KHẢO SÁT HIỆU SUẤT THU NHẬN CHẾ PHẨM ENZYME PROTEASE TỪ CANH TRƯỜNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VỚI CÁC LOẠI TÁC NHÂN TỦA KHÁC NHAU

http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN KHẢO SÁT HIỆU SUẤT THU NHẬN CHẾ PHẨM ENZYME PROTEASE TỪ CANH TRƯỜNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS OBO OKS CO M VỚI CÁC LOẠI TÁC NHÂN TỦA KHÁC NHAU Bảng 1.1: Lượng chế phẩm enzyme protease thu hiệu suất thu nhận với loại tác nhân tủa khác Tác nhân tủa Khối enzyme Khối lượng tủa (g) Khối lượng tủa thu nhận lượng canh Hiệu suất trung trường bình (g) (g) (%) Cồn 50 2,59 2,74 2,68 2,67 5,34 Acetone 50 1,84 1,87 1,83 1,85 3,70 Amoni 50 1,16 0,96 1,09 1,07 2,14 sulfat Nhận xét : Lượng chế phẩm enzyme thu hiệu suất thu nhận enzyme cao trường hợp tác nhân tủa cồn KHẢO SÁT HOẠT Độ PROTEASE 2.1 Đường chuẩn Tyrosin : Bảng 2.1: Đường chuẩn Tyrosin Lượng 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 0,181 0,355 0,529 0,704 0,878 KI L Tyrosin(µmol) OD (750 nm) http://kilobooks.com 0,9 0,8 0,7 MẬT ĐỘ 0,6 QUANG OD 0,5 (750 nm) 0,4 0,3 0,2 0,1 0 OBO OKS CO M THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 0,2 0,4 0,6 0,8 1,2 NỒNG ĐỘ TYROSIN (µmol) Hình 2.1 : Đường chuẩn Tyrosin 2.2 Khảo sát hoạt độ protease canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis: Cân 20 g canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis, tiến hành mục II.3.1, phần dịch thu 200 ml, pha lỗng lần, đem 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến mục II.3.2 Bảng 2.2: Hoạt độ protease canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis µmol Lần ODM ODĐC ∆OD = ODM - Tyrosin 0,998 1,012 1,013 KI L ODĐC Hoạt độ Hoạt độ (UI/g trungbình CT) (UI/g CT) 0,915 0,083 0,091 1,46 0,915 0,097 0,107 1,71 0,915 0,098 0,108 1,73 1,63 Nhận xét : Hoạt độ protease canh trường vi khuẩn 1,63 UI/g CT (giá trị trung bình) http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 2.3 Khảo sát hoạt độ protease chế phẩm enzyme tủa cồn 960: Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan 100ml nước cất, sau OBO OKS CO M pha lỗng lần, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến mục II.3.2 Bảng 2.3: Hoạt độ protease chế phẩm enzyme tủa cồn 960 µmol Lần ODM ODĐC ∆OD = ODM Hoạt độ - Tyrosin (UI/g CPE) ODĐC Hoạt độ trung bình (UI/g CPE) 0,425 0,300 0,125 0,139 22,24 0,427 0,310 0,117 0,130 20,80 0,429 0,290 0,139 0,155 24,80 22,61 Nhận xét : Hoạt độ chế phẩm enzyme protease tủa cồn 960 22,61 UI/g CPE (giá trị trung bình) 2.4 Khảo sát hoạt độ protease chế phẩm enzyme tủa aceton : Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan 100ml nước cất, sau pha lỗng lần, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến mục II.3.2 acetone Lần ODM KI L Bảng 2.4: Hoạt độ protease chế phẩm enzyme tủa ODĐC µmol ∆OD = ODM Hoạt độ - Tyrosin (UI/g CPE) trung bình (UI/g ODĐC 0,493 0,492 Hoạt độ CPE) 0,410 0,083 0,091 14,56 0,402 0,090 0,099 15,84 14,29 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 0,495 0,424 0,071 0,078 12,48 Nhận xét : Hoạt độ chế phẩm enzyme protease tủa OBO OKS CO M aceton 14,29 UI/g CPE (giá trị trung bình) 2.5 Khảo sát hoạt độ protease chế phẩm enzyme tủa amoni sulfat: Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan 100ml nước cất, sau pha lỗng lần, lấy 0,5ml tiến hành xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến mục II.3.2 Bảng 2.5: Hoạt độ protease chế phẩm enzyme tủa Amoni sulfat µmol