Khảo sát vi khuẩn vùng rễ và vi khuẩn nội sinh ở cây ngô (zea mays) trồng tại đông nam bộ

iii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Chữ viết tắt vii Danh mục hình viii Danh mục bảng x Danh mục biểu đồ xi Chƣơng I MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 1.4 Thời gian nghiên cứu Chƣơng II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cây Ngô .4 2.1.1 Đặc điểm Ngô 2.1.2 Giá trị dinh dƣỡng công dụng Ngô .5 2.2 Hiện trạng sản xuất Ngô vùng Đông Nam Bộ 2.2.1 Đặc điểm khí hậu, thổ nhƣỡng vùng Đông Nam Bộ .6 2.2.2 Đặc điểm vùng Ngô Đông Nam Bộ 2.3 Vi khu n vùng rễ, vi khu n nội sinh thực vật vai trò chúng tăng trƣởng thực vật 13 2.3.1 Vi khu n vùng rễ rhizo acteria 13 2.3.2 Vi khu n nội sinh thực vật endophytic acteria 16 2.3.3 Cơ chế cố định đạm, hòa tan lân khó tan vi khu n vùng rễ vi khu n nội sinh thực vật 19 iv 2.3.3.1 Cơ chế cố định đạm 19 2.3.3.2 Cơ chế hòa tan lân khó tan 20 Chƣơng III PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23 3.1 Phƣơng tiện nghiên cứu 23 3.1.1 Vật liệu, hóa chất 23 3.1.2 Thiết ị, dụng cụ .23 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 23 3.2.1 Thu thập xử lý mẫu .23 3.2.1.1 Thu thập mẫu đất mẫu Ngô .23 3.2.1.2 Xử lý mẫu đất mẫu Ngô 24 3.2.2 Phân tích số tiêu nông hóa đất 25 3.2.2.1 Xác định pHH2O, pHKCl pHNaF đất 25 3.2.2.2 Xác định độ ẩm tính hệ số khô kiệt đất .26 3.2.2.3 Xác định N tổng số theo phương pháp Kjendahl 27 3.2.2.4 Xác định P dễ tiêu theo phương pháp Oniani .29 3.2.2.5 Xác định K trao đổi quang kế lửa .31 3.2.2.6 Xác định hàm lượng chất hữu tổng theo phương pháp WalkleyBlack 32 3.2.3 Phân lập đếm mật số vi khu n đất vùng rễ Ngô 33 3.2.3.1 Pha loãng dịch đất tạo hộp trải 34 3.2.3.2 Tính mật số tế bào tương ứng với độ pha loãng khác 35 3.2.4 Phân lập làm vi khu n nội sinh Ngô 36 3.2.4.1 Khử trùng bề mặt mẫu Ngô 36 3.2.4.2 Ly trích dịch từ mẫu Ngô chủng vào môi trường bán đặc .36 3.2.4.3 Cấy chuyền làm dòng vi khuẩn nội sinh 36 3.2.5 Bảo quản dòng vi khu n thu đƣợc 37 3.2.6 Mô tả đặc điểm khu n lạc đặc điểm tế dòng vi khu n thu đƣợc .37 v 3.2.6.1 Mô tả đặc điểm khuẩn lạc .37 3.2.6.2 Mô tả hình thái, khả chuyển động nhuộm Gram 37 3.2.7 Khảo sát khả cố định đạm dòng thu đƣợc 39 3.2.7.1 Xác định dòng có khả cố định đạm .39 3.2.7.2 Khảo sát khả phát triển loại môi trường không đạm khác 39 3.2.8 Khảo sát khả hòa tan lân dòng thu đƣợc 40 3.2.8.1 Xác định dòng có khả hòa tan lân 40 3.2.8.2 Khảo sát khả tạo vòng halo (halozone) môi trường NBRIP đặc có bổ sung bromothymol blue 40 3.2.8.3 Khảo sát khả tạo vòng suốt môi trường NBRIP đặc 41 3.2.9 Phƣơng pháp xử lý số liệu .41 Chƣơng IV K T QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 4.1 Một số tiêu nông hóa đất trồng Ngô 43 4.1.1 pH đất 44 4.1.2 Độ m hệ số khô kiệt đất 45 4.1.3 Thành phần dinh dƣỡng đất 46 4.2 Mật số vi khu n đất vùng rễ Ngô 47 4.3 Đặc điểm khu n lạc dòng vi khu n đất vùng rễ Ngô 49 4.4 Đặc điểm tế dòng vi khu n đất vùng rễ Ngô 52 4.6 Kết chủng dịch trích mẫu Ngô vào môi trƣờng LB án đặc 53 4.7 Đặc điểm khu n lạc dòng vi khu n nội sinh Ngô 56 4.8 Đặc điểm tế dòng vi khu n nội sinh Ngô 58 4.9 Khả cố định đạm hòa tan lân dòng vi khu n đất vùng rễ vi khu n nội sinh Ngô trồng Đông Nam Bộ 61 4.10 Khả phát triển dòng vi khu n cố định đạm loại môi trƣờng không đạm khác 64 vi 4.11 Khả sinh acid làm giảm pH dòng