Hiện trạng ô nhiễm Asen trên thế giới và ở Việt Nam vẫn đang là vấn đề quan trọng, đáng quan tâm, bởi nguy hại của nước thải nhiễm Asen ảnh hưởng nghiêm trọng đến môi trường sinh thái và đối với sức khỏe con người. Theo như những nghiên cứu trên thế giới thì cây dương xỉ Pteris vittata được biết là loài có khả năng hấp thụ Asen cao trong thời gian ngắn. Cây dương xỉ Pteris vittata có khả năng hấp thụ được Asen có thể là do hệ sinh vật trong lá hấp thụ và chuyển hóa Asen. Qua đó tiến hành phân lập vi khuẩn có khả năng kháng chịu Asen trong lá cây dương xỉ. Mục đích của đề tài là phân lập và định danh vi khuẩn có khả năng kháng chịu Asen trong lá cây dương xỉ. Bằng việc sử dụng phương pháp sinh hóa và PCR với đoạn mồi 16S rDNA để định danh vi khuẩn phân lập được. Kết quả nghiên cứu đã phân lập và định danh được ba chủng vi khuẩn có khả năng kháng chịu Asen trong lá cây dương xỉ là Bacillus licheniformis, Bacillus cereus và Bacillus anthracis.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP VI KHUẨN KHÁNG CHỊU ASEN TRONG LÁ CÂY DƯƠNG XỈ Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã ngành: D420201 Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÔI TRƯỜNG Sinh viên thực hiện: TRẦN MINH XÔNG Niên khóa: 2011 – 2015 Tháng 08 năm 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP VI KHUẨN KHÁNG CHỊU ASEN TRONG LÁ CÂY DƯƠNG XỈ Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực TS NGUYỄN BẢO QUỐC TRẦN MINH XÔNG Tháng 08 năm 2015 LỜI CẢM ƠN Mãi khắc ghi công ơn sinh thành, nuôi nấng, dạy dỗ ba, má người thân gia đình cho có ngày hôm Chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trường Đại Học Nông Lâm TP.HCM, Ban chủ nhiệm môn Công nghệ Sinh học toàn thể quý thầy cô tận tình dạy bảo truyền đạt kiến thức cho em suốt thời gian học tập trường Chân thành biết ơn sâu sắc đến quý thầy TS Nguyễn Bảo Quốc tận tình bảo giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Chân thành cảm ơn đến anh chị, bạn phòng Bệnh học người toàn thể lớp DH11SM động viên, giúp đỡ em thời gian thực đề tài Sinh viên thực Trần Minh Xông i TÓM TẮT Hiện trạng ô nhiễm Asen giới Việt Nam vấn đề quan trọng, đáng quan tâm, nguy hại nước thải nhiễm Asen ảnh hưởng nghiêm trọng đến môi trường sinh thái sức khỏe người Theo nghiên cứu giới dương xỉ Pteris vittata biết loài có khả hấp thụ Asen cao thời gian ngắn Cây dương xỉ Pteris vittata có khả hấp thụ Asen hệ sinh vật hấp thụ chuyển hóa Asen Qua tiến hành phân lập vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ Mục đích đề tài phân lập định danh vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ Bằng việc sử dụng phương pháp sinh hóa PCR với đoạn mồi 16S rDNA để định danh vi khuẩn phân lập Kết nghiên cứu phân lập định danh ba chủng vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ Bacillus licheniformis, Bacillus cereus Bacillus anthracis ii SUMMARY Isolater arsinic-resistant bacteria in fern leaves Arsenic contamination is an important issue in the World and Viet Nam, because poisonous Arsenic in waste water seriously affects the ecological environment and human health According