Tách dòng và xác định trình tự gene kháng thể tái tổ hợp kháng tế bào lympho bệnh ung thư vú

Ung thư là một trong những căn bệnh hiểm nghèo có tỉ lệ tử vong cao, đứng thứ hai sau bệnh tim mạch. Hằng năm, trên thế giới có hàng triệu người chết vì ung thư và dường như tỉ lệ mắc bệnh ung thư ngày một cao hơn.

Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 LỜI MỞ ĐẦU Ung thư là một trong những căn bệnh hiểm nghèo có tỉ lệ tử vong cao, đứng thứ hai sau bệnh tim mạch. Hằng năm, trên thế giới có hàng triệu người chết vì ung thư và dường như tỉ lệ mắc bệnh ung thư ngày một cao hơn. Vì rằng căn bệnh này có thể xảy ra với bất kỳ ai và ở bất kỳ cơ quan nào của cơ thể cũng như ở mọi lứa tuổi. Ung thư biểu hiện khi sự kiểm soát quá trình điều hoà sinh trưởng của tế bào bị sai lệch, dẫn đến sự tăng sinh tế bào một cách bất thường, tạo thành các khối u ác tính. Ung thư có thể xảy ra ở bất kỳ bào quan nào, bất kỳ mô nào trong cơ thể. Phụ thuộc vào vị trí xuất hiện của các khối u mà người ta gọi tên các bệnh ung thư khác nhau: ung thư máu xảy ra với các tế bào máu và tế bào mầm, ung thư vú là sự tăng sinh của các tế bào vú, ung thư phổi xảy ra với các tế bào phổi .Ung thư có thể do di truyền, do virus hoặc do các điều kiện ngoại cảnh gây nên như hoá chất, tia tử ngoại . nhưng cho dù bát cứ nguyên nhân nào thì ung thư đều có chung một hậu quả là sự phát triển vô tổ chức của một tế bào hoặc một nhóm tế bào ban đầu và cuối cùng tạo thành các khối u và di căn ở giai đoạn cuối. Một trong những đặc điểm khác biệt của tế bào ung thư với các tế bào bình thường được các nhà khoa học quan tâm đó là các phân tử protein đặc hiệu của tế bào ung thư, chúng là sản phẩm của các gene “đặc biệt” trong tế bào ung thư. Các phân tử protein đặc hiệu của tế bào ung thư hoặc được gắn trên bề mặt màng tế bào hoặc được giải phóng vào hệ tuần hoàn dưới dạng các phân tử tự do. Sử dụng các protein này làm chỉ thị trong chẩn đoán sớm đối với các bệnh ung thư đang được các nhà nghiên cứu đặc biệt quan tâm. Trong số các bệnh ung thư thì một trong những bệnh ung thư phổ biến nhất ở phụ nữ nhiều nước trên thế giới là ung thư vú. Tại Việt nam, theo ghi nhận của Hà nội năm 1998, tỷ lệ ung thư vú chuẩn theo tuổi là 20,3/100.000 dân, đứng đầu trong các ung thư của phụ nữ. Tại thành phố Hồ Chí Minh, tỷ lệ này là 17,1/100.000 dân, 1 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 đứng hàng thứ 2 sau ung thu cổ tử cung. Tỷ lệ mắc ung thư vú đang tăng không chỉ ở Việt Nam mà hầu hết các nước trên thế giới. Vì vậy, ung thư vú chiếm vị trí rất quan trọng trong việc chăm sóc sức khoẻ cộng đồng. Để góp phần xây dựng bộ kit chẩn đoán sớm bệnh ung thư vú, chúng tôi tiến hành nghiên cứu tạo kháng thể kháng lại dòng tế bào ung thư vú. Tuy nhiên, trong khuôn khổ đồ án này, chúng tôi chỉ chú trọng nghiên cứu : “Tách dòng và xác định trình tự gene kháng thể tái tổ hợp kháng tế bào lympho bệnh ung thư vú”. 2 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. SƠ LƯỢC VỀ BỆNH UNG THƯ Ung thư là tên chung dùng để gọi một nhóm bệnh trên 200 loại khác nhau về nguồn gốc của tế bào, căn nguyên, tiên lượng và cách thức điều trị nhưng có những đặc điểm chung, đó là sự phân chia không kiểm soát được của