vi khu n có khả hòa tan lân 69 4.12 Khả hòa tan calcium orthophosphate dòng vi khu n có khả hòa tan lân 74 Chƣơng V K T LUẬN VÀ KI N NGHỊ 78 TÀI LIỆU THAM KHẢO 83 PHỤ LỤC .95 Hóa chất 95 Trang thiết ị 99 Số liệu kết nghiên cứu 100 vii CHỮ VI T TẮT BR-VT: tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu ĐN: tỉnh Đồng Nai TN: tỉnh Tây Ninh LB: Luria-Bertani medium NBRIP: National Botanical Research Institute's phosphate growth medium NCBI: National Center for Biotechnology Information PGPR: Plant Growth-Promoting Rhizobacteria viii DANH MỤC HÌNH STT Trang Hình 2.1 Hình thái – giải phẫu Ngô (Zea mays L.) Hình 2.2 Bản đồ hành vùng Đông Nam Bộ, Việt Nam Hình 2.3 Mô hình thâm canh Ngô lai thí điểm tỉnh Đồng Nai 12 Hình 2.4 Sơ đồ mô hình tập đoàn hạt đất vi sinh vật hạt 14 Hình 2.5 Các chế kích thích tăng trưởng thực vật PGPR 15 Hình 2.6 Ảnh hiển vi điện tử quét dòng hóa vùng lông hút rễ Lúa Burkholderia kururiensis 17 Hình 2.7 Sơ đồ dạng lân trao đổi đất 22 Hình 3.1 Cách thu mẫu ngẫu nhiên .24 Hình 3.2 Phổ màu xanh molybdate đường chuẩn lân 29 10 Hình 3.3 Sơ đồ pha loãng dịch đất tạo hộp trải 34 11 Hình 3.4 Phổ màu theo pH bromothymol blue 40 12 Hình 4.1 Một số mẫu đất thu .43 13 Hình 4.2 Một số dạng khuẩn lạc vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 52 14 Hình 4.3 Mẫu thân rễ Ngô sau rửa khử trùng 54 15 Hình 4.4 Vi khuẩn nội sinh phát triển môi trường bán đặc 54 16 Hình 4.5 Cấy chuyền vi khuẩn nội sinh từ môi trường bán đặc sang môi trường đặc .55 17 Hình 4.6 Một số dòng vi khuẩn nội sinh Ngô 58 18 Hình 4.7 Hình dạng tế bào nhuộm Gram số dòng vi khuẩn thu 59 19 Hình 4.8 Màu sắc loại môi trường không đạm có bổ sung bromothymol blue (pH=6,8) sau hấp khử trùng .66 20 Hình 4.9 Sự phát triển dòng vi khuẩn cố định đạm môi trường Thornton có bổ sung chất thị màu bromothymol blue 67 ix 21 Hình 4.10 Sự tiết acid làm chuyển màu chất thị màu bromothymol blue dòng vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 71 22 Hình 4.11 Sự tiết acid làm chuyển màu chất thị màu bromothymol blue dòng vi khuẩn nội sinh Ngô 71 23 Hình 4.12 Vòng halo số dòng vi khuẩn đất vùng rễ vi khuẩn nội sinh Ngô .73 24 Hình 4.13 Vòng suốt số dòng vi khuẩn đất vùng rễ vi khuẩn nội sinh Ngô 74 25 Hình 4.14 So sánh đường kính vòng halo số dòng vi khuẩn có khả hòa tan lân 77 x DANH MỤC BẢNG STT Trang Bảng 2.1 Những nhóm đất vùng Đông Nam Bộ Bảng 2.2 Diện tích gieo trồng, suất sản lượng Ngô tỉnh thành vùng Đông Nam Bộ, năm 2010 11 Bảng 4.1 Ký hiệu mẫu 44 Bảng 4.2 Kết đo pH đất 45 Bảng 4.3 Kết đo độ ẩm hệ số khô kiệt đất 46 Bảng 4.4 Kết thành phần dinh dưỡng đất 46 Bảng 4.5 Kết mật số tế bào vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 48 Bảng 4.6 Đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 50 Bảng 4.7 Đặc điểm tế bào dòng vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 53 10 Bảng 4.8 Đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn nội sinh Ngô 56 11 Bảng 4.9 Đặc điểm tế bào dòng vi khuẩn nội sinh Ngô 60 12 Bảng 4.10 Khả cố định đạm hòa tan lân dòng vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 61 13 Bảng 4.11 Khả cố định đạm hòa tan lân dòng vi khuẩn nội sinh Ngô .61 14 Bảng 4.12 Khả phát triển loại môi trường không đạm vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 64 15 Bảng 4.13 Khả phát triển loại môi trường không đạm vi