to research in the word, Pteris vittata has known for being a species that is able to highly absorb arsenic in a short time Pteris vittata can absorb arsenic likely due to biomass in leaves which absoteria and metabolizes arsenic It thereby isolates Arsenicresistant bacteria in fern leaves The purpose of this project is the isolation and identification of bacteria in fern leaves that can resist arsenic By using biochemical mathod and 16S rDNA with PCR for identification of bacteria isolated, research results have isolated and identified the three strains of bacteria that can resist arsenic is Bacillus licheniformis, Bacillus cereus and Bacillus anthraci Keywords: arsenic-resistant, Bacillus lecheniformis, Bacillus cereus, Bacillus anthracis, Pteris vittata iii MỤC LỤC Trang Tháng 08 năm 2015 ii LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT .ii Hiện trạng ô nhiễm Asen giới Việt Nam vấn đề quan trọng, đáng quan tâm, nguy hại nước thải nhiễm Asen ảnh hưởng nghiêm trọng đến môi trường sinh thái sức khỏe người ii Theo nghiên cứu giới dương xỉ Pteris vittata biết loài có khả hấp thụ Asen cao thời gian ngắn Cây dương xỉ Pteris vittata có khả hấp thụ Asen hệ sinh vật hấp thụ chuyển hóa Asen Qua tiến hành phân lập vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ .ii Mục đích đề tài phân lập định danh vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ Bằng việc sử dụng phương pháp sinh hóa PCR với đoạn mồi 16S rDNA để định danh vi khuẩn phân lập Kết nghiên cứu phân lập định danh ba chủng vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ Bacillus licheniformis, Bacillus cereus Bacillus anthracis ii SUMMARY iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii BLAST: Basic local alignment sequence tool .vii LB: Luria Betanni vii NB: Nutrient Broth vii NCBI: National Center for Biotechnology Information .vii PCR: Polymerase Chain Reaction vii TYEG: Trytone Yeast extrat Glucose vii V/P: Voges-Proskauer .vii DANH SÁCH BẢNG BẢNG viii Trang viii DANH SÁCH CÁC HÌNH xi Trang xi Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề iv 1.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Nội dung thực Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình chung giới vấn đề ô nhiễm Asen .2 2.2 Tình hình ô nhiễm Asen Việt Nam .3 2.3 Giới thiệu Asen 2.7 Nguồn gây ô nhiễm Asen 2.8 Những bệnh gây Asen 2.9 Các hợp chất Asen tự nhiên 11 2.10 Khái quát dương xỉ 13 2.11 Một số nghiên cứu sử dụng dương xỉ để xử lí Asen 14 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 15 3.1 Thời gian địa điểm 15 3.2 Dụng cụ vật liệu 16 3.2.1.Đối tượng nghiên cứu .16 3.2.2 Thiết bị dụng cụ 16 3.2.3 Môi trường hóa chất 17 3.2.3.1.Môi trường hóa chất dùng cho phương pháp nuôi cấy 17 3.2.3.2 Môi trường hóa chất dùng cho phản ứng PCR 17 3.3 Phương pháp nghiên cứu .17 3.3.1 Lấy mẫu 18 3.3.2 Phân lập vi khuẩn 18 3.3.3 Định danh vi khuẩn 19 v 3.3.3.1 Định danh phản ứng sinh hóa 19 3.3.3.2 Định danh phương pháp PCR 22 Bảng 3.1 Thành phần phản ứng PCR 16S rDNA PCR arsC 24 Bảng 3.2 Chu trình nhiệt phản ứng PCR 16S rDNA .24 Bảng 3.3 Chu trình nhiệt