Phân lập và khảo sát đặc tính của vi khuẩn nội sinh ở cây trinh nữ (Mimosa pudica L.) tại tỉnh Trà Vinh

Header Page of 126 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC TRẦN TRỌNG HIẾU PHÂN LẬP VÀ KHẢO SÁT ĐẶC TÍNH CỦA VI KHUẨN NỘI SINH Ở CÂY TRINH NỮ (Mimosa pudica L.) TẠI TỈNH TRÀ VINH LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CAO HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số ngành: 60 42 02 01 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS NGUYỄN HỮU HIỆP 2015 Footer Page of 126 Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page of 126 TÓM TẮT Từ lâu thuốc kháng sinh sử dụng điều trị bệnh vi khuẩn Sau thời gian, nhóm vi khuẩn kháng lại thuốc Tuy nhiên, nhiều dược liệu lại không gặp phải bất lợi Vì vậy, phân lập khảo sát đặc tính vi khuẩn nội sinh Trinh nữ tỉnh Trà Vinh thực Tiến hành khảo sát khả cố định đạm theo phương pháp Indophenol blue, tổng hợp IAA theo phương pháp Salkowski, hòa tan lân khó tan hoạt tính kháng khuẩn phương pháp khuếch tán giấy thấm Kết nghiên cứu có 44 dòng vi khuẩn nội sinh phân lập từ Trinh nữ tỉnh Trà Vinh Đa số dòng vi khuẩn có dạng hình que, gram âm có khả chuyển động Ngoài ra, chúng có đặc tính cố định đạm, tổng hợp IAA hòa tan lân khó tan Kết khảo sát khả cố định đạm tổng hợp IAA vi khuẩn cho thấy dòng vi khuẩn tổng hợp lượng đạm IAA định vào ngày sau chủng Lượng đạm IAA tăng cao vào ngày giảm dần vào ngày sau chủng Trong đó, dòng TH4 có khả cố định lượng đạm cao (0,68 µg/mL) Nồng độ IAA cao 51,8 µg/mL (do dòng RH5 tổng hợp) Hai mươi chín dòng vi khuẩn có khả hòa tan lân khó tan Kết thử hoạt tính kháng khuẩn loài vi khuẩn Aeromonas hydrophila, Escherichia coli Staphylococcus aureus cho thấy có 16 dòng có tính kháng với Aeromonas hydrophila, có 12 dòng có tính kháng với Escherichia coli, có dòng có tính kháng với Staphylococcus aureus, có dòng có tính kháng với Aeromonas hydrophila Escherichia coli, có dòng có tính kháng với Aeromonas hydrophila Staphylococcus aureus, có dòng có tính kháng với loài vi khuẩn Aeromonas hydrophila, Escherichia coli Staphylococcus aureus Hai dòng vi khuẩn nhận diện cấp độ loài phương pháp giải trình tự vùng gene 16S-rRNA Dòng NH11 nhận diện Klebsiella pneumoniae (độ đồng hình 98%) Dòng TH10 có độ đồng hình 99% với Bacillus megaterium Từ khóa: Bacillus megaterium, Trinh nữ, kháng khuẩn, Klebsiella pneumoniae, vi khuẩn nội sinh Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page of 126 iii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page of 126 ABSTRACT Synthetic antibiotics have been used for a long time to treat bacterial pathogen After sometime bacteria could resist to antibiotics However, several medicinal plants have been used instead of synthetic antibiotics but they did not have this problem Therefore, isolation and examine characteristics of endophytic bacteria from Mimosa pudica L cultivated in Tra Vinh province was carried out Conduct examine nitrogen fixation ability of endophytic bacterial strains followed by Indolphenol blue method, Indole-3Acetic acid (IAA) synthesis followed by Salkowski method, solubilize insoluble phosphate to soluble and antibacterial activity by blotter diffusion method