khuẩn nội sinh Ngô 65 xi DANH MỤC BIỂU ĐỒ STT Trang Biểu đồ 4.1 Các đặc điểm hình thái khuẩn lạc thường gặp vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 51 Biểu đồ 4.2 Các đặc điểm hình thái khuẩn lạc thường gặp vi khuẩn nội sinh Ngô 57 Biểu đồ 4.3 Tỉ lệ nhóm vi khuẩn nội sinh Ngô phân theo khả cố định đạm, hòa tan lân 62 Biểu đồ 4.4 Tỉ lệ nhóm vi khuẩn nội sinh Ngô phân theo khả cố định đạm, hòa tan lân 62 Biểu đồ 4.5 So sánh khả cố định đạm, hòa tan lân vi khuẩn đất vùng rễ vi khuẩn nội sinh Ngô 63 Biểu đồ 4.6 Sự thay đổi màu sắc môi trường nuôi cấy vi khuẩn đất vùng rễ Ngô môi trường Thornton LGI không đạm 65 Biểu đồ 4.7 Sự thay đổi màu sắc môi trường nuôi cấy vi khuẩn nội sinh Ngô môi trường Thornton LGI không đạm 66 Biểu đồ 4.8 Khả mọc loại môi trường không đạm vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 68 Biểu đồ 4.9 Khả mọc loại môi trường không đạm vi khuẩn nội sinh Ngô 68 10 Biểu đồ 4.10 So sánh khả mọc loại môi trường không đạm vi khuẩn đất vùng rễ vi khuẩn nội sinh Ngô 69 11 Biểu đồ 4.11 Đường kính vòng halo dòng vi khuẩn đất vùng rễ Ngô 72 12 Biểu đồ 4.12 Đường kính vòng halo dòng vi khuẩn nội sinh Ngô 73 13 Biểu đồ 4.13 Đường kính vòng phân giải calcium orthophosphate đối chiếu với đường kính khuẩn lạc dòng vi khuẩn đất vùng rễ Ngô .75 xii 14 Biểu đồ 4.14 Tỉ lệ nhóm vi khuẩn đất vùng rễ Ngô theo đường kính vòng phân giải calcium orthophosphate 75 15 Biểu đồ 4.15 Đường kính vòng phân giải calcium orthophosphate đối chiếu với đường kính khuẩn lạc dòng vi khuẩn nội sinh Ngô 76 16 Biểu đồ 4.16 Tỉ lệ nhóm vi khuẩn nội sinh Ngô theo đường kính vòng phân giải calcium orthophosphate 76 115 Đặc điểm STT Nguồn gốc Hình dạng tế bào Chuyển động Gram Số lƣợng Rễ Thân Que ngắn Que dài Cầu Khác (song cầu) Nhanh Vừa Chậm Không Âm Dương 37 20 46 36 15 35 22 T lệ 65% 35% 81% 5% 12% 2% 63% 11% 26% 0% 62% 38% Bảng 4c Khả phát triền môi trƣờng Burk không đạm NBRIP chứa lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh Ngô trồng Bà Rịa – Vũng Tàu STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Dòng RL01 RL02 RL03 RM04 RM05 RP06 RP07 RM08 RP09 RP10 RM11 RP12 RP13 RP14 RP15 RP16 RM17 RM18 RM19 RP20 Khả phát triển môi trƣờng Burk + +++ + ++ + ++ ++ ++ + ++ + ++ + ++ ++ ++ + môi trƣờng NBRIP ++ +++ ++ + + ++ + ++ ++ ++ + ++ + + + + + +++ ++ 116 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 RL21 RL22 RM23 RL24 RL25 RP26 RM27 RL28 RL29 RP30 RL31 RP32 TM33 TP34 TP35 TL36 TP37 TP38 TM39 TL40 TM41 TL42 TP43 TP44 TL45 TL46 TP47 TP48 TM49 TM50 TM51 RP52 RL53 RL54 RL55 TP56 RM57 ++ + ++ + ++ + +++ + + ++ +++ ++ +++ ++ ++ + ++ + ++ + ++ + ++ +++ +++ +++ +++ + + ++ + ++ + + +++ + +++ ++ +++ +++ +++ +++ + ++ + + + + +++ +++ + ++ + +++ Sau ngày nuôi cấy: (-) khuẩn lạc không phát triển; (+) khuẩn lạc phát triển; (++) khuẩn lạc phát triển vừa; (+++) khuẩn lạc phát triển mạnh 117 STT Khả cố định đạm/hòa tan lân Số lƣợng Chỉ hòa tan lân Chỉ cố định đạm Cả hai khả Không 39 T lệ 12% 9% 68% 11% Bảng 5a Đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn nội sinh Ngô trồng Tây Ninh STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Dòng vi khuẩn TC01 RC02 TC03 TC04 TC05 RC06 RC07 RX08 RX09 RX10 RX11 RX12 TX13 TR14 TR15 TC16 RC17 TR18 RC19 TC20 RC21 TR22 RR23 RR24 RR25 RR26 Đặc điểm khuẩn lạc Hình dạng Không Tròn Tròn Không Tròn Tròn Không