phản ứng PCR arsC 25 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 4.1 Kết phân lập 26 4.2 kết phân tích tiêu sinh hóa 27 Bảng 4.1 kết kiểm tra sinh hóa .27 4.3 Kết ly trích DNA từ mẫu vi khuẩn phân lập 29 4.4 Kết khuếch đại trình tự rDNA 16S phản ứng PCR .30 4.5 Kết xác định gen arsC phương pháp PCR .31 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .32 5.1 Kết luận 32 5.2 Đề nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO .33 PHỤ LỤC 35 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT BLAST: Basic local alignment sequence tool LB: Luria Betanni NB: Nutrient Broth NCBI: National Center for Biotechnology Information PCR: Polymerase Chain Reaction UNICEF: United Nations Chiiden’s Fund TYEG: Trytone Yeast extrat Glucose V/P: Voges-Proskauer vii DANH SÁCH BẢNG BẢNG Trang Tháng 08 năm 2015 ii LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT .ii Hiện trạng ô nhiễm Asen giới Việt Nam vấn đề quan trọng, đáng quan tâm, nguy hại nước thải nhiễm Asen ảnh hưởng nghiêm trọng đến môi trường sinh thái sức khỏe người ii Theo nghiên cứu giới dương xỉ Pteris vittata biết loài có khả hấp thụ Asen cao thời gian ngắn Cây dương xỉ Pteris vittata có khả hấp thụ Asen hệ sinh vật hấp thụ chuyển hóa Asen Qua tiến hành phân lập vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ .ii Mục đích đề tài phân lập định danh vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ Bằng việc sử dụng phương pháp sinh hóa PCR với đoạn mồi 16S rDNA để định danh vi khuẩn phân lập Kết nghiên cứu phân lập định danh ba chủng vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ Bacillus licheniformis, Bacillus cereus Bacillus anthracis ii SUMMARY iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii BLAST: Basic local alignment sequence tool .vii LB: Luria Betanni vii NB: Nutrient Broth vii NCBI: National Center for Biotechnology Information .vii PCR: Polymerase Chain Reaction vii TYEG: Trytone Yeast extrat Glucose vii V/P: Voges-Proskauer .vii DANH SÁCH BẢNG BẢNG viii Trang viii DANH SÁCH CÁC HÌNH xi Trang xi Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề viii chủng vi khẩn có màu trắng có viền (M1.C), chủng vi khuẩn có màu vàng nhạt (M1.D) Để biết tên vi khuẩn cần thực phản ứng sinh hóa PCR (a) (b) (c) (d) (e) (f) Hình 4.1 Hình ảnh vi khuẩn phân lập (a) arsenate mM , (b) arsenate mM, (c) mẫu M1.A, (d) mẫu M1.B, (e) mẫu M1.C, (f) mẫu M1.D 4.2 kết phân tích tiêu sinh hóa Bảng 4.1 kết kiểm tra sinh hóa Mẫu Màu sắc Hình dạng tế bào Gram Citrat Catalase VP Amilase M1.A Trắn g Que + + + + + + + M1.B Trắn g Que + - - - + - + M1.C Trắn g Que + - - - + - + 27 Di Oxydase động M1.D Vàng Que + + - - + + + (+) phản ứng dương tính, (-) phản ứng âm tính Qua bảng 4.1 có nhận xét: Mẫu vi khuẩn M1.A có màu trắng, hình dạng tế bào hình que, thon hai đầu, mẫu dương tính với tất cà phản ứng sinh hóa thử nghiệm là: Gram dương, citrat, catalse, VP, amilase, di động oxydase Mẫu vi khuẩn M1.B M1.C có kết phân tích sinh hóa giống nhau, nhửng khuẩn có màu trắng, hình dạng tế bào hình que thon hai đầu, có Gram dương, dương tính với amilase oxydase; có