Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởngđến kỹ thuật lây nhiễm nhân tạo bệnh sương mai (Phytophthorainfestans) phục vụ chọn giống cà chua chống chịu bệnh

Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học PHN I M U 1.1 Tớnh cp thit ca ti Ca chua (Lycopersicon esculentum Mill.) thuục ho ca (Solanaceae), cú ngun gc Nam M la loi rau qu c ngi tiờu dựng trờn th gii cng nh Vit Nam rt a chuụng Qu ca chua cung cp vitamin A va C rt quan va c s dung rt phong phu, a dng, phự hp vi khõu vi cua nhiờu ngi va cua nhiờu la tuụi Vi vi ngot, tớnh mỏt, ca chua cú tỏc dung to nng lng, tng sc sng, lam cõn bng t bao, khai vi, gii nhit, iờu hũa bai tit, giup tiờu húa d dang cỏc loi bụt, tinh bụt Ngoai ra, ca chua cú th s dung theo nhiờu phng thc khỏc nh: n ti ( lam salat, n qu ti, ch bin cỏc mún n); ch bin( ca chua cụ c, ca chua úng hụp nguyờn qu, nc qu, tng ca chua) Vit Nam ca chua c trng chu yu miờn Bc trung cỏc tnh: Ha Nụi, Hng Yờn, Hi Phũng, Bc Ninhvi din tớch ln nhng nng sut cha cao va khụng ụn inh Ca chua thng c trng vao vu ụng vỡ vu cõy ca chua cho nng sut cao nht Nhng t nhng nm 70 cua th k XX cỏc nha khoa hoc, cỏc nha chon ging ó nghiờn cu to nhng ging ca chua mi cú th trng c vu xuõn hố T õy tng thờm mụt vu mi cho cõy ca chua, sn lng ca chua tng lờn ng thi cng c di ờu nm n ca chua xuõn hố gn nh ó tr mụt vu chớnh cựng vi vu ụng Ca chua trng di vu khụng nhng gii quyt c khan him rau ma cũn cung cp nguyờn liu liờn tuc cho cỏc nha mỏy ch bin, giup tng hiu qu kinh t cho ngi trng Tuy vy, vic trng ca chua vu xuõn hố ó gp phi khụng ớt khú khn nh: thi tit núng, ma nhiờu khụng thun li cho ca chua sinh trng, phỏt trin, thu phn, thu tinh khú khn va c bit la d bi rt nhiờu cỏc loi sõu bnh tn cụng Mt khỏc, iờu kin thi tit li luụn luụn thay ụi ú cn Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học phi cú bụ ging tt vi nng sut cao, cht lng tt, chng chiu sõu bnh va chiu c cỏc yu t ngoi cnh bt li Nh ó trỡnh bay trờn, sn xut ca chua vu ụng nc ta khỏ thun li, nờn ca chua c trng chu yu (70%) vu ụng xuõn t thỏng 12 n thỏng nm sau Tuy nhiờn, vu ụng xuõn la thi k hụi tu nhiờu yu t mụi trng (nhit ụ, õm ụ, ỏnh sỏng ) rt thun li cho bnh sng mai phỏt trin hn ch bnh, k thut phụ bin nht ang c nụng dõn ỏp dung la phun thuc tr bnh vi 13-15 ln phun/ vu ca chua (Kt qu ti: Nghiờn cu ng dng ng b cỏc gii phỏp cụng ngh xõy dng mụ hỡnh sn xut rau an ton, 2001-2003, H ni) Vi c thự sn xut ca chua luụn tiờm õn tớnh thiu ụn inh va nguy c khụng an toan v sinh thc phõm cao Nhng nm qua nhiờu chng trỡnh, d ỏn chon to ging rau, cỏc c quan thuục Bụ Nụng nghip & PTNT, trng i hoc ó a mụt s ging ca chua mi vao sn xut Ging ca chua phuc vu ch bin PT18 (Vin nghiờn cu rau qu), Ging C95, VT3 ( Vin cõy lng thc & cõy thc phõm), cỏc ging ca chua lai F1 : FM 20, FM29, lai s 4, lai s (Vin nghiờn cu rau qu), HT21 (trng i hoc nụng nghip Ha nụi) So vi cỏc ging ca chua truyờn thng ( ca chua Ba lan, ca chua Phỏp, ca chua Hng lan ) cỏc ging mi to th hin vt trụi vờ nng sut va cht lng iờu ỏng chu ý la hu ht cỏc ging c chon to trờn cha hoc ớt chu ý n tớnh khỏng bnh sng mai to c ging chng chiu bnh bờn cnh vic thu thp ngun gene khỏng bnh, cụng tỏc lai to va chon loc t qun th phõn ly da trờn kt qu lõy bnh nhõn to cú ý ngha cc k quan Nu kt qu lõy bnh nhõn to khụng phn ỏnh ung bn cht di truyờn cua ging thỡ kt qu chon ging s tht bi Lõy bnh nhõn to vi nm P infestans ó cú nhiờu nghiờn cu.Tuy nhiờn c thự cua cụng tỏc chon to ging la cn lõy ng lot vi s Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học lng mu rt ln va ũi hi biu hin bnh phi ng nht gia cỏc ln lõy Lnh vc cũn rt ớt nghiờn cu cp n Xut phỏt t chung tụi xin c thc hin tai Nghiờn cu mt s yu t nh hng n k thut lõy nhim nhõn to bnh sng mai (Phytophthora infestans) phc v chn ging c chua chng chu bnh 1.2 Mc ớch ngha ca ti nghiờn cu 1.2.1 Mc ớch Hoan thin k thut lõy bnh nhõn to va nh hng cua tuụi lỏ cõy ca chua vi ụ mn cm cua bnh sng mai 1.2.2 í ngha - Phuc vu cho cụng tỏc chon ging ca chua chng chiu bnh sng mai - Nghiờn cu tỏc ụng cua mụi trng ti kh nng chng chiu bnh sng mai cua cõy ca chua Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học PHN II TNG QUAN TI LIU 2.