Nghiên cứu chế tạo màng trị bỏng từ cellulose của acetobacter xylinum phối hợp với hoạt chất tái sinh mô từ dầu mù u và tinh dầu tràm

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo nghiên cứu Ủy ban quốc gia phòng chống tai nạn, thương tích Cục y tế dự phòng, số lượng tai nạn bỏng nước đứng thứ sau tai nạn giao thơng với khoảng 20 000 - 25 000 bệnh nhân / năm Thực tế, số bệnh nhân bị vết thương da cao nhiều tính tai nạn khác gây tai nạn lao động, tai nạn giao thơng Năm 2006, nước có 5880 vụ tai nạn lao động.[8] Con số chưa gồm tai nạn lĩnh vực nơng nghiệp sở tư nhân quản lý Số vụ thống kê chiếm 8-10 % so với thực tế Vào tháng cao điểm, hàng ngày Viện bỏng Quốc gia phải điều trị cho khoảng 200 bệnh nhân bị vết thương bỏng, tai nạn giao thơng, tai nạn nghề nghịêp Cũng theo thống kê Viện Bỏng quốc gia, 80 % nạn nhân bỏng xuất thân từ gia đình có thu nhập thấp, chi phí cho ca điều trị bỏng nặng tốn Các tai nạn nêu tạo thương tích nặng nề Chấn thương bỏng làm gia tăng thẩm thấu nước, protein chất điện giải, dẫn đến tăng tiết dịch, tạo điều kiện gia tăng nhiễm trùng vết thương Mục tiêu điều trị bỏng vết thương da chống nhiễm trùng, giữ mơi trường đủ ẩm mà khơng bị ứ dịch, tạo điều kiện cho mơ phát triển bảo vệ mơ q.[11],[98] Một vết thương da hay vết bỏng chóng lành giữ điều kiện thích hợp, nghĩa cần có lớp màng bảo vệ vết thương (wound dressing) Một lớp màng bảo vệ có ý nghĩa lớn việc giữ cho vết thương tránh khỏi nhiễm trùng, có độ ẩm thích hợp, kích thích lành sẹo, bảo vệ tế bào hình thành quan trọng hạn chế tình trạng nước chất điện giải liên tục bay từ bề mặt vết thương.[32],[52] Chế tạo màng sinh học cellulose vi khuẩn chứa hoạt chất tái sinh mơ từ dầu mù u tinh dầu tràm sử dụng điều trị bỏng vết thương da nhằm đáp ứng mục tiêu Cellulose vi khuẩn (Bacterial Cellulose, viết tắt BC) sản phẩm số lồi vi khuẩn, đặc biệt vi khuẩn Acetobacter xylinum BC tạo thành từ Acetobacter xylinum có cấu trúc hóa học giống cellulose thực vật có số tính chất hóa lý đặc biệt đường kính sợi nhỏ, độ tinh khiết cao, độ polymer hóa lớn, độ bền học khả thấm hút nước cao, bị thủy phân enzyme…[89],[104] Vì BC ứng dụng nhiều lĩnh vực cơng nghệ thực phẩm, cơng nghệ giấy, cơng nghệ pin, …Trong lĩnh vực y học, BC nghiên cứu dùng làm tá dược, mặt nạ dưỡng da, mạch máu nhân tạo đặc biệt sử dụng làm màng sinh học trị bỏng…[29],[46] Hiện loại màng sinh học phần lớn phải nhập ngoại, giá thành màng cao tùy thuộc nhiều vào nguồn hàng nhập vào Việc sản xuất màng nước góp phần cung cấp kịp thời cho điều trị, chi phí điều trị cho bệnh nhân giảm nhiều giá thành thấp Việc sử dụng màng sinh học từ cellulose vi khuẩn hoạt chất tái sinh mơ dầu mù u có nhiều thuận lợi màng có tính ổn định bảo quản nhiệt độ bình thường, khơng cần điều kiện bảo quản đặc biệt, điều thuận tiện cho q trình sử dụng bảo quản màng Từ sở mục tiêu nghiên cứu đề tài là: Nghiên cứu điều kiện ni cấy vi khuẩn Acetobacter xylinum thu BC Chế tạo màng BC tinh chế sử dụng tạo màng trị bỏng Nghiên cứu chế tạo màng trị bỏng từ màng cellulose