chromatography", Journal o f Chromatography B: Biomedical application, (675), 295 - 302 Kiyoshi Tsuji, John F Goetz, William van Meter and Kathy A Gusciora (1979)," Normal - phase high-performance liquid chromatography determination of neomycin sulphatderivatized with 1-fluoro-2,4-dinitrobenzen", Journo/o/'C/)romcjfograp/7y,(l 75), 141 - 152 The United States Pharmacopoiea (2009), vol 3, pp 3045- 3069 Nghiên cứu bào chẽ tiểu phân nano lipid rắn chứa vitamin K Ngó Thị Thu Trang, Nguyễn Trấn Linh Trường Đại học Dược Hà Nội SUMMARY The purpose o f this study was to investigate novel vitamin Kj - loaded solid lipid nanoparticles (VITK - SLNs) formulation for topical delivery, following our previous study [ 1] Influences o f lipid carriers (cetyl alcohol, stearic acid, Suppocire), surfactants (Span 80, Tween 80, Cremophor EL, poloxamer 188) and methods o f preparation on in vitro drug release and particle size were studied The VITK - SLNs with 0.5% cetyl alcohol, 0.8% Suppocire, 0.7% Span 80, 15% Tween 80 showed good drug release after hours (82.34 ± 3.75%) and small Z - verage (90.65 rim) Ultrasonic and high shear homogenization were the most suitable method o f preparation in this study Từ khóa: Tiểu phán nano lipid rân, vitamin K, Đặt Vấn đề Trong vài năm trở lại đây, vitamin K, xuất mỹ phẩm chế phẩm dùng để điểu trị tĩnh mạch mạng nhện cải thiện triệu chứng ban đỏ, ban xuất huyết, vết thâm tím nhiều nguyên nhân khác Nhưng dùng tỉ lệ chúng đến giải phóng dược chất in vitro [1], Nghiên cứu thực với mục đích tiếp tục đánh giá ảnh hưởng loại, tỉ lệ lipid, chất diện hoạt ảnh hưởng kỹ thuật bào chế đến kích thước tiểu phân giải phóng dược chất hệ theo đường da vitamin gặp phải hạn chế tính thấm qua da khó trì tác dụng thời gian dài Bào chế đại có nhiều biện pháp để cải thiện tính thấm cho dược chất, Vitamin K, đạt tiêu chuẩn dược điển Trung Quốc, số bào chế hệ tiểu phân nano lipid rắn alcol cetỵlic, acid stearic, Suppocire, Cremophor EL, Bên cạnh tác dụng làm tăng tính thấm dược Span 80, Tween 80, poloxame 188, ethanol tuyệt đối, Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu chất, hệ tiểu phân nano lipid rắn có khả natri clorid, natri dihydrophosphat, natri hỵdroxyd uv, để bảo vệ vitamin K,, dược chất đạt tiêu chuẩn nhà sản xuất Acid phosphoric, acid ngăn cản tia nhạy cảm với ánh sáng Với nghiên cứu trước, sơ đánh giá ảnh hưởng số loại lipid, chất diện hoạt acetic, methanol loại dùng cho HPLC Thiết bị Máy siêu âm LABSONIC® M, máy khuấy từ IKA - WERKE (Đức), thiết bị đồng hóa nhờ lực phân cắt lớn Unidrive, máy đo quang phổ UV-VIS HITACHI Kết bàn luận Khảo sát ảnh hưởng thành phân công U1800 (Nhật), kính hiển vi điện tử truyền qua JEM thức đến lượng vitamin K, giải phóng từ hệ tiểu 1010, máy phân tích kích thước hạt Zetasizer Nano ZS90, hệ thống đánh giá giải phóng thuốc qua màng Hanson Research, hệ thống sắc ký lỏng hiệu phàn nano: Theo kết công bố nhóm nghiên cứu, phương pháp thiết kế mặt hợp tử tâm (phẩn cao Agilent số thiết bị khác mềm MODDE 8.0) sử dụng với yêu cẩu Phương pháp nghiên cứu biến đầu vào bảng để đưa bảng thiết kê' thí nghiệm với 19 công thức Tiến hành bào chế Phương pháp bào chế Bào chế mẫu 100 ml chứa 0,25 g vitamin phương pháp siêu âm, đánh giá giải phóng dược K,, loại lipid (alcol cetylic, acid stearic, Suppocire), chất từ mẫu Sử dụng phẩn mềm FormRules 2.0 loại chất diện hoạt (CDH) thân nước (Tween 80, để đánh giá ảnh hưởng số thành phẩn Khi Cremophor EL, poloxame 188) loại CDH thân lượng chất mang alcol cetylic tăng từ 0,5 g lên 1,3 dấu (Span 80) với tỉ lệ khác Pha dầu (vitamin K,, g lượng vitamin K, giải phóng từ hệ tiểu phân lipid, CDH thân dáu, đun nóng 70 - 80“C) phổi hợp với pha nước (nước, CDH thân nước, đun nóng nano bị giảm nhiều, tăng 70 - 80°C) phương pháp siêu âm (30000 Hz, 100 alcol cetylic khoảng từ 0,5 - 1,3 g, tăng khối um, - 20 phút) - khuấy từ (700 vòng/phút) lượng Tween 80 sử dụng làm giảm tỉ lệ vitamin giải phóng Ảnh hưởng lượng acid stearic tới tỉ hóa nhờ lực phân cắt lớn (4000 - 21000 vòng/ phút -1 phút) Để nguội nhiệt độ phòng Phương pháp đánh giá hệ tiểu phán nano khoảng từ 1,3 - 2,5 g lại không ảnh hưởng Khi lượng lệ vitamin K, giải phóng tương tựalcol cetylic, có tỉ lệ giải phóng nhỏ với tất từ hệ tiểu mẫu Kết thu cho thấy alcol cetỵlic phân nano: hệ thống giải phóng qua màng Hanson phối hợp với Suppocire chất mang tốt cho hệ tiểu phân nano [ ] - Đánh giá giải phóng vitamin Research Màng cellulose acetat 0,2 ụm Môi trường giải phóng ml ethanol: dung dịch đệm phosphat pH 7,5 (1:4) 37°c, tốc độ khuấy 400 vòng/phút Thể Bảng Kí hiệu vàyêu cáu cùa biến đâu vào STT Biến Loại chất mang X, Lượng chẫt mãng X phân nano: sử dụng hệ thống sắc kí lỏng hiệu Lượng Suppocire cao Agilent với thông số: cột Zorbax SB - C18 (250 X 4,6 mm, um), tốc độ dòng 1,2 ml/phút; detectơ Loại CDH thân nước X, Lượng CDH thân nước Xs Lượng Span 80 X tích mẫu thử: 0,5 ml Cứ sau 30 phút lấy mẫu lẩn giờ; xác định hàm lượng vitamin giải phóng phương pháp đo quang phổ u v - VIS bước sóng 277 nm - Định lượng nồng độ vitamin K, hệ tiểu uv, bước sóng phát 226 nm; thể tích tiêm mẫu |jl; pha động hỗn hợp methanol : dung dịch acid acetic 0,25 M (9 :1 ) Mẫu thử 2,0 ml hệ tiểu Ký hiệu Loại biễn Giới hạn Định tỉnh Alcol cetylic Acid stearic g Định lượng 0,5-2,5 g Dính lượng ,8 -2 ,0 Định tính Tween 80 Cremophor EL g Oịnh lượng 1,5-2,0 g Định lượng ,3 -0 ,7 Đơn vị phân nano hòa tan ethanol đun nóng vừa đủ 50 ml, làm tạnh 10°c để lipid kết tủa, ly tâm 12000 Chưa thể kết luận Cremophor EL hay Tween 80 vòng/phút 30 phút, lấy phấn dịch, pha loãng có hiệu hơn, mẫu có tỉ lệ vitamin K, giải lán pha động phóng cao sau mẫu bào chế với Tween - Đánh giá hình thái kích thước tiểu phân 80, lựa chọn Tween 80 cho hệ tiểu phân nano kính hiển vi điện tử truyền nghiên cứu [1], Thiết kế công thức để qua Đánh giá kích thước phân bố kích thước tiểu tiếp tục đánh giá ảnh hưởng tỉ lệ lipid, tỉ lệ Tween phân máy Zetasizer