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu bnh sng mai hi c chua 2.1.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu trờn th gii Bnh sng mai ca chua, khoai tõy phụ bin vựng ụn i va mụt s vựng nhit i nh Trung Phi, Trung M, Nam M, n ụ, Trung Quc, ụng Dng va phớa Bc Vit Nam ( Roer, 1953) qun th nm cú mụt vai cụng b mụt s nc khu vc Chõu nh Han Quc, n ụ, Thỏi Lan, Inụnờxia, NePalva Trung Quc ( Vinh hong Le, Ngo thi Xuyờn, Arne Hermennsen, 2003) miờn Trung Loan phun thuc Metalaxyl t 1-2 tun mụt ln cng lam gim bnh nng va tng nng sut (Hartman va Huang, 1995) Thuc Metalaxyl cng c s dung rụng rói phũng tr bnh mc sng ca chua Ha Lan Tuy nhiờn s dung thuc hoỏ hoc nhiờu cng xõy hin tng khỏng thuc cua nm, c bit vi thuc Metalaxyl carolina (M) cỏc isolates thu c ó cú hin tng khỏng thuc Cỏc isolates cua nm P infestans nc Chõu ( Han Quc, n ụ, loan, Indonesia, Thỏi Lan, Nepal va Trung Quc) t nm 1992-1997 thỡ cú 336 isolates khỏng thuc Metalaxyl S dung ging khỏng bnh la mụt nhng gii phỏp rt quan qun lý dich hi Mụt s dũng ca chua khỏng bnh sng mai ó dc chon to (Kim va Mutschler, 2006) Tuy nhiờn nhng kt qu chon to ca chua khỏng bnh sng mai cũn rt hn ch, va cn phi tip tuc nghiờn cu Nghiờn cu ban u tớnh khỏng bnh sng mai trờn ca chua ó xỏc inh c mụt s gen khỏng: gen Ph-1 nm trờn nhim sc th (Clayberg va cụng s, 1965), gen Ph-2 nm trờn nhim sc th s 10 (Moreau va cụng s, 1998), gen Ph-3 trờn nhim sc th (Chunwongse va cụng s, 2002) Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Tuy nhiờn nhng gen khụng th hin tớnh khỏng i vi tt c cỏc isolate cua nm sng mai Gen khỏng Ph-1 trụi (cú ging ca chua New Yorker), cú hiu qu vi chung To Gen khỏng Ph-2 trụi khụng hoan toan (cú ging ca chua Pieraline, Macline, Piline) cú hiu lc vi chung T0, ớt tỏc dung i vi chung T1 Gen Ph-3 trụi khụng hoan toan, khỏng tt vi chung Pi -16, ú gen Ph-1 va Ph-2 khụng th hin tớnh khỏng vi chung Ging ca chua mang gen khỏng Ph-1 hay gen Ph -2 khụng th hin kh nng khỏng tt i vi cỏc chung nm sng mai ti Israel (Cohen, 2002) iờu ú chng t cỏc gen trờn ch mang tớnh khỏng chuyờn tớnh vi mụt hoc mụt s chung Phytophthora infestans nht inh Trỏi li, nm bnh cú kh nng sinh sn hu tớnh to cỏc dng tỏi tụ hp mi rt nhanh nờn ging ca chua mang gen khỏng trờn rt d bi nhim bnh bi cỏc chung mi Phng phỏp s dung nhiờu gen, mi gen cú vai trũ nht inh liờn quan n tớnh khỏng , nhm to cỏc ging ca chua khỏng bnh ụn inh (Durable resistance) ó c nghiờn cu Mụt s QTL khỏng bnh sng mai ó c xỏc inh trờn loai ca chua di Lycopersicon pimpinellifolium (Frary va cụng s, 1998), va L hirsutum (Brouwer va cụng s, 2004) Ging L3707 (L Pimpenellifolium, PI365951, Peru) c xỏc inh khỏng vi nm sng mai (Black va cụng s, 1996a; Black va cụng s, 1996b; Ben-Daniel va cụng s, 2004) L3707 th hin tớnh khỏng khụng chuyờn tớnh vi nm phytophthora infestans, c qui inh bi gen ục lp, trụi khụng hoan toan, va th hin tng tỏc trụi (Irit Irzhansky & Yigal Cohen, 2006) Hu ht ngun gen khỏng bnh cua ca chua c tỡm thy loai hoang di, tt c chung ờu cú th lai vi ca chua trng trot Tuy nhiờn, mụt s trng hp cu th cng gp mụt s khú khn s dung loai xa vờ di truyờn nh la Lycopersicon chilense hay Lycopersicon Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học peruvianum (Rick 1982) Vi phng phỏp lai to ging truyờn thng s gp rt nhiờu khú khn s dung cỏc gen cú dng di (Jones va Qualset, 1984) Cỏc dng di thng thiu cỏc tớnh trng cn thit cho nhu cu ngi: nng sut thp, cht lng qu kộm hn ch hang lot cỏc gen khụng cn thit i kốm vi mụt s ớt gen cn quỏ trỡnh lai to, phng phỏp lai li vi dng trng trot c s dung Vi s tr giup cua sinh hoc phõn t, bn liờn kt gen xỏc inh c chớnh xỏc s va vi trớ cua tng gen hay QTL cua nú trờn nhim sc th Cỏc QTL cn thit s c a vao cõy trng, cỏc tớnh trng khụng cn thit s loi b nhanh chúng quỏ trỡnh chon loc cú s tr giup cua ch thi phõn t (MAS) (Tanksley va cụng s, 