Nghiên cứu chế tạo màng ceilulo se trị bỏng từ acetobacter xylinum

BỘ Y TẾ BÁO CÁO KẾT QUÁ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ TÊN ĐỀ TÀI : Nghiên cứu chế tạo màng cellulose trị bỏng từ Acefobacter xylinum Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ trì Cấp quản lý : Nguyễn Văn Thanh : ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh : Bộ Y tế Thời gian thực : 24 tháng Trong : kinh phíSNKH : 200 triệu đồng Tổng kinh phí thực : 200 triệu đồng Năm 2006 %2 49 Q07 BAO CAO KET QUA NGHIEN CUU DE TAI CAP BO Tên đề tài : Nghiên cứu chế tạo mang cellulose tri tit Acetobacter fF Chủ nhiệm đề tài : Nguyễn Văn Thanh YS Cơ quan chủ trì đề tài : ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh FPF Cơ quan quản lý đề tài : Bộ Y tế wa xylinum Danh sách người thực : Nguyễn Văn Thanh Huỳnh Thị Ngọc Lan Trần Thu Hoa Nguyễn Kim Minh Tâm Thời gian thực đề tài: 24 tháng MỤC LỤC BANG CAC CHU VIET TAT i DANH SACH CAC BANG i DANH SACH CAC HINH v DANH MỤC BIÊU DO vỉ DANH MỤC PHỤ LỤC ii PHAN A : TOM TAT CAC KET QUA NOIBAT CUA DE TAI viii PHẦN B : NỘI DUNG BÁO CÁO CHI TIẾT KẾT QUÁ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ Phan1 DAT VAN DE I Phẩn2 TONG QUAN 2.1 Acetobacter xylinum 2.2 Cau tic, đặc tính màng BC 2.3 Mơi trường nuôi cấy 2.4 il -Métsé tng dung cla BC 25 13 Các loại màng sử dụng điều tri bong 14 Phan VAT LEU, PHUONG PHAP THU NGHIEM 19 3.1 Vậtlệu 19 ; 3.2 Phương pháp 3.2.1 Xây dựng qui trình ni cấy A xyfrtm 3.2.2 Nghiên cứu đặc tínhcủamàngBC 26 - — c 26 28 3.2 Thử độ vô khuẩn màng thành phẩm 34 3.2.4 Ché tao mang BC phối hợp với hoạt chất TSM tá dược 35 3.2.5 Thử nghiệm in vivo tác dụng điều trị chế phẩm màng BC phối hợp hoạt chất tái sinh mô Phần KẾT QUÁ 37 38 4.1 Xây dựng qui trình nhân giống 35 4.1.1 Khảo sát nỗng độ đường slucose 35 4.2.2 Khảo sát nông độ đường saccharose 4.2.3 Khảo sát pH thích hợp 4.2.4 Khả tạo BC mơi trường nước đừa 4.2.5 Khảo sát thời gian cho lượng vi khuẩn tối đa 38 45 45 48 49 50 50 55 56 59 43 Xác định điều kiện nuôi cấy để có độ đày màng BC thích hợp 59 4.12 Khả sử dụng đường saccharose 4.143 Ảnh hưởng pepton cao nấm men 4.1.4 Khảo sát pH thích hợp cho q trình nhân giống 4.1.5 Khảo sát ảnh hưởng vitamin C tăng trưởng vi khuẩn 4.1.6 Anh hưởng độ thơng khí tăng trưởng vi khuẩn 4.2 Qui trình ni cấy thu BC 4.21 Khảo sát nổng độ đường slucose 44, 45 Xt ly mang BC 60 Khảo sát đặc tính màng 63 4.5.1, Quan sát màng BC đưới kính hiển vi điện tử quét ( SEM ) 63 4.5.2 Độ tỉnh khiết màng 64 4.5.3 Khả thấm hút nước màng 65 ASA Khảo sát khả cần vị khuẩn màng BC 69 4.5.5 Khảo sát tính gây kích ứng màng BC 71 _ 45.6 Độ bến học màng BC _ Thir nghiém in vivo tic dụng điều trị chế 4.6 phẩm màng BC phối hợp hoạt chất tái sinh mô 4.7 Xây dựng tiêu chuẩn cho màng trị bỏng BC bán thành phẩm 4.8 Xây dựng tiêu chuẩn cho màng trị bổng BC thành phẩm Acetul 87 Phẩn § PHẢN BÀN LUẬN KẾT LUẬN Phẩn6 KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO 98 101 CHỮ VIẾT TẮT BC : Bactenal cellulose HCTSM _ : Hoạt chất tái sinh mô A xylinum : Acetobater xylinum DANH MUC CAC BANG TT TÊN BẢNG TRANG | Đặc điểm sinh hóa A