Nano ZS90 80, loại chất diện hoạt thân nước bảng Bán Một sỗ công thức bào chẽ rà kích thước ẩ u phân hệ nano Nguyên liệu CT9 CT20 CT21 CT22 CT23 CT24 CT25 CT26 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 Alcol cetylic (g) 0,5 0,75 1,0 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Suppocire (g) 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 Span 80 (g) 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 0,7 Tween 80 (g) 1,5 1,5 1,5 1,75 2,0 Vitamin K, (g) _ Tween 20 (g) 1,5 Poloxame 188(g) 1,5 Cremophor EL (g) Nước cát vđ (ml) 1,5 100 100 100 100 100 100 100 100 KTTP(nm) 90,2 168,2 116,2 158,2 159,8 85,6 97,4 90,1 POI 0,416 0,530 0,864 0,430 0,693 0,378 0,596 0,683 Ảnh hưởng ti lệ Hpid (CT9, CT20, CT21) KTTP mẫu bào chế với lượng alcol cetylic chê' với poloxame 188 Điểu poloxame 188 có HLB lớn (29), tạo nên lớp áo thân nước làm 0,75 1,0 g đểu lớn mẫu bào chế với lượng alcol cetylic 0,5 g Điểu lượng lipid dung môi dễ dàng thấm vào tiểu phân nano, giúp giải phóng dược chất Mầu bào chế với Tween tăng làm tăng độ nhớt hệ, dẫn tới kích thước tiểu 80 có lượng vitamin K| giải phóng sau phân tăng Do vậy, lựa chọn tỉ lệ alcol cetylic 0,5 g mẫu bào chế với poloxame 188 cao mẫu lại, nhiên kích thước tiểu phân nhỏ Ảnh hưởng ti lệ Tween 80 (CT9, CT22, CT23) Khi lượng Tween 80 tăng từ 1,5- 2,0 g, kích thước phân bố kích thước tiểu phân Do vậy, tiểu phân PDI đểu tăng Có thể nống độ Tween Tween 80 lựa chọn làm CDH thân nước cho 80 tăng vượt nồng độ tối ưu nên dẫn tới kết tụ tiểu phân hình thành tiểu phân nghiên cứu có kích thước lớn Bàng Ảnh hư ầ g cũa thời gian siêu âm Ảnh hưởng loại CDH thân nước (CT9, CT24, CĨ25, CT26) Kích thước tiểu phân trung bình mẫu sử dụng CDH khác không khác biệt nhiều đểu 100 nm Tuy nhiên hệ số đa phân tán (PDI) lại khác nhau, mẫu sử dụng Tween 20 Tween 80 có PDI nhỏ mảu lại -♦-n9a»«n80) -*-CTa4(Twtoi») -*-ay{pok«une U8) •— CTM(Ctemopliora) Ảnh hưởng thời gian siêu âm Thời gian (phút) MẫuCT9 (Tween 80) 10 15 20 KTTP (nm) 500,2 270,3 223,5 181,0 124,7 93,3 PDI 0,516 0,454 0,402 0,323 0,421 0,447 Khi thời gian siêu âm tăng từ phút lên 20 phút kích thước tiểu phân trung bình mẫu giảm, sóng siêu âm tạo lượng cao, sinh nhiệt tạo ứng suất học, tác động vào tiểu phân giúp phân chia chúng thành tiểu phân nhỏ PDI giảm tảng thời gian siêu âm từ đến phút, tiếp tục tăng thời gian siêu âm PDI tăng Tuy nhiên, siêu âm 20 phút PDI tăng không nhiều so với 10 phút kích thước tiểu phân giảm đáng kể Do vậy, chọn thời ThMiitan(gKit) Hinh ĩỉlệvitoirìinK giũiphóngtừhệnơnoCT9, CT24, Ơ25, Ữ 26 gian siêu âm phút cho nghiên cứu Bào chế phương pháp đồng hóa nhờ lực phán cốt lớn Mẫu có lượng vitamin K, giải phóng nhiều đáu sau mẫu bào Bào chế hệ tiểu phân nano lipid rắn theo công thức phương pháp hóa nhờ lực phân cắt lớn với tốc độ khuấy thời gian khác Với thời gian hóa phút, phút 98,03 ± 0,87% Lượng dược chất giải phóng sau 82,34 ± 3,75%, tiểu phân thu có hình cẩu 10 phút, tăng tốc độ đống