1989) Trong cỏc nm qua, bn ch thi phõn t (Molecular marker maps) ó c phỏt trin cho nhiờu loi cõy, ú cú cõy ca chua va ó s dung cụng lnh vc di truyờn va chon ging ng dung (Foolad va cụng s, 1997; Paterson va cụng s, 1988; Stuber, 1994 ; Martin va cụng s, 1993) i vi QTL khỏng bnh sng mai cua ca chua cng c mụt s tỏc gi nghiờn cu (Duglas va cụng s, 2003; Christine va cụng s, 2007 ) to c ging ca chua khỏng bnh iờu u tiờn phi xỏc inh c ngun gen khỏng bnh Lõy bnh nhõn to la cụng cu chớnh xỏc phn ỏnh ung c im cua ngun vt liu to ging va chon loc cỏc cỏ th u tu qun th phõn ly Hin lõy bnh sng mai nhõn to cho ca chua cú mụt s phng phỏp chớnh la lõy lỏ tỏch ri (detached leaf) hay lõy giai on cõy non bung sinh trng Nhiờu tỏc gi ó cp n cỏc ch ụ nhit ụ, õm ụ, tuụi cõy khỏc lõy bnh nhõn to cho tng iờu kin cu th Tuy nhiờn ỏp dung vao cỏc thớ nghim, chung tụi nhn thy sau lõy bnh nhõn to cho kt qu khụng ng nht va cú th phn ỏnh khụng rừ s khỏc bit gia ging khỏng bnh va ging nhim bnh õy la lý chung tụi tin hanh cỏc thớ nghim bụ xung Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học 2.1.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu ti Vit Nam vit nam bnh sng mai ó xut hin va gõy hi tt c cỏc vựng trng ca chua, c bit la mụt s vựng chuyờn canh nh: ụng Anh- Ha nụi, a Lt, Lõm ng Thit hi bnh gõy lam gim nng sut va phõm cht cua sn phõm Thit hi vờ nng sut bnh gõy khong 40%, cú t ti 70-90% (Vin khoa hoc k thut Nụng Nghip Vit Nam , 1990) Bnh mc sng trờn cõy ca chua bi c hai vu ụng va ụng xuõn thuục cỏc tnh Ha nụi, Hng Yờn, Bc Ninh va Hi Phũng T l bnh trung bỡnh t 40,6% (V Hoan, 1973 va Nguyn Vn Viờn, 1995-1998), Ha Nụi t 40% (Nguyn Kim Võn, 1997) bnh sng mai ca chua cú th thit hi trờn tt c cỏc bụ phn cua cõy nh lỏ, thõn, hoa, qu phụ bin ng Bng Bc Bụ (Nguyn Duy Nghi, 1975) Nm P infestans nõy mm va xõm nhp vao cõy t 90% cho n õm ụ bóo hoa, õm ụ thp nht cho s phỏt trin cua bnh 76%, iờu kin thun li, bnh s phỏt trin rt nhanh cú cõy s bi tan lui hoan toan vũng t 7-10 (Nguyn Duy Nghi, 1975 va Nguyn Kim Võn, 1997; V Triu Mõn va Lờ Lng Tờ, 2001) xỏc inh quy lut phỏt sinh , phỏt trin cua bnh sng mai cỏc nha nghiờn cu trc cho rng bnh sng mai cú t phỏt sinh, t xut hin gia thỏng 12 u thỏng 1, t xut hin u thỏng n cui thỏng 1, t xut hin u thỏng n gia thỏng 2, t xut hin vao cui thỏng n gia thỏng va thng gõy hi ca chua nng vao t 2, t trờn ca chua chớnh vu (Nguyn Duy Nghi, Lng Vn Tỏm, 1975) Bnh sng mai thng xut hin gõy hi t gia, cui thỏng 12 cho n thỏng nm sau (Nguyờn Vn Viờn, 1998) Vi muc tiờu chon to c mụt s ging ca chua cú kh nng chng chiu bnh sng mai, mụt loi bnh nguy him ang e doa nghờ sn xut ca chua nc ta núi chung, vựng trng ca chua chuyờn canh ln Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Theo nghiờn cu cua Lờ Hng Vnh (2002), 388 mu bnh c thu thp vựng Ha Nụi, Ha Tõy, Bc Giang, Bc Ninh, Lao Cai, a Lt ó thu thp c 320 mu t t l 80.5% T l sng mai Hi Phũng chim 60-100% trờn tt c cỏc mu thu thp (2001-2002), nhng vu ụng (2002-2003) bnh xut hin vi mc nh vựng An Hi T l nhim bnh nng nht trờn ca chua la ụng Anh, Tiờn Lóng, Cam ng va thi xó Lao Cai, Di Linh, c Trong, a Lt Mc ụ nhim bnh trung bỡnh 20,534,7% la cỏc tnh Hng Yờn, Ha Tõy, Bc Giang, Bc Ninh Nm cú th phỏt trin tt trờn mụi trng nhõn to nh u Ha Lan, V8 va mụi trng chon loc, thớch hp nht cho s sinh trng va phỏt trin cua nm P infestans, nm cú th hỡnh bao t tt nht trờn mụi trng V8 la mụi trng thớch hp cho s hỡnh bao t cua nm (Ngụ Thi Xuyờn, Hoang Vn Tho, 2003) Bnh sng mai la bnh gõy hi nghiờm phu thuục rt nhiờu vao iờu kin thi tit vy vic phũng tr bnh rt khú cn cú s chu ý din bin cua thi tit thc hin cỏc bin phỏp phun phũng bnh bng thuc hoỏ hoc vy bin phỏp hu hiu nht phũng bnh mc sng la bin phỏp hoỏ hoc Cỏc loi thuc zineb 80WP 0,2-0,3%, Alliet, Boocdo 1%, Ridomil 72WP phun trc bnh xut hin ( V Triu Mõn, Lờ Lng Tờ, 2001) Trong iờu kin bnh ó phỏt sinh gõy hi va iờu kin thi tit thun li cho bnh phỏt trin mnh thỡ cú th s dung mụt s loi thuc nh Ridomil 5G ( 10-14 kg/ha), Ridomil MZ72 BHN (2,5-3,0 kg/ha), Maneb 80WP ( 0,2-0,3%), Antracol 80WP, (0,2-0,4%), Zineb 80WP (2,5-3,0 kg/ha), Aliette 80WP (0,3%) phun tr nm bnh Ngoai dựng ging khỏng cng ang c nghiờn cu va c ng dung vic phũng tr bnh sng mai nhng cha cú hiu qu rừ rt ( V tuyờn Hoang, ctv, 1982), cỏc ging ca chua nhp nụi t Chõu u (Hunggari, Bungari, Liờn Xụ c) thng bi bnh nng va phỏt trin cua bnh khỏ Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học nhanh so sỏnh mụt s ging ca chua cng bit cỏc ging Ba Lan, Hng Lan bi bnh sng mai khỏ nng cỏc ging HP1, HP5 cú kh nng chng chiu khỏ ln Mc ụ phỏt trin cua bnh cú liờn quan nhiờu ti c tớnh cua cỏc ging ca chua, nhỡn chung cỏc ging ờu bi nhim bnh, chung ch khỏc vờ mc ụ nhim bnh tu theo tng ging 2.2 c im ca bnh sng mai (Late blight) v nm Phytophthora infestans Nm P infestans gõy bnh mc sng c Anton de Bary xỏc inh nm 1867, õy la loi nm thuục lp nm trng (Oomycetes), bụ nm sng mai (Peronosporales) Nm cú th phỏt trin iờu kin nhit ụ 4-260C nhng thớch hp nht khong 200C, õm ụ thớch hp nht 91100% (Jean, 1985) Kớch thc bao t nm trung bỡnh (36ì22) - (29ì19) àm (Ewin va Ribeiro, 1996), ng kớnh si nm t 3,5-4,0àm cú th t ti 7.6-16 àm nuụi cy trờn mụi trng nhõn to Bao t phõn sinh hỡnh ụ van, elip, hoc hỡnh qu chanh yờn nh bao t nh cú cung kớch thc bao t khong (29-36) ì (19-22 àm) (Stevenson, 1993) Bnh mc sng cú th phỏ hoi moi thi gian sinh trng cua cõy (Fry, 1992; Goodwin, 1992a), hi nhiờu bụ phn trờn cõy: lỏ, qu, thõn, ht (Rubin va cụng s, 2001; Rubin va Cohen, 2004a) Triu chng gõy hi trờn cõy ca chua rt a dng tu thuục vao ging va iờu kin thi tit Trờn lỏ ban u la nhng im nh mau xanh tỏi, sau ú lan rụng mau nõu thm, ranh gii gia phn mụ bnh va mụ kho khụng rừ rt (Steveson, 1993) vt bnh xut hin bt c vi trớ nao trờn phin lỏ sau ú lan rụng ra, nm cú th gõy hi trờn canh, qu Trong iờu kin thi tit thn li cho nm phỏt trin thỡ phớa di lỏ bnh xut hin lp nm mau trng, nu thi tit quỏ õm thỡ vt bnh s bi nhn, cũn thi tit khụ thỡ vt bnh khụ túp li lam cõy cht hộo Báo cáo thực tập tốt nghiệp Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Vit Nam, bnh mc sng (sng mai) trờn ca chua, khoai tõy cú tờn khỏc la bnh dich muụn (theo kt qu iờu tra bnh cõy nm 1967-1968 cua Vin Bo v Thc vt), bnh sng mai (V Hoan, 1967), va c goi la bnh mc sng nm 1973 (V Hoan, 1973) Bnh mc sng ca chua, khoai tõy cú th hi tt c cỏc bụ phn cua cõy nh lỏ, thõn, hoa, qu (ca chua) va cu (khoai tõy) (Lờ Duy Nghi, 1975) Nm P.infestans ny mm va xõm nhp vao cõy phi t ụ õm t 90% n õm ụ bóo hũa, õm ụ thp nht cho s phỏt trin cua bnh la 76% Trong iờu kin thun li, bnh s phỏt trin rt nhanh, cõy cú th bi lui toan bụ vũng t 7-10 (Lờ Duy Nghi, 1975; Nguyn Kim Võn, 1997; V Triu Mõn & Lờ Lng Tờ, 2001) Phytophthora infestans la loi nm di tn cú hai dng (main type) A1 va A2 tựy theo vựng sinh thỏi (Fry W.E va CTV, 1993), cú chu k phỏt trin hoan toan vi hai giai on sinh sn vụ tớnh va sinh sn hu tớnh (Hermanson A., 2002) Nm sinh sn vụ tớnh bng bao t phõn sinh (Crosier, 1934), di hỡnh thc ny mm (trc tip va giỏn tip hỡnh bao t ụng cú lụng roi thi tit lnh õm) Hỡnh thc sinh sn hu tớnh ch xut hin cú c dng A1 va A2 Vỡ vy nhng vựng ch xut hin chung A1 hoc A2 thỡ nm ch sinh sn theo kiu vụ tớnh va cn cú cõy kớ chu tn ti Tuy nhiờn giai on sinh sn hu tớnh xy ra, bao t trng cú th tn ti qua nhiờu thỏng, nm ma khụng cn cú ký chu (Derenth va ctv, 1995) Nm P.infestans cú kh nng hỡnh nhiờu chung (race) khỏc Da trờn lý thuyt gen i gen Flor, 1952 (V Triu Mõn & Lờ Lng Tờ, 2001), nm gm cú 16 chung ú bao gm cỏc chung n va chung hn hp Tuy nhiờn s lng chung nm thay ụi tựy thuục vao khu vc sinh thỏi trng trot hoc mi nc khỏc í ngha chớnh cua vic xỏc inh chung nm la xỏc inh c mụt ging ca chua nao nhim vi Báo cáo thực tập tốt nghiệp 10 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học im 4: 41-70% din tớch lỏ bi bnh im 5: 71-90% din tớch lỏ bi bnh im 6: 91-100% din tớch lỏ bi bnh im s trờn s cho theo tng cõy riờng bit, mc ụ khỏng - nhim bnh s chia cỏc nhúm sau: Khỏng bnh cao: cú im t 0.0-2.0 Chng chiu