Lần ODM ODĐC ∆OD = ODM Hoạt độ - Tyrosin (UI/g CPE) ODĐC Hoạt độ trung bình (UI/g CPE) 0,517 0,458 0,059 0,064 10,24 0,489 0,462 0,027 0,027 4,32 0,524 0,487 0,037 0,039 6,24 6,93 Nhận xét : Hoạt độ chế phẩm enzyme protease tủa muối amoni sulfat 6,93 UI/g CPE (giá trị trung bình) 2.6 Sự so sánh hoạt độ CPE protease tủa tác nhân khác nhau: KI L Bảng 2.6: So sánh hoạt độ CPE protease với tác nhân tủa khác Tác nhân tủa Cồn 960 Hoạt độ (UI/g CPE) Hoạt độ trung bình (UI/g CPE) 22,24 20,80 24,80 22,61 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 14,56 Acetone 14,29 15,84 OBO OKS CO M 12,48 10,24 Amoni sulfat 4,32 6,93 6,24 Nhận xét : Trong loại chế phẩm protease, chế phẩm có hoạt độ cao chế phẩm enzyme tủa cồn (22,61 UI/g CPE) KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PROTEIN THEO PHƯƠNG PHÁP LOWRY 3.1 Đường chuẩn Albumin : Bảng 3.1: Đường chuẩn Albumin Nồng độ protein (µg/ml) OD (750 nm) 50 100 150 200 250 0,208 0,404 0,598 0,795 0,988 1,2 QUANG OD (750 nm) 0,8 0,6 KI L MẬT ĐỘ 0,4 0,2 0 50 100 150 200 NỒNG ĐỘ ALBUMIN (µg/ml) Hình 3.1: Đường chuẩn Albumin 250 300 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 3.2 Khảo sát hàm lượng protein canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis : OBO OKS CO M Cân 20 g canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis, tiến hành mục II.3.1, phần dịch thu 200 ml, pha lỗng 50 lần, đem1ml tiến hành thí nghiệm theo phương pháp Lowry mục II.3.3 Bảng 3.2: Hàm lượng protein canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis : Lần ODM ODĐC Nồng độ Hàm lượng Hàm ∆OD protein protein lượng = ODM - ODĐC tương ứng (mg/g CT) protein (µg/ml) trung bình (mg/g CT) 0,774 0,035 0,739 187,872 93,94 0,783 0,035 0,748 190,179 95,09 0,788 0,035 0,753 191,462 95,73 94,92 Nhận xét : Hàm lượng protein canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis 94,92 mg/g CT (giá trị trung bình) 3.3 Khảo sát hàm lượng protein CPE protease tủa cồn 960 : Cân 1g chế phẩm enzyme protease hòa tan 100ml nước cất, sau pha lỗng 20 lần, lấy 1ml xác định hàm lượng protein theo phương pháp KI L Lowry mục II.3.3 Bảng 3.3: Hàm lượng protein chế phẩm enzyme tủa cồn 960 Lần ODM ODĐC Nồng độ Hàm lượng Hàm lượng ∆OD protein protein protein =ODM- tương ứng (mg/g CPE) trung bình ODĐC (µg/ml) (mg/g http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN CPE) 0,631 0,035 0,666 169,154 338,31 0,639 0,035 0,604 153,256 306,51 0,645 0,035 0,610 155,487 310,97 OBO OKS CO M 318,60 Nhận xét : Hàm lượng protein chế phẩm enzyme protease tủa cồn 960 318,60 mg/g CPE (giá trị trung bình) 3.4 Khảo sát hàm lượng protein CPE protease tủa aceton: Cân 1g chế phẩm enzyme protease hòa tan 100ml nước cất, sau pha lỗng 20 lần, lấy 1ml xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry mục II.3.3 Bảng 3.4: Hàm lượng protein chế phẩm enzyme tủa cồn Acetone Lần ODM ODĐC ∆OD = ODM ODĐC Nồng độ Hàm lượng Hàm lượng protein protein protein - tương ứng (mg/g CPE) trung bình (µg/ml) 0,598 0,035 0,563 142,744 285,49 0,594 0,035 0,559 141,718 283,44 0,597 0,035 0,562 142,478 284,97 KI L (mg/g CPE) 284,63 Nhận xét : Hàm lượng protein chế phẩm enzyme protease tủa aceton 284,63 mg/g CPE (giá trị trung bình) 3.5 Khảo sát hàm lượng protein CPE protease tủa muối amoni sulfat : http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Cân 1g chế phẩm enzyme protease hòa tan 100ml nước cất, sau pha lỗng 20 lần, lấy 1ml xác định hàm lượng