tinh chế phối hợp với hoạt chất tái sinh mơ từ dầu mù u tinh dầu tràm trà Úc Bước đầu đánh giá hiệu điều trị màng trị bỏng lâm sàng CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cellulose từ vi khuẩn Acetobacter xylinum 1.1.1 Vi khuẩn Acetobacter xylinum Một số lồi vi khuẩn thuộc chi khác có khả tổng hợp cellulose (gọi bacterial cellulose) Acetobacter, Achromobacter, Aerobacter, Rhizobium Trong lồi trên, Acetobacter xylinum vi khuẩn tạo cellulose hữu hiệu A xylinum Brown mơ tả lần vào năm 1886 với khả tạo lớp màng giống gelatin bề mặt mơi trường lên men có thành phần hóa học giống cellulose Sau khảo sát kính hiển vi cho thấy vi khuẩn phân bố tồn lớp mạng lưới cellulose Hiện vi khuẩn A xylinum chủng vi khuẩn có lợi lĩnh vực sản xuất cellulose đường sinh tổng hợp A xylinum thuộc nhóm vi khuẩn Acetic, chi Acetobacter, họ Pseudomonadaceae Gần xếp vào chi Gluconacetobacter Vi khuẩn hiếu khí, có chu mao sản xuất cellulose ngoại bào Theo khóa phân loại Bergey, A xylinum thuộc lớp Schizomycetes, Pseudomonadales, phụ Pseudomonadieae, họ Pseudomonadaceace [45],[49] Vi khuẩn A xylinum hình que, thẳng hay cong, dài khoảng 2-3 µm, bề ngang khoảng 0,6-0,8 µm, khơng sinh bào tử, di động khơng, thường xếp riêng lẻ, đơi thành chuỗi A xylinum vi khuẩn gram âm, trường hợp đặc biệt vi khuẩn già hay ảnh hưởng mơi trường ni cấy lâu ngày hình dạng gram vi khuẩn thay đổi, tế bào dài hơn, phình to ra, phân nhánh khơng phân nhánh, trường hợp giống bị thối hố dần, chất lượng cellulose [56] A xylinum phát triển phạm vi pH từ 3-8, nhiệt độ phát triển từ 12-30 o C Ở 37 oC vi khuẩn bị thối hóa hồn tồn Nhiệt độ thích hợp 25 oC, pH tối ưu để tạo cellulose 5,5 Trong mơi trường ni cấy lỏng, trạng thái tĩnh, vi khuẩn sử dụng chất dinh dưỡng chuyển hố thành cellulose tạo váng dày bề mặt chất Ở trạng thái động, cellulose tạo thành có hình elip dạng sợi nhỏ Khi tạo cellulose, vi khuẩn đồng thời tích lũy khoảng % acid acetic, điều làm pH mơi trường giảm từ 1-2 so với pH mơi trường ban đầu Tuy nhiên, A xylinum có khả chịu pH thấp Ứng dụng ưu điểm này, ni cấy người ta thường cho thêm acid acetic để tránh nhiễm loại vi khuẩn lạ Hình 1.1 Hình chụp A xylinum mạng lưới cellulose kính hiển vi điện tử qt ( x 10 000 lần) Nguồn: Yamanaka S Watanabe K (1994) Application of bacterial cellulose [107] Đặc điểm sinh hố A xylinum: vi khuẩn có khả oxy hóa ethanol thành acid acetic, phản ứng catalase dương tính, khơng tăng trưởng mơi trường Hoyer, khơng tạo sắc tố nâu, có khả tổng hợp cellulose, chuyển hóa glucose thành acid acetic, chuyển glycerol thành dihydroxy aceton Khi ni mơi trường rắn, lúc tế bào non, khuẩn lạc mọc riêng rẽ, nhầy, suốt, xuất sau 3-5 ngày Khi già, tế bào mọc dính thành cụm, khuẩn lạc mọc dính thành lớp màng 1.1.2 Sinh tổng hợp BC vi khuẩn A xylinum Cellulose tổng hợp lỗ bề mặt tế bào có kích thước khoảng 3,5 nm Các lỗ xếp thành hàng dài, lỗ bao phủ hạt có kích thước 10 nm [36] Hạt bao gồm enzym tổng hợp cellulose có liên quan phản ứng polymer hóa (AcsAB) vài enzym hỗ trợ có liên quan đến chức khác (AcsC, AcsD).