kết âm tính với citrat, catalse, VP khả di chuyển Mẫu vi khuẩn M1.D có màu vàng, hình dạng tế bào hình que, thon hai đầu, Gram dương, có kết dương tính với số tiêu sinh hóa sau: citrat, amilase, oxydase có khả di chuyển Qua kết phân tích số tiêu sinh hóa chủng vi khuẩn phân lập từ nồng độ arsenate mM, cho thấy có chủng vi khuẩn có kết sinh hóa khác Những thử nghiệm sinh hóa cho kết sinh hóa giống với sinh hóa chủng Bacillus (a) (b) Hình 4.2 Kết nhuộm Gram catalase (a) Gram dương, (b) catalase dương tính 28 Trong Hình 4.2 (a) kết nhuộm Gram đại điện mẫu vi khuẫn phân lập Ta thấ hình nhuộm Gram vi khuẩn bắt màu tím có hình que, thon hai đầu Hình 4.2 (b) kết amilase dương tính, ta thấy điểm cấy vi khuẩn không chuyển sang màu tím đĩa petri, chứng tỏ điểm cấy vi khuẩn tinh bột, tinh bột vi khuẩn phân giải Hình 4.3 Kết catalase dương tính Trong hình 4.3 kết dương tính phản ứng catalase, nhỏ giọt H2O2 lên vệt vi khuẩn, thấy có xuất bọt khí, bọt khí xuất nhanh sau dần, điều cho thấy vi khuẩn phân lập có khả biến dưỡng lượng theo phương thức hô hấp với oxy Những thử nghiệm sinh hóa cho biết đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn phân lập được, vẫnchưa xác định xác vi khuẩn tên gì, kết hợp thử nghiệm sinh hóa với phản ứng PCR để biết xác tên chủng vi khuẩn phân lập Phản ứng PCR thực với cặp mồi chuyên biệt vi khuẩn 16S – rDNA 4.3 Kết ly trích DNA từ mẫu vi khuẩn phân lập Mục đích: thu nhận DNA gen chủng vi khuẩn phân lập Để biết có mặt DNA chủng vi khuẩn phân lập được, ta tiến hành ly trích DNA vi khuẩn DNA vi khuẩn ly trích phương pháp 29 boiling, phương pháp dễ thực hiện, không tạp hóa chất, tốn có thời gian nhanh nhất, bên cạnh mặt hạn chế phương pháp chất lượng DNA sau ly trích dễ bị tạp protein RNA Sau ly trích DNA vi khuẩn dùng máy đo nồng độ DNA cho kết mẫu ly trích có DNA vi khuẩn, nồng độ DNA thấp Kết hợp với diện di để kiểm tra band DNA, kết chụp gel không thấy band DNA 4.4 Kết khuếch đại trình tự rDNA 16S phản ứng PCR Để định danh cách xác chủng vi khuẩn phân lập mức độ loài gần toàn thông tin trình tự DNA mã hóa cho phân tử rDNA 16S phải biết thật đầy đủ, cần tiến hành phản ứng PCR để khuếch đại toàn trình tự rDNA 16S từ khuôn DNA gen chủng vi khuẩn phân lập Phản ứng PCR thực với cặp mồi 16S rDNA Kết PCR mẫu vi khuẩn thể hình sau: Ladder M1.A M1.B M1.C M1.D 1,5 Kb Hình 4.3 Kết chạy PCR với cặp mồi 63F – 1489R 30 Kết chạy PCR cho band, giếng thứ ứng với mẫu M1.A có band sáng rõ Còn giếng thứ ứng với mẫu M1.B, giếng thứ ứng với mẫu M1.C, giếng thứ ứng với mẫu M1.D có band, band sáng không rõ Phân tích trình tự rDNA 16S Kết giải trình tự (phụ lục) xử lý phần mềm fast PCR để tạo trình tự rDNA nguyên vẹn chủng vi khuẩn Trình tự rDNA 16S nguyên vẹn so sánh với trình tự DNA chủng vi khuẩn khác ngân hàng liệu NCBI phần mềm BLAST Sau giải trình tự mẫu vi khuẩn phân lập cho kết Mẫu M1.A xác định chủng Bacillus licheniformis Ba mẫu M1.B, M1.C, M1.D có kết tương đồng chủng Bacillus cereus, Bacillus thuringienses, Bacillus anthracis chủng Bacillus salmalaya Kết hợp với kết phân tích tiêu sinh hóa cho thấy chủng M1.B M1.C có