Không Không Tròn Tròn Tròn Tròn Không Không Tròn Tròn Tròn Tròn Tròn Tròn Tròn Tròn Tròn Tròn Tròn Màu sắc Dạng bìa Độ Trắng đục Trắng đục Vàng Trắng đục Trắng đục Hồng nhạt Trắng đục Trắng sữa Trắng sữa Trắng đục Trắng đục Trắng đục Trắng Trắng đục Trắng sữa Trắng sữa Vàng nghệ Vàng nhạt Trắng ngà Beige Trắng đục Trắng Vàng Vàng chanh Trắng sữa Vàng Răng cưa Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Răng cưa Răng cưa Răng cưa Nguyên Nguyên Nguyên Răng cưa Răng cưa Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Răng cưa Răng cưa Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Phẳng Lài Mô Lài Mô Mô Mô Phẳng Mô Lài Phẳng Lài Mô Phẳng Phẳng Mô Mô Mô Lài Lài Phẳng Mô Lài Mô Lài Lài Đƣờng kính (cm) 0.8 0.4 0.2 0.5 0.2 0.4 0.1 1.2 0.6 0.3 1.2 0.6 0.2 0.8 0.4 0.2 0.1 0.3 0.7 0.3 0.5 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 118 Đặc điểm khuẩn lạc STT Hình dạng Màu sắc Dạng bìa Độ Đƣờng kính Tròn Không Trắng Cam Vàng Khác Nguyên Răng cưa Mô Lài Phẳng ≤ 0.1 > 0.1 – 0.5 > 0.5 – 1.0 >1.0 Số lƣợng 19 18 18 11 17 T lệ 73% 27% 69% 0% 23% 8% 69% 31% 42% 35% 23% 8% 65% 19% 8% Bảng 5b Nguồn gốc đặc điểm tế bào dòng vi khuẩn nội sinh Ngô trồng Tây Ninh STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Dòng TC01 RC02 TC03 TC04 TC05 RC06 RC07 RX08 RX09 RX10 RX11 RX12 TX13 TR14 TR15 TC16 RC17 TR18 RC19 TC20 RC21 Nguồn gốc Thân, TN7 Rễ, TN7 Thân, TN7 Thân, TN7 Thân, TN7 Rễ, TN7 Rễ, TN7 Rễ, TN6 Rễ, TN6 Rễ, TN6 Rễ, TN6 Rễ, TN6 Thân, TN6 Rễ, TN1 Thân, TN1 Thân, TN7 Rễ, TN7 Thân, TN1 Rễ, TN7 Thân, TN7 Rễ, TN7 Hình dạng Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que dài Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que dài Que ngắn Cầu Que ngắn Que ngắn Cầu Que ngắn Chuyển động Nhanh Chậm Chậm Nhanh Nhanh Nhanh Chậm Vừa Chậm Nhanh Nhanh Chậm Nhanh Vừa Chậm Chậm Chậm Vừa Nhanh Chậm Nhanh Gram + + + + + + + - 119 22 23 24 25 26 TR22 RR23 RR24 RR25 RR26 Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Thân, TN1 Rễ, TN1 Rễ, TN1 Rễ, TN1 Rễ, TN1 Nhanh Vừa Nhanh Nhanh Vừa Đặc điểm STT Nguồn gốc Hình dạng tế bào Chuyển động Gram Số lƣợng Rễ Thân Que ngắn Que dài Cầu Khác (song cầu) Nhanh Vừa Chậm Không Âm Dương 16 10 22 2 12 17 + + T lệ 62% 38% 84% 8% 8% 0% 46% 19% 35% 0% 65% 35% Bảng 5c Khả phát triền môi trƣờng Burk không đạm NBRIP chứa lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh Ngô trồng Tây Ninh STT Dòng 10 11 12 13 14 15 16 TC01 RC02 TC03 TC04 TC05 RC06 RC07 RX08 RX09 RX10 RX11 RX12 TX13 TR14 TR15 TC16 Khả phát triển môi trƣờng Burk ++ + + + +++ + ++ + ++ + + + + - môi trƣờng NBRIP ++ ++ ++ + +++ + ++ + ++ + ++ + + + 120 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 RC17 TR18 RC19 TC20 RC21 TR22 RR23 RR24 RR25 RR26 + + + + + + - + + + ++ + ++ Sau ngày nuôi cấy: (-) khuẩn lạc không phát triển; (+) khuẩn lạc phát triển; (++) khuẩn lạc phát triển vừa; (+++) khuẩn lạc phát triển mạnh STT Khả cố định đạm/hòa tan lân Chỉ hòa tan lân Chỉ cố định đạm Cả hai khả Không Số lƣợng 15 T lệ 19% 15% 58% 8% Bảng 6a Đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn nội sinh Ngô trồng Đồng Nai STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Dòng vi khuẩn RH01 RB02 RB03 RB04 RT05 TR06 RT07 RT08 RT09 RH10 RB11 RB12 TT13 TT14 TT15 RT16 RH17 RB18 Đặc điểm khuẩn lạc Hình dạng Không Tròn Tròn Tròn Không Tròn Tròn Tròn Không