] Từ đó chúng tôi kết hợp môi trường MRS borth bổ sung 2% lactose, 1% glucose để tiến hành khảo sát khả năng sinh tổng hợp của chủng L farciminis Để khảo sát khả năng sinh tổng hợp exopolysaccharide của các chủng L farciminis TC25, TC28, TC30 chúng tôi tiến hành nuôi cấy vi khuẩn từ các ống chủng gốc từ phòng thí nghiệm đã được chuẩn bị, tiến hành ria đĩa chọn khuẩn lạc đơn và ủ 24h ở 37 0C,... chọn chủng vi khuẩn L farciminis sinh tổng hợp EPS cao, môi trường MRS bổ sung (2%, 3%, 4%, 5%, 6%) hàm lượng glucose, môi trường MRS bổ sung (2%, 3%, 4%, 5%, 6%) hàm lượng lactose, môi trường MRS bổ sung (2%, 3%, 4%, 5%, 6%) hàm lượng saccharose, môi trường MRS bổ sung (25%, 50%, 75%, 100%) lượng đường trong nước dừa, sau đó ta chọn môi trường bổ sung đường sinh tổng hợp EPS cao để tiến hành khảo sát... cấu tạo bằng cách bổ sung các nucleotide đường ở màng tế bào chất Đường là nguyên liệu khởi đầu cho chuỗi tổng hợp Chủng LAB có thể sử dụng monosacarides khác nhau và disaccharides như nguồn năng lượng, thông qua vi c sử dụng hiệu quả các loại đường Đường đưa vào tế bào được chuyển đổi thành nucleotide đường Các đường monosacarit được chuyển đổi thành nucleotide đường cho các phản ứng trùng hợp, bao gồm... người, được nghiên cứu để có thể đưa vào cơ thể con người qua đường tiêu hóa Để tồn tại được trong đường tiêu hóa của người, vi khuẩn Lactobacillus phải có khả năng chịu đựng môi trường acid trong dạ dày người Đề tài ở đây nghiên cứu khả năng chịu đựng môi trường acid trong dạ dày của vi khuẩn Lactobacillus, nhằm chọn lọc được những vi khuẩn Lactobacillus hữu ích có khả năng tồn tại trong đường tiêu... của vi khuẩn Lactobacillus Lactobacillus thuộc nhóm các vi khuẩn lactic, là những vi khuẩn có khả năng lên men các carbohydrate thành năng lượng và acid lactic Vi khuẩn Lactobacillus được phân loại như sau: Ngành: Firmicutes Lớp: Bacilli Bộ: Lactobacillales Họ: Lactobacillaceae Giống: Lactobacillus Vi khuẩn Lactobacillus thường có dạng hình que, với kích thước khoảng 0,5 – 1,2 x 1 – 10 μm Các tế bào vi. .. 4.1 Biểu đồ kết quả khảo sát khả năng sinh tổng hợp EPS của chủng vi khuẩn Lactobacillus farciminis TC25, TC28, TC30 trên môi trường MRS bổ sung 2% lactose, 1% glucose Nhìn vào hình 4.1 ta có thể thấy, với điều kiện nuôi cấy trong môi trường MRS có bổ sung 2% lactose, 1% glucose với thời gian 48 giờ, ở nhiệt độ 37 oC, kết quả cho thấy cả 3 chủng L farciminis đều có khả năng sinh tổng hợp EPS và cho hàm... của các đơn vị lặp lại của mỗi chủng là không giống nhau, ngoại trừ trong trường hợp của Lactobacillus kefiranofaciens subsp Loài này, được phân lập từ hạt kefir, một thực phẩm sữa lên men từ các khu vực Bắc Caucasus, tạo ra một lượng lớn các polysaccharides 11 2.2.3 Sinh tổng hợp EPS.[40] Hình 2.5 Cơ chế sinh tổng hợp EPS[27] 2.2.3.1 Homo- EPS sinh tổng hợp Homo – EPS được tổng hợp bên ngoài các tế... cao làm tăng khả năng liên kết bề mặt của các màng sinh học Tập hợp tế bào vi khuẩn Các cầu nối giữa các tế bào được kích hoạt bởi exopolysaccharides, làm cho mật độ tế bào cao Khả năng giữ nước Exopolysaccharides có khả năng giữ nước cao nhờ liên kết hydro do đó duy trì 1 lượng nước xung quanh màng sinh học Sự gắn kết của màng sinh học Nguồn dinh dưỡng Lớp bảo vệ Exopolysaccharides có khả năng tạo thành... thị đường chuẩn của glucose tinh khiết với thuốc thử DNS sẽ tính được hàm lượng đường khử của mẫu nước dừa 3.2.5 Phương pháp toán học - Xử lý bằng phần mềm SPSS 20 để hệ thống hóa các số liệu nghiên cứu 26 PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết quả khảo sát tuyển chọn chủng vi khuẩn Lactobacillus farciminis TC25, TC28, TC30 có khả năng sinh tổng hợp EPS cao Cấu trúc của EPS được tạo thành từ các ... từ chủng vi sinh khác Vi n Công nghệ sinh học, Vi n Khoa học Công nghệ Vi t Nam có số đề tài nghiên cứu sinh tổng hợp ứng dụng 18 chủng vi sinh vật sinh EPS vào vi c sản xuất số chế phẩm sinh. .. QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA HÀM LƯỢNG ĐƯỜNG SACCHAROSE BỔ SUNG VÀO MÔI TRƯỜNG MRS BORTH ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP EPS BỞI CHỦNG L FARCIMINIS TC30 .37 HÌNH 4.6 BIỂU ĐỒ KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG... trường đến khả sinh tổng hợp chủng L farciminis TC30 39 Để khảo sát ảnh hưởng hàm lượng đường nước dừa lên khả sinh tổng hợp EPS chủng L farciminis TC30, tiến hành xác định hàm lượng đường khử