bnh: 2.1-4.0 Nhim bnh: 4.1-6.0 3.3 Thi gian v a im nghiờn cu 3.3.1 thi gian nghiờn cu Thi gian thc hin tai t 29/03/2010 n 04/06/2010 3.2.2 a im nghiờn cu Thớ nghim c thc hin ti Bụ mụn Cụng Ngh Sinh Hoc, Vin nghiờn cu Rau Qu- Trõu Qu- Gia Lõm- Ha Nụi Báo cáo thực tập tốt nghiệp 21 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học PHN IV KT QU NGHIấN CU V THO LUN 4.1 nh hng ca tui lỏ n mc nhim bnh sng mai c chua Bng k thut lõy bnh nhõn to, va ỏnh giỏ ngoai ng ruụng cho thy mu ging 08TP43 va 08TP48 ờu rt mn cm vi bnh sng mai nờn ó c dựng thớ nghim Kt qu bng 4.1 cho thy, nu cn c vao ch s bnh thỡ mc ụ nhim cua cỏc lỏ non (cha thuc) cao hn cỏc lỏ gia trờn c mu ging ca chua Tuy nhiờn nu xột theo s bao t c hỡnh thỡ thy trờn lỏ bỏnh t bao t to nhiờu hn rừ rt Kt qu phn nao ng nht vi kt qu cua Nelson (2006): Cỏc lỏ khỏc vờ ụ tuụi thuc s cú mc phn ng bnh khụng ging Theo Nelson trờn cõy cỏc lỏ gia mn cm vi bnh nhiờu hn lỏ non da trờn ch s bnh Cng tng t, cựng mụt lỏ, lỏ chột vi trớ chớnh gia d bi nhim bnh hn cỏc lỏ chột xung quanh lỏ chột gia sm thuc hn S khỏc gia thớ nghim cú th c cho rng iờu kin thớ nghim khụng hoan toan ging Thớ nghim cua Nelson cõy c trng bung sinh trng vi iờu kin nhit ụ la 26-280C, cng ỏnh sỏng la 135 mol photon/m2/s Vi iờu kin thớ nghim mụ lỏ s non hn trng ngoai t nhiờn Tuy nhiờn nu cn c vao s lng bao t c hỡnh thỡ ging nh cú quy lut chung la lỏ non ớt mn cm bnh hn lỏ gia va lỏ bỏnh t Vỡ vy ly mu lỏ lõy bnh nhõn to khụng nờn chon lỏ non Cỏc lỏ gia nm phớa di d bi dớnh bõn ma hoc quỏ trỡnh canh tỏc nờn kt qu lõy nhim khú trỏnh nhim bi cỏc vi sinh vt khỏc Báo cáo thực tập tốt nghiệp 22 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Bng 4.1: Mi quan h gia tui lỏ c chua v mn cm bnh sng mai Mu ging c chua 08TP43 08TP48 S bo t sinh Tui lỏ Ch s bnh Non Bỏnh t Gi 5,7a 5,3b trờn lỏ chột (x103) 13,7c 19,0a 5,0c 5,3a 5,3a 4,7b 15,7b 12,3c 20,7a 14,3b Non Bỏnh t Gi Hỡnh nh 4.1: nh hng ca tui lỏ c chua n mn cm bnh sng mai Báo cáo thực tập tốt nghiệp 23 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học 4.2 nh hng ca tui cõy n mn cm bnh sng mai c chua Vi isolate nm c lõy trờn ging ca chua mn cm vi bnh cỏc ụ tuụi khỏc cho thy mc dự ờu thc hin lõy bnh trờn lỏ bỏnh t nhng cõy cú ụ tuụi khỏc cú mc ụ nhim bnh rt khỏc Tuy cú s sai khỏc mi ging, nhng nhỡn chung cõy gia ớt mn cm bnh hn cõy non Kt qu nghiờn cu phự hp vi nghiờn cu cua Carnegie va Colhoun 1982, Stewart 1990 Khi nghiờn cu trờn khoai tõy cho thy rng cõy non thun li hn cho bnh sng mai phỏt trin Visker va cụng s (2003) cng ch rng cõy gia khỏng bnh tt hn cõy non Nhng thớ nghim cua Nelson (2006) thỡ s khỏc bit khụng rừ rang Trong thớ nghim chung tụi nhn thy i vi tt c cỏc ging c lõy vi cỏc Isolate khỏc ờu cú ch s bnh va s bao t sinh cao nht cõy t 30 tuụi õy la thi im tt nht lõy bnh ma thớ nghiờm ch Báo cáo thực tập tốt nghiệp 24 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Bng 4.2: Mi liờn h gia tui cõy v mn cm bnh sng mai Isolate nm N Ging c Tui cõy chua P375 (ngy) 30 45 60 30 45 60 30 45 60 30 45 60 30 45 60 30 45 60 Hng chõu Savior R P375 Hng chõu Savior Ch s bnh 6,0a 6,0a 4,3b 6,0a 6,0a 5,3b 6,0a 6,0a 4,3b 6,0a 4,3b 4,0b 5,3b 6,0a 4,7c 6,0a 6,0a 4,3b Bo t (x1000/lỏ chột) 27a 25a 14b 36a 30b 15c 26a 19b 16c 24a 16b 12b 30a 31a 17b 22a 17b 21a 4.3 nh hng ca thi gian x lý cõy bung sinh trng (170C, m bóo hũa ~100%) sau lõy nm P infestans Kt qu bng 4.3 cho thy thi gian x lý nhit ụ 17 0C va õm ụ bóo hũa bung sinh trng cú nh hng rừ rt n kt qu lõy bnh nhõn to cụng thc khụng x lý, sau lõy xong ngoai iờu kin thng cú phun õm thng xuyờn nhng nhit ụ cao 22 0C-270C nờn nm bnh khụng phỏt trin c Vỡ vy bụ lỏ cua c ging cũn nguyờn vn, khụng phõn bit c ging khỏng va nhim bnh Trong cụng thc x lý t 24h n 48h phõn bit rt rừ ging khỏng bnh va ging nhim bnh Hu ht cỏc cõy cua ging nhim bnh cht ú cỏc cõy cua ging khỏng ch cú cỏc m nh iờu cng Báo cáo thực tập tốt nghiệp 25 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học cho thy rng vi thi gian trờn iờu kin