Không Không Tròn Tròn Không Tròn Tròn Tròn Tròn Màu sắc Trắng Trắng Trắng đục Trắng đục Trắng ngà Trắng đục Trắng đục Trắng đục Trắng Trắng đục Trắng sữa Trắng đục Vàng cam Vàng nhạt Trắng Vàng đục Beige Vàng nghệ Dạng bìa Răng cưa Nguyên Nguyên Răng cưa Răng cưa Răng cưa Nguyên Nguyên Răng cưa Răng cưa Nguyên Răng cưa Răng cưa Răng cưa Răng cưa Răng cưa Răng cưa Nguyên Độ Lài Lài Mô Mô Lài Lài Mô Mô Lài Lài Lài Lài Mô Lài Mô Lài Lài Mô Đƣờng kính (cm) 0.2 0.1 0.2 0.1 1.0 0.1 0.1 0.1 0.2 0.2 0.7 0.1 0.2 0.1 0.1 0.1 0.3 0.1 121 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 RT19 RH20 RT21 RH22 RB23 RH24 RB25 RT26 RB27 RB28 RB29 RT30 RH31 RB32 RT33 Tròn Tròn Tròn Tròn Tròn Tròn Không Không Tròn Tròn Tròn Không Tròn Tròn Tròn Vàng Vàng Hồng Hồng nhạt Cam Vàng Vàng Trắng đục Trắng Vàng Vàng chanh Trắng sữa Vàng nhạt Trắng đục Cam Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Nguyên Răng cưa Nguyên Nguyên Nguyên Răng cưa Nguyên Nguyên Nguyên Đặc điểm khuẩn lạc STT Hình dạng Màu sắc Dạng bìa Độ Đƣờng kính Mô Lài Mô Lài Mô Mô Mô Lài Mô Mô Mô Mô Mô Mô Mô 0.3 0.2 0.2 0.2 0.1 0.3 0.3 1.0 0.2 0.2 0.2 0.5 0.3 0.1 0.4 Số lƣợng Tròn Không Trắng Cam Vàng Khác Nguyên Răng cưa Mô Lài Phẳng ≤ 0.1 > 0.1 – 0.5 > 0.5 – 1.0 >1.0 24 17 11 19 14 19 14 12 19 T lệ 73% 27% 52% 6% 33% 9% 58% 42% 58% 42% 0% 36% 58% 6% 0% Bảng 6b Nguồn gốc đặc điểm tế bào dòng vi khuẩn nội sinh Ngô trồng Đồng Nai STT Dòng RH01 RB02 RB03 RB04 RT05 Nguồn gốc Rễ, DN3 Rễ, DN1 Rễ, DN1 Rễ, DN1 Rễ, DN2 Hình dạng Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que dài Chuyển động Vừa Nhanh Nhanh Vừa Chậm Gram + 122 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 TR06 RT07 RT08 RT09 RH10 RB11 RB12 TT13 TT14 TT15 RT16 RH17 RB18 RT19 RH20 RT21 RH22 RB23 RH24 RB25 RT26 RB27 RB28 RB29 RT30 RH31 RB32 RT33 Rễ, DN2 Rễ, DN2 Rễ, DN2 Rễ, DN2 Rễ, DN3 Rễ, DN1 Rễ, DN1 Thân, DN2 Thân, DN2 Thân, DN2 Rễ, DN2 Rễ, DN3 Rễ, DN1 Rễ, DN2 Rễ, DN3 Rễ, DN2 Rễ, DN3 Thân, DN1 Thân, DN3 Thân, DN1 Thân, DN2 Thân, DN1 Thân, DN1 Rễ, DN1 Rễ, DN2 Rễ, DN3 Rễ, DN1 Rễ, DN2 Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Cầu Cầu Que ngắn Que ngắn Que ngắn Cầu Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que ngắn Que dài Que ngắn Que ngắn Que ngắn Vừa Nhanh Vừa Nhanh Vừa Vừa Nhanh Vừa Nhanh Vừa Vừa Chậm Chậm Nhanh Vừa Vừa Nhanh Nhanh Nhanh Nhanh Nhanh Nhanh Chậm Nhanh Chậm Chậm Chậm Nhanh Đặc điểm STT Nguồn gốc Hình dạng tế bào Chuyển động Gram Rễ Thân Que ngắn Que dài Cầu Khác (song cầu) Nhanh Vừa Chậm Không Âm Dương Số lƣợng 24 28 15 11 25 + + + + + + + T lệ 73% 27% 85% 6% 9% 0% 45% 33% 21% 0% 76% 24% 123 Bảng 6c Khả phát triền môi trƣờng Burk không đạm NBRIP chứa lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh Ngô trồng Đồng Nai STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Dòng RH01 RB02 RB03 RB04 RT05 TR06 RT07 RT08 RT09 RH10 RB11 RB12 TT13 TT14 TT15 RT16 RH17 RB18 RT19 RH20 RT21 RH22 RB23 RH24 RB25 RT26 RB27 RB28 RB29 RT30 RH31 RB32 RT33 Khả phát triển môi trƣờng Burk ++ +++ ++ ++ + ++ ++ ++ +++ +++ ++ +++ ++ + + + + + + + +++ - môi trƣờng NBRIP ++ ++ + ++ + ++ + ++ +++ ++ ++ +++ ++ ++ ++ + + ++ + + +++ + + Sau ngày nuôi cấy: (-) khuẩn lạc không phát triển; (+) khuẩn lạc phát triển; (++) khuẩn lạc phát triển vừa; (+++) khuẩn lạc phát triển mạnh 124 STT Khả cố định đạm/hòa tan lân Chỉ hòa tan