Khảo sát tác động đối kháng của nấm trichoderma đối với nấm fusarium solani gây bệnh thối rễ trên cam quít tại đồng bằng sông cửu long

B GIÁO D C VÀ ÀO T O TR NG I H C C N TH _ D KH O SÁT TÁC TRICHODERMA NG MINH NG I KHÁNG C A N M I V I N M FUSARIUM SOLANI GÂY B NH TH I R TRÊN CAM QUÍT T I NG B NG SÔNG C U LONG LU N ÁN TI N S NÔNG NGHI P C n Th - 2010 B GIÁO D C VÀ ÀO T O TR NG I H C C N TH _ D KH O SÁT TÁC TRICHODERMA NG MINH NG I KHÁNG C A N M I V I N M FUSARIUM SOLANI GÂY B NH TH I R TRÊN CAM QUÍT T I NG B NG SÔNG C U LONG CHUYÊN NGÀNH B O V TH C V T MÃ S : 62 62 1001 LU N ÁN TI N S NÔNG NGHI P NG IH NG D N KHOA H C: PGS PH M V N KIM C n Th - 2010 ii C ng Hòa Xã H i Ch Ngh a Vi t Nam c l p - T - H nh phúc - L I CAM OAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên c u “Kh o sát tác đ ng đ i kháng c a n m Trichoderma đ i v i n m Fusarium solani gây b nh th i r cam quít t i đ ng b ng sông C u Long” c a riêng Các s li u, k t qu nêu lu n án trung th c ch a t ng đ c ng i khác công b b t k công trình khác Tác gi lu n án D ng Minh iii TRANG C M T Xin chân thành bi t n Th y h ng d n khoa h c: - PGs Ph m V n Kim, t n tình ch b o h ph ng d n n i dung, ng pháp k ho ch tri n khai thành công thí nghi m; Lu n án không th hoàn thành n u s giúp đ , h ng d n khoa h c đ ng viên c a Th y Xin chân thành c m n H i đ ng đánh giá lu n án c p C s : PGs.Ts Nguy n B o V Tr ng i h c C n Th PGs.Ts Cao Ng c i p Tr ng i h c C n Th Ts L u H ng M n Vi n Nghiên c u lúa BSCL PGs.Ts Nguy n V n Hu nh Tr ng i h c C n Th PGs.Ts Tr n V n Hai Tr ng i h c C n Th Ts Lê ình ôn Tr ng i h c Nông Lâm Tp HCM PGs.Ts Lê V n Hòa Tr ng i h c C n Th Xin chân thành c m n H i đ ng ch m lu n án Ti n s : PGs.Ts Lê V n Hòa Tr ng i h c C n Th PGs.Ts Ph m V n D C c Tr ng tr t PGs.Ts Cao Ng c i p Tr ng i h c C n Th PGs.Ts Hu nh Thanh Hùng Tr ng i h c Nông Lâm Tp HCM Ts Lê C m Loan Vi n Nghiên c u lúa BSCL PGs.Ts Nguy n V n Bá Tr ng i h c Tây ô PGs.Ts Tr n V n Hai Tr ng i h c C n Th Xin chân thành c m n: - Ban Giám Hi u Tr ng i H c C n Th ; - Ban Ch Nhi m Khoa Nông Nghi p Sinh H c ng D ng; - Phòng Qu n Lý Khoa H c Phòng T o; - Các Phòng Ban ch c n ng khác c a Tr ng i H c C n Th ; iv ã t o u ki n t t cho công tác đào t o nghiên c u sinh - Ban ch nhi m B môn B o v Th c v t, t o m i u ki n đ hoàn thành n i dung h c t p lu n án Các thành viên B môn nhóm nghiên c u h tr tích c c vi c th c hi n thí nghi m - Ts H V n Chi n, Ts Lê H u H i nhi t tình c ng tác th c hi n thí nghi m t i Ti n Giang; - Xin c m n s tài tr kinh phí đ th c hi n đ tài t s Nông Nghi p V nh Long s Khoa h c Công ngh Ti n Giang, C n Th , H u Giang S ng h nhi t tình đ tri n khai thí nghi m đ ng c a s Nông Nghi p t nh Ti n Giang, V nh Long, Trà Vinh, ng Tháp, C n Th , H u Giang Sóc Tr ng - Xin trân tr ng ghi nh nh ng s ng h , y m tr c a c quan, nông dân b n bè t i n i - Sau cùng, xin ghi nh s chia s đ ng viên c a gia đình góp ph n không nh vào s hoàn t t c a lu n án D ng Minh v TÓM L C B nh vàng th i r m t b nh gây nhi u thi t h i có múi đ ng b ng sông C u Long ( BSCL) Tác nhân gây b nh đ nh n n m Fusarium solani gây Vi c s d ng lo i nông d phòng tr b nh th c ghi c nh m ng cho hi u qu không cao gây ô nhi m môi tr ng, lúc bi n pháp phòng tr sinh h c v i n m đ i kháng Trichoderma t có nhi u tri n v ng tài "Kh o sát tác đ ng đ i kháng c a n m Trichoderma đ i v i n m Fusarium solani gây b nh th i r cam quít t i đ ng b ng sông C u Long" đ c th c hi n nh m ch n l c, đánh giá kh n ng đ i kháng c a t p đoàn n m ho i sinh Trichoderma b n đ a nh m tìm ch ng n m thích h p giúp phòng tr b nh th i r K t qu nghiên c u c a đ tài đ t đ - Trên m u s u t p t v n u tra t i Ti n Giang, V nh Long, C n Th H u Giang phân l p đ c nh sau: ng Tháp, c 318 ch ng Trichoderma 114 ch ng Fusarium t ph n r b nh F solani đ c xác