nhiều đặc điểm tương đồng với Bacillus cereus, chủng M1.D có kết tương đồng với chủng Bacillus anthracis 4.5 Kết xác định gen arsC phương pháp PCR Sau thực phản ứng PCR nhằm xác định diện gen arsC chủng vi khuẩn phân lập Nhưng kết PCR cho thấy mẫu vi khuẩn có diện gen arsC Kết phản ứng PCR xác định gen arsC không chắn, đối chứng dương để so sánh, trình thực phản ứng PCR có sai sót thao tác hóa chất Nhưng vi khuẩn phân lập sống môi trường có arsenate nồng độ mM, điều cho thấy vi khuẩn phân lập có gen chế kháng Asen để tồn phát triển môi trường có arsenate 31 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Sau kết thúc đề tài, có số kết sau Kết phân lập: Phân lập làm chủng vi khuẩn kháng chịu nồng độ Asen mM Kết định danh: Thông qua kết phân tích số tiêu sinh hóa kết giải trình tự PCR chủng phân lập - Chủng M1.A Bacillus licheniformis - Chủng M1.B M1.C Bacillus cereus - Chủng M1.D Bacillus anthracis Kết kiểm tra gen ars C Sau tiến hành phản ứng khuếch đại PCR đoạn mồi arsC với chủng vi khuẩn phân lập được, cho kết chủng có gen arsC 32 5.2 Đề nghị Cần làm thêm nhiều mẫu nhiều khu vực khác để xác định gen arsC vi khuẩn kháng chịu Asen Xác định chế kháng Asen chủng vi khuẩn phân lập Thử nghiệm khả chuyển hóa Asen vi khuẩn phân lập mô hình thực nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bùi Thị Kim Anh 2011 Môi trường đất nước, Luận án Tiến sĩ, Trường đại học Khoa Học Tự Nhiên Cục quản lý môi trường y tế - vấn đề nhiễm độc thạch tín nước ngầm sức khỏe người Việt Nam Đặng Thị An 2005 Nghiên cứu khả chống chịu kim loại nặng số loài thực vật Đề tài nghiên cứu cấp Viện sinh thái Tài nguyên sinh vật 2005 – 2006 Đỗ Văn Ái, Mai Trọng Nhuận, Nguyễn Khắc vinh 2005 Một số đặc diểm phân bố Arsen tự nhiên vần đề ô nhiễm arsen môi trường nước ta, Báo cáo Cục địa chất khoáng sản Việt Nam Nguyễn Tiến Bân 2003 – 2005 Danh mục loài thực vật Việt Nam, Tập II, III Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Lê Đức, Nguyễn Cảnh Tiến Trình, Phạm Viết Dũng, Nguyễn Thị Thu Nhạn 2008 nghiên cứu dạng Asen đất ô nhiễm khai thác thiết Hà Thượng – Đại Từ - Thái Nguyên, Tạp chí khoa học đất.30: 87 – 92 33 Trần Thị Thanh Hương, Lê Quốc Tuấn, Khoa Khoa Học, Khoa Học Môi Trường Và Tài Nguyên – Trường đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh - Cơ chế gây độc Asen khả giải độc Asen vi sinh vật Hoàng Đàn.2006 Xử lý nước thải bãi lọc trồng – Công nghệ đem lại nhiều lợi ích cho môi trường Tạp chí Bảo vệ Môi trường 4: 34 – 39 Tài liệu tiếng nước Anhui Huang, Max Teplitski, Bala Rathinasabapathi, and Lena Ma (23 july 2015), Characterization of arsenic-resistant bacteria from the rhizosphere of arsenic hyperaccumulator Preris vittata 10 Bala Rathinasabapathi, Suresh Babu Raman, Gina Kertulis, and Lena Ma (2006), Arsenic-resistant proteobacterium from the phyllosphere of arsenichyperaccumulating fern (Pteris vittata L.) reduces arsenic to arsenite 11 Piyasa Ghosh, Bala Rarhinasabapathi, Lena Q.ma (2011), Arsenic-resistant bacteria solubilized arsenic in the growth media and increased growth of arsenic hyperaccumulator Pteris vittata L 12 