lân Chỉ cố định đạm Cả hai khả Không Số lƣợng 18 T lệ 15% 12% 55% 18% Bảng 7a Đƣờng kính vòng halo dòng vi khuẩn đất vùng rễ Đƣờng kính vòng halo đơn vị (cm (đo ngày thứ STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Dòng vi khuẩn LM 02 LM 06 PT 07 LT 08 PT 09 LM 10 PT 11 LM 13 LT 16 LT 18 LM 27 LM 28 LT 29 PT38 BA08 TX09 MC12 BA15 BA16 BA24 SB01 SB02 SH03 SH05 ST07 SH10 SH11 SH32 Nghiệm thức 1.8 0.8 0.8 0.6 1.5 0.4 0.2 0.6 0.4 0.6 0.3 0 0.6 0.8 0.8 0.4 0.4 0.7 0.8 0.6 0.6 0.4 0.7 0.8 1.3 Nghiệm thức 2 0.7 0.5 0.5 1.6 0.4 0.4 0.5 0.3 0.4 0.2 0 0.4 0.4 0.8 0.8 0.4 0.5 0.6 0.9 0.6 0.5 0.6 0.9 0.8 1.5 Nghiệm thức 2.1 0.6 0.6 0.6 1.8 0.6 0.3 0.5 0.5 0.7 0.4 0 0.4 0.8 0.9 0.8 0.5 0.5 0.6 0.8 0.8 0.4 0.9 0.9 1.5 Giá trị Độ lệch trung chuẩn bình 0.00 0.00 1.97 0.15 0.70 0.10 0.63 0.15 0.57 0.06 1.63 0.15 0.47 0.12 0.30 0.10 0.53 0.06 0.40 0.10 0.57 0.15 0.30 0.10 0.00 0.00 0.00 0.00 0.47 0.12 0.67 0.23 0.83 0.06 0.87 0.12 0.43 0.06 0.47 0.06 0.63 0.06 0.90 0.10 0.67 0.12 0.63 0.15 0.47 0.12 0.83 0.12 0.83 0.06 1.43 0.12 125 Bảng 7b Đƣờng kính vòng halo dòng vi khuẩn nội sinh Đƣờng kính vòng halo đơn vị (cm (đo ngày thứ STT 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Dòng vi khuẩn Nghiệm thức Nghiệm thức 0.8 0.9 1.3 1.5 1.3 0.6 0.8 1 0.8 0.8 0.8 0 RL02 RM19 RP30 TM33 TP35 TL36 TP37 TP38 TL46 TP47 TP48 TM49 TM50 RM57 RC06 RH10 TT13 RT26 Nghiệm thức 1.2 1 1.9 1.6 1.5 0.5 0.8 1.2 1.2 0.9 0.6 0 1.1 0.9 0.9 1.1 1.8 1.5 0.7 0.9 1.1 1.1 0.7 0.9 0.7 0 Giá trị Độ lệch trung chuẩn bình 1.10 0.10 0.00 0.00 0.90 0.10 0.93 0.06 1.97 0.06 1.13 0.15 1.63 0.15 1.43 0.12 0.60 0.10 0.00 0.00 0.83 0.06 1.10 0.10 1.10 0.10 0.80 0.10 0.90 0.10 0.70 0.10 0.00 0.00 0.00 0.00 Bảng 8a Đƣờng kính vòng phân giải lân dòng vi khuẩn đất vùng rễ STT 10 Đk khuẩn lạc 0.2 1.2 0.6 0.5 0.5 0.9 0.4 1.2 0.3 0.3 Dòng vi khuẩn LM 02 LM 06 PT 07 LT 08 PT 09 LM 10 PT 11 LM 13 LT 16 LT 18 Đƣờng kính vòng halo đơn vị (cm (đo ngày thứ 10) NT1 0.3 0.6 0.8 0.5 0.9 0.4 1.6 0.3 1.5 NT2 0.2 1.9 0.6 1.2 0.5 0.9 0.4 1.3 0.3 1.3 NT3 0.3 2.1 0.6 0.5 0.9 0.6 1.5 0.4 1.4 Giá trị trung bình 0.27 2.00 0.60 1.00 0.50 0.90 0.47 1.47 0.33 1.40 Độ lệch chuẩn 0.06 0.10 0.00 0.20 0.00 0.00 0.12 0.15 0.06 0.10 126 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 0.5 0.2 0.1 0.2 0.2 0.5 0.2 0.5 0.3 0.4 0.3 0.8 0.5 0.4 0.2 0.5 0.5 0.6 1.6 0.1 0.2 0.6 0.8 0.8 0.4 0.4 0.7 1.4 0.6 0.7 0.4 0.7 0.8 1.7 LM 27 LM 28 LT 29 PT38 BA08 TX09 MC12 BA15 BA16 BA24 SB01 SB02 SH03 SH05 ST07 SH10 SH11 SH32 100% đk khuẩn lạc >100% - 200% đk khuẩn lạc >200% đk khuẩn lạc 0.4 1.5 0.1 0.2 0.8 0.9 0.8 0.8 0.4 0.5 0.6 1.4 0.6 0.7 0.6 0.9 0.8 1.8 0.6 1.3 0.1 0.3 0.6 0.8 0.9 0.8 0.3 0.5 0.6 1.5 0.8 0.8 0.4 0.9 0.9 1.5 0.53 1.47 0.10 0.23 0.67 0.83 0.83 0.87 0.37 0.47 0.63 1.43 0.67 0.73 0.47 0.83 0.83 1.67 0.12 0.15 0.00 0.06 0.12 0.06 0.06 0.12 0.06 0.06 0.06 0.06 0.12 0.06 0.12 0.12 0.06 0.15 14% 64% 21% Bảng 8b Đƣờng kính vòng phân giải lân dòng vi khuẩn nội sinh STT 10 11 Đk khuẩn lạc 1.0 0.3 0.4 0.5 0.4 0.6 0.2 1.2 0.3 1.0 0.2 Dòng vi khuẩn RL02 RM19 RP30 TM33 TP35 TL36 TP37 TP38 TL46 TP47 TP48 Đƣờng kính vòng halo đơn vị (cm (đo ngày thứ 10) NT1 0.4 0.6 1.2 0.9 1.1 1.2 0.5 0.6 NT2 0.3 0.8 0.9 1.5 0.8 1.2 1.2 0.6 0.5 NT3 0.3 0.7 1.2 1.3 1.1 1.3 0.6 0.4 Giá trị trung bình 1.00 0.33 0.70 1.03 1.33 0.90 1.13 1.23 0.57 1.00 0.50 Độ lệch chuẩn 0.00 0.06 0.10 0.15 0.15 0.10 0.06 0.06 0.06 0.00 0.10 127 12 13 14 15 16 17 18 0.3 0.7 0.2 0.4 0.2 0.2 1.0 0.5 0.7 0.4 0.6 0.4 0.3 TM49 TM50 RM57 RC06 RH10 TT13 RT26 100% đk khuẩn lạc >100% - 200% đk khuẩn lạc >200% đk khuẩn lạc 0.4 0.7 0.5 0.8 0.3 0.2 0.4 0.9 0.5 0.6 0.4 0.2 0.43 0.77 0.47 0.67 0.37 0.23 1.00 0.06 0.12 0.06 0.12 0.06 0.06 0.00 16% 56% 28% Bảng 9a Khả phát triển môi trƣờng không đạm vi khuẩn đất vùng rễ STT Dòng Có bổ sung bromothymol blue vi khuẩn 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Thornton PT 01 PT 07 + (vàng) - PT 09 PT 11 PT 23 LM 28 LT 29 - MC04 BA15 TX19 BA24 SB02 SH03 SH04 SH05 ST14 SB15 ST18 SB21 ST29 SH35 + (xanh) + (xanh) + (vàng) + (Hơi vàng) + (xanh) + (Rất vàng) + (Hơi vàng) + (xanh) + (Rất vàng) + (xanh) + (vàng) + (Hơi vàng) + (vàng) - LGI LGI + (Hơi vàng) + (vàng) + (xanh) + (vàng) + (xanh) + (vàng) + (Hơi vàng) + (Hơi vàng) + (Hơi vàng) + (Hơi vàng) + (Rất vàng) + (xanh) + (xanh) + (xanh) + (vàng) + (Hơi vàng) + (Hơi vàng) - + + + + + + + + + + + + + + + + + + 128 Không mọc Thornton pH 6.8 Hơi vàng Xanh Rất vàng Vàng Tổng cộng 21 21 18 21 LGI pH 6.8 LGI pH 5.5 Không mọc Burk Thornton pH 6,8 LGI pH 6,8 LGI pH 5,5 Mọc 0% 100% 33% 19% 14% 67% 81% 86% Bảng 9b Khả phát triển môi trƣờng không đạm vi khuẩn đất vùng rễ STT Dòng vi khuẩn 10 11 12 13 14 RL02 RP30 TP34 TL36 TM50 RL55 TP56 RM57 RC06 RB02 RH10 RB11 TT13 RB32 Có bổ sung bromothymol blue Thornton + (Hơi vàng) + (Hơi vàng) + (Rất vàng) + (vàng) + (xanh) + (xanh) - LGI LGI + (xanh) + (Hơi vàng) + (Vàng) + (Hơi vàng) + (Vàng) + (Rất vàng) + + (Hơi vàng) - + + + + + + + + + + + + + 129 Không mọc Thornton pH 6.8 Hơi vàng Xanh Rất vàng Vàng Tổng cộng 2 1 14 14 13 14 LGI pH 6.8 LGI pH 5.5 Không mọc Burk Thornton pH 6,8 LGI pH 6,8 LGI pH 5,5 Mọc 0% 100% 57% 44% 7% 43% 56% 93% [...]... (Cao Ngọc Điệp, 2011) Đề tài: “KHẢO SÁT VI KHUẨN VÙNG RỄ VÀ VI KHUẨN NỘI SINH Ở CÂY NGÔ (Zea mays) TRỒNG TẠI ĐÔNG NAM BỘ” được thực hiện nhằm bước đầu phân lập và khảo sát đặc điểm của một số vi khuẩn vùng rễ và vi khuẩn nội sinh cây Ngô trồng tại các loại đất chính của Đông Nam Bộ như đất đỏ, đất xám, đất đen Trong đó, đặc biệt quan tâm đến khả năng cố định đạm và hòa tan lân khó tan của các dòng... trồng Ngô, 2012) Hiện nay, căn cứ vào các điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng đất đai, tập quán canh tác, mùa vụ, người ta chia vùng trồng Ngô nước ta làm 8 vùng chính: Vùng Ngô đồng bằng Bắc Bộ (đồng bằng sông Hồng), vùng Ngô Đông Bắc Bắc Bộ, vùng Ngô Tây Bắc Bắc Bộ, vùng Ngô Bắc Trung Bộ, vùng Ngô Nam Trung Bộ, vùng Ngô Tây Nguyên, vùng Ngô Đông Nam Bộ, vùng Ngô đồng bằng sông Cửu Long Trong đó, vùng Ngô. .. hồi Sinh học (Bioremediation/ Phytoremediation) , v.v 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu nhằm hai mục tiêu chính là: - Xác định mật số vi khuẩn đất vùng rễ Ngô - Bước đầu tuyển chọn các vi khuẩn đất vùng rễ và vi khuẩn nội sinh trong cây Ngô có khả năng cố định đạm và hòa tan lân khó tan 3 1.3 Đối tƣợng và phạm vi nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu bao gồm các vi khuẩn đất vùng rễ và vi khuẩn nội sinh. .. phần bổ sung vào sự đánh giá quan hệ “đất – vi sinh vật – cây trồng ở các loại đất trồng chính của vùng Đông Nam Bộ Nghiên cứu này còn cung cấp một bộ sưu tập giống cho các khảo sát sâu hơn về các đặc tính