A Nghiên cứu bào chế hệ nano lipìd chứa fluconazol Đào Minh Huy, Nguyễn Thị Mai Anh, Ngô Thị Phương Liên Trường Đại học Dược Hà Hội SUM M ARY F lu co n a zo le -lo a d e d n a n o stru c tu re d lip id carriers (F-NLC) w ere p re p a re d b y em u lsifica tio n -u ltra so n ica tio n m e th o d a n d a sse sse d fo r d iffe re n t ch a cteristics The results sh o w e d th a t th e F-N LC rep resen t th e p a rticle size o f a p p ro xim a te ly Ỉ9 nm , p o ly d isp e rsity in d e x (PDI) o fo 150, z e ta p o te n tia l o f- m V D SC th e rm o g m su g g e sts th a t flu co n a z o le is so lu b ilize d o r fin ely d isp e rse d in lip id m atrix In v itro relea se stu d y sh o w s th a t, F-N LC w ith % liq u id lip id h a s lo w e st relea se rate Từ k hóa; h ệ n a n o lipid, fiu co n a zo l, b o c h ế Đặt vấn đề Trong năm gần đây, ý dành cho hệ nano lipid (NLC) ưu điểm khả nhà sản xuất Dinatri phosphat, acid phosphoric, methanol; đạt tiêu chuẩn cho HPLC Thiết bị Máy khuấy từ IKA-WERKE (Đức), máy siêu âm kéo dài giải phóng, tăng thấm qua da bảo Labsonic (Đức), máy đo kích thước tiểu phân vệ dược chất Tuy nhiên hệ nano có nhược điểm zeta Zetasizer ZS90 (Malvern Instrument), màng độ ổn định kích thước tiểu phân không cao, có thẩm tích MWCO 12-14kDa (Spectrumlab), máy phân tích nhiệt vi sai Mettler Toledo, nhớt kế quay tượng trục xuất dược chất khỏi cốt lipid tượng gel hóa trình bảo quản [2],-[4] Fluconazol (FLZ) dược chất chống nấm thuộc nhóm azol Fluconazol có độ tan khoảng - mg/ ml, thường bào chế dạng gel thân nước điểu trị nhiễm nấm da Nhằm mục đích kéo dài giải phóng fluconazol, tiến hành nghiên cứu với mục tiêu: xây dựng công thức đánh giá Brookfield LVDV-E Phương pháp nghiên cứu Phương pháp bào chế Bàng l Công thức bào chéhệ F-HLC Alcol cetylic 1,98 g Acid oleic ,0 Fluconazol 0,4 g Pha dấu số đặc tính hệ nano lipid rán chứa fluconazol (F-NLC) g Chất diện hoạt thân dáu Chất diên hoat thân nước 3g Pha nước Nước cất lọc qua màng 0,2 (Itn Nguyên liệu, thiết bị phương pháp nghiên cứu 10 ml Bào chế hệ nano lipid chứa fluconazol phương pháp nhũ hóa siêu âm theo công thức Nguyên liệu thiết bị Nguyên vật liệu Fluconazol, alcol cetylic xuất xứ Trung Quốc (USP ,32); Tween 40 (Hàn Quốc); Tween 80, Tween 20, Cremophor EL, poloxamer, benzalkonium clorid, bảng - Hòa tan fluconazol chất diện hoạt (CDH) thân dẩu hỗn hợp alcol cetylic acid oleic nóng ch ả yở -7 “C - Hòa tan CDH thân nước 100 ml nước, natri lauryl Sulfat, natri deoxycholat, Span 80: theo khuấy từ kết hợp đun nóng tới nhiệt độ pha tiêu chuẩn Dược điển Trung Quốc tiêu chuẩn dầu - Phối hợp pha dầu vào pha nước, trì nhiệt độ 60 - 70“C, siêu âm với tẩn số 30 kHz, biên độ 100 |am, Độ nhớt mẫu xác định nhớt kế quay Tốc độ 100 v/p, lượng mẫu 100 ml Sử dụng 15 phút, kết hợp khuấy từ liên tục - Khuấy trì làm nguội nhũ tương vể kim đoS64và S61 nhiệt độ phòng thu hỗn dịch nano lipid chứa Kết bàn luận fluconazol (F-NLC) Phương pháp đánh giá đặc tính hệ nano lipid Ảnh hưởng loại chất diện hoạt tới KTTP, chứa fluconazol - Kích thước