[69] Mỗi hạt sản xuất chuỗi glucan, chuỗi tạo thành sợi bản, sợi kết hợp lại thành vi sợi phun vào mơi trường ni cấy Những sợi sinh BC kết hợp lại với để hình thành nên sợi sơ cấp (subfibril), sợi mảnh có nguồn gốc tự nhiên Các sợi sơ cấp kết lại thành vi sợi (microfibril) Các vi sợi nằm bó (bundle), cuối hình thành dải (ribbon) AcsAB AcsC AcsD Hình 1.2 Cấu tạo lỗ tiết cellulose Nguồn: Umeda Y.,Hirano A., Yshibashi M.,(1999) DNA Res.6 [101] Sinh tổng hợp BC tiến trình bao gồm nhiều bước điều hòa cách chun biệt xác, liên quan đến số lớn enzym, phức hợp protein điều hòa Tiến trình bao gồm tổng hợp uridin diphosphoglucose, tiền chất cellulose, tiếp đến polymer hóa glucose vào chuỗi β- 1,4 glucan kết hợp sợi vào dải ribbon hình thành từ hàng trăm, chí hàng ngàn sợi cellulose riêng lẻ Con đường chế tổng hợp uridin diphosphoglucose biết nhiều, chế phân tử polymer hóa glucose vào mạch dài mạch nhánh, đẩy bên ngồi chúng kết hợp thành sợi cần làm sáng tỏ hơn.[19],[26] Cellulose tổng hợp từ A xylinum sản phẩm cuối biến dưỡng carbon, phụ thuộc vào trạng thái sinh lý tế bào liên quan đến chu trình pentose phosphat chu trình Krebs, kèm với q trình tạo glucose -6phosphat Q trình phân giải glucose khơng hoạt động vi khuẩn acid acetic khơng tổng hợp enzym quan trọng đường phosphofructosekinase A xylinum chuyển hóa nhiều hợp chất carbon hexose, glycerol, dihydroxyaceton, pyruvat acid dicarboxylic thành cellulose thường có hiệu suất 50 % Dicarboxylic acid vào chu trình Krebs nhờ vào q trình decarboxyl hóa để thành pyruvat, chuyển thành hexose thơng qua đường tạo glucose, tương tự glycerol, dihydroxyaceton hợp chất trung gian chu trình pentose phosphat.[85] …X-X-X-X + UDP-X …X-X-X-X-X + UDP (1) X-X-X-Y + UDP-Y …Y-X-Y-X-Y + UDP (2) Phản ứng (1) trường hợp tổng hợp polysaccharid từ loại monosaccharid, phản ứng (2) trường hợp polysaccharid gồm loại monosaccharid liên tiếp A xylinum sinh sống mơi trường lỏng thực q trình trao đổi chất cách hấp thu đường kết hợp đường với acid béo tạo thành tiền chất nằm màng tế bào Sinh tổng hợp BC tiến trình gồm nhiều bước, UDPG (Uridin diphosphoglucose) tiền chất trực tiếp cellulose Uridin diphosphoglucose sản phẩm đường phổ biến sinh vật, bao gồm thực vật, liên quan đến phosphoryl hóa glucose thành glucose-6- phosphat, xúc tác glucosekinase Tiếp đến q trình đồng phân hóa hợp chất thành glucose - α- 1- phosphat xúc tác phosphoglucomutase cuối chuyển thành uridin diphosphoglucose enzym UDP- Glucopyrophosphorylase Enzym cuối enzym quan trọng, liên quan đến q trình tổng hợp BC vài đột biến khơng tổng hợp cellulose bị thiếu enzym này, hoạt động UDP- Glucopyrophosphorylase thay đổi chủng A xylinum khác hoạt động cao phát vi khuẩn tổng hợp cellulose hữu hiệu A xylinum ssp BPR2001 Chủng thích sử dụng fructose hơn, biểu lộ hoạt động cao phosphoglucoisomerase có hệ thống phosphotransferase Hệ thống chuyển fructose thành fructose-1-phosphat tiếp đến fructose -1,6- biphosphat Cellulose Glucose Cs GHK UDP-Glu UGP PGM Glu-1-P G6PDH Glu-6-P