Forty-four endophytic bacterial strains were isolated from samples of Mimosa pudica L cultivated of Tra Vinh province Almost bacterial cells had rod shape, Gram negative, motile All strains were able to fix nitrogen, synthesized IAA and could solubilize insoluble phosphate to soluble The results showed that these endophytes could produce ammonium and IAA in the medium after 2nd days The highest amount of ammonium and IAA were produced at day fourth and considerably decreased at 6th days The strain TH4 had the highest ability of N-fixing with 0,68 µg/mL, while strain RH5 gave highest amount of IAA at 51,8 µg/mL Twenty-nine strains could solubilize insoluble phosphate The results showed that these endophytes could against Aeromonas hydrophila, Escherichia coli and Staphylococcus aureus Sixteen strains showed antibacterial activity against Aeromonas hydrophila, twelve strains could against Escherichia coli and seven strains showed antibacterial activity against Staphylococcus aureus, eight strains showed antibacterial activity against Aeromonas hydrophila and Escherichia coli, four strains showed antibacterial activity against Aeromonas hydrophila and Staphylococcus aureus and one strains showed antibacterial activity against Aeromonas hydrophila, Escherichia coli and Staphylococcus aureus Comparing the nucleotide sequences in 16S ribosomal RNA with the gene bank database, three isolates were indentified to the species level The strain NH11 was determined as Klebsiella pneumoniae (with 98% homogeneous level) and the strain TH10 had 99% homogeneous level, similarity to Bacillus megaterium Key words: antibacterial activity, Bacillus megaterium, endophytes, Klebsiella pneumoniae, Mimosa pudica L Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page of 126 iv Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page of 126 MỤC LỤC Trang CHẤP THUẬN CỦA HỘI ĐỒNG i LỜI CẢM TẠ ii TÓM TẮT iii ABSTRACT iv TRANG CAM KẾT KẾT QUẢ v MỤC LỤC vi DANH SÁCH BẢNG x DANH SÁCH HÌNH xi DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xii CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược tỉnh Trà Vinh 2.1.1 Vị trí địa lý 2.1.2 Điều kiện đất đai 2.1.3 Điều kiện sông ngòi 2.1.4 Điều kiện thời tiết, khí hậu 2.2 Sơ lược Trinh nữ 2.2.1 Nguồn gốc, phân bố phân loại 2.2.2 Mô tả thực vật 2.2.3 Một số công dụng theo kinh nghiệm dân gian 2.2.4 Một số nghiên cứu khoa học nước 2.2.5 Một số nghiên cứu khoa học nước 2.2.6 Thành phần hóa học Trinh nữ 10 2.2.7 Tính kháng khuẩn Trinh nữ 14 2.2.8 Một số vi khuẩn nội sinh phân lập từ chi Trinh nữ 14 2.3 Sơ lược vi khuẩn nội sinh thực vật 16 2.3.1 Một số đặc tính vi khuẩn nội sinh 16 2.3.2 Một số giống vi khuẩn nội sinh thường gặp 21 2.4 Sơ lược vi khuẩn gây bệnh sử dụng nghiên cứu 25 Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page of 126 vi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page of 126 2.4.1 Vi khuẩn Escherichia coli 25 2.4.2 Vi khuẩn Aeromonas hydrophila 25 2.4.3 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 26 2.5 Sơ lược kỹ thuật Polymerase Chain Reaction 27 2.6 Sơ lược kỹ thuật điện di 27 2.7 Giải mã trình tự gene vi khuẩn nội sinh 28 2.8 Phần mềm phân tích trình