xylinwn 2_ | Đường kính loại sợi 3| Thành phần nước dừa già | Liều lượng tiêm thỏ 12 33 | Hướng dẫn đánh giá mức độ kích ứng ban đỏ phù | Ảnh hưởng nổng độ đường glucose lên tăng trưởng 33 39 40 A xylinum, thí nghiệm lần |Ảnh hưởng nổng độ đường lên tăng trưởng A.xylinum, thí nghiệm lần | Khả sử dụng đường saccharose, thí nghiệm lần | Khả sử dụng đường saccharose, thí nghiệm lần 10 | Khả sử dụng đường saccharose, thí nghiệm lần 11 | Khả tăng trưởng 4.ty(m sát, thí nghiệm lần I 12 | Khả tăng trưởng Á.vyfimưm khảo sát thí nghiệm lần 13 | Khả tăng trưởng A khảo sát thí nghiệm lần mơi trường khảo xylinum 4i 42 43 44 môi trường 44 môi trường 45 I+ | Sự tăng trưởng A xyiinum pH khác nhau, thí nghiệm 46 lần I 15 | Sự tăng trưởng-của A xylinwn pH khác nhau, - thí-nghiệm 45: : 16 | Sự tăng trưởng A xyfinưm pH khác nhau, 46 lần lần thí nghiệm 17 | Tác động acid ascorbic đến tăng trưởng A xyiirưm 18 | Sự 19 | Sự tăng ưưởng A xylinum G2 didu kiện ni cấy thơng khí, ni cấy ứnh, thí nghiệm lần tăng trưởng A xy/ueơm điều kiện ni cấy thơng khí ni cấy tĩnh, thí nghiệm lần 20 | Ảnh hưởng nổng độ đường giucose lên khả tạo cellulose cia A xylinum 21 | Khả sử dụng du@ng saccharose cia A.xylinum, thi nghiém; 48 49 49 51 52 | _22 | Khả sử dụng đường saccharose xyimzn,thí nghiệm 33 lần 23 | Khả sử dụng đường saccharose A xyirưưn, thí 34 nghiệm lần 24 | Lượng BC tạo thành pH môi trường khác nhau, thí nghiệm lần I 55 25 | Lượng BC tạo thành pH môi trường khác nhau, thí nghiệm lần 36 26 | Hiệu mơi trường nước dừa ethanol q trình ni cấy A xyÍinum tạo BC 57 27 | S6 vi khuẩn môi trường sau khoảng thời gian 28 | Kết thu màng BC tươi 58 60 29 | Độ dày màng độ ẩm khác 30 | Lượng nước hút màng số độ ẩm khác 62 66 31 | Lượng nước hút màng số độ ẩm khác 66 32 | Lượng nước hút màng số độ ẩm khác 67 nhau 33 | Kết gây kích ứng dịch chiết từ màng BC bán thành 73 34 } Kết trung bình khảo sát gây kích ứng dịch chiết từ màng BC 35 | Kết độ bền học màng 74 phẩm 75 36 | Tình trạng vết bỏng thỏ sau khoảng thời gian điều trị _— “| 78 TƠ, 37 | Theo dõi diện tích vết thương thỏ 81 38 | Diện tích trung bình vết thương cịn lại thí nghiệm 84 -39 -Ì Chiều dai mang BC ban thành phẩm † 40 | Chiểu rộng màng BC bán thành phẩm | 42 | Trọng lượng khô màng BC bán thành phẩm 43 | Độ ẩm màng BC bán thành phẩm £86 87 | | 89 ! ga I 4L | Độ dày màng BC bán thành phẩm f 44 | Kích thước độ dày màng Acetul 45 | Dé day mang Aceul i - 46 | Độ thơng thống màng ị ; 47_ | Độ hút ẩm màng 48 | Lugng hoat chit tdi sinh mé wong ming pham Acetul iv a) i ' 86} gg 90 | DANH MỤC CÁC HÌNH TT TÊN HÌNH TRANG | Vi khuẩn A xylinam | Cấu trúc chuỗi polimer f1,4- glucopyranose khong phan nhánh | | _| | - † BC nuôi cấy nh BC nuôi cấy động Cấu trúc màng BC nuôi cấy tĩnh Màng mỏng BC phương pháp nuôi cấy tĩnh Tế bào vi khuẩn sợi cellulose A xy/,ưn 6 7 | Sy tao cellulose cia A xylinum 10 | Các chế phẩm BASYC® 14 | So dé téng hgp cellulose A xylinum có đường kính độ dày khác dùng làm mạch máu nhân tạo phẫu thuật 11 | Hoạt hóa lần hoạt hóa lần 23 12 | Mang ‘BC thơ màng BC sau xử lý 26 13 | Buồng đếm Neubauer cải tiến 27 14 | A xylinum nhân