PGA PGI Fructose PTS ATC → Fru- 1-P Fru-6-P EM HMP ATC FBP Fru-bi-P Sơ đồ 1.1 Sơ đồ tổng hợp cellulose A xylinum Hình 1.3 Con đường tổng hợp cellulose A xylinum với nguồn carbon glucose Nguồn : Brown R.M (1999), Pure Appl Chem 71 (5) [19] Sợi đơn Dải Hình 1.4 Vi khuẩn A xylinum tổng hợp sợi cellulose Nguồn: Diete K et al (2001).Prog Polym Sci 26 26, [29] 1.1.3 Đặc tính cellulose vi khuẩn 1.1.3.1 Cấu trúc Kỹ thuật nhiễu xạ tia X phân biệt dạng cấu trúc kích thước cellulose vi khuẩn Các kỹ thuật phân tích phổ hồng ngoại phổ cộng hưởng từ hạt nhân giúp xác định dạng kết tinh cellulose vi khuẩn [61] Hình 1.5 Cellulose vi khuẩn Hình 1.6 Cellulose thực vật (x 20 000 lần) (x 200 lần) Nguồn: Brown R.M (1999), Pure Appl Chem 71 (5) [19] Cellulose vi khuẩn có cấu trúc siêu mịn, đường kính sợi 1/100 đường kính sợi cellulose thực vật So sánh đường kính sợi cellulose vi khuẩn với đường kính sợi nhân tạo cho thấy kích thước sợi cellulose vi khuẩn nhỏ kích thước sợi tổng hợp hóa học nhỏ Cellulose polymer khơng phân nhánh bao gồm gốc glucosepyranose nối với nối β -1,4 glucan Các nghiên cứu BC cho thấy BC có cấu trúc giống cellulose thực vật Tuy nhiên cấu trúc cao phân tử đặc tính BC khác với cellulose thực vật Các sợi sinh BC kết lại với để hình thành sợi sơ cấp (subfibril) Các vi sợi nằm bó (bundle) cuối hình thành dải (ribbon) Các dải có chiều dày 3- nm, chiều rộng, 4,1117 nm [19],[50],[106],[107] Trong chiều rộng sợi cellulose tạo từ gỗ thơng 30 000 – 75 000 nm hay gỗ bạch dương (betula) 14 000 – 40 000 nm Những dải vi sợi cellulose mịn có chiều dài thay đổi từ – µm hình thành nên cấu trúc lưới dày đặc, liên kết liên kết hydro BC khác với cellulose thực vật số kết chặt, mức độ polymer hóa, thường BC có mức độ polymer hóa từ 2000 đến 6000.[50] Một vài trường hợp đạt tới 16 000 – 20 000 [103] mức polymer hóa thực vật 13000 – 14 000 Bảng 1.1 Đường kính loại sợi [108] Loại sợi Tóc Bơng vải Gỗ thơng Sợi tổng hợp Sợi tổng hợp kỹ thuật cao Sợi collagel Cellulose vi khuẩn Kích thước 100 µm 10 µm 10 µm 10 µm µm 0,1 µm 0,01µm Cấu trúc BC phụ thuộc chặt chẽ vào điều kiện ni cấy.[42],[58],[108] Ở điều kiện ni cấy tĩnh, vi khuẩn tổng hợp lớp cellulose bề mặt dịch ni cấy gọi S-BC (static BC) Các sợi cellulose sơ cấp liên tục đẩy từ lỗ xếp dọc bề mặt tế bào vi khuẩn, kết lại thành vi sợi bị đẩy xuống sâu mơi trường dinh dưỡng Các dải cellulose từ mơi trường tĩnh tạo nên mặt phẳng song song khơng tổ chức, có vai trò chống đỡ cho quần thể tế bào A.xylinum Các sợi BC kế tạo từ mơi trường tĩnh nối với bẻ nhánh sợi BC tạo từ mơi trường ni cấy động hình thành A - BC (Agitated – BC) A- BC tạo dạng hạt nhỏ, hình sợi dài, chúng phân tán tốt mơi trường Các sợi đan lưới 10 với mơi trường giống mơ hình kẻ ơ, có hướng song song vng góc [36],[93] Sự khác cấu trúc khơng gian ba chiều hai dạng S-BC A-BC quan sát rõ ràng kính hiển vi điện tử qt Những sợi S-BC kéo dài chồng lên sợi khác theo chiều đan chéo nhau, sợi A-BC rối rắm cong Ngồi bề mặt cắt ngang sợi A-BC khoảng 0,1 – 0,2 µm lớn sợi S-BC (0,05 – 0,1 µm) Sự khác hình thái hai loại BC làm mức độ kết tinh, kích cỡ kết tinh chúng khác nhau.