protein theo phương pháp OBO OKS CO M Lowry mục II.3.3 Bảng 3.5: Hàm lượng protein chế phẩm enzyme tủa amoni sulfat Lần ODM ODĐC Nồng độ Hàm lượng Hàm lượng protein protein protein trung - tương (mg/g bình ứng CPE) (mg/g CPE) ∆OD = ODM ODĐC (µg/ml) 0,456 0,035 0,421 106,333 212,67 0,414 0,035 0,379 95,564 191,13 0,444 0,035 0,409 103,256 206,51 203,44 Nhận xét : Hàm lượng protein chế phẩm enzyme protease tủa aceton 203,44 mg/g CPE (giá trị trung bình) 3.6 Sự so sánh hàm lượng protein chế phẩm protease tủa tác nhân khác : Bảng 3.6: So sánh hàm lượng protein loại chế phẩm enzyme protease với tác nhân tủa khác Hàm lượng protein Hàm lượng protein trung bình (mg/g CPE) (mg/g CPE) KI L Tác nhân tủa Cồn 960 Aceton 338,31 306,51 318,60 310,97 285,49 283,44 284,97 284,63 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 212,67 203,44 191,13 Amoni sulfat OBO OKS CO M 206,51 Nhận xét : Hàm lượng protein cao chế phẩm enzyme protease tủa cồn 960 307,85 mg/g CPE (giá trị trung bình ) HOẠT ĐỘ RIÊNG CỦA PROTEASE Bảng 4.1: Hoạt độ riêng canh trường vi khuẩn Hoạt độ protease Hàm lượng Hoạt độ riêng (UI/g CT) protein (UI/mg Pr) (mg protein/g CT) 1,63 94,92 0,017 Bảng 4.2: So sánh hoạt độ riêng loại chế phẩm enzyme protease với tác nhân tủa khác Tác nhân tủa Hoạt độ protease Hàm lượng Hoạt độ riêng (UI/g CPE) protein (UI/mg Pr) (mg Pr/g CPE) Cồn 960 Acetone Amoni sulfat 22,61 318,60 0,072 14,29 284,63 0,050 6,93 203,44 0,034 Nhận xét : Hoạt độ riêng chế phẩm enzyme protease tủa KI L cồn cao 0,072 UI/mg CPE (giá trị trung bình) KHẢO SÁT SỰ PHỤ THUỘC HOẠT ĐỘ CỦA CÁC CHẾ PHẨM ENZYME PROTEASE VÀO NHIỆT ĐỘ 5.1 Khảo sát phụ thuộc hoạt độ CPE protease (tủa cồn) theo nhiệt độ: http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Cân 1g chế phẩm enzym hòa tan 100ml nước cất, sau pha lỗng lần, nhiệt độ khảo sát từ 300 C đến 800 C, lấy 0,5ml tiến hành xác định OBO OKS CO M hoạt độ theo Anson cải tiến mục II.3.2 Bảng 5.1: Khảo sát phụ thuộc hoạt độ protease CPE (tủa cồn) theo nhiệt độ Nhiệt Lần (oC) 50 55 60 Hoạt độ (UI/g CPE) 0,425 0,300 0,125 0,139 22,24 0,427 0,310 0,117 0,130 20,80 0,429 0,290 0,139 0,155 24,80 0,484 0,320 0,164 0,184 29,44 0,487 0.324 0,163 0,183 29,28 0,480 0.329 0,151 0,169 27,04 0,563 0,332 0,231 0,260 41,60 0,565 0,329 0,236 0,266 42,56 0,564 0,337 0,227 0,256 40,96 0,707 0,365 0,342 0,387 61,92 0,730 0,359 0,371 0,420 67,20 0,705 0,367 0,338 0,382 61,12 0,705 0,367 0,338 0,382 61,12 0,698 0,365 0,333 0,377 60,32 0,708 0,359 0,349 0,395 63,20 0,532 0,441 0,091 0,100 16,00 0,526 0,445 0,081 0,089 14,24 0,498 0,438 0,060 0,065 10,40 0,480 0,463 0,017 0,016 2,56 2 Hoạt độ - Tyrosin (UI/g CPE) trung bình 70 ODM µmol ODĐC KI L 40 ODĐC ∆OD = độ 30 ODM 22,61 28,59 41,71 63,40 61,55 13,55 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Bảng 5.2: Khảo sát phụ thuộc hoạt độ enzyme vào nhiệt độ CPE (tủa aceton) : (oC) 50 55 60 ODM - Tyrosin (UI/g CPE) 0,091 14,56 0,492 0,402 0,090 0,099 15,84 0,495 0,424 0,071 0,078 12,48 0,518 0,402 0,116 0,129 20,64 0,519 0,398 0,121 0,135 21,60 0,531 0,404 0,127 0,141 22,56 0,630 0,397 0,233 0,262 41,92 0,573 0,393 0,180 0,202 32,32 0,585 0,395 0,190 0,213 34,08 0,635 0,415 0,220 0,248 39,68 0,676 0,410 0,266 0,300 48,00 0,640 0,413 0,227 0,256 40,96 0,611 0,406 0,205 0,230 36,80 0,587 0,404 0,183 0,205 32,80 0,521 0,406 0,115 0,128 20,48 0,476 0,464 0,012 0,010 1,60 0,479 0,464 0,015 0,014 2,24 0,473 0,460 0,013 0,011 1,76 