nhit ụ va õm ụ phự hp nm sng mai cú th xõm nhp vao mụ t bao ký chu gõy bnh Tip tuc x lý bung sinh trng n 72h cng phõn bit c rừ rang mc ụ nhim bnh cua cỏc ging Tuy nhiờn cụng thc thi gian bung sinh trng lõu nờn cỏc cõy sng sút cua ging khỏng bnh chuyn vang, cõy yu Vỡ vy sau lõy bnh nhõn to cn cõy iờu kin 170C, õm ụ bóo hũa, 24-48h sau ú a ngoai nhng thng xuyờn trỡ õm ụ trờn bờ mt lỏ cao n sau lõy thỡ ỏnh giỏ tớnh khỏng- nhim Bng 4.3: Mi quan h gia tớnh khỏng bnh sng mai v mụi trng lõy bnh nhõn to Thi gian x lý Mu ging Ch s bnh ỏnh giỏ 0h 09C13 0,06 Khỏng bnh cao 09C82 0,00 Khỏng bnh cao 09C13 5,46 Nhim bnh 09C82 0,23 Khỏng bnh cao 09C13 5,83 Nhim bnh 09C82 1,03 Khỏng bnh cao 09C13 6,00 Nhim bnh 09C82 2,29 Chng chiu bnh 24h 48h 72h Báo cáo thực tập tốt nghiệp 26 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm 1.Khụng x lý (i chng) Khoa Công nghệ sinh học 2.X lý 24h 3.X lý 48h 4.X lý 72h Hỡnh nh 4.2: nh hng ca thi gian x lý bung sinh trng (Trong mi nh phớa trỏi l mu ging 09C82, phớa phi l mu ging 09C13) Báo cáo thực tập tốt nghiệp 27 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học PHN V KT LUN V NGH 5.1 Kt lun Qua cỏc thớ nghim trờn, chung tụi rut cỏc kt lun sau õy: 1.ụ thuc cua lỏ ca chua cú liờn quan n mc ụ nhim bnh Khi lõy bnh nhõn to bng phng phỏp lỏ tỏch ri nờn dựng lỏ bỏnh t 2.Cõy ca chua gia ớt mn cm vi bnh sng mai hn cõy non Sau gieo 30 (cõy cú 4-5 lỏ tht) la thi im thớch hp cho lõy bnh sng mai nhõn to 3.i vi k thut lõy bnh nhõn to cõy con, sau lõy nhim xong cn cõy iờu kin 17 0C, õm ụ bóo hũa t 24-48h sau ú ch mỏt thng xuyờn phun õm, sau lõy nhim s ỏnh giỏ mc nhim bnh 4.Cỏc kt qu trờn õy cú th ng dung quỏ trỡnh chon to ging ca chua chng chiu bnh sng mai 5.2 ngh K thut lõy bnh nhõn to cn c thc hin trờn ung i tng la lỏ bỏnh t cua cõy ca chua s cho kt qu cao nht nhm muc ớch trỡ tớnh ục cua nm Phytopthora infestans Cn phũng tr bnh sng mai ca chua cõy la tuụi sau gieo c 30 bi õy la thi im ma cõy d bi nhim bnh nht Kt qu trờn õy la mụt phn quan trong vic hoan thin k thut lõy bnh nhõn to phuc vu cho vic chon to ging ca chua chng chiu bnh sng mai Báo cáo thực tập tốt nghiệp 28 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học TI LIU THAM KHO Carnegie SF, J.Colhoun 1982 Susceptibility of potato leaves to Phytophthora infestans in relation to plant age and leaf position Phytopathologische Zeitschrift 104, 157167 Davis, R.M., G Hamilton, W.T.Lanini, and T.H Spreen 1996 The importance of pesticides and other pest management practices in U.S tomato production USDA, NAPIAP: Document number 2-CA-96 Davis, R.M., G Hamilton, W.T.Lanini, T.H Spreen and C.Osteen 1998 The importance of pesticides and other pest management practices in U.S tomato production USDA, NAPIAP: Document number 1-CA-98 Fry, W.E and S.B Goodwin.1997a Resurgence of the Irish potato famine fungus Bioscience 47(6): 363-371 Fry, W.E and S.B Goodwin.1997b Reemergence of potato and tomato late blight in the United States Plant Disease 81(12): 1349-1357 Garelik.G 2002 Taking the bite out of potato blight Science 298(5599): 1702-1704 Goodwin, S.B., C.D Smart, R.W Sandrock, K.L Deahi, Z.K Punja and W.E.Fry 1998 Genetic charge within population of Phytophthora infestans in the United States and Canada during 1994-1996: Role of migration and recombination Phytopathology 88(9): 939-949 Judelson,H.S.1997 The genetics and biology of Phytophthora infestans: Mordern approaches to a historical challenge Fungal genetics and biology 22(2): 65-76 Kato, M.,E.S.Mizubuti, S.B.Goodwin and W.E.Fry 1997 Sensitivity to protectant fungicides and pathogenic fitness of clonal lineages of Phytophthora infestans in the United States Phytopathology 87(9): 973978 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 29 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Nelson H.E.2006 Bioassay to detect small differences in resistance of tomato to late blight according to leaf age, leaf and leaflet position, and plant age Australasian Plant Pathology, 2006, 