tự gene giải mã 28 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 29 3.2 Phương tiện nghiên cứu 29 3.2.1 Vật liệu 29 3.2.2 Dụng cụ 30 3.2.3 Trang thiết bị 30 3.2.4 Hóa chất 31 3.3 Phương pháp nghiên cứu 33 3.3.1 Phương pháp phân lập vi khuẩn nội sinh 33 3.3.2 Quan sát đo kích thước tế bào vi khuẩn nội sinh 36 3.3.3 Nhuộm Gram vi khuẩn nội sinh 37 3.4 Khảo sát số đặc tính vi khuẩn nội sinh 38 3.4.1 Khảo sát khả cố định đạm dòng vi khuẩn nội sinh phân lập Trinh nữ 38 3.4.2 Khảo sát khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn nội sinh phân lập Trinh nữ 41 3.4.3 Khảo sát khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh phân lập Trinh nữ 43 3.4.4 Khảo sát khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn nội sinh phân lập Trinh nữ 44 3.5 Tuyển chọn, định danh dòng vi khuẩn nội sinh triển vọng 45 3.5.1 Chiết tách DNA dòng vi khuẩn nội sinh triển vọng 45 3.5.2 Định danh dòng vi khuẩn nội sinh kỹ thuật Sinh học Phân tử 46 3.6 Phương pháp xử lý số liệu 47 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 48 4.1 Kết phân lập vi khuẩn nội sinh 48 4.1.1 Đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn nội sinh 50 Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page of 126 vii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page of 126 4.1.2 Đặc điểm tế bào dòng vi khuẩn nội sinh 52 4.2 Kết khảo sát khả cố định đạm dòng vi khuẩn nội sinh 54 4.2.1 Khả cố định đạm dòng vi khuẩn nội sinh nốt rễ (nhóm 1) 54 4.2.2 Khả cố định đạm dòng vi khuẩn nội sinh rễ (nhóm 2) 56 4.2.3 Khả cố định đạm dòng vi khuẩn nội sinh thân (nhóm 3) 57 4.2.4 Khả cố định đạm dòng vi khuẩn nội sinh (nhóm 4) 58 4.2.5 So sánh khả cố định đạm dòng vi khuẩn nội sinh triển vọng 59 4.3 Kết khảo sát khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn nội sinh 61 4.3.1 Khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn nội sinh nốt rễ (nhóm 1) 61 4.3.2 Khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn nội sinh rễ (nhóm 2) 62 4.3.3 Khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn nội sinh thân (nhóm 3) 64 4.3.4 Khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn nội sinh (nhóm 4) 65 4.3.5 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn nội sinh triển vọng 67 4.4 Kết khảo sát khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh 68 4.4.1 Khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh nốt rễ (nhóm 1) 68 4.4.2 Khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh rễ (nhóm 2) 69 4.4.3 Khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh thân (nhóm 3) 70 4.4.4 Khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh (nhóm 4) 71 4.4.5 So sánh khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn nội sinh triển vọng 72 4.5 Kết khảo sát khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn nội sinh 73 4.5.1 Khả kháng với vi khuẩn Aeromonas hydrophila 74 4.5.2 Khả kháng với vi khuẩn Escherichia coli 75 4.5.3 Khả kháng với vi khuẩn Staphylococcus aureus 77 4.6 Kết định danh dòng vi khuẩn nội sinh kỹ thuật Sinh học Phân tử 80 Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page of 126 viii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page of 126 4.6.1 Trình tự