0,467 0,460 0,007 0,004 0,64 0,473 0,464 0,009 0,007 1,12 0,465 0,460 0,005 0,002 0,32 trung bình CPE) 0,083 Hoạt độ (UI/g 0,493 0,410 80 Hoạt độ 1 70 µmol ODĐC KI L 40 ODĐC ∆OD = độ 30 ODM OBO OKS CO M Nhiệt Lần 14,29 21,60 36,11 42,88 30,03 1,87 0,69 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Nhận xét : Ở 550C, chế phẩm enzyme protease tủa aceton có 50 40 30 HOẠT ĐỘ 20 (UI/g CPE) 10 -10 OBO OKS CO M hoạt độ cao 42,88 UI/g CPE (giá trị trung bình) 20 40 60 80 100 NHIỆT ĐỘ (ĐỘ C) Hình 5.2: Sự phụ thuộc hoạt độ chế phẩm protease (tủa aceton) theo nhiệt độ 5.3 Khảo sát phụ thuộc hoạt độ enzyme vào nhiệt độ CPE (tủa amoni sulfat) : Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan 100ml nước cất, sau pha lỗng lần, nhiệt độ khảo sát từ 300 C đến 800 C, lấy 0,5ml tiến KI L hành xác định hoạt độ theo Anson cải tiến mục II.3.2 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Bảng 5.3: Khảo sát phụ thuộc hoạt độ CPE protease (tủa amoni sulfat) theo nhiệt độ (oC) 50 55 60 70 Hoạt độ ODM (UI/g CPE) 0,417 0,358 0,059 0,064 10,24 0,389 0,362 0,027 0,027 4,32 0,424 0,387 0,037 0,039 6,24 0,544 0,457 0,087 0,096 15,36 0,554 0,459 0,095 0,105 16,80 0,541 0,451 0,090 0,099 15,84 0,660 0,487 0,173 0,194 31,04 0,657 0,490 0,167 0,187 29,92 0,662 0,485 0,177 0,198 31,68 0,753 0,545 0,208 0,234 37,44 0,749 0,549 0,200 0,225 36,00 0,755 0,541 0,214 0,241 38,56 0,704 0,528 0,176 0,197 31,52 0,701 0,531 0,170 0,191 30,56 0,707 0,525 0,182 0,204 32,64 0,608 0,557 0,051 0,055 8,80 0,610 0,555 0,055 0,059 9,44 0,614 0,551 0,063 0,068 10,88 0,513 0,508 0,005 0,002 0,32 0,518 0,503 0,015 0,014 2,24 0,512 0,507 0,005 0,002 0,32 2 Hoạt độ - Tyrosin (UI/g CPE) trung bình 80 µmol ODĐC KI L 40 ODĐC ∆OD = độ 30 ODM OBO OKS CO M Nhiệt Lần 6,93 16,00 30,88 37,33 31,57 9,71 0,96 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Nhận xét : Ở 550C, chế phẩm enzyme protease tủa muối 40 35 30 HOẠT ĐỘ (UI/g CPE) 25 20 15 10 0 OBO OKS CO M amoni sulfat có hoạt độ cao 37,33 UI/g CPE (giá trị trung bình) 20 40 60 80 100 NHIỆT ĐỘ (ĐỘ C) Hình 5.3: Sự phụ thuộc hoạt độ chế phẩm protease (tủa amoni sulfat) theo nhiệt độ KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỔI HOẠT ĐỘ CỦA CHẾ PHẨM PROTEASE TỪ BACILLUS SUBTILIS THEO pH Cân 1g chế phẩm enzym hòa tan 100ml nước cất, sau pha lỗng lần, nhiệt độ 550C, pH khảo sát từ đến 10, lấy 0,5ml tiến KI L hành xác định hoạt độ theo Anson cải tiến mục II.3.2 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Bảng 6.1: Sự biến đổi hoạt độ CPE protease theo pH pH Lần ODM ODĐC ∆OD ODM Hoạt độ 6,5 0,448 0,436 0,012 0,010 1,60 0,451 0,433 0,018 0,017 2,72 0,446 0,438 0,008 0,006 0,96 0,514 0,459 0,055 0,059 9,44 0,519 0,455 0,064 0,070 11,20 0,512 0,461 0,051 0,055 8,80 0,798 0,542 0,256 0,289 46,24 0,801 0,539 0,262 0,296 47,36 0,795 0,545 0,250 0,282 45,12 0,972 0,538 0,434 0,492 78,72 0,968 0,542 0,426 0,483 77,28 0,974 0,536 0,438 0,496 79,36 0,921 0,547 0,374 0,423 67,68 0,924 0,544 0,380 0,430 68,80 0,919 0,549 0,370 0,419 67,04 0,813 0,530 0,283 0,319 51,04 0,815 0,528 0,287 0,324 51,84 0,814 0,530 0,284 0,321 51,36 0,691 0,575 0,116 0,129 20,64 0,694 0,572 0,122 0,136 21,76 KI L ODĐC Hoạt - Tyrosin (UI/g CPE) trung OBO OKS CO M = µmol 0,688 0,578 0,110 0,122 19,52 0,584 0,557 0,027 0,027 4,32 bình(UI/g CPE) 1,76 9,81 46,24 78,45 67,84 51,41 20,64 độ http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 10 0,580 0,561 0,019 