nh n (theo quy trình Koch) tác nhân gây b nh vàng th i r cam quít t i t nh - Qua tr c nghi m s kh i đ a petri ch n đ Trichoderma phân l p t v - Ph c 50 ch ng n có kh n ng đ i kháng t t v i F solani ng pháp sinh tr c nghi m nh m đánh giá kh n ng ti t chitinase đ i kháng v i n m b nh t có hi u qu đ ch n ch ng n m đ i kháng cao v i m m b nh ( c ch bào t n m b nh m c m m) Ph đ c 11 ch ng Trichoderma đ i kháng t t ng pháp ch n pH 4,2 - 5,5, có ti m n ng giúp phòng tr b nh th i r - Kh o sát ho t tính đ i kháng c a Trichoderma qua vi c ti t chitinase cho th y ch ng tri n v ng đ u có kh n ng s n sinh exo- endo-chitinase giúp đ i kháng t t v i n m b nh Trên quít Ti u, Trichoderma vi giúp t o đ glucanase c kh n ng kích kháng qua s hi n di n c a chitinase r lá, giúp đ kháng l i v i F solani Ki m đ nh qua k thu t PCR c ng cho th y ch ng tri n v ng ti t endo- exo-chitinase, đ c u n t gene mã hóa ech42 chit73 K t qu gi i trình t DNA c a vùng ITS EF xác đ nh ch ng tri n v ng thu c loài T harzianum (T-BM2a, T-TO2a, T-TO2b) T asperellum (T-LV1a, TOM2a) - Các nghiên c u v dinh d ng khoáng cho th y ch ng Trichoderma tri n v ng đ u c n N (d ng (NH4)2SO4), P, K (KH2PO4), Ca (CaSO4) Mg (MgSO4) v i m c đ khác Trong đó, bón phân hóa h c NPK cho v n cam quít đ u cho tác đ ng tích c c vi c phát tri n c a Trichoderma u ki n thí nghi m Kh n ng đ i kháng v i n m b nh c a ch ng b n đ a c ng t thích h p n n đ t có sa c u khác nhau, đ ng th i phù h p v i pH chua (4,2-5,5) c a BSCL - N m ch ng Trichoderma n i tr i đ c nhân nuôi ph i tr n đ s d ng phòng tr b nh th i r cam quít qua mô hình ng d ng có v t li u h u c , th c hi n 13 v n cam quít b b nh t i Ti n Giang, ng Tháp, V nh Long, C n Th H u Giang K t qu cho th y ch ng Trichoderma đ u có kh n ng kh ng ch F solani gây b nh th i r cam quít u ki n đ t v n có pH th p (4,0 – 4,4) S ph i h p ch ng (T-mix) cho th y tính hi u qu cao n đ nh qua m thí nghi m (so v i thu c tr b nh) Hi u qu tr b nh cao đ t v nđ c cung c p thêm ch t h u c Bi n pháp x lý b nh v i Trichoderma phân h u c c ng giúp hình thành thói quen s d ng phân h u c vi c canh tác có múi t i BSCL Các ch ng Trichoderma tri n v ng đ ký s n xu t v i tên th ng m i Tricô- HCT c ph i tr n (T-mix) đ ng vii SUMMARY Root rot disease is an important pest of citrus orchards growing in the Mekong Delta of Vietnam Fusarium solani was considered the causal agent of the disease The disease management by applying chemical fungicides often attained low efficiency and caused environmental pollution while a biological control alternative by using Trichoderma fungus could give higher prospects The thesis entitled "Studies on the fungal antagonism of Trichoderma on Fusarium solani, causal agent of the citrus root rot disease in Mekong Delta" was carried out for selection and antagonistic evaluation of local saprophytic Trichoderma population for controlling the root rot disease The results showed that: - The surveys of fruit orchards in Tiengiang, Dongthap, Vinhlong, Cantho and Haugiang provinces collected and isolated 318 Trichoderma and 114 Fusarium isolates from damaged roots of citrus trees By Koch's postulate test, F solani was the causal agent of citrus root rot disease (with yellow leaf symptom) in these provinces - The primary study on petri dishes in the laboratory further selected 50 isolates of Trichoderma that antagonised efficiently with F solani - The bioassay method for antagonistic evaluation by chitinase release was efficient for selecting Trichoderma isolates to control the germination of pathogen spores This technique helped to select 11 promising isolates to antagonise root rot disease at the pH range 4.2 to 5.5 - Studies of enzyme activity of Trichoderma by its chitinase release showed that promising isolates can produce exo- and