Prof Roberto Bassi and Prof Giovanni Vallini, The interraction between rhizobacteria and the hyperaccumulator fern Pteris vittata in arsenic transformation 13 Silvia Lampis, Chiara Santi, Adriana Ciurli, Marco Andreolli and Giovanni Vallini (february 2015), Promotion of arsenic phytoextraction efficiency in the fern Pteris vittata by the inoculation of As-resistant bacteria: a soil bioremediation perspective 14 W.H WALLACE and J.E GATES (june 1986), Indentification of Eubacteria Isolated from Leaf Cavities of Four Species of the N-Fixing Azolla Fern as Arthrobacter Tài liệu web 15 http://doctorhouses.com 16 http://tuoitre.vn 17 http://doc.edu.vn 18 http://vnexpress.net 19 https://en.wikipedia.org 20 http://vietbao.vn 34 21 http://123doc.org 22 http://menvisinh.org 23 https://en.wikipedia.org PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần hóa chất loại môi trường - - - Thành phần hóa chất môi trường TYEG o Tryptone 1g o Yeast extract 0,3g o Glucose 0,5g o Agar 15g Thành phần môi trường NB o Peptone 5g o NaCl 7g o Meat extract 3g o PH 7,5 Thành phần môi trường LB o Tryptone 10g o NaCl 10g o Yeast extract 5g o PH 7,5 35 - - Thành phần môi trường Clark – Lubs o Peptone 3g o K3HPO4 5g o Glucoza 5g o PH 7,5 Thành phần môi trường simmons citrat o NaCl 5g o MgSO4.7H2O 0,2g o NH4H2PO4 1g o K2HPO4.3H2O 1g o Natri xitrat 2g o BPB 1% nước o Agar 12g o Nước cất 990ml Phụ lục 2: Thành phần hóa chất dùng sinh học phân tử - Thành phần hóa chất TE buffer (pH = 8) o Tris/HCl 10mM o EDTA 1mM 36 Phụ lục 3: Kết giải trình tự định danh vi khuẩn Mẫu vi khuẩn M1.A 37 38 39 Mẫu vi khuẩn M1.B 40 41 [...]... mục đích phân lập và xác định vi khuẩn có khả năng kháng chịu Asen trong lá cây dương xỉ 1.2 Yêu cầu của đề tài Phân lập một số chủng vi khuẩn kháng chịu được Asen trong lá cây dương xỉ Thiết lập quy trình PCR trong vi c định danh chủng vi khuẩn kháng chịu được Asen trong lá cây dương xỉ bằng vi c sử dụng đoạn mồi 16S rDNA Định danh chủng vi khuẩn đó bằng một số biện pháp sinh hóa và sinh học phân tử... được Asen có thể là do hệ sinh vật trong lá hấp thụ và chuyển hóa Asen Qua đó tiến hành phân lập vi khuẩn có khả năng kháng chịu Asen trong lá cây dương xỉ .ii Mục đích của đề tài là phân lập và định danh vi khuẩn có khả năng kháng chịu Asen trong lá cây dương xỉ Bằng vi c sử dụng phương pháp sinh hóa và PCR với đoạn mồi 16S rDNA để định danh vi khuẩn phân lập được Kết quả nghiên cứu đã phân. .. vật biển nói chung thường giàu Asen , hàm lượng trung bình của Asen trong cá biển từ 0,6 – 4,7 ppm, còn trong nước ngọt là 0,54 ppm, Asen tập trung trong gan và mỡ cá 12 2.10 Khái quát về cây dương xỉ Dương xỉ có hai nhánh chính : dương xỉ Microsorum và dương xỉ Bolbitis Dương xỉ Microsorum được đại diện bởi dương xỉ java (dương xỉ lá thường) trong hàng ngàn họ dương xỉ khác nhau Hầu hết chúng đều... nhưng vi c áp dụng phương pháp này trong xử lý Asen chưa thật sự hiệu quả, vì phương pháp này chỉ áp dụng xử lý trong hoạt động nông nghiệp và trong sinh hoạt, chứ chưa áp dụng rộng rãi với quy mô lớn trong công nghiệp, và vi c xử lý sinh khối cây dương xỉ làm