0,018 2,88 0,586 0,558 0,028 0,028 4,48 0,454 0,449 0,005 0,002 0,03 0,457 0,451 0,006 0,003 0,48 0,456 0,451 0,005 0,002 0,03 OBO OKS CO M 3,89 0,18 Nhận xét : pH = 6,0; chế phẩm enzyme protease tủa cồn 960 có hoạt độ cao 78,45 UI/g CPE (giá trị trung bình ) 90 80 70 60 HOẠT ĐỘ 50 (UI/g CPE) 40 30 20 10 0 10 12 pH Hình 6.1: Sự phụ thuộc hoạt độ chế phẩm protease (tủa cồn) theo pH KHẢO SÁT Q TRÌNH THỦY PHÂN PROTID CỦA CHẾ KI L PHẨM PROTEASE 7.1 Khảo sát q trình thủy phân albumin : Với điều kiện nhiệt độ 550C ; pH = 6,0 http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Bảng 7.1: Sự biến đổi lượng NF theo thời gian thủy phân albumin CPE protease Thời V NaOH 0,1N (ml) Lượng N-formol tương Trung gian x=1 thủy phân (giờ) OBO OKS CO M Cơ chất ứng (g/100 ml dịch bình thủy phân ) lượng Nformol tương ứng (g) 5,625 5,650 5,650 0,158 0,158 0,158 0,158 5,875 5,900 5,875 0,165 0,165 0,165 0,165 6,200 6,175 6,175 0,174 0,173 0,173 0,173 6,500 6,500 6,490 0,182 0,182 0,182 0,182 6,850 6,870 6,850 0,192 0,192 0,192 0,192 Albumi 7,150 7,140 7,160 0,200 0,199 0,200 0,200 n 7,350 7,350 7,375 0,206 0,206 0,207 0,206 7,500 7,525 7,500 0,210 0,211 0,210 0,210 7,570 7,550 7,550 0,212 0,211 0,211 0,211 7,550 7,550 7,550 0,211 0,211 0,211 0,211 10 7,550 7,550 7,550 0,211 0,211 0,211 0,211 11 7,550 7,550 7,550 0,211 0,211 0,211 0,211 KI L Nhận xét : Với chất albumin, q trình thủy phân có vận tốc tăng nhanh khoảng từ – Giờ thứ thứ 7, lượng N-formol có tăng lượng có chiều hướng giảm Từ thứ 8, q trình thủy phân gần ổn định http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 7.2 Khảo sát q trình thủy phân casein : Với điều kiện nhiệt độ 550C pH = 6,0 CPE protease OBO OKS CO M Bảng 7.2: Sự biến đổi lượng NF theo thời gian thủy phân casein Cơ Thời V NaOH 0,1N (ml) Lượng N-formol tương Trung chất gian x=1 thủy phân (giờ) thủy phân) lượng Nformol tương ứng (g) 5,875 5,900 5,875 0,165 0,165 0,165 0,165 6,125 6,100 6,100 0,172 0,171 0,171 0,171 6,400 6,375 6,375 0,179 0,179 0,179 0,179 6,750 6,750 6,725 0,189 0,189 0,188 0,189 7,175 7,175 7,200 0,201 0,201 0,202 0,201 7,625 7,600 7,600 0,214 0,213 0,213 0,213 8,100 8,125 8,100 0,227 0,228 0,227 0,227 8,675 8,675 8,700 0,243 0,243 0,244 0,243 9,300 9,325 9,325 0,260 0,261 0,261 0,261 10,050 10,100 10,000 0,281 0,283 0,280 0,281 10 10,250 10,250 10,250 0,287 0,287 0,287 0,287 11 10,375 10,400 10,375 0,291 0,291 0,291 0,291 12 10,450 10,475 10,475 0,293 0,293 0,293 0,293 13 10,475 10,475 10,475 0,293 0,293 0,293 0,293 14 10,475 10,475 10,475 0,293 0,293 0,293 0,293 15 10,475 10,475 10,475 0,293 0,293 0,293 0,293 KI L Casein ứng (g/100 ml dịch bình http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Nhận xét : Với chất casein, q trình thủy phân có vận tốc tăng nhanh OBO OKS CO M khoảng từ – Giờ thứ 10 thứ 11, lượng N-formol có tăng lượng có chiều hướng giảm Từ thứ 12, q trình thủy phân gần ổn định 7.3 Khảo sát q trình thủy phân protid đậu nành hạt : Với điều kiện nhiệt độ 550C pH = 6,0 Bảng 7.3: Sự biến đổi lượng NF theo thời gian thủy phân đậu nành hạt CPE protease Cơ Thời V NaOH 0,1N (ml) Lượng N-formol tương Trung chất gian x=1 thủy phân (giờ) ứng (g/100 ml dịch bình thủy phân) lượng Nformol tương ứng (g) 5,300 5,350 5,325 0,149 0,15 0,149 0,149 5,525 5,500 5,525 0,155 0,154 0,155 0,155 5,8000 5,775 5,750 0,162 0,162 0,161 0,162 6,050 6,075 6,100 0,169 0,17 0,171 0,17 6,400 6,375 6,375 0,179 0,179 0,179 0,179 6,750 6,725 