[93],[94] Hình 1.7 Cellulose ni cấy động Hình 1.8 Cellulose ni cấy tĩnh Nguồn: Takayasu T., Fumihiro Y.(1997), Pure & Applied Chemistry, 69(11), [94] Hai dạng kết tinh phổ biến cellulose tự nhiên cellulose I cellulose II [35],[44],[[83], phân biệt kỹ thuật phân tích tia X tia hồng ngoại Cellulose I chuyển thành cellulose II cellose II khơng thể chuyển thành cellulose I Cellulose I tổng hợp đa số thực vật A xylinum mơi trường ni cấy tĩnh Các chuỗi β - 1,4- glucans cellulose II xắp xếp cách ngẫu nhiên, khơng song song nối với số lượng lớn nối hydro làm cho cellulose II có độ bền nhiệt Rất tế bào Eukaryot tổng hợp cellulose II A xylinum tổng hợp hai loại I II Một phần đáng kể cellulose II có A-BC.[86] Trong tự nhiên, cellulose II tổng hợp vài sinh vật (một số tảo, mốc vi khuẩn Sarcina ventriculi, A xylinum) (Jonas Farah, 1998).[50] Hiện sản phẩm cơng 151 PHẦN PHỤ LỤC PH Phụ lục Thử nghiệm tính kích ứng Phụ lục 1a Kết gây kích ứng dịch chiết từ màng BC tinh chế Mẫu chiết Thỏ Nước muối 0,9% Polyethylenglycol Dầu oliu Kết mẫu chứng Kết mẫu thử Ban đỏ Vết phù Ban đỏ Vết phù 24h 0 0 48h 0 0 72h 0 0 24h 0 0 48h 0 0 72h 0 0 24h 0 0 48h 0 0 72h 0 0 24h 0 0 48h 0 0 72h 0 0 24h 0 0 48h 0 0 72h 0 0 24h 0 0 48h 0 0 72h 0 0 Thời gian Phụ lục 1b Mức độ phản ứng da thỏ thử nghiệm tính kích ứng màng Acetul ( TC 3113/ 1999/ QĐ/BYT ) Phản ứng Điểm đánh giá Sự tạo vẩy ban đỏ Khơng ban đỏ Ban đỏ nhẹ(vừa đủ nhận thấy) Ban đỏ nhận thấy rõ Ban đỏ vừa phải đến nặng Ban đỏ nghiêm trọng (đỏ tấy) đến tạo thành vẩy dể ngăn ngừa tiến triển ban đỏ Gây phù nề Khơng phù nề Phù nề nhẹ (vừa đủ nhận thấy) Phù nề nhận thấy rõ (viền phù nề phồng lên rõ) Phù nề vừa phải (da phồng lên khoảng mm) Phù nề nghiêm trọng (da phồng lên mm có lan rộng vùng xung quanh)- Tổng số điểm kích ứng tối đa Phụ lục 1c Hướng dẫn đánh giá mức độ kích ứng ban đỏ phù thử th nghiệm tính kích ứng màng BC tinh chế theo USP 28 Hình dạng vết ban vảy Khơng có ban Ban nhẹ (vừa đủ để nhận thấy) Ban nhẹ Ban nặng Từ ban nặng (màu đỏ củ cải) đến hình thành vảy mỏng Hình dạng vết phù Khơng có phù Phù nhẹ (vừa đủ để nhận thấy) Phù nhẹ (rìa vết phù phồng nhẹ) Phù nặng (phồng lên xấp xỉ 1mm) Phù nặng ( phồng lên 1mm lan rộng) Đánh giá mức độ Đánh giá mức độ Phụ lục Xây dựng tiêu chuẩn kích thước màng Phụ lục 2a Chiều dài màng BC bán thành phẩm Màng Chiều dài (cm) 10 Số liệu thống kê 10 9,85 10 10,05 10,05 10 9,95 9,95 9,9 10 n = 10 X = 9,989 SD = 0,062 e = ±0,0346 CV =0,62% < 2% Loại giá trò bất thường bảng kiểm đònh T Ttn (max)=1,76 0.05) Bilirubin Kết xét nghiệm bilirubin trực tiếp bilirubin gián tiếp Sau 30 ngày (mg/ dl) Lơ Chứng Thử Sau 60 ngày (mg/ dl) Bili trực tiếp Bili gián tiếp Bili trực tiếp Bili gián tiếp n=13 n =13 n=37 n=37 0.12 ± 0.02 0.22 ± 0.04 0.12 ± 0.01 0.18 ± 0.03 N=16 N=16 N=43 N=43 0.11 ± 0.02 0.13 ± 0.02 0.11 ± 0.01 0.19 ± 0.02 Nồng độ trung bình bilirubin trực tiếp đợt thử nghiệm hai lơ khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0.05), nồng