gene mã hóa 16S-rRNA dòng NH11 81 4.6.2 Trình tự gene mã hóa 16S-rRNA dòng TH10 83 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 85 5.1 Kết luận 85 5.2 Đề xuất 85 TÀI LIỆU THAM KHẢO 86 PHỤ LỤC 100 Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page of 126 ix Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page of 126 DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1: Độ ẩm hàm lượng tro xác định Trinh nữ 11 Bảng 2.2: Kết phân tích quang phổ phận Trinh nữ 11 Bảng 2.3: Thành phần chất béo Trinh nữ 13 Bảng 3.1: Thành phần môi trường Nfb 32 Bảng 3.2: Thành phần môi trường PDA 32 Bảng 3.3: Thành phần môi trường NBRIP 33 Bảng 3.4: Thành phần hóa chất thực phản ứng PCR 46 Bảng 3.5: Quy trình nhiệt độ phản ứng PCR 46 Bảng 4.1: Nguồn gốc dòng vi khuẩn phân lập môi trường PDA 49 Bảng 4.2: Đặc điểm khuẩn lạc môi trường PDA sau 24 51 Bảng 4.3: Đặc điểm tế bào vi khuẩn phân lập môi trường PDA 53 Bảng 4.4: Hàm lượng ammonium (µg/mL) dòng vi khuẩn nốt rễ 55 Bảng 4.5: Hàm lượng ammonium (µg/mL) dòng vi khuẩn thân 58 Bảng 4.6: Hàm lượng ammonium (µg/mL) dòng vi khuẩn triển vọng 60 Bảng 4.7: Hàm lượng IAA (µg/mL) dòng vi khuẩn nốt rễ 62 Bảng 4.8: Hàm lượng IAA (µg/mL) dòng vi khuẩn thân 64 Bảng 4.9: Hàm lượng IAA (µg/mL) dòng vi khuẩn triển vọng 67 Bảng 4.10: Hiệu hòa tan lân (E%) dòng vi khuẩn nốt rễ 69 Bảng 4.11: Hiệu hòa tan lân (E%) dòng vi khuẩn thân 71 Bảng 4.12: Hiệu hòa tan lân (E%) dòng vi khuẩn triển vọng 72 Bảng 4.13: Đường kính vòng vô khuẩn (mm) dòng VKNS kháng A.hydrophila 74 Bảng 4.14: Đường kính vòng vô khuẩn (mm) dòng VKNS kháng S.aureus 77 Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page of 126 x Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page of 126 DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1: Bản đồ địa lý tỉnh Trà Vinh Hình 2.2: Cây Trinh nữ Mimosa pudica L Hình 3.1: Các phận Trinh nữ thu xử lý 29 Hình 3.2: Các phận Trinh nữ xử lý trước phân lập 34 Hình 3.3: Phương pháp pha loãng dịch mẫu 35 Hình 3.4: Dung dịch xây dựng đường chuẩn đạm 39 Hình 3.5: Dung dịch xây dựng đường chuẩn IAA 42 Hình 3.6: Sơ đồ khảo sát khả kháng khuẩn 44 Hình 3.7: Chu kỳ nhiệt độ phản ứng PCR 47 Hình 4.1: Vòng pellicle xuất sau ngày chủng dịch vi khuẩn 48 Hình 4.2: Khuẩn lạc dòng NH5 LH9 phân lập môi trường PDA 50 Hình 4.3: Vi khuẩn Gram âm (TH11) Gram dương (TH8) vật kính X100 kính hiển vi điện tử 52 Hình 4.4: Hàm lượng ammonium (µg/mL) dòng vi khuẩn rễ 56 Hình 4.5: Hàm lượng ammonium (µg/mL) dòng vi khuẩn 59 Hình 4.6: Hàm lượng IAA (µg/mL) dòng vi khuẩn rễ 63 Hình 4.7: Hàm lượng IAA (µg/mL) dòng vi khuẩn 66 Hình 4.8: Hiệu hòa tan lân (E%) dòng vi khuẩn rễ 70 Hình 4.9: Hiệu hòa tan lân (E%) dòng vi khuẩn 72 Hình 4.10: Vòng sáng halo dòng LH7 RH5 sau ngày 73 Hình 4.11: Vòng vô khuẩn dòng TH3, TH10 LH10 kháng với A.hydrophila 75 Hình 4.12: Đường kính vòng vô khuẩn (mm) dòng VKNS kháng E.coli 76 Hình 4.13: Vòng vô khuẩn dòng TH13 LH10 kháng với E.coli 76 Hình 4.14: Vòng vô khuẩn dòng TH2 TH3 kháng với S.aureus 78 Hình 4.15: Trình tự gen mã hóa 16S-rRNA dòng NH11 81 Hình 4.16: Trình tự gen mã hóa 16S-rRNA dòng TH10 83 Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page of 126 