tiểu phân (KTTP), số đa phân tán zeta độ ổn định hệ F-NLC Bào chế hệ F-NLC với khối lượng thể tích (PDI) zeta hệ F-NLC xác định sử dụng bảng quy trình phương pháp bào chế với thiết bị Zetasizer ZS90 Điểu kiện: nhiệt độ 25°C; hệ CDH hỗn hợp CDH khác (Tween 20,40, số khúc xạ 1,5; mẫu pha loãng 100 lẩn 80; Tween 80-Span 80 1:1; Cremophor; Poloxamer; nước lọc qua màng 0,2 um - Hàm lượng fluconazol hệ định benzalkonium clorid; natri deoxy cholat; natri lauryl sulfat; Tween 20-Tween 80 1:1; Tween 20-Span 80 lượng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) theo phương pháp Gupta [3] 80 2:1) Tổng lượng CDH sửdụng g Kết - Khả giải phóng in vitro hệ F-NLC đánh giá qua màng thẩm tích (phân tử lượng cut off 12-14 kDa) thiết bị thử giải phóng qua màng Hanson Research Môi trường thử giải phóng: ml đệm phosphat pH 7,4 có chứa 2% Tween 80 ml hỗn dịch thêm vào ngăn cho, đậy kín Sau khoảng thời gian định, ml mẫu rút từ 14:1; Poloxamer-Span 80 1:1; natri lauryl sulfat-Span trình bày hình Kết cho thấy hệ F-NLC bào chế với chất diện hoạt không ion hóa đểu zeta khoảng -30 mV Với chất diện hoạt anion natri deoxỵcholat natri lauryl sulfat, zeta giảm sâu (< -50 mV) hấp phụ anion lên bề mặt Đối với CDH cationic benzalkonium clorid ngăn nhận [2], Hàm lượng fluconazol đánh giá zeta mang giá trị +46,9 Tuy nhiên phân bố KTTP phương pháp HPLC nêu [3], - Trước phân tích nhiệt vi sai (DSC), hỗn dịch có thêm pic 1500 nm tiểu phân trình chuyển zeta từ âm sang dương F-NLC đông khô (Triad freeze-drier Labconco) với thông số: đông lạnh -60“C (6 giờ), làm khô sơ (khi cation benzalkonium hấp phụ lên bề mặt) đâ kết tụ Tuy nhiên, mối tương quan zeta KTTP PDI Trong CDH cấp -15°c (20 giờ), làm khô thứ cấp 20°c (8 giờ) Điểu kiện phân tích nhiệt: nhiệt độ quét 10 - 250“C, tốc độ 10“C/phút, môi trường khí Nitơ, khối lượng mẫu từ - 20 mg sử dụng Tween 40, NaLs, POL-Span 1:1 vàNaLs:Span 1:1 cho hệ F-NLC có KTTP PDI nằm giới hạn mong muốn (< 250; < 0,250 tương ứng) Chỉ có hệ h 0.8 0.6 0.4Õ Q 0.2 H fý w Chất diện hoạt ừ> “0 O r~ òo M ữì r- v/ỉ - 0.2 NJ Hình l:KnPjhézetũ,vòPDIcủũhệF-NLCvớicácá&diệnhoạtÈácnhouJ20,40,80:ĩween20,40JO:S:Spũn80:CRE:ữemophor:POL:Poloxom:Blữ:benmlbnm dorid; HoL: nơtrilouryl sulíũt, NũDC: nũtri deoxyáolot F-NLC sử dụng Tween 40 cho thấy độ ổn định vật lý sau tháng bảo quản điểu kiện phòng thí nghiệm, hệ F-NLC bào chế với CDH lại đểu tách lớp kết tụ rõ rệt sau tuần bảo quản Ảnh hưởng lượng lipid tới KTTP, độ nhớt độ ổn định hệ F-NLC Tiến hành bào chế hệ F-NLC theo khối lượng thể tích bảng 1, với tổng lượng alcol cetylic acid oleic thay đổi từ ,2 ,5 ,7 10 g Kết trình bày bảng Unq lữTP vờ PDI cùa hệ F-NLCtrong trình bâo quần 10 Lượng lipid (g) ngày KTTP PDI KTTP PDI KTTP PDI 98,08 0,161 141,70 0,200 174,40 0,169 Độ nhót (cps) tháng 4,8 104,1 7,5 0,204 151,9 PDI KTTP PDI 15,7 5200 50000 3000 6400 45000 0,145 10 Độ nhớt(cps) KTTP Kết cho thấy với lượng CDH cố định 3% (để đảm bảo yêu cẩu vể giới hạn CDH), ICTTP tăng dẩn tăng lượng lipid hệ (bảng 2) Với lượng lipid 10 g, sau làm nguội nhiệt độ phòng