35, 297301 Raposo R., D.W.Wilks and W.E.Fry 1993 Evaluation of potato late blight forecast modified to include weather forecasts: A simulation analysis Phytopathology 83(1): 103-108 Stewart HE 1990 Effect of plant age and inoculum concentration on expression of major gene resistance to Phytophthora infestans in detached potato leaflets Mycological Research 94, 823826 Umaerus,V.and M.Umaerus 1994 Inheritance of resistance to late blight Potato genetics G.R.E Mackay, CAB International, Wallingford Oxon OX 108DE, England.UK:365-401 Visker MHPW, LCP Keizer, DJ Budding, LC Van Loon, LT Colon, PC Struik 2003 Leaf position prevails over plant age and leaf age in reflecting resistance to late blight in potato Phytopathology 93,666674 Báo cáo thực tập tốt nghiệp 30 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học LI CM N! hon thnh c ti ny, bờn cnh s c gng n lc ca bn thõn tụi ó nhn c s ng viờn v giỳp rt nhit tỡnh ca nhiu cỏ nhõn v th Tụi xin by t lũng bit n sõu sc nht ti cụ giỏo hng dn ThS Nguyn Th Thỳy Liờn v cỏc thy cụ giỏo Khoa Cụng ngh sinh hc, nhng ngi ó tn tỡnh giỳp , to mi iu kin tt nht cho tụi thc hin v hon thnh tt t thc Tụi xin chõn thnh cm n TS Trn Ngc Hựng, cựng cỏc thy giỏo, cụ giỏo v tt c mi ngi ti Vin nghiờn cu rau qu ó to iu kin giỳp tụi hon thnh ti ny Cui cựng cho tụi by t lũng bit n sõu sc n gia ỡnh, bn bố nhng ngi ó luụn ng viờn, giỳp tụi sut quỏ trỡnh hc v thc hin ti Bc Giang, ngy 07 thỏng 06 nm 2010 Sinh viờn Hong Quc Lut Báo cáo thực tập tốt nghiệp i Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học MC LC LI CM N PHN I .1 M U 1.1 Tớnh cp thit cua tai 1.2 Muc ớch ngha cua tai nghiờn cu 1.2.1 Muc ớch 1.2.2 í ngha PHN II .4 TNG QUAN TI LIU 2.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu bnh sng mai hi ca chua 2.1.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu trờn th gii 2.1.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu ti Vit Nam 2.2 c im cua bnh sng mai (Late blight) va nm Phytophthora infestans 2.3 c tớnh thc vt 11 PHN III 16 I TNG NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU 16 3.1 Vt liu nghiờn cu 16 3.2 Nụi dung va phng phỏp nghiờn cu 16 3.2.1 Nụi dung nghiờn cu 16 3.2.2 Phng phỏp nghiờn cu .16 Báo cáo thực tập tốt nghiệp ii Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học 3.3 Thi gian va ia im nghiờn cu 21 3.3.1 thi gian nghiờn cu 21 3.2.2 ia im nghiờn cu 21 PHN IV 22 KT QU NGHIấN CU V THO LUN .22 4.1 nh hng cua tuụi lỏ n mc ụ nhim bnh sng mai ca chua .22 4.2 nh hng cua tuụi cõy n ụ mn cm bnh sng mai ca chua .24 4.3 nh hng cua thi gian x lý cõy bung sinh trng (170C, õm ụ bóo hũa ~100%) sau lõy nm P infestans .25 PHN V 28 KT LUN V NGH .28 5.1 Kt lun 28 5.2 nghi .28 TI LIU THAM KHO .29 Báo cáo thực tập tốt nghiệp iii Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học DANH MC BNG BIU Bng 4.1: Mi quan h gia tuụi lỏ ca chua va ụ mn cm bnh sng mai 23 Bng 4.2: Mi liờn h gia tuụi cõy va ụ mn cm bnh sng mai .25 Bng 4.3: Mi quan h gia tớnh khỏng bnh sng mai va mụi trng lõy bnh nhõn to .26 Báo cáo thực tập tốt nghiệp iv Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học DANH MC BIU Hỡnh nh 3.1: Boc bao t ụng (Sporangia) cua nm P infestans phõn lp .16 t ca chua 17 Hỡnh nh 3.2: Lõy nhim bnh sng mai ca chua .18 Hỡnh nh 3.3: Thang ỏnh giỏ bnh sng mai ca chua .19 Hỡnh nh 4.1: nh hng cua tuụi lỏ ca chua n ụ 23 mn cm bnh sng mai .23 Hỡnh nh 4.2: nh hng cua thi gian x lý bung sinh trng (Trong mi nh phớa trỏi la mu ging 09C82, phớa phi la mu ging 09C13) 27 Báo cáo thực tập tốt nghiệp v Hoàng Quốc Luật 8K [...]... Hỡnh nh 3.2: Lõy nhim bnh sng mai c chua Báo cáo thực tập tốt nghiệp 18 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Hỡnh nh 3.3: Thang ỏnh giỏ bnh sng mai c chua * Nghiờn cu nh hng ca tui cõy n mc mn cm ca bnh sng mai Thớ nghim c thc hin trờn 3 ging ca chua: P375 (Minh chõu- ai loan), Hng chõu (Syngenta), Savior (Syngenta), vi 2 isolate nm sng mai: R (thu thp ti Vin nghiờn... thực tập tốt nghiệp 22 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học Bng 4.1: Mi quan h gia tui lỏ c chua v mn cm bnh sng mai Mu ging c chua 08TP43 08TP48 S bo t sinh ra Tui lỏ Ch s bnh Non Bỏnh t Gi 5,7a 5,3b trờn lỏ chột (x103) 13,7c 19,0a 5,0c 5,3a 5,3a 4,7b 15,7b 12,3c 20,7a 14,3b Non Bỏnh t Gi Hỡnh nh 4.1: nh hng ca tui lỏ c chua n mn cm bnh sng mai Báo cáo thực tập tốt nghiệp... 