quý khác của các vi sinh vật vùng rễ và vi sinh vật nội sinh cây Ngô nhằm có thể ứng dụng vào thực tiễn sản xuất phân bón vi sinh hoặc các chế phẩm thuộc các lĩnh vực khác như Kiểm soát Sinh học (Biological... phủ bề mặt và bón phân xanh khi gieo trồng trên đất xám Khảo sát trên không bao hàm ảnh hưởng của các vi sinh vật có quan hệ tích cực đến sự sinh trưởng và phát triển của cây trồng, trong đó có vi khuẩn sinh vật nội sinh thực vật (endophytic bacteria) và vi khuẩn vùng rễ (rhizobacteria) Mà như đã biết, bộ ba “đất, thực vật và vi sinh vật đất” có quan hệ tương tác chặt chẽ 2 Trong đó, vi sinh vật đất... Cửu Long; phía Đông - Đông Nam giáp với biển Đông và Đồng bằng sông Cửu Long; phía Đông giáp Tây nguyên và Duyên hải Nam Trung Bộ Về đơn vị hành chính, vùng Đông Nam Bộ gồm 6 tỉnh thành: Bình Phước, Bình Dương, Tây Ninh, Đồng Nai, Bà RịaVũng Tàu và Thành phố Hồ Chí Minh 7 (http:/ /vi. wikipedia.org/wiki /Đông _Nam_ Bộ_ (Vi t _Nam) , 30/5/2013) Hình 2.2 Bản đồ hành chính vùng Đông Nam Bộ, Vi t Nam (Nguồn: http://img.khudothimoi.com/images/dulieu/1/ban-do-viet -nam- 64-tinhthanh-01.jpg)... ảnh hưởng quan trọng đến cấu tượng đất và năng suất cây trồng Vi sinh vật vùng rễ, nhất là vi khuẩn vùng rễ đã mang lại nhiều lợi ích cho cây trồng, đặc biệt là kích thích sự tăng trưởng của thực vật Chính vì vậy, những vi khuẩn này được gọi chung là vi khuẩn rễ thúc đẩy sự tăng trưởng của thực vật Plant Growth Promoting Rhizobacteria, gọi tắt là PGPR Vùng rễ còn là nơi xuất phát của nhiều vi khuẩn. .. và vi khuẩn nội sinh trong cây Ngô thuộc các giống Ngô nếp (Zea mays var Ceratina), Ngô tẻ (Zea mays var Indurata), Ngô ngọt (Zea mays var Rugosa, Zea mays var Saccharata) và các giống Ngô lai được trồng phổ biến tại ba loại đất chính là đất đỏ, đất xám và đất đen của vùng Đông Nam Bộ, Vi t Nam Nghiên cứu tập trung vào hai khả năng của các dòng vi khuẩn thu được: cố định đạm và hòa tan phosphorite 1.4... trùng (http://vietbao.vn , 28/4/2012) 2.2 Hiện trạng sản xuất Ngô của vùng Đông Nam Bộ 2.2.1 Đặc điểm khí hậu, thổ nhƣỡng vùng Đông Nam Bộ Đông Nam Bộ trải dài từ 105o 49’ đến 107o 35’ kinh độ Đông và từ 10o 20’ đến 12o 17’vĩ độ Bắc Tổng diện tích vùng khoảng 2,34 triệu ha (chiếm khoảng 20,3% tổng diện tích đất Vi t Nam) Phía Bắc và phía Tây Bắc của Đông Nam Bộ giáp với Cambodia; phía Tây Nam giáp với... suất bình quân của vùng là 52,0 tạ/ha và sản lượng đạt 422,7 nghìn tấn (Trung tâm khuyến nông Quốc gia, 2010) Ở Đồng Nai, Ngô là cây trồng chính và được trồng nhiều trên loại đất đen (luvisols) Trong khi đó, tại Bà Rịa – Vũng Tàu có nhiều huyện trồng Ngô trên đất đỏ (ferralsols) và đất trồng Ngô tại Tây Ninh cũng là loại đất đặc trưng của vùng chính là đất xám (acrisols) Ở vùng Đông Nam Bộ, những hạn chế ... chia vùng trồng Ngô nước ta làm vùng chính: Vùng Ngô đồng Bắc Bộ (đồng sông Hồng), vùng Ngô Đông Bắc Bắc Bộ, vùng Ngô Tây Bắc Bắc Bộ, vùng Ngô Bắc Trung Bộ, vùng Ngô Nam Trung Bộ, vùng Ngô Tây... dòng vi khuẩn nội sinh Ngô 71 23 Hình 4.12 Vòng halo số dòng vi khuẩn đất vùng rễ vi khuẩn nội sinh Ngô .73 24 Hình 4.13 Vòng suốt số dòng vi khuẩn đất vùng rễ vi khuẩn nội sinh. .. chất sinh trưởng thực vật, v.v Một số dòng ưu vi t tuyển chọn để đưa vào sản xuất phân bón sinh học (Cao Ngọc Điệp, 2011) Đề tài: “KHẢO SÁT VI KHUẨN VÙNG RỄ VÀ VI KHUẨN NỘI SINH Ở CÂY NGÔ (Zea mays)