endo-chitinases for pathogen antagonism On citrus young trees, Trichoderma isolates also supported trees to produce systemic acquired resistance by the presence of chitinases and viii glucanases in citrus roots and leaves to resist against F solani Analysing by PCR techniques proved that these enzymes were controlled by two encoding genes ech42 and chit73 The results of DNA sequence of ITS and EF region also determined that five promising isolates of Trichoderma belong to two species T harzianum (T-BM2a, T-TO2a, T-TO2b) and T asperellum (T-LV1a, T-OM2a) - Studies of the effect of mineral nutrients on promising Trichoderma isolates showed that they needed nitrogen (ammonium sulphate form), phosphorus, potassium (mono-potassium phosphate), calcium (calcium sulphate) and magnesium (magnesium sulphate) at different dosages, while application of chemical NPK for citrus orchards affected actively on Trichoderma growths in greenhouse condition The antagonistic capacities were also favourable to different soil textures and suitable to the acid soil (pH from 4.2 to 5.5) of Mekong Delta - Five promising isolates of Trichoderma were propagated and combined for biological control of root rot disease by applying in two types of models, carried out on 13 citrus orchards at Tiengiang, Dongthap, Vinhlong, Cantho and Haugiang provinces Results showed that the isolates can control effectively the root rot disease in soil under lower pH conditions (4.0 to 4.4) The combination of isolates (T-mix) gave high efficiency and good stability in all experiments (comparing with chemical fungicides) The control effectiveness was promoted when the soils of gardens were applied with organic matter or compost to promote Trichoderma growing The biocontrol method of applying Trichoderma together with organic matter also created the habit of composting in fruit gardens of Mekong Delta The combination product of promising Trichoderma (T-mix) was registered and commercialised with the trade name "Trico-DHCT" ix M CL C Trang C v SUMMARY vii M CL C ix TÓM L DANH M C CÁC CH xiii VI T T T DANH SÁCH B NG xiv DANH SÁCH HÌNH xvii M U CH NG 1: T NG QUAN TÀI LI U 1.1 N m Fusarium c m hình thái 1.1.1 1.1.2 Phân lo i 1.1.3 i u ki n kh n ng gây h i c a Fusarium 1.1.4 c t c a Fusarium 1.1.5 c m c a m t s loài thu c chi Fusarium ph bi n t i Vi t Nam 10 1.1.6 Tác đ ng c a môi tr ng đ n Fusarium 15 17 1.2 N m Trichoderma c m c a Trichoderma 1.2.1 1.2.2 M i t 17 ng tác gi a Trichoderma tác nhân gây b nh 1.2.3 Kh n ng kích thích ho c c ch sinh tr 1.2.4 Các y u t nh h Trichoderma ng c a ¬ NG 2: V T LI U, N I DUNG VÀ PH 25 NG PHÁP NGHIÊN C U a m th i gian nghiên c u 2.1 Phân l p ch ng F solani gây b nh Trichoderma đ i kháng v n cam quít t i t nh vùng đ ng b ng sông C u Long 2.1.1 23 ng đ n s phát tri n ho t đ ng đ i kháng c a 1.2.5 M i quan h ba thành ph n gi a Trichoderma - Th c v t - Ký sinh gây b nh CH 18 i u tra tình hình b nh cam quít công tác s u t p ngu n n m b n đ a gây b nh đ i kháng 2.1.2 Xác đ nh tác nhân gây b nh th i r qua quy trình Koch 2.2 Kh o sát tác đ ng c a Trichoderma đ i v i F solani 28 30 31 31 31 33 34 CONG HOA BO GIAO DUC VA DAO TAO HOI CHU N G H VIET ~ NAM T R ~ & N GD;?I HOC CAN THO Doc l$p - Tq - Hgnh phuc DANH SACH HOI D ~ N G CHAM LUAN AN TIEN SP CAP T R ? J ' ~ G Chkm luan iin ciia nghi&nciru sinh: Ducrng Minh Chuy&nnganh: B6o ve thuc v$t Kh6a n5m: 20b2 Mii s6: 62.62.10.01 T&ndB t&E"KhBo stbt ttbc dong d6i khtbng cc6 aim Trichoderma d6i v6i n2n1 Fusarium solani giiy be& th6i r$ tr6n cam quit tai &ng bing s6ng Ciru LongH Ngay biio ve: 01/12/2010 Ngubi hu6ng d%n: PGS Ph9m Vgn Kim Danh siich HQi d8ng chkm luan iin ti& ST ckp Truimg: Ckn Tho, thang 12 nZlm 20 10 I-IIEU T R ~ & P ~ G B GIÁO D C VÀ ÀO T O TR NG I H C C N TH C NG HOÀ XÃ H I CH NGH A