Asen (còn gọi là thạch tín), ký hiệu As, số nguyên tử là 33. Asen là một á kim gây độc khét tiếng cây dương xỉ Pteris vittata được cho là loài thực vật siêu tích lũy Asen Kết quả kiểm tra sinh hóa cho thấy những vi khuẩn phân lập được có đặc điểm sinh hóa giống với Bacillus
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP VI KHUẨN KHÁNG CHỊU ASEN TRONG LÁ CÂY DƯƠNG XỈ Sinh viên thực hiện: TRẦN MINH XÔNG Tháng 08 năm 2015 NỘI DUNG MỞ MỞ ĐẦU ĐẦU VẬT VẬT LIỆU LIỆU VÀ VÀ PHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP PHÁP KẾT KẾT QUẢ QUẢ VÀ VÀ THẢO THẢO LUẬN LUẬN KẾT KẾT LUẬN LUẬN VÀ VÀ KIẾN KIẾN NGHỊ NGHỊ MỞ ĐẦU Ô nhiễm Asen môi trường nước Hình 1: Asen nước thải công nghiệp (Nguồn s-mart.vn) Hình 2: Nước sinh hoạt nhiễm Asen (Nguồn suckhoedoisong.vn) MỞ ĐẦU Giới thiệu Asen Asen (còn gọi thạch tín), ký hiệu As, số nguyên tử 33 Asen kim gây độc khét tiếng Hình 3: Khối Asen tự nhiên (Nguồn: vi.wikipedia.org) MỞ ĐẦU Xử lý Asen sinh học dương xỉ Pteris vittata cho loài thực vật siêu tích lũy Asen Hình 4: Dương xỉ Pteris vittata (nguồn: cayhoacanh.com) MỞ ĐẦU Phân lập tuyển chọn vi khuẩn kháng chịu Asen dương xỉ Định danh vi khuẩn phương pháp sinh hóa sinh Nội Nộidung dungnghiên nghiêncứu cứu học phân tử Xác định gen arsC vi khuẩn phân lập VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Đối tượng nghiên cứu Hình 5: Lá dương xỉ Pteris vittata VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Thiết bị dùng nghiên cứu Hình 6: Tủ cấy vi sinh Hình 7: Máy PCR VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Phương pháp thí nghiệm Thí nghiệm Phân lập tuyển chọn vi khuẩn (a) Hình 8: Khuẩn lạc (a) Nồng độ mM; (b) Nồng độ mM (b) VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Phương pháp thí nghiệm Thí nghiệm Thực số phản ứng sinh hóa Nhuộm Gram Khả di động Khảo sát hoạt tính catalase Khảo sát oxydase Thử nghiệm Voges – Prokauer (VP) Khả chuyển hóa citrat Khả phân giải tinh bột (a) (b) VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Phương pháp thí nghiệm Thí nghiệm Phân tích trình tự 16S rDNA xác định gen arsC phương pháp PCR Tăng sinh vi Ly trích DNA Chạy PCR Điện di Giải trình tự DNA khuẩn Quy trình thực phản ứng PCR (a) (b) VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Phương pháp thí nghiệm Thí nghiệm Phân tích trình tự 16S rDNA xác định gen arsC phương pháp PCR 95 C phút 95 C 72 C 72 C 30 giây 53 C phút phút 30 giây C 35 chu kỳ Hình 9: Chu trình nhiệt phản ứng PCR 16S rDNA (b) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết phân lập (a) (b) (a) (c) Hình 10: Những vi khuẩn phân lập (a) M1.A; (b) M1.B; (c) M1.C; (d) M1.D (d) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết sinh hóa Bảng 1: Kết thử nghiệm sinh hóa (+) Dương tính; (-) Âm tính Mẫu Màu sắc Hình Gram Citrat Catalase VP Amilase Di động Oxydase dạng tế bào M1.A Trắng Que + + + + + + + M1.B Trắng Que + - - - + - + M1.C Trắng Que + - - - + - + M1.D Vàng Que + + - - + + + (a) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết sinh hóa Kết kiểm tra sinh hóa cho thấy vi khuẩn phân lập có đặc điểm sinh hóa (a) giống với Bacillus (b) (c) (a) Hình 11: Một số hình ảnh kiểm tra sinh hóa (a) Gram dương; (b) Amilaze dương tính; (c) Catalase dương tính KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết PCR Kết PCR bốn mẫu vi khuẩn phân lập có band ladder M1.A M1.B 1,5 Kb (a) Hình 12: Kết PCR 16S rDNA M1.C M1.D KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Phân lập ba chủng vi khuẩn kháng chịu nồng độ arsenat mM Dựa vào kết giải trình tự DNA kết sinh hóa Mẫu M1.A Bacillus lichenifomis Mẫu M1.B M1.C Bacillus careus Mẫu M1.D Bacillus anthracis (a) Bốn mẫu vi khuẩn diện gen arsC M1.D KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kiến nghị Làm thêm mẫu khu vực khác để xác định gen arsC vi khuẩn kháng chịu Asen Xác định chế kháng Asen vi khuẩn phân lập Thử nghiệm khả chuyển hóa Asen vi khuẩn phân lập (a) M1.D XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN! Trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Thầy cô Bộ môn công nghệ sinh học Hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Bảo Quốc Ban hội đồng bạn theo dõi 19 M1.D (a) [...]... những vi khuẩn phân lập được có đặc điểm sinh hóa (a) giống với Bacillus (b) (c) (a) Hình 11: Một số hình ảnh kiểm tra sinh hóa (a) Gram dương; (b) Amilaze dương tính; (c) Catalase dương tính KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả PCR Kết quả PCR bốn mẫu vi khuẩn phân lập được đều có band ladder M1.A M1.B 1,5 Kb (a) Hình 12: Kết quả PCR 16S rDNA M1.C M1.D KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Phân lập ba chủng vi khuẩn. .. arsC M1.D KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kiến nghị Làm thêm mẫu lá ở các khu vực khác nhau để xác định gen arsC của vi khuẩn kháng chịu Asen Xác định cơ chế kháng Asen của những vi khuẩn phân lập được Thử nghiệm khả năng chuyển hóa Asen của vi khuẩn phân lập được (a) M1.D XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN! Trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Thầy cô Bộ môn công nghệ sinh học Hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn... vi khuẩn kháng chịu được nồng độ arsenat 5 mM Dựa vào kết quả giải trình tự DNA và kết quả sinh hóa Mẫu M1.A là Bacillus lichenifomis Mẫu M1.B và M1.C là Bacillus careus Mẫu M1.D là Bacillus anthracis (a) Bốn mẫu vi khuẩn không có sự hiện diện của gen arsC M1.D KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kiến nghị Làm thêm mẫu lá ở các khu vực khác nhau để xác định gen arsC của vi khuẩn kháng chịu Asen Xác... phút 30 giây 0 4 C 35 chu kỳ Hình 9: Chu trình nhiệt của phản ứng PCR 16S rDNA (b) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả phân lập (a) (b) (a) (c) Hình 10: Những vi khuẩn phân lập được (a) M1.A; (b) M1.B; (c) M1.C; (d) M1.D (d) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả sinh hóa Bảng 1: Kết quả thử nghiệm sinh hóa (+) Dương tính; (-) Âm tính Mẫu Màu sắc Hình Gram Citrat Catalase VP Amilase Di động Oxydase dạng tế bào M1.A Trắng...VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Phương pháp thí nghiệm Thí nghiệm 3 Phân tích trình tự 16S rDNA và xác định gen arsC bằng phương pháp PCR Tăng sinh vi Ly trích DNA Chạy PCR Điện di Giải trình tự DNA khuẩn Quy trình thực hiện phản ứng PCR (a) (b) VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Phương pháp thí nghiệm Thí nghiệm 3 Phân tích trình tự 16S rDNA và xác định gen arsC bằng phương pháp PCR 0 95 C 2 phút