độ trung bình bilirubin gián tiếp hai lơ khác có ý nghĩa thống kê ( p < 0.05), lơ chứng cao lơ thử nằm giới hạn bình thường Nồng độ trung bình bilirubin trực tiếp bilirubin gián tiếp cuối đợt thử nghiệm hai lơ khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0.05) Xét nghiệm đánh giá chức thận BUN Kết xét nghiệm BUN hai lơ Lô Chứng Thử Sau 30 ngày (mg/ dl) Sau 60 ngày (mg/ dl) n=13 n=37 14.85 ± 2.82 17.30 ± 1.40 n=16 n=43 14.56 ± 2.61 15.65 ± 2.54 Trung bình BUN đợt thử nghiệm cuối đợt thử nghiệm hai lơ khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0.05) Creatinin Kết xét nghiệm creatinin hai lơ Lơ Chứng Thử Sau 30 ngày (mg/ dl) Sau 60 ngày (mg/ dl) n=13 n=37 0.52 ± 0.02 0.52 ± 0.03 n=16 n=43 0.54 ± 0.03 0.50 ± 0.05 Nồng độ trung bình creatinin đợt thử nghiệm cuối đợt thử nghiệm hai lơ khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0.05) Phụ lục Tình trạng vết thương thỏ lơ điều trị với HCTSM sau thời gian bảo quản Ngày thứ Tình trạng vết thương thỏ sau khoảng thời gian điều trị lơ thử nghiệm Hoạt chất TSM HCTSM Acid béo từ dầu mè Chứng Vết thương ướt Vết thương ướt Vết thương ướt Vết thương ướt Vết thương khơ, bờ viêm đỏ, mày nhiều, bờ co Vết thương khơ, bờ viêm đỏ, lộ xương Vết thương khơ, bờ viêm đỏ, lộ xương bị khơ Vết thương khơ, bờ viêm đỏ lộ xương bị khơ Vết thương bắt Vết thương khơ, mày nhiều, bờ co vào trong, viêm đỏ xung quanh Vết thương Vết thương khơ, mày khơ, có mày, nhiều, bờ co bờ chưa co, lộ xương rõ 1 đầu bong mày, 11 13 lộ lớp mơ hạt đỏ, viêm đỏ xung quanh xương khơ, Mày bong Vết thương khơ, hồn tồn, lớp mày bắt đầu mơ hạt đỏ, bờ co bong ra, bờ co vào nhiều, bắt đầu lên da non Mày bong hồn tồn, lớp mơ hạt đỏ, bờ co vào nhiều, bắt đầu lên da non vào trong, lộ Vết thương khơ, mày bắt đầu bong ra, bờ co, xuất mơ hạt lên da non viêm đỏ xung quanh Vết thương khơ, mày nhiều, chưa bong ra, lộ xương khơ, bờ co Vết thương khơ, mày nhiều, chưa bong ra, lộ xương khơ, bờ co Vết thương khơ, mày nhiều, bờ chưa co Vết thương khơ, mày nhiều, bờ co Phụ lục Một số kết thử nghiệm lâm sàng Phụ lục 6a Phân bố bệnh nhân theo tuổi Nhóm tuổi 15 – 30 31 – 50 >50 Tổng Nhóm Số BN 19 16 40 Nhóm % 47,5 40 12,5 100 Số BN 21 16 40 Tổng % 52,5 40 7,5 100 Số BN 40 32 80 % 50 40 10 100 Nhận xét: độ tuổi gặp nhiều nghiên cứu từ 15 – 50 tuổi Phụ lục 6b Phân bố bệnh nhân theo tác nhân gây bỏng Nhóm Tác nhân Nhóm Tổng Số BN % Số BN % Số BN % Nhiệt ướt 10 17,5 11 13,7 Nhiệt khơ 26 65 30 75 56 70 Ngun nhân khác 10 25 7,5 13 16,3 Tổng 40 100 40 100 80 100 Nhận xét: tác nhân bỏng chủ yếu nhiệt khơ chiếm 70% Phụ lục 6c Sự thay đổi tần số mạch, huyết áp trung bình tần số thở bệnh nhân nghiên cứu q trình điều trị nhóm Thời điểm Trước đắp màng X ± SD 78 ± 11,6 Sau đắp màng Chỉ số theo dõi Tần số mạch (lần/phút) p >0,05 Huyết áp trung bình (mmHg) X ± SD Tần số thở X ± SD (lần/phút) 81 ± 12,5 74 ± 13,2 79 ± 15,4 p >0,05 21 ± 5,6 p >0,05 23 ± 7,2 Phụ lục 6d Một số tiêu cận lâm sàng nhóm bệnh nhân nhóm trước sau ngày điều trị ( X ± SD) Thời điểm