VI T NAM c l p - T - H nh phúc PHI U NH N XÉT BÁO CÁO LU N ÁN TI N S H tên ng Chuyên ngành: i nh n xét: PGS TS PH M V N D B nh h c th o m c C quan công tác: C c Tr ng Tr t Mobile: 0913974380 Nghiên c u sinh: ThS D ; Email: phamvandu_ctt@yahoo.com NG MINH V đ tài: “Kh o sát tác đ ng đ i kháng c a n m Trichoderma đ i v i n m Fusarium solani gây b nh th i r cam quít t i đ ng b ng sông C u Long ” Chuyên ngành: B o v th c v t Mã ngành: 62 62 1001 Ý KI N NH N XÉT Sau đ c b n lu n án ti n s , tóm t t lu n án công trình nghiên c u công b liên quan đ n đ tài lu n án c a NCS D ng Minh, xin có nh ng nh n xét nh sau: Hình th c lu n án Lu n án đ c trình bày theo m u quy đ nh c a B Giáo d c & t o cân đ i gi a ph n/ch ng Bài vi t h u nh r t l i t , đ c trình bày r t m ch l c v i nhi u b ng hình minh h a t th c hi n ph ng pháp cho đ n k t qu đ t đ c N i dung lu n án 2.1 Ý ngh a khoa h c, th c ti n tính c p thi t c a đ tài Vùng BSCL có di n tích tr ng n trái chi m t l quan tr ng c n c Tuy nhiên đ a hình t p quán k thu t canh tác t o u ki n cho m m b nh đ t gây h i đ n r nh Fusarium, Phytophthora, … Qu n lý b nh th i r m t cách có hi u qu b n v ng r t quan tr ng tài cung c p nhi u k t qu , thông tin có giá tr v m t th c ti n c ng nh v m t khoa h c: 2.2 N i dung k t c u c a lu n án S ch, đ p, rõ ràng, có t t c 145 trang, ph ch ng, k t c u g m: Tóm t t ti ng Vi t; Abstract ti ng Anh; M c l c; Danh sách ch vi t t t; Danh sách b ng (38 b ng); Danh sách hình (47 hình, v i đ y đ hình ch p báo cáo minh h a cho nghiên c u c a lu n án); Lu n án có 145 trang chính, g m: Ph n M đ u (3 trang); Ch ng 1: T ng quan tài li u t trang 5-29 (24 trang); Ch ng 2: V t li u ph ng pháp t trang 30 đ n 53 (24 trang); Ch ng 3: K t qu th o lu n t trang 54 đ n trang 128 (74 trang); Ch ng 4: K t lu n đ ngh t 128 đ n 130 (3 trang); Kèm theo Danh sách báo (2 trang); 160 tài li u tham kh o (8) n c (152) (13 trang) Th hi n s công phu l c kh o tài li u c a NCS ngu n tài li u tham kh o quý giá cho sinh viên cán b gi ng d y ho t đ ng ngành BVTV; cu i Ph l c (12 trang) Cá qui trình h ng d n s d ng Trichoderma, li t kê đ y đ phi u u tra, đ a m thu m u Fusarium solani Trichoderma v n cam quit, s li u nghiên c u v Fusarium solani, qui trình ly trích DNA t s i n m Trichoderma C u trúc đ y đ s phân chia s trang nh v y h p lý khoa h c, đ c bi t Ch ng K t qu th o lu n r t phong phú toàn di n 2.3 tin c y h p lý c a ph ng pháp nghiên c u Trình t nghiên c u t u tra, thu th p tách ròng đ i t ng nghiên c u nh Trichoderma Fusarium Nh ng thí nghi m v hi u qu đ i kháng c a ch ng Trichoderma đ c trình bày r t rõ ràng khoa h c qua hình nh, ph ng pháp đánh giá r t th n tr ng nh đánh giá b c đ u phòng thí nghi m nhà l i đ n đ ng, sau thi t l p mô hình Ph ng pháp b trí thí nghi m, l y m u, phân tích th ng kê đ u phù h p v i n i dung m c đích c a lu n án Ngoài tác gi ng d ng công ngh cao trình th c hi n đ tài nh : xác đ nh s hi n di n c a gen di u n s t ng h p exo-và endo-chitinase qua k thu t PCR; loài Trichoderma đ c xác đ nh thông qua gi i trình t ADN, s d ng c p m i ITS (F) ITS4 (R), tef1 (F) tef1 (R), EF1-728 (F) EF1-986 (R) Nghiên c u v tác đ ng c a m t s phân bón đa trung vi l ng (N, P, K, Ca Mg) lên s sinh tr ng hình thành bào t c a Trichoderma Nhìn chung b c ti n hành nghiên c u đ c thi t k r t hoàn ch nh đ tin c y nghiên c u cao 2.4 V tính phù h p c a đ tài lu n án v i mã s chuyên ngành tài lu n án hoàn toàn phù h p v i mã s chuyên ngành B o v th c v t mã s : (62 62 1001) 2.5 V đ tài lu n án, s li u, k t qu nghiên c u, k t lu n c a lu n án có trùng l p không v i lu n án đ c b o v n c, trích d n rõ ràng đ y đ , trung th c: N i dung nghiên c u r t c p nh t, phân tích s li u th hi n đ tin c y r t cao K t qu nghiên c u c a lu n án không trùng l p v i b t c k t qu hay n c đ c công