xi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page 10 of 126 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT - 16S-rRNA 16S ribosomal Ribonucleic acid (Vùng gen mã hóa 16S-rRNA) - A.hydrophila Aeromonas hydrophila (Vi khuẩn Aeromonas hydrophila) - BLAST Basic Local Alignment Search Tool (Công cụ dùng để so sánh trình tự chuỗi nucleotides) - bp Base pairs (Cặp bazơ nitơ) - ĐBSCL Đồng sông Cửu Long - ĐHCT Đại học Cần Thơ - DMSO Dimethyl sulfoxide (Hợp chất hữu chứa lưu huỳnh) - DNA Deoxyribonucleic acid (Vật liệu di truyền cấp độ phân tử) - dNTPs Deoxynucleotide Triphosphates (Hỗn hợp chứa loại nucleotides) - E.coli Escherichia coli (Vi khuẩn Escherichia coli) - IAA Indole-3-Acetic acid (Kích thích tố tăng trưởng thực vật, Auxin tự nhiên) - kb Kilo base pairs (1.000 cặp bazơ nitơ) - NBRIP National Botanical Research Institute’s Phosphate (Môi trường chứa lân khó tan NBRIP) - NCBI National Center for Biotechnology Information (Trung tâm Thông tin Công nghệ Sinh học Mỹ) - Nfb Nitrogen fixing bacteria (Môi trường không đạm Nfb) - OD Optical Density (Độ hấp thu quang phổ) - PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại gen, phản ứng chuỗi trùng hợp) Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page 10 of 126 xii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page 11 of 126 - PDA Potato Dextrose Agar (Môi trường dinh dưỡng PDA) - S.aureus Staphylococcus aureus (Vi khuẩn Staphylococcus aureus) - Stt Số thứ tự - Taq polymerase Thermus aquaticus polymerase (Men polymerase trích từ vi khuẩn Thermus aquaticus) - UV Ultra violet (Tia cực tím, tia tử ngoại) - VK Vi khuẩn - VKNS Vi khuẩn nội sinh Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page 11 of 126 xiii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page 12 of 126 CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Vai trò thuốc đời sống người chứng minh từ hàng ngàn năm qua Ngày nay, khoa học kỹ thuật phát triển ngành tổng hợp hữu đạt trình độ cao sản xuất nhiều loại thuốc chữa bệnh tốt, kháng sinh tân dược sử dụng rộng rãi phổ biến nhiều nước giới nhằm điều trị bệnh lý khác Tuy nhiên, bên cạnh hiệu điều trị hầu hết thuốc kháng sinh tân dược có nguy gây phản ứng không mong muốn cho người bệnh gây tác dụng phụ tức thời có biến chứng lâu dài, Nguyên nhân tượng phản ứng miễn dịch thể thuốc sản phẩm chuyển hóa từ thuốc Ngoài ra, số phản ứng khó dự đoán trước phản ứng dị ứng tình trạng không dung nạp thuốc thường xảy Loại phản ứng thường ảnh hưởng đến số hệ thống quan thể da, niêm mạc, gan, tế bào máu, dẫn đến tai biến nguy hiểm nhiều loại kháng sinh gây ra, có dẫn đến tử vong Trong thời đại ngày nay, người có xu hướng sử dụng nguồn thảo mộc mà thiên nhiên ban tặng để tăng cường sức khỏe, chữa bệnh hiệu mà không gây tác dụng phụ lại vừa có lợi mặt kinh tế Thuốc thảo dược có chứa hoạt chất tự nhiên đóng vai trò quan trọng việc phòng chống bệnh tật, trì sức khỏe nâng cao chất lượng sống cho người với nhiều thành phần có hoạt tính sinh học dược lý quan trọng, có giá trị chế tạo thành loại thuốc, gia vị, thức uống, mỹ phẩm, Việc sử dụng kháng sinh có nguồn gốc thiên nhiên nhiều người hướng đến có đặc điểm bật độc, không gây tai biến nguy hiểm Cho đến