giống môi tường lỏng 38 15 | Nuôi cấy thu màng BC nồng độ đường glucose khác 50 16 Ì Ni cấy A xylinum môi trường số 20 57 18 | Màng BC sau tỉnh chế 61 17 | Mang BC thô thu sau 10 ngầy 60 19 | Màng BC độ ẩm khác 62 22 | Sdi cellulose cua ming BC sau xt ly 63 2+ 25 26 27 28 29 30 65 70 Tủ 71 71 74 74 20 | Sợi cellulose màng BC sau nuôi cấy, chưa qua xử lý 21 | Vikhudn A xylinum tong mang BC 23 | Bể mặt màng BC kính hiển vi điện tử | | | | | | | Kết Khả Khả Khả Hộp Kết Kết thử điện đường glucose cẩn khuẩn màng BC -năng cần khuẩn vải gac CC " cẩn khuẩn màng URGOTUL® thạch chứng không che phủ màng khả gây kích dịch chiết dầu thực vật sau 24h _ khả gây kích ứng địch chiết mang BC bing NaCl 0.9% sau 24h 63 63 64 31 | Kết khả gây kích ứng dịch chiết màng BC 74 32 | Môi trường kiểm tra độ vô khuẩn 16 polyethylenglycol 400 sau 21h 33 | Môi trường thử sau ngày 34 | M6i trường số 12 sau 14 77 77 TT TÊN HÌNH TRANG 35 | Vết thương sau gây bỏng 78 36 | Vết bổng sau ngày điếu trị 37 | Vết bỏng sau 15 ngày điểu trị 78 82 38 | Vết bỏng chứng sau ngày 39 | Vết bỏng chứng sau 15 ngày 40 | Vết bỏng chứng sau 22 ngày 82 83 41 | Giải phẫu bệnh lý vùng da lành lô HCTSM + Màng BC 84 DANH MỤC BIỂU ĐỒ TT TEN BIEU DO TRANG Sự tăng trưởng A.xyiinum theo nẵng độ đường glucose, thí nghiệm lần I1 | Su ting trưởng A xylinum theo néng dé dudng glucose, thí nghiệm lần Sự tăng trưởng A xvlinuwn méi trung saccharose, thí nghiệm lần I 39 : 40 4i |Sự tăng trưởng A.vyinmm theo nêng độ saccharose, thí 42 |Sự tăng trưởng theo nổng thí 43 nghiệm lần A.o/ữrơm độ saccharose, nghiệm lần ˆ | Ảnh hưởng peptone cao nấm men lên tăng trưởng 45 | Sự tăng trưởng A xy(inum theo pH | Ảnh hưởng aci4 ascorbic tăng trưởng Á xyÍbuưm _ | Ảnh hưởng oxy lên tăng trưởng A.xyiinum 47 48 49 A xylinum 10 | Ảnh hưởng nổng độ đường cellulose cla A xvlinum glucose lên khả 11 | Khả sử dụng đường saccharose A xylintun - sẩn xuất _ 12 | Khả sử dụng đường saccharose củaA xyfinưm.thí nghiệm lần2 | 13 | Khả nang sit dung dung saccharose cia A xylinum, thí nghiệm lần 51 _33 5+ 55 14 | Lượng BC tạo pH khác 15 | Hiệu môi trường nước dừa ethanol trình $6 37 16 | Đường cong tăng trưởng Á xyiinum 59 nuôi cấy A xplinum tạo BC 17 | Khả thấm hút màng số I độ ẩm khác 18 | Khả thấm hút màng số độ ẩm khác 19 | Khả thấm hút màng số độ ẩm khác 20] Quá trình lành vết thương thỏ vi 67 69 69 82 DANH MỤC PHỤ LỤC TÊN PHỤ LỤC Kết phân tích thống kê số liệu Kết xét nghiệm giải phẫu bệnh Kết thử nghiệm độ bền học vii PHẦN A TOM TAT CAC KET QUA NOI BAT CUA DE TAI ... trình ni cấy nhân giống tạo sản phẩm cellulose từ Acetobacter xylinum Xây dựng qui trình xử lý tỉnh chế BC thô đạt tiêu chuẩn làm màng trị bỏng Tạo màng trị bỏng từ BC tỉnh chế hoạt chất tái sinh... điều trị bỏng vết thương màng sinh học chế tạo từ cellulose vi khuẩn Acetobacter xylinum Màng BC có nhiều ưu điểm chế tạo từ nguyên liệu rẻ tiền đặc biệt phối hợp với hoạt chất tái sinh mô từ. .. (b) Thực theo mục tiêu nghiên cứu : Thực tất mực tiêu để ra: nghiên cứu qui trình ni cấy thu sắn phẩm BC từ Acetobacter xylinum từ chế tạo màng trị bồng (c) Các sản phẩm tạo ra: đạt yêu cầu kỹ