hóa KTTP giảm gán cẩu, kích thước tiểu phân trung bình 90,65 nm Với tốc độ đồng hóa 10.000, 13.000, 15.000 vòng/phút, tăng thời gian kích thước tiểu phân giảm Điểu tăng tốc độ hóa làm tăng lực phân cắt tác dụng lên lipid chảy lỏng làm giảm kích thước giọt Còn với tốc độ 18.000 21.000 vòng/phút, tăng thời gian từ phút lên phút KTTP giảm, tiếp tục tăng thời gian hóa lên phút kích thước tiểu phân tăng Mẫu bào chế với tốc độ 21.000 vòng/phút 10 phút cho kích thước tiểu phân tương tự mẫu bào chế phương pháp siêu âm khuấy từ, nhiên T h i gian (giờ) M Ỉ.H Iệ vim in giòi phóng từ hệ m o bào ché theo CT9 PDI cao (0,617), thời tốc độ này, thiết bị rung, ổn mẫu bào chế nhiểu bọt Do vậy, không lựa chọn phương pháp để bào chế tiểu phân nano lipid rắn SLNs V i t « « i n K Ò 03 P r i n t M n g : 0 X » »1 mn ỈOThởl gian(pbũt) Tốc độ đổDg obẩt bóa (vòDg/pbút) M Biểu đỗKỈTPàocácrìiôuSLN s bào ché băng phương pháp đóng nhót lìóo nhờ lực phân cát l ầ Tuy nhiên, số mẫu sau bào chế phương pháp siêu âm - khuấy từ tiếp tục hóa đạt độ ổn định vật lý cao Do lựa chọn phương pháp siêu âm - khuấy từ, sau hóa với tốc độ 7000 vòng/phút phút để bào chế hệ tiểu phân Đánh gìá số đặc tính hệ tiểu phán nano lipid chứa vitamin /c, Hệ tiểu phân bào chế có hàm lương vitamin K M n» Ảnh chụp TEM hệ nom bòo chế theo CT9 Kếtiuận Hệ tiểu phân nano lipid rắn chứa vitamin K, với loại tỉ lệ tá dược khác bào chế theo phương pháp đánh giá số đặc tính Trên sở lựa chọn công thức với 0,5% alcol cetylic, 0,8% Suppocire, 0,7% Span 80, 1,5% Tween 80 cho mẫu tiểu phân nano có tốc độ giải phóng ổn định nhất, tỉ lệ vitamin K, giải phóng lớn sau Phương pháp bào chế siêu âm - khuấy từ sau hóa nhờ lực phân cắt lớn cho tiểu phân hình cẩu, kích thước tương đối nhỏ đồng đều, thể chất ổn định TÀI LIỆU THAM KHẢO Ngô Thị Thu Trang, Phạm Thị Phương Dung, Nguyễn Trán Linh (2012), "Nghiên cứu bào chế gel chứa tiểu phân nano vitamin K,", Tạp chí Y dược học quân sự, tr 21 - 26 Da Silva A L M., Contri R V., Jornada D s., Pohlmann A R„ Guterres s s (2012), "Vitamin K,-loaded lipid core nanocapsules; physicochemical characterization and in vitro skin permeation", Skin Research and Technology, 0, pp - Liu c H., Wu c T., Fang J Y (2010), "Characterization and formulation optimization of solid lipid nanoparticles in vitamin K| delivery" Drug Development and Industrial Pharmacy, 36(7), pp 751-761 ... siêu âm - khuấy từ, sau hóa với tốc độ 7000 vòng/phút phút để bào chế hệ tiểu phân Đánh gìá số đặc tính hệ tiểu phán nano lipid chứa vitamin /c, Hệ tiểu phân bào chế có hàm lương vitamin K M n»... lớn Mẫu có lượng vitamin K, giải phóng nhiều đáu sau mẫu bào Bào chế hệ tiểu phân nano lipid rắn theo công thức phương pháp hóa nhờ lực phân cắt lớn với tốc độ khuấy thời gian khác Với thời gian... lệ vitamin K, giải lán pha động phóng cao sau mẫu bào chế với Tween - Đánh giá hình thái k ch thước tiểu phân 80, lựa chọn Tween 80 cho hệ tiểu phân nano k nh hiển vi điện tử truyền nghiên cứu