chưa có tài liệu nghiên cứu cho thấy tượng kháng thuốc sử dụng loại thuốc có nguồn gốc thiên nhiên Mặc dù hiệu lực kháng khuẩn chúng không mạnh loại kháng sinh tân dược đủ để chữa khỏi bệnh Vì thế, thời gian gần đây, việc tập trung nghiên cứu loại kháng sinh có nguồn gốc thảo mộc có xu hướng tăng giới cho thấy tiềm to lớn mà chúng mang lại Nước ta có nguồn tài nguyên thực vật vô phong phú quý giá, đề tài hấp dẫn nhà khoa học nước giới Trong đó, Trinh nữ dược liệu phổ biến Đông y cổ truyền sử dụng để điều trị vấn đề bệnh lý Theo Azmi et al (2011) Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page 12 of 126 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn Tốt nghiệp Cao học khóa 20 - 2015 Trường ĐHCT Header Page 13 of 126 tất phận khác Trinh nữ có chứa nhiều chất có hoạt tính sinh học dược lý quan trọng, có tác dụng chống lại bệnh thần kinh, tim mạch, rối loạn tiêu hóa, tiểu đường, chữa lành vết thương, chống oxy hóa, kháng độc, kháng khuẩn kháng nấm Nhiều công trình nghiên cứu khoa học cho thấy trồng thuộc họ đậu (Fabaceae) có chứa nhiều nhóm vi sinh vật nội sinh có lợi trồng vùng rễ kích thích trồng phát triển tốt nhờ chúng có khả cố định đạm, hòa tan lân khó tan, tổng hợp kích thích tố tăng trưởng thực vật IAA hợp chất có khả trực tiếp ức chế số bệnh kích thích trồng sản xuất hợp chất biến dưỡng thứ cấp chống lại tác nhân gây bệnh (Strobel, 2003) Tập đoàn vi sinh vật nội sinh vùng rễ cây, có dược liệu có khả giúp trồng sinh trưởng phát triển tốt Ngoài ra, chúng có khả sản xuất trực tiếp hợp chất kháng khuẩn tự nhiên kích thích trồng ký chủ sản xuất hợp chất biến dưỡng trung gian, hợp chất kháng khuẩn (Hardoim et al., 2008) Ở Việt Nam, chưa có công trình nghiên cứu khoa học vi khuẩn nội sinh (VKNS) Trinh nữ Vì vậy, với lý nêu nên đề tài “Phân lập khảo sát đặc tính vi khuẩn nội sinh Trinh nữ (Mimosa pudica L.) tỉnh Trà Vinh” thực 1.2 Mục tiêu đề tài Phân lập tuyển chọn dòng VKNS Trinh nữ (Mimosa pudica L.) tỉnh Trà Vinh có đặc tính tốt tính kháng khuẩn, khả cố định đạm, tổng hợp IAA, hòa tan lân khó tan nhằm để ứng dụng sản xuất phân vi sinh thay phân bón hóa học phục vụ lĩnh vực nông nghiệp, vừa tăng suất trồng lại vừa giảm chi phí phân bón công lao động, đồng thời giúp hạn chế ô nhiễm môi trường đất canh tác Mặt khác có ứng dụng hiệu lĩnh vực y vi sinh nhằm sản xuất loại thuốc kháng sinh thảo dược thay phần thuốc kháng sinh tân dược có nguồn gốc hóa học, giúp điều trị bệnh người vật nuôi mà không gây tình trạng kháng thuốc hay tác dụng phụ Ngành Công nghệ Sinh học Footer Page 13 of 126 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học ... pháp phân lập vi khuẩn nội sinh 33 3.3.2 Quan sát đo kích thước tế bào vi khuẩn nội sinh 36 3.3.3 Nhuộm Gram vi khuẩn nội sinh 37 3.4 Khảo sát số đặc tính vi khuẩn nội sinh ... tan dòng vi khuẩn nội sinh phân lập Trinh nữ 43 3.4.4 Khảo sát khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn nội sinh phân lập Trinh nữ 44 3.5 Tuyển chọn, định danh dòng vi khuẩn nội sinh triển... nội sinh Trinh nữ (Mimosa pudica L.) tỉnh Trà Vinh thực 1.2 Mục tiêu đề tài Phân lập tuyển chọn dòng VKNS Trinh nữ (Mimosa pudica L.) tỉnh Trà Vinh có đặc tính tốt tính kháng khuẩn, khả cố định