b 2.6 V nh ng đóng góp m i cho l nh v c khoa h c chuyên ngành : - Ý ngh a khoa h c : Vùng BSCL có di n tích tr ng n trái chi m g n 60% (500,000 ha) nhi u lo i tr ng b b nh vùng r r t tr m tr ng Qu n lý b nh th i r m t cách có hi u qu b n v ng r t quan tr ng tài cung c p nhi u k t qu , thông tin có giá tr v m t th c ti n c ng nh v m t khoa h c: Nh t trí v i nh ng thành qu m i đ t đ c c a lu n án - i u tra, thu th p m u b nh, đ c bi t phân l p đ 114 ch ng F solani c 318 ch ng Trichoderma - C ch ti t chitinaz đ i kháng v i n m b nh, hi u qu đ i kháng c a n m b nh nh kh n ng ti t exo- endo-chitinase đ c u n b ng gen m hóa chit 13 vA ech42, mot co chi IshAng benh giAn tiBp g i ~ ciiy p t r h g qua SF hien dien cua chitinase v8 beta- 1,3-glucanase rz vh 16 cay - Qua giai trinh tq DNA xAc djnh dbng Trichoderma hiin vqng (T-MB2a, T-LVla, T-OM2a, T-TO 2a, T-T02b) thuoc lohi T harzianum vB T asperellum - Me hinh img dung sir dung Trichoderma c6 hi&uqui an djnh qua 13 di&mthi nghi&m thuac tinh DBSCL, c6c c h h g Trichderma stwgc d5ng ky v6i ten thwong mai TriceDHCT VB c6c cBng trinh cBng b6 c6a luen Bn T6m bAo cAo khoa hoc c6 lien quan 85 dwgc cbng b6 tr6n cAc tap chi khoa hoc chuy6n nghnh nutrc Di$u g6p p h h thhm djnh chkt lugng cao khoa hoc cua luan An NhGng digm tin lim r6, b8 sung v i s4a ch4a - TAc gia cin sira chira lqi m@ s6 sai sM nh6, nhin chung v$ lugn An khA h o h hao vh it sai s6t D$ tai cho thky diiy 18 mQt c6ng trinhnghien ciru rht hohn chchinh vira c6 giA trj thqc ti&nvira mang tinh khoa hoc cao ~ &quAt nghi6n civu d5 dAp img diy dii muc ti6u nghi6n ciru d$ ra, c6 dQ tin cay cao, cung ckp nhiiu thBng tin vB 18 tai lieu tra ciru t6t Kinh d&nghj hQi d6ng cho theng qua v l c6ng nhan luan An dqt trinh ~ i k nST cho nghi6n cim sinh PGS.TS PHAM v&V D u Ho vk ten nguiri nh$n xCt: Hujrnh Thanh Hung Hoc vi: Ph6 Giho su; ~ i &sin Chuyen nginh:: N8ng h6a Ca quan cBng tac: Truang Dqi Hgc N8ng LBm TP HB Chi Minh Nhi&rnvu t r o w Hiii d A n ~Phiin : Ri&n Ho T6n NCS: Dvong Minh Chuy6n nganh: Bio ve Thuc v$t Mii s6: 62.62.10.01 Ten d&tii luan an: "Khlo sat t i c dQng d6i khlng c i a n i m Trichoderma ilBi vCi nkm Fusarium solani gPy benh th6i r8 tr$n cam quit tqi Dang bing s6ng C h Long'' Ca s6 dao tao: Truivng Dai hoc in thcr Y KIEN N H ~ N XET Hinh thiYc Luan v5n trinh bay sach, r6 rang, hanh vBn dE hi& Lu$n v5n trinh bay 145 trang (chua tinh phhn phu luc), co 40 bang, 47 hinh, tham lthao 160 tai lieu (trong c6 tai lieu ti6ng Viet , 152 tai lieu nuivc ngohi) ~ 6qua t d$ thi c6 cBng trinh dugc cBng b6, c6 cBng trinh lien quan trqc tiip d6n d&t8i NQi dung 2.1 Y nghia l&oa hoc c i a lu$n An Trong nhimg n5m gin diy, benh th6i r$ dZi giy thi@ hhpi dang k6 tren ciy 5n trai tr6ng tr khu vqc c8c tinh d&ngbing Sdng Ciru Long, dac biet 18 trCn ciy c6 mui Viec sir dung cac loai nBng duqc d6 phbng tr/ benh th6i r$ tren c b ciy c6 mui a khu vqc thuirng khBng hieu qua, kh6ng gihi quyk triet d6 v l giy-anh h u h g xhu d6n mBi t n r h g Viec nghi6n ciru vP Bp dung bien phiip sinh hpc, thBng qua sir dung nim Trichoderma d6 phbng tri benh th6i r8 nhm Fusarium solani tren cam qufl la tip thi& vh c6 nghia khoa hoc cfing nhu thqc ti& quan trong sin xuht ciy an qua hien tai d&ngbing SBng Civu Long the0 h u h g bin v5ng ~ qui t c6a d&tai dii di siiu nghien cuu mot c h h khoa hoc va co he th6ng nh3ng vhn d$ lien quan va dZi giAi quy&tmot cach hoan chinh v9 c6 hi& qua tr6n cac vhng tr6ng cam qufl tai mot s6 vhng tr&ngchh y6u c6a d&ngbing SBng C h Long 2.2 Niji dung v h k&tchu lu$n Bn DB tai nghien ciru bao g6m nhi&u nai dung: Di&u tra thu th$p cac chung Trichoderma vB cac chirng Fusarium solani tir chc v u h cam qufl bi benh th6i r8 lam ngu6n nguy6n lieu cho cac thi nghiern; khio sat tac dong va m6i tumg tac giiia Trichoderma vivi Fusarium