Chỉ số p Trước đắp màng Sau đắp màng ngày Hồng cầu (1012/l) 4,9 ± 0,14 4,83 ± 0,14 >0,05 Bạch cầu (109/l) 11,9 ± 0,1 9,6 ± 0,4 0,05 Glucose (mol/l) 5,5 ± 0,5 6,0 ± 0,45 >0,05 Creatinin (µm/l) 70 ± 3,98 67,5 ± 4,56 >0,05 Urê (mol/l) 4,6 ± 0,2 4,35 ± 0,16 >0,05 SGPT (µm/l) 25,3 ± 4,1 26,1 ± 4,0 >0,05 SGOT (µm/l) 36,2 ± 3,2 35,5 ± 3,16 >0,05 Protein (g/l) 51,9 ± 3,6 50,6 ± 2,39 >0,05 Nhận xét: số lượng bạch cầu trước sau đắp màng có khác biệt với p 0,05 Phụ lục 6e Một số tiêu cận lâm sàng bệnh nhân nghiên cứu nhóm ( X ± SD) Chỉ số Thời điểm p Trước đắp màng Sau đắp màng ngày HC (1012/l) 4,17 ± 0,3 4,06 ± 0,3 >0,05 BC (109/l) 12,7 ± 0,7 9,5 ± 0,3 0,05 Glucose (mol/l) 5,37 ± 0,3 5,52± 0,2 >0,05 Creatinin (µm/l) 70 ± 5,5 66,5 ±7,5 >0,05 Ure (mol/l) 4,17 ± 0,3 3,99 ± 0,3 >0,05 SGPT (µm/l) 26,3 ± 4,1 28 ± 4,0 >0,05 SGOT (µm/l) 35,9 ± 3,9 34,1± 3,6 >0,05 Protein (g/l) 46,9 ± 11,8 53,8± 11,9 >0,05 Nhận xét: Các tiêu hồng cầu, tiểu cầu, glucose, creatinin, ure, SGPT, SGOT, protein thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê với p>0,05 Chỉ số bạch cầu thay đổi giới hạn cho phép Phụ lục 6f Một vài hình ảnh điều trị với màng Acetul trường hợp bỏng sâu phẫu thuật cắt hoại tử Hình ảnh tổn thương bỏng độ IV Sau cắt hoại tử Che phủ với Acetul Nano bạc Sau ngày nano bạc bong thay với màng Acetul (màng Acetul đắp từ ngày thứ bám dính) [...]... vết thương 1.4.1 D u mù u D u mù u có tên khác: Huile de Fahara, Huile de Kanami, Huile de Tamanu D u mù u được ép từ hạt của cây mù u Calophyllum inophylum L., Clusiaceae D u mù u thơ có m u xanh đen, còn lẫn nhi u tạp chất, nhựa Sau khi tinh chế, d u có m u vàng, vị đắng, mùi đặc trưng của d u mù u D u mù u thơ có chứa khoảng 72 % d u béo và 28 % nhựa, có loại chứa tới 90,3 % d u béo và 9,7 % nhựa.[31]... sản xuất và bán ra thị trường và được sử ® dụng trong đi u trị các loại vết thương mất da (chế phẩm BioFill , Gengiflex ® , ® Bioprocess ) Người ta đã nghiên c u tẩm nano bạc vào màng BC nhằm tạo cho màng có hoạt tính kháng khuẩn Trong nghiên c u này NaBH4 được thêm vào để làm giảm sự hấp thu ion Ag+ vào màng, chỉ cho dạng nano Ago thấm vào màng Màng BC có tẩm nano bạc có hoạt tính kháng khuẩn đối với. .. nghiệp của cellulose II chủ y u có được là dựa trên sự biến đổi hóa học cellulose thực vật 1.1.3.2 Tính chất cellulose vi khuẩn BC có độ bền cơ học, hóa học cao và có khả năng cản vi khuẩn.[89],[104] Với tính chất này màng BC đã được chế tạo làm màng lọc cản khuẩn Khả năng hút nước của BC lớn hơn rất nhi u so với cellulose thực vật (so sánh với sợi bơng, cao hơn gần 200 lần) Khả năng này còn tùy thuộc vào... với giải ph u bệnh và đang được áp dụng tại Viện Bỏng Quốc Gia Lê H u Trác • Bỏng độ I (viêm cấp da do bỏng, viêm vơ khuẩn cấp): da khơ, đỏ, nề, đau rát Khỏi sau 2-3 ngày, có thể thấy lớp sừng hóa khơ và bong ra • Bỏng độ II (bỏng bi u bì): trên nền da viêm cấp có nốt bỏng chứa dịch m u vàng nhạt, đáy nốt bỏng m u vàng ánh, ướt, có dịch xuất tiết Bỏng bi u bì sẽ tự 19 tái tạo lại bằng sự phân bào của. .. vi khuẩn phân