hệ NLC chất đặc gel (5200 cps) Sau tháng bảo quản hệ F-NLC g lipid chuyển sang thể chất gel (3000 cps) tượng chuyển dạng thù hình alcol cetylic [4], Sự chuyển dạng thù hình lipid từ dạng bền (a, ß') sang dạng (ß) thường kèm với thay đổi hình dạng (từ tròn sang thuôn dài) Do đó, diện tích bể mặt tiểu phân lực liên kết sơ nước (Van der Waals) tăng lên, độ linh động toàn hệ giảm xuống (gel hóa) [4] Ảnh hường cùa tốc độ làm lạnh tới HTTP hệ F-NLC Bào chế mẫu F-NLC theo khối lượng thể tích bảng với loại CDH thân nước Tween 40 natrilautyl Sulfat với quỵ trình phương pháp bào chế Trước làm nguội nhũ tương D/N vể nhiệt độ phòng để thu tiểu phân F-NLC rắn, nhũ tương xác định KTTP điểu kiện trì nhiệt độ 70°c Sau làm nguội nhiệt độ phòng nhanh (5 phút) chậm (30 phút), mẫu NLC xác định KTTP PDI Kết trình bày bảng CDH Natrí lauryl Sulfat Tween 40 Nhũ tương Nhanh Châm Nhũ tương Nhanh (TO) (TI) (T2) (NO) (NI) (N2) KTTP 92,29 122,9 284,9 184,9 190,1 208,9 PDI 0,256 0,290 0,501 0,224 0,320 0,269 IVICiU Châm Quá trình làm lạnh nhanh hay chậm ảnh hưởng tới trạng thái kết tinh lipid hệ (tròn thuôn dài [4]) Kết cho thấy, với công thức sử dụng Tween 40 trình làm lạnh thực nhanh (5 phút) KTTP PDI tảng không nhiều so với trước làm lạnh (TI cao TO không nhiều); trình thực chậm (30 phút) KTTP PDI tăng lên nhiều (T2 cao TO nhiều) Với công thức sử dụng natri lauryl Sulfat, KTTP PDI tăng không đáng kể (NO, N I, N2 xấp xỉ nhau) Sự khác giải thích natri lauryl Sulfat có giá trị nồng độ tạo micel tới hạn (8,67x10'^IVI) cao nhiều so với Tween 40 (0,0067x10'^M) [7] Nath lauryl Sulfat tổn nhiểu dung dịch dạng tự khả bao phủ bể mặt hệ nano tốt (khi alcol cetylic kết tinh làm lạnh [4]) Do vậy, trình làm lạnh nhanh áp dụng để bào chế hệ F-NLC Phán tích nhiệt vi sai Đánh giá đặc tính nhiệt fluconazol, alcol cetỵlic, hệ F-NLC 0,2,20% lipid lỏng (acid oleic) Khối lượng mẫu phân tích nhiệt vi sai đảm bảo cho lượng FLZ mẫu gán tương đương nhằm tránh tượng pha loãng làm giảm cường độ pic FLZ Kết trình bày hình Kinh ĩ Phổphân tích nhiệt vi Sũi màu fiuconazol, olcol cetỵlic, F-NLC0; 2; 20% Kết cho thấy đường nhiệt maufluconazol có pic tỏa nhiệt mạnh 140°c tương ứng với pic nóng chảy FLZ, pic tỏa nhiệt nhẹ 100°c tương ứng với trình nước dạng FLZ monohydrat [6] Các pic không xuất đường nhiệt mẫu F-NLC chứng tỏ hòa tan/ phân tán FLZ vào cốt lipid chuyển dạng FLZ từ kết tinh sang vô định hình Trong mẫu F-NLC diện Tween 40, acid oleic (có điểm ch ả y th ấp - th ể pic thu nhiệt khoảng 10 - 20“C) FLZ ngăn cản hình thành tinh thể hoàn chỉnh alcol cetylic _ ỊỌ Thời gian (giờ) 20 25 Hình Phán trăm fluconozol giỏi phóng qua mòng thổĩĩì tích DD: dung dịch fliiconazol, HLC0; 2; 20 vờ 100 hệ mong lipid có cấu trúc nom V Ở ÌO ; ì ; 20 vờ ĩ00% lipid lỏng pic thu nhiệt tương ứng với điểm chảy alcol cetylic (60°C) bị dịch chuyển (từ 60 xuống 50°C) sau 24 giờ) Các mẫu F-NLC đểu cho thấy khả Khả nàng giải phóng invitro kiểm soát giải phóng FLZ mức độ khác Bào chế mẫu F-NLC với tỷ lệ lipid lỏng (acid Khi lượng lipid lỏng giảm dần từ 100; 