tren cic khia canh sinh hoc, h6a sinh va di truy&n;Xac djnh mot s6 y6u t6 19 h6a ti& dit thc dong d6n m6i quan he giiia Trichoderma v l Fusarium; DAnh gih hieu qua c6a c6c chung Trichoderma viec k.h6ng ch6 benh th6i rE Fusarium solani cac v u h cam qufi di$u kien canh tAc tai d6ng bing SGng Ciru Long Luan an trinh bay 145 trang (khbng tinh ph$n phu luc) phhn mb dhu: trang (chi6m 2,76%), chumg 1: ~ b quan n t8i ~ lieu: 25 trang (chi6m 17,24%); chuong 2: Vat lieu, nai dung vB phumg phap nghien c h : 24 trang (chi6m 16,55%); t vB thdo luan: 74 trang (chi&m3 1,03%); phBn k&tlu& va d&nghi: chuong 3: ~ 6qua trang (chi&m2,07%), cbn lai 11 chc c6ng trinh d l c6ng b6 vB thi lieu tham khao: 15 trang (chi6m 10,34%) ~ 6chu t nhu tr&nla tumg d6i phh h q , nhi&nph,hh t8ng quan chi6m 17,24% 1k hai it 2.3.334 tin c$y vB sy h e 19 ciia phwcyng phip nghizn civu D&t8i nghi8n ciru tap trung sir dung Trichoderma d&quan 1); benh th6i re Fusarium solani giiy tr&nciiy cam qufi tr6ng tai c8c tinh d8ng bing s6ng Ciru Long CZin cir vao chc noi dung nghiCn ciru vB chc k&tqua dat duqc, d&t8i nghi8n ciru phh hpp vvbi chuy8n nghnh BAo ve thqc vat, mii s6 62.62.10.01 Ckc lc&tquH thu duqc kh6ng tr.+ng lip vvbi cac lu$n an dii bao ve vh ngoii nudc Tham khao 160 tii lieu, chd y&u1& chc tBi lieu nu& ngoai (152 tai lieu) Viec trich d8n cac t&ilieu tham khao rd ring, kh8 diy du v i trung thqc Chc phuong phap sir dung tir di&utra thu thgp mku, thi nghiem phbng, thi nghiem ngoBi d8ng ruong d&ub6 tri d h g nguy8n tic C6 sir dung.ck trang thikt bj hien dqi (PCR, GiHi trinh DNA) hb trq xac djnh mat s6 chi ti&ulhm co sir khoa hoc virng chic h m Cac s6 lieu thu thap duqc tang hpp, xir 1); thang ice dhy du n8n dhm bHo da trung thqc vA tin cay 2.4 ~ &quHt nghien ciru dP dat dwqc - Di&utra chc v u h tai ~ i &Giang, n 136ng Thhp, V7nh Long, ~ h tho n vB H$u Giang d l phiin lap duqc 18 chung Tricodema va 114 ch6ng Fusarium tir c L phbn r$ ciiy benh - Xac dinh Cturqc 50 chung Tricoderma phiin lap ttir cac v u h c6 kha niing d6i khhng tat v&iFusarium solani - Danh gia khH nZing ti6t Chitinaz d6i khing vvbi nhm benh, chon duqc 11 chung Trichoderma d6i khang t6t b pH 4,2 - 5,5 - XBc djnh tr&nciiy qufi ti&u, Trichoderma gitip ciiy tao I&& nZing kich khang qua sq hien dien cfia chitinaz vB glucanar r5 vB 18, g i ~ pciiy khhng lai vdi Fusarium solani XBc djnh chc chung Trtchoderma c6 tri&nvong ti6t endo vA exo - chitinaz duqc di&ul&i&n tir gen m l h6a cch42 vB chi173 Giai trinh tq DNA d l xac djnh c h h g trikn vong - Xhc djnh b6n phgn h6a hoc N, P, K cho mim cam qufi d&r:cho tAc dong tich cvc d6n su phat tri6n cha Trichoderma; niing d6i k h k g vdi nhm b$nh cua cac ch6ng bin dja t6 thich hgvp vdi di&uki$n sa chu dit va pH d6t ccba d6ng bing SBng CZiu Long - D h h gih qua m6 hinh, tren 13 mim cam qufl dang bj benh tai ~ i k Giang, n Long, in Tho vh Hau Giang chc c h h g Trichoderma n6i troi d&u ~ Thhp, n V?nh ~ co l&a n h g lch6ng ch6 n h Fusarium solani giiy benh th6i r6 cam qufl di&u ki$n vudn dht c6 pH 4,O - 4,4 Su tron ch6ng Trichoderma c6 hieu qui cao nhit va An djnh (so vdi thu6c trir benh) Hi& qui c h g cao git vudn duqc cung tip th6m chit hh2i.u co CBc kit qui dat dugc c6a lu@nan dhp img d$ d i cAc ~ myc ti& cc6a d&tai dat 2.5 Nhiing d6ng g6p mCvi cGa lugn Bn cho khoa h ~ cs5n , xuht Theo chiing t6i, d&thi clia NCS c6 cac d6ng g6p mdi sau: - D$ dhnh gih niing ti6t chitinar cfia Trichoderrna d6i khang v6i nhm 66nh vh chon duqc 11 ch6ng Trichoderma c6 niing d6i khhng t6t dhng phbng trj sinh hoc ~&JIIth6i r6 cam qufl Fusarium solani giiy - Xhc djnh tinh khhng benh c6a Trichodwma 1h nhb khh niing tikt chc exo- v2i endo-chitinaz, dugc di8u khi%ntir gen mi5 h6a chit73 vh 2ch42 Trichoderma giiip ciiy tao niing k h h g b$nh qua sv hien di$n c6a chitinaz vh glucanaz