hủy, những tinh thể này còn có u điểm là rẻ tiền [73] 1.1.4.3 Các nguồn ngun li u thường dùng để ni A xylinum thu nhận BC Các nguồn ngun li u truyền thống thường được sử dụng trong sản xuất BC từ A xylinum như: nước dừa già, rỉ đường, nước mía, nước ép trái cây…[5] Tùy theo nguồn ngun li u mà sản lượng BC tạo thành sẽ cao hay thấp Theo một số nghiên c u cho thấy Acetobacter xylinum ni... n u đi u trị tốt sẽ lên da non và khỏi • Bỏng độ III (bỏng trung bì): nốt bỏng vòm đầy, dịch nốt bỏng đục, m u hồng, đáy nốt bỏng m u đỏ, tím sẫm, trắng bệch hoặc m u xám, đám da hoại tử, còn một phần cảm giác đau Bỏng trung bì diễn biến theo ki u rụng hoại tử, tái tạo mơ hạt, còn đảo bi u mơ rải rác mọc và phủ lên diện mơ hạt tạo thành sẹo bỏng Thời gian khỏi và thành sẹo từ 18 - 45 ngày, phụ thuộc... tăng trưởng bị ức chế, q trình sinh sản bị đình trệ và hi u suất tạo cellulose giảm nhi u Ở 24 oC sản lượng cellulose cao hơn 50 % trong suốt 72 giờ ni cấy nhưng nhiệt độ đó khơng thích hợp cho sản xuất quy mơ cơng nghiệp Tác động của oxy: A xylinum là vi khuẩn hi u khí, vì vậy cần đi u kiện thơng khí trong q trình ni cấy Trong thực tế tốc độ thơng khí quyết định năng suất tổng hợp cellulose Trong ni... Mycobacterium tuberculosis H37 – RV Độc tính tế bào: khơng độc đối với gen, khơng gây ung thư, khơng độc theo đường u ng, khơng kích ứng da, khơng hoặc kích ứng y u đối với mắt Tác dụng mau lành vết thương in vivo: những nghiên c u thực nghiệm về sự lành sẹo của d u mù u đã được Jeason thực hiện trên thú ch u một sự kích thích ở da và đi đến kết luận rằng, d u mù u được đắp nhi u giờ trên vết bỏng cho... Eicosenoic 0,2510 Behenic 0.295 1.4.3 Tinh d u tràm trà Úc Tinh d u tràm trà Úc (viết tắt là T.T.O.) là tinh chất d u được cất kéo theo hơi nước từ Melaleuca alternifolia, một loại cây tràm ở Úc T.T.O tinh khiết khơng m u hoặc m u vàng nhạt, có mùi thơm dễ ch u đặc trưng T.T.O là một hỗn hợp phức tạp của gần 100 thành phần gồm monoterpen, sesquiterpen hydrocarbon và alcol của nó Thành phần chính là terpinen... 0,8 Acid erucic 0,10 Acid oleic 50 ± 1,7 Acid lignoceric 0,20 Acid linoleic 21,7 ± 1 Acid nervonic 0,20 Acid linolenic 0,5 ± 0,2 Acid eicosenoic 0,72 35 Tác dụng sinh học của d u mù u Tác dụng kháng khuẩn và kháng nấm: d u và nhựa mù u có khả năng kháng khuẩn tương đương nhau đối với 2 chủng Staphylococcus aureus và Bacillius subtilis Calophylloid có khả năng ức chế tồn bộ sự tăng trưởng của vi trùng ... BC tinh chế sử dụng tạo màng trị bỏng Nghiên c u chế tạo màng trị bỏng từ màng cellulose tinh chế phối hợp với hoạt chất tái sinh mơ từ d u mù u tinh d u tràm trà Úc Bước đ u đánh giá hi u đi u. .. cấp d u mù u 2.1.2 Ngun vật li u thử nghiệm 2.1.2.1 Hoạt chất tái sinh mơ Hoạt chất tái sinh mơ chiết từ d u mù u: d u mù u ép từ hạt mù u ( Calophilum inophyllum) D u thơ thu sau ép tinh chế. .. nhựa tạp chất khác D u mù u tinh chế ngun li u để chiết hoạt chất tái sinh mơ Ti u chuẩn d u mù u tinh chế sử dụng chiết hoạt chất tái sinh mơ 39 Xây dựng ti u chuẩn lý hóa d u mù u tinh chế dùng