20 2% khả oleic) ,2 ,2 100% Các mẫu F-NLC có hàm kiểm soát giải phóng FLZ F-NLC tăng dẩn lượng fluconazol KTTP mẫu khác (lượng FLZ giải phóng sau 24 giảm dẩn: 45; 30 không nhiều (nằm khoảng 150 - 200 nm) Tiến 25% tương ứng) Tuy nhiên với hệ F-NLC 0% lipid hành thử giải phóng theo phương pháp ghi lỏng, tượng trục xuất thuốc [2], FLZ phương pháp đánh giá đặc tính hệ nano lipid không phân bố nhiều vào lõi lipid mà nằm pha chứa fluconazol Kết trình bày hình nước Do vậy, tốc độ giải phóng FLZ từ hệ F-NLC 0% Kết cho thấy lượng FLZ mẫu dung dịch thấm qua màng thẩm tích lớn (xấp xỉ 80% 100% tương đương 4 Kết luận Trong nghiên cứu này, hệ NLC chứa fluconazol bào chế phương pháp nhũ hóa - siêu âm kết hợp khuấy từ có độ ổn định vể đặc tính hóa alcol cetylic tốt chất diện hoạt khác Hệ hấp tiệt khuẩn mà không ảnh hưởng tới KTTP PDI Tỷ lệ nồng độ lipid rắn hệ lượng CDH thêm vào cẩn nhỏ 5:3 để đảm bảo tượng gel hóa không xuất NLC bào chế với 2% lipid lỏng lý tháng Những kết thu gợi ý có khả kiểm soát giải phóng tốt dung dịch Tween 40 có khả ổn định hệ NLC bào chế với fluconazol NLC với 0; 20 100% lipid lỏng TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2009), D ược th Q uốc gia, NXB Y học, Hà Nội, pp 464 - 467 Das Surajit (2012), "Are nanostructured lipid carriers (NLCs) b e tterth an solid lipid nanoparticles (SLNs): D evelopm ent, characterizations and com p arative evaluations o f clotrim azole-loaded SLNs and NLCs?", European Jo u rn a l o f Pharm aceutical Sciences, 47(1), pp 130 -1 Gupta M (2012), "D evelopm ent, characterization and in vivo assessm ent o f effective lipidic nanoparticles fo r derm al d elivery of fluconazo le against cutaneous candidiasis", Chem istry an d Physics o f lipids, 165 (4), pp 454 - 461 Helgason T (2009), "Effect o f surfactant surface coverage on form ation o f solid lipid nanoparticles (S L N )", Jo u rn a l o f Colloid and Interface Sciences, 334(1), pp 75 - 81 M ehnert w (2012), "Solid lipid nanoparticle: Production, characterization and applications", Ad va nce Drug Delivery Reviews, 64, pp 83-101 M ino R Caira (2004), "Preparation and crystal characterization o f a polym orph, a m onohydrate, and an ethyl acetate solvate o f the antifung al f\uconazo\e", Jo u rn a l o f Pharm aceutical Science, 93(3), pp 601 - 511 Pasupati M., M ysels K J (1971), "Critical m icelle concentration o f aqueous surfactant system s", United Stated D epartm ent o f Com m erce ... nhiệt độ phòng thu hỗn dịch nano lipid chứa Kết bàn luận fluconazol (F-NLC) Phương pháp đánh giá đặc tính hệ nano lipid Ảnh hưởng loại chất diện hoạt tới KTTP, chứa fluconazol - Kích thước tiểu... ổn định hệ F-NLC Bào chế hệ F-NLC với khối lượng thể tích (PDI) zeta hệ F-NLC xác định sử dụng bảng quy trình phương pháp bào chế với thiết bị Zetasizer ZS90 Điểu kiện: nhiệt độ 25°C; hệ CDH hỗn... kiện phòng thí nghiệm, hệ F-NLC bào chế với CDH lại đểu tách lớp kết tụ rõ rệt sau tuần bảo quản Ảnh hưởng lượng lipid tới KTTP, độ nhớt độ ổn định hệ F-NLC Tiến hành bào chế hệ F-NLC theo khối lượng