iv r6 vh 18 giiip DNA d5 xb djnh chung c2y d& khang vivi Fusarium solani Giii trinh Trichoderma c6 tri6n vong thuoc lohi Trichoderma harzianum vh T asperellum - Sir dyng chc c h h g Trichoderm trikn vong d&tri benh th6i r6, k6t hqp vdi vat lieu hh2i.u co c6 n a g kh6ng chi benh th6i r6 cam qufi tren dht vubn d6ng b h g S8ng Cim Long (c6 pH: 4,O - 4,4) 2.6 CBc uu di&m vB thi&us6t can bb sung, siYa chca U'u di&m - Lu& An trinh bhy sach, r6 rang, hhnh van d6 hi&u,tham khio nhi&utai lieu lien quan d6n noi dung nghien ciru, c6 nhi&uhhinh &nhminh hoa - NOi dung nghisn cciru phc hpp, c6 he th6ng Cac thi nghiem b6 tri dirng nguyen tic, chc chi tieu theo d6i phh hgvp vh dhp img y&uciu d8 thi Bat CAc phuong phBp nghi&nciru sir dytg 1h n h h g phumg phhp ph8 bi6n Cac s6 lieu thu thap tir chc thi nghiem duqc t6ng hqp vh xir 19 thang k&,nen ding tin cay - ~ 6qub t ciia d&thi di+i tao sin ph&n c6 hi$u qui ~ h i &s6t u can b6 sung, chinh sea - Hinh thhc - Cbn nhi&usai s6t in &:I 1Bi chinh ti; trinh bhy chm r6: bang 60 c&nvi6t n thhnh " CBc c h h g F solani phiin lap tai lai cgu " Cac c h h g F solani c6a ~ i &Giang" ~ i Giang" n v9 lxol~gtu iv chc vhng khic; trang 84 b h g 3.12 kh6ng vi&ttit Qra bhg - Ditng thuht ngir chuy6n men: phi dkt (NCS dung phi nhi6u dit), trang 28, myc 1.2.5 n6n ddng mi% quan he ba thinh phkn thay cho cum tir " quan he chi&u9'd6 hi&uhon; lch8ng n6n dung tir "giau", "ngh6o" d&chi cho enzyme - ~ h &trich n d8n tii lieu tham khBo nen chon cBch: tlc'gih, n3m hoac [s6 thI? tu thi lieu tham khho] NCS chon ch clch - Trong phhn k6t quh v i thho lu$n n6n bb tir nQi dung 1, 2, 3, 4, ~ i 6nhu t v$y ngubi @c nghi 18 liet k6 c8c nai dung - Chd clch h8nh v3n: ~ h i &doan u NCS trinh bi; nhu van n6i, dac biet l i phkn mb th cac thi nghiem v&mot s6 doan phkn kit quB - Nai dung - Noi dung 4: n6n s ~ lai a la: tlc dong ciia sa ciu dht vh mat s6 dinh d u h g kholng N, P, K, Ca vA Mg d6n quan he gi5a Trichoderma v i Fusarium solani, vi phi dit kh6ng phhi chi dga v8o c8c nguyen t6 khohng tren - Muc 3.5.3 phkn kit quB nen bb, vi khSng li6n quan trgc tikp d6n cac nai dung ciia d&tii - Tinh he thang ckc k&tquh nghien c h , NCS chua lam nBi bat phkn trinh biy kit quh, chii y6u l i ch6 k6t quh ciia timg thi nghiem (nang tinh liet kc), l$p di lap lai - K6t lu$n cbn dhi, din t r f , chua t$p trung vio c8c noi dung chinh c6a d&tii 2.7 ~ h A Ivqng t v&chc bhi bho cho khoa h ~ bP c cbng b6 cfia NCS Nghisn cI?u sinh k2 khai c6ng trinh dB h q c c6ng b6 tir niim 2003 - 2006, 66 c6 cbng trinh phhn Bnh k6t quh ciia luhn An Trong c6ng trinh cbng b6, c6 b8i dBng tren clc Ky y6u Hoi nghi khoa hoc va b8i dang tr6n tap chi Khoa hoc ciia t r u h g Dai hoc ~ h Tho n Nai dung clc bii bao phhn hnh k6t qua nghi6n cfru ciia d& thi, c8c bii b8o c6 chit l q n g t6t v i &qc d3ng tr6n cbc Tap chi c6 uy tin duqc tinh di&mc6ng trinh khoa hoc + \ I C " N >[...]... solani gây h i trên cam quít - Kh o sát tác đ ng c a Trichoderma đ i v i F solani và h th ng r c a cam quít - Kh o sát m i t hoá sinh và DNA ng tác gi a Trichoderma và F solani trên khía c nh 3 - Xác đ nh các y u t t đ t (sa c u và phì nhiêu đ t) tác đ ng đ n m i quan h gi a Trichoderma và F solani trên cam quít - ánh giá hi u qu c a các ch ng Trichoderma trong vi c kh ng ch b nh th i r do F solani trong... đ i kháng c a các ch ng Trichoderma tri n v ng đ phòng tr sinh h c b nh th i r do F solani trên các v n tr ng cam quít 50 xi CH 54 NG 3: K T QU VÀ TH O LU N 3.1 Phân l p các ch ng F solani gây b nh và Trichoderma đ i kháng trên các v n cam quít t i các t nh vùng đ ng b ng sông C u Long 54 3.1.1 K t qu đi u tra tình hình b nh trên cam quít và công tác s u t p các ngu n n m b n đ a gây b nh và đ i kháng. .. ng Trichoderma thu th p t i Ti n Giang đ i v i F solani gây b nh th i r cam quít (3 