6,750 0,189 0,188 0,189 0,189 7,150 7,150 7,125 0,200 0,200 0,200 0,200 7,575 7,575 7,550 0,212 0,212 0,211 0,212 Pr_đậu 8,050 8,025 8,025 0,225 0,225 0,225 0,225 nành 8,350 8,375 8,350 0,234 0,235 0,234 0,234 hạt 10 8,600 8,625 8,600 0,241 0,242 0,241 0,241 KI L http://kilobooks.com 11 8,750 8,775 8,775 0,245 0,246 0,246 0,246 12 8,900 8,900 8,900 0,249 0,249 0,249 0,249 13 8,900 8,900 8,900 0,249 0,249 0,249 0,249 14 8,900 8,900 8,900 0,249 0,249 0,249 0,249 15 OBO OKS CO M THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 8,900 8,900 8,900 0,249 0,249 0,249 0,249 Nhận xét : Với chất đậu nành hạt, q trình thủy phân có vận tốc tăng nhanh khoảng từ – 10 Giờ thứ 11, lượng N-formol có tăng lượng có chiều hướng giảm Từ thứ 12, q trình thủy phân gần ổn định 7.4 Khảo sát q trình thủy phân protid nấm rơm : Với điều kiện nhiệt độ 550C pH = 6,0 Bảng 7.4: Sự biến đổi lượng NF theo thời gian thủy phân nấm rơm CPE protease Cơ chất Thời gian thủy phân x=1 ứng (g/100 ml dịch bình thủy phân) KI L (giờ) V NaOH 0,1N (ml) Lượng N-formol tương Trung lượng Nformol tương ứng (g) 5,050 5,100 5,050 0,141 0,143 0,141 0,142 5,325 5,325 5,325 0,149 0,149 0,149 0,149 5,600 5,625 5,600 0,157 0,158 0,157 0,157 5,925 5,925 5,925 0,166 0,166 0,166 0,166 6,275 6,275 6,300 0,176 0,176 0,176 0,176 http://kilobooks.com 6,675 6,675 6,700 0,187 0,187 0,188 0,187 7,100 7,100 7,100 0,199 0,199 0,199 0,199 Pr_nấm 7,575 7,575 7,500 0,212 0,212 0,210 0,211 rơm 8,025 8,000 8,025 0,225 0,224 0,225 0,225 8,375 8,400 8,400 0,235 0,235 0,235 0,235 10 8,625 8,650 8,625 0,242 0,242 0,242 0,242 11 8,800 8,825 8,825 0,246 0,247 0,247 0,247 12 8,925 8,950 8,925 0,25 0,251 0,250 0,250 13 8,950 8,950 8,925 0,251 0,251 0,250 0,251 14 8,950 8,950 8,950 0,251 0,251 0,251 0,251 15 OBO OKS CO M THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 8,950 8,950 8,950 0,251 0,251 0,251 0,251 Nhận xét : Với chất nấm rơm, q trình thủy phân có vận tốc tăng nhanh khoảng từ – 10 Giờ thứ 11 thứ 12, lượng N-formol có tăng lượng có chiều hướng giảm Từ thứ 13, q trình thủy phân gần ổn định 7.5 Khảo sát q trình thủy phân thịt heo nạc : Với điều kiện nhiệt độ 550C pH = 6,0 Bảng 7.5: Sự biến đổi lượng NF theo thời gian thủy phân thịt heo nạc KI L CPE protease http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Cơ Thời V NaOH 0,1N (ml) chất gian x=1 phân (giờ) heo nạc bình thủy phân) lượng Nformol tương ứng (g) 5,000 5,050 5,050 0,14 0,141 0,141 0,141 5,175 5,150 5,200 0,145 0,144 0,145 0,145 5,350 5,400 5,350 0,150 0,151 0,150 0,150 5,575 5,575 5,550 0,156 0,156 0,155 0,156 5,825 5,800 5,825 0,163 0,162 0,163 0,163 6,225 6,200 6,200 0,174 0,174 0,174 0,174 6,400 6,375 6,400 0,179 0,179 0,179 0,179 6,750 6,750 6,750 0,189 0,189 0,189 0,189 6,950 6,925 6,925 0,195 0,194 0,194 0,194 7,050 7,075 7,075 0,197 0,198 0,198 0,198 10 7,150 7,175 7,175 0,200 0,201 0,201 0,201 11 7,175 7,175 7,175 0,201 0,201 0,201 0,201 12 7,175 7,175 7,175 0,201 0,201 0,201 0,201 13 7,175 7,175 7,175 0,201 0,201 0,201 0,201 KI L Pr_thịt Trung ứng (g/100 ml dịch OBO OKS CO M thủy Lượng N-formol tương Nhận xét : Với chất thịt heo nạc, q trình thủy phân có vận tốc tăng nhanh khoảng từ – Giờ thứ thứ 9, lượng N-formol có tăng http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN lượng có chiều hướng giảm Từ thứ 10, q trình thủy phân gần ổn định OBO OKS CO M 0,35 0,3 0,25 LƯNG N-FORMOL TRONG QUÁ TRÌNH THỦY PHÂN (G/ 100 ml dung dòch thủy phân) 