17 Hỡnh nh 3.2: Lõy nhim bnh sng mai ca chua .18 Hỡnh nh 3.3: Thang ỏnh giỏ bnh sng mai ca chua .19 Hỡnh nh 4.1: nh hng cua tuụi lỏ ca chua n ụ 23 mn cm bnh sng mai .23 Hỡnh nh 4.2: nh hng cua thi gian x lý trong bung sinh trng (Trong mi nh phớa trỏi la mu ging 09C82, phớa phi la mu ging 09C13) 27 Báo cáo thực tập tốt nghiệp v Hoàng Quốc Luật 8K ... lỏ ca chua va ụ mn cm bnh sng mai 23 Bng 4.2: Mi liờn h gia tuụi cõy va ụ mn cm bnh sng mai .25 Bng 4.3: Mi quan h gia tớnh khỏng bnh sng mai va mụi trng lõy bnh nhõn to .26 Báo cáo thực tập tốt nghiệp iv Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học DANH MC BIU Hỡnh nh 3.1: Boc bao t ụng (Sporangia) cua nm P infestans phõn lp .16 t ca chua. .. cõy Báo cáo thực tập tốt nghiệp 15 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học PHN III I TNG NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU 3.1 Vt liu nghiờn cu - Cõy ca chua - Lỏ ca chua 3.2 Ni dung v phng phỏp nghiờn cu 3.2.1 Ni dung nghiờn cu - Thớ nghim 1: Nghiờn cu va lõy nhim bnh sng mai lỏ ca chua c gi trong tu inh ụn 170C - Thớ nghim 2: Nghiờn cu va lõy nhim bnh sng mai tuụi cõy khỏc... n mc ụ nhim bnh sng mai ca chua .22 4.2 nh hng cua tuụi cõy n ụ mn cm bnh sng mai ca chua .24 4.3 nh hng cua thi gian x lý cõy con trong bung sinh trng (170C, õm ụ bóo hũa ~100%) sau khi lõy nm P infestans .25 PHN V 28 KT LUN V NGH .28 5.1 Kt lun 28 5.2 ờ nghi .28 TI LIU THAM KHO .29 Báo cáo thực tập tốt nghiệp iii Hoàng... 7,0 t chua hn phi bún thờm vụi * iu kin phỏt sinh v phỏt trin ca nm bnh: Báo cáo thực tập tốt nghiệp 13 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học - Bnh sng mai thớch hp vi iờu kin thi tit õm ụ cao, tri õm u, cú nhiờu sng mự; nhit ụ khụng khớ thp khong 18-22 0C, trong ú cú 1 khong thi gian nhit ụ xung thp 12-150C - nc ta bnh cú th phỏt sinh quanh nm tuy nhiờn vu ca chua va... nhm muc ớch duy trỡ tớnh ục cua nm Phytopthora infestans Cn phũng tr bnh sng mai ca chua khi cõy la tuụi sau khi gieo c 30 ngay bi õy la thi im ma cõy d bi nhim bnh nht Kt qu trờn õy la mụt phn quan trong trong vic hoan thin k thut lõy bnh nhõn to phuc vu cho vic chon to ging ca chua chng chiu bnh sng mai Báo cáo thực tập tốt nghiệp 28 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh... lõy bnh sng mai nhõn to 3.i vi k thut lõy bnh nhõn to cõy con, sau khi lõy nhim xong cn cõy trong iờu kin 17 0C, õm ụ bóo hũa t 24-48h sau ú ch mỏt thng xuyờn phun õm, sau 7 ngay lõy nhim s ỏnh giỏ mc nhim bnh 4.Cỏc kt qu trờn õy cú th ng dung trong quỏ trỡnh chon to ging ca chua chng chiu bnh sng mai 5.2 ngh K thut lõy bnh nhõn to cn c thc hin trờn ung i tng la lỏ bỏnh t cua cõy ca chua s cho kt... tập tốt nghiệp 14 Hoàng Quốc Luật 8K Trờng Cao đẳng Nông Lâm Khoa Công nghệ sinh học bao t va nú xõm nhp gõy hi cho cõy trng (T0 thớch hp 18-220C, ti thiu= 120C) Thi gian tiờm duc cua ụng bao nang t 2-5 ngay Ca chua bnh tớch lu qua lỏ va ht nc ta khụng sinh bao t hu tớnh ma ch sinh bao t vụ tớnh Bin phỏp phũng tr: - Trng ging khỏng bnh hoc nhim bnh nh - Khụng trng luõn canh vi cõy ho ca nh ca chua, ... kh nng sinh trng va phõn nhỏnh cỏc ging ca chua c chia lam dng hỡnh: - Dng sinh trng hu hn (determinate) - Dng sinh trng vụ hn (indeterminate) - Dng sinh trng bỏn hu hn (semideterminate) - Dng... khỏng Ph-2 trụi khụng hoan toan (cú ging ca chua Pieraline, Macline, Piline) cú hiu lc vi chung T0, ớt tỏc dung i vi chung T1 Gen Ph-3 trụi khụng hoan toan, khỏng tt vi chung Pi -1 6, ú gen Ph-1 va... ging ca chua mi vao sn xut Ging ca chua phuc vu ch bin PT18 (Vin nghiờn cu rau qu), Ging C95, VT3 ( Vin cõy lng thc & cõy thc phõm), cỏc ging ca chua lai F1 : FM 20, FM29, lai s 4, lai s (Vin