ngày sau khi nuôi c y) 68 Hi u su t đ i kháng (%) đã hi u ch nh c a các ch ng Trichoderma thu th p t i V nh Long đ i v i F solani gây b nh th i r cam quít (3 ngày sau khi nuôi c y) 69 Hi u su t đ i kháng (%) đã hi u ch nh c a các ch ng Trichoderma thu th p t i C n Th và H u Giang đ i v i F solani gây b nh th i r cam quít. .. n ng đ i kháng c a các ch ng Trichoderma d a trên kh n ng c ch s phát tri n s i n m c a các ch ng F solani 34 2.2.2 Tác đ ng c a pH đ n kh n ng đ i kháng c a các ch ng Trichoderma trong môi tr ng nuôi c y PDA 35 2.3 Kh o sát m i t ng tác gi a Trichoderma và F solani trên khía c nh hoá sinh và DNA 36 2.3.1 Tr c nghi m kh Trichoderma n ng ti t chitinase đ i kháng c a các ch ng 36 2.3.2 Kh o sát kh n... ch ng F solani F-BM2 trên cây quít Ti u con Quy trình Koch th m c nhi m b nh trên quít Ti u v i ch ng F .solani F-TB4 Quy trình Koch (in-vitro) th m c nhi m b nh v i 2 ch ng F solani F-CTTG5 và F-CG4 Quy trình Koch (in-vitro) th m c nhi m b nh v i ch ng F solani F-TN2 Kh n ng đ i kháng c a các ch ng Trichoderma v i F solani Kh n ng đ i kháng trên đ a petri c a ch ng Trichoderma T-OM1 đ i v i F solani. .. 3.1.2 Tác nhân gây b nh th i r và m c gây h i qua quy trình Koch 58 ¬ Trên cây con tr ng trong l đ t ¬ Trên cây con tr ng in-vitro 3.1.3 Nh n di n b nh vàng lá th i r do F solani trên các v 58 60 n cây có múi 3.2 Tác đ ng c a Trichoderma đ i v i F solani 65 66 3.2.1 Tr c nghi m kh n ng đ i kháng c a các ch ng Trichoderma d a trên kh n ng c ch s phát tri n s i n m c a các ch ng F solani 66 3.2.2 Tác đ... trong các v n cam quít trong đi u ki n canh tác t i đ ng b ng sông C u Long 3 IT - NG VÀ PH M VI NGHIÊN C U it ng nghiên c u c a đ tài: Phòng tr b nh th i r trên cây có múi do n m Fusarium solani gây h i b ng các ch ng n m đ i kháng Trichoderma b n đ a - Ph m vi nghiên c u c a đ tài: S d ng n m Trichoderma đ qu n lý b nh th i r trên các v n cây có múi t i các t nh thu c đ ng b ng sông C u Long (Ti n Giang,... i (%) trên các v n cam quít đi u tra t i Ti n Giang, C n Th và H u Giang i u tra và thu th p m u các v n cây b b nh Tri u ch ng b nh th i r trên quít Ti u do F solani (Lai Vung, ng Tháp) Tri u ch ng b nh th i r trên chanh do F solani (Ô Môn, C n Th ) Tri u ch ng vàng lá trên nhánh b i do F solani (Cái Bè, Ti n Giang) Tri u ch ng ch t cây trên b i do b nh th i r F solani (Tam Bình, V nh Long) R quít. .. ng c a dinh d ng đ t (N, P, K) đ n kh n ng đ i kháng c a Trichoderma đ i v i n m b nh F solani 103 3.4.3 Tác đ ng c a sa c u đ t đ n kh n ng đ i kháng c a Trichoderma đ i v i n m b nh F solani 105 3.5 Hi u qu kh ng ch b nh th i r F solani c a các ch ng Trichoderma trong các v n cam quít t i đ ng b ng sông C u Long 106 3.5.1 Kh n ng phân h y h u c c a Trichoderma t các ngu n nguyên li u h u c s n có... u công trình nghiên c u c ng cho th y s hi n di n và vai trò c a các dòng Trichoderma trong vi c kh ng ch Fusarium [60], [127], [64], c ng là tác nhân chính gây b nh th i r trên các v n cam quít t i BSCL Tuy nhiên, ho t đ ng đ i kháng v i các lo i n m gây h i r cây c a Trichoderma c ng nh m c đ gây h i c a Fusarium l i ch u tác đ ng b i nhi u y u t do môi tr l ng đ t chi ph i nh : Sa c u đ t, pH [138], ... phúc - L I CAM OAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên c u “Kh o sát tác đ ng đ i kháng c a n m Trichoderma đ i v i n m Fusarium solani gây b nh th i r cam quít t i đ ng b ng sông C u Long c a... v i n m đ i kháng Trichoderma t có nhi u tri n v ng tài "Kh o sát tác đ ng đ i kháng c a n m Trichoderma đ i v i n m Fusarium solani gây b nh th i r cam quít t i đ ng b ng sông C u Long" đ c th... O TR NG I H C C N TH _ D KH O SÁT TÁC TRICHODERMA NG MINH NG I KHÁNG C A N M I V I N M FUSARIUM SOLANI GÂY B NH TH I R TRÊN CAM QUÍT T I NG B NG SÔNG C U LONG CHUYÊN NGÀNH B O V TH C V T MÃ