0,2 0,15 0,1 đậu nành hạt albumin casein nấm rơm thòt heo nạt 0,05 0 10 15 20 THỜI GIAN (GIỜ) Hình 7.1: Sự biến đổi hàm lượng NF theo thời gian q trình thủy KI L phân chất khác chế phẩm protease http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN MỤC LỤC KHẢO SÁT HIỆU SUẤT THU NHẬN CHẾ PHẨM ENZYME OBO OKS CO M PROTEASE TỪ CANH TRƯỜNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VỚI CÁC LOẠI TÁC NHÂN TỦA KHÁC NHAU KHẢO SÁT HOẠT ĐỘ PROTEASE 2.1 Đường chuẩn Tyrosin : 2.2 Khảo sát hoạt độ protease canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis: 2.3 Khảo sát hoạt độ protease chế phẩm enzyme tủa cồn 960: 2.4 Khảo sát hoạt độ protease chế phẩm enzyme tủa aceton : 2.5 Khảo sát hoạt độ protease chế phẩm enzyme tủa 2.6 Sự so sánh hoạt độ CPE protease tủa tác nhân khác nhau: KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PROTEIN THEO PHƯƠNG PHÁP LOWRY 3.1 Đường chuẩn Albumin : 3.3 Khảo sát hàm lượng protein CPE protease tủa cồn 960 : 3.4 Khảo sát hàm lượng protein CPE protease tủa aceton: 3.5 Khảo sát hàm lượng protein CPE protease tủa muối amoni sulfat : KI L 3.6 Sự so sánh hàm lượng protein chế phẩm protease tủa tác nhân khác : HOẠT ĐỘ RIÊNG CỦA PROTEASE KHẢO SÁT SỰ PHỤ THUỘC HOẠT ĐỘ CỦA CÁC CHẾ PHẨM ENZYME PROTEASE VÀO NHIỆT ĐỘ 5.1 Khảo sát phụ thuộc hoạt độ CPE protease (tủa cồn) theo nhiệt độ: http://kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 5.2 Khảo sát phụ thuộc hoạt độ enzyme vào nhiệt độ CPE (tủa aceton) : 11 OBO OKS CO M 5.3 Khảo sát phụ thuộc hoạt độ enzyme vào nhiệt độ CPE (tủa amoni sulfat) : 13 KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỔI HOẠT ĐỘ CỦA CHẾ PHẨM PROTEASE TỪ BACILLUS SUBTILIS THEO pH 15 KHẢO SÁT Q TRÌNH THỦY PHÂN PROTID CỦA CHẾ PHẨM PROTEASE 17 7.1 Khảo sát q trình thủy phân albumin : 17 7.2 Khảo sát q trình thủy phân casein : 19 7.3 Khảo sát q trình thủy phân protid đậu nành hạt : 20 7.4 Khảo sát q trình thủy phân protid nấm rơm : 21 KI L 7.5 Khảo sát q trình thủy phân thịt heo nạc : 22 [...]... phân các cơ chất khác nhau bởi chế phẩm protease http://kilobooks.com THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN MỤC LỤC 1 KHẢO SÁT HIỆU SUẤT THU NHẬN CHẾ PHẨM ENZYME OBO OKS CO M PROTEASE TỪ CANH TRƯỜNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS VỚI CÁC LOẠI TÁC NHÂN TỦA KHÁC NHAU 1 2 KHẢO SÁT HOẠT ĐỘ PROTEASE 1 2.1 Đường chuẩn Tyrosin : 1 2.2 Khảo sát hoạt độ protease trong canh trường vi khuẩn Bacillus subtilis: ... Bacillus subtilis: 2 2.3 Khảo sát hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng cồn 960: 3 2.4 Khảo sát hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng aceton : 3 2.5 Khảo sát hoạt độ protease của chế phẩm enzyme được tủa bằng 4 2.6 Sự so sánh hoạt độ các CPE protease tủa bởi các tác nhân khác nhau: 4 3 KHẢO SÁT HÀM LƯỢNG PROTEIN THEO PHƯƠNG PHÁP... Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa bằng cồn 960 : 6 3.4 Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa bằng aceton: 7 3.5 Khảo sát hàm lượng protein của CPE protease được tủa bằng muối amoni sulfat : 7 KI L 3.6 Sự so sánh hàm lượng protein của chế phẩm protease tủa bởi các tác nhân khác nhau : 8 4 HOẠT ĐỘ RIÊNG CỦA PROTEASE 9 5 KHẢO SÁT SỰ PHỤ THU C... HOẠT ĐỘ CỦA CÁC CHẾ PHẨM ENZYME PROTEASE VÀO NHIỆT ĐỘ 9 5.1 Khảo sát sự phụ thu c hoạt độ của CPE protease (tủa bằng cồn) theo nhiệt độ: 9 http://kilobooks.com THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 5.2 Khảo sát sự phụ thu c hoạt độ enzyme vào nhiệt độ đối với CPE (tủa bằng aceton) : 11 OBO OKS CO M 5.3 Khảo sát sự phụ thu c hoạt độ enzyme vào nhiệt độ đối với CPE (tủa bằng amoni... 