sao không ô nhiễm môi trường cũng gặp khó khăn Xuất phát từ những vấn đề trên, đề tài phân lập vi khuẩn kháng chịu Asen trong lá cây dương xỉ ... lý Asen bằng các chất hóa học thì vi c sử dụng thực vật để hấp thụ Asen cũng được áp dụng, loài thực vật điển hình xử lý Asen là cây dương xỉ Các nhà khoa học đã tìm thấy loải dương xỉ có tên Pteris vittata (dương xỉ diều hâu) có thể hút Asen chứa trong nước, làm giảm nồng độ Asen gần bằng 100 lần trong vòng 24 tiếng (Elless và ctv) Qua đó ta thấy cây dương xỉ diều hâu là một loài siêu tích lũy Asen, ... nhiễm Asen trên các vùng đất nông nghiệp Dương xỉ diều hâu có thể hấp thụ Asen và các hợp chất của nó trong thời gian rất ngắn Các cuộc kiểm tra cho thấy, hàm lượng Asen trong dương xỉ tăng lên 126 lần chỉ sau 2 tuần được chuyển sang vùng đất bị ô nhiễm 13 Hình 2.2 Cây dương xỉ Pteris vittata (nguồn: cayhoacanh.com) 2.11 Một số nghiên cứu về sử dụng cây dương xỉ để xử lí Asen Mô hình xử lý đất nhiễm Asen. .. phân lập và định danh được ba chủng vi khuẩn có khả năng kháng chịu Asen trong lá cây dương xỉ là Bacillus licheniformis, Bacillus cereus và Bacillus anthracis ii SUMMARY iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VI T TẮT vii BLAST: Basic local alignment sequence tool .vii LB: Luria Betanni vii NB: Nutrient Broth vii... sinh học phân tử 1.3 Nội dung thực hiện Phân lập vi khuẩn có trong lá cây dương xỉ Thử khả năng kháng chịu Asen của vi khuẩn trên môi trường thạch có arsenate Định danh các chủng vi sinh vật bằng phương pháp sinh hóa và PCR Xác định sự hiện diện của gen arsC bằng phương pháp PCR Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình chung trên thế giới về vấn đề ô nhiễm Asen Cuộc khủng hoảng thạch tín bắt đầu nhen... FeOOH Trong trầm tích biển ven bờ Vi t Nam có hàm lượng Asen (trao đổi ion) dao động trong khoảng 0,1 – 6,1 ppm Asen trong không khí và nước Hàm lượng Asen trong không khí (ng/m 3) của thế giới khoảng 0,007 – 2,3 (trung bình 0,5) Hàm lượng Asen trong nước dưới đất phụ thuộc rất nhiều vào tính chất và trạng thái môi trường địa hóa Dạng Asen tồn tại chủ yếu trong nước dưới đất là H 3AsO4 Hàm lượng Asen trong. .. trên thế giới về vấn đề ô nhiễm Asen .2 2.2 Tình hình ô nhiễm Asen ở Vi t Nam .3 2.3 Giới thiệu về Asen 4 2.7 Nguồn gây ô nhiễm Asen 9 2.8 Những bệnh gây ra bởi Asen 9 2.9 Các hợp chất của Asen trong tự nhiên 11 2.10 Khái quát về cây dương xỉ 13 2.11 Một số nghiên cứu về sử dụng cây dương xỉ để xử lí Asen 14 Chương 3 VẬT LIỆU VÀ ... khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ 1.2 Yêu cầu đề tài Phân lập số chủng vi khuẩn kháng chịu Asen dương xỉ Thiết lập quy trình PCR vi c định danh chủng vi khuẩn kháng chịu Asen dương xỉ vi c sử... khả kháng chịu Asen dương xỉ Mục đích đề tài phân lập định danh vi khuẩn có khả kháng chịu Asen dương xỉ Bằng vi c sử dụng phương pháp sinh hóa PCR với đoạn mồi 16S rDNA để định danh vi khuẩn phân. .. nghiệp, vi c xử lý sinh khối dương xỉ không ô nhiễm môi trường gặp khó khăn Xuất phát từ vấn đề trên, đề tài phân lập vi khuẩn kháng chịu Asen dương xỉ thực nhằm mục đích phân lập xác định vi khuẩn