13 6 KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỔI HOẠT ĐỘ CỦA CHẾ PHẨM PROTEASE TỪ BACILLUS SUBTILIS THEO pH 15 7 KHẢO SÁT Q TRÌNH THỦY PHÂN PROTID CỦA CHẾ PHẨM PROTEASE 17 7.1 Khảo sát q trình thủy phân albumin : 17 7.2 Khảo sát q trình thủy phân casein : 19 7.3 Khảo sát q trình thủy phân protid đậu nành hạt : 20 7.4 Khảo sát q trình thủy phân protid nấm rơm : 21 KI L 7.5 Khảo sát. .. THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Nhận xét : Ở 550C, chế phẩm enzyme protease được tủa bằng muối 40 35 30 HOẠT ĐỘ (UI/g CPE) 25 20 15 10 5 0 0 OBO OKS CO M amoni sulfat có hoạt độ cao nhất là 37,33 UI/g CPE (giá trị trung bình) 20 40 60 80 100 NHIỆT ĐỘ (ĐỘ C) Hình 5.3: Sự phụ thu c của hoạt độ chế phẩm protease (tủa bằng amoni sulfat) theo nhiệt độ 6 KHẢO SÁT SỰ BIẾN ĐỔI HOẠT ĐỘ CỦA CHẾ PHẨM PROTEASE TỪ BACILLUS. .. http://kilobooks.com THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Nhận xét : Ở 550C, chế phẩm enzyme protease được tủa bằng aceton có 50 40 30 HOẠT ĐỘ 20 (UI/g CPE) 10 0 -10 0 OBO OKS CO M hoạt độ cao nhất là 42,88 UI/g CPE (giá trị trung bình) 20 40 60 80 100 NHIỆT ĐỘ (ĐỘ C) Hình 5.2: Sự phụ thu c của hoạt độ chế phẩm protease (tủa bằng aceton) theo nhiệt độ 5.3 Khảo sát sự phụ thu c hoạt độ enzyme vào nhiệt độ đối với CPE (tủa bằng... phụ thu c hoạt độ enzyme vào nhiệt độ đối với CPE (tủa bằng aceton) : Cân 1g chế phẩm enzym protease hòa tan trong 100ml nước cất, sau đó pha lỗng 2 lần, ở mỗi nhiệt độ khảo sát từ 300 C đến 800 C, lấy 0,5ml tiến KI L hành xác định hoạt độ theo Anson cải tiến như mục II.3.2 http://kilobooks.com THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Bảng 5.2: Khảo sát sự phụ thu c hoạt độ enzyme vào nhiệt độ đối với CPE (tủa. .. 0 0 2 4 6 8 10 12 pH Hình 6.1: Sự phụ thu c hoạt độ của chế phẩm protease (tủa bằng cồn) theo pH 7 KHẢO SÁT Q TRÌNH THỦY PHÂN PROTID CỦA CHẾ KI L PHẨM PROTEASE 7.1 Khảo sát q trình thủy phân albumin : Với điều kiện nhiệt độ 550C ; pH = 6,0 http://kilobooks.com THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN Bảng 7.1: Sự biến đổi lượng NF theo thời gian thủy phân albumin bởi CPE protease Thời V NaOH 0,1N (ml) Lượng N-formol... THƯ VI N ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN 80 2 0,482 0,460 0,022 0,022 3,52 3 0,484 0,465 0,019 0,018 2,88 2,99 OBO OKS CO M Nhận xét : Ở 550C, chế phẩm enzyme protease được tủa bằng cồn 960 có hoạt độ cao nhất là 63,40 UI/g CPE (giá trị trung bình) 70 60 50 HOẠT ĐỘ 40 (UI/g CPE) 30 20 10 0 0 20 40 60 NHIỆT ĐỘ (ĐỘ C) 80 100 Hình 5.1: Sự phụ thu c của hoạt độ chế phẩm protease (tủa bằng cồn) theo nhiệt độ 5.2 Khảo sát ... OBO OKS CO M thủy Lượng N-formol tương Nhận xét : Với chất thịt heo nạc, q trình thủy phân có vận tốc tăng nhanh khoảng từ – Giờ thứ thứ 9, lượng N-formol có tăng http:/ /kilobooks.com THƯ VIỆN... ODĐC Nồng độ Hàm lượng Hàm lượng ∆OD protein protein protein =ODM- tương ứng (mg/g CPE) trung bình ODĐC (µg/ml) (mg/g http:/ /kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC TUYẾN CPE) 0,631 0,035 0,666 169,154... 0,480 0,463 0,017 0,016 2,56 2 Hoạt độ - Tyrosin (UI/g CPE) trung bình 70 ODM µmol ODĐC KI L 40 ODĐC ∆OD = độ 30 ODM 22,61 28,59 41,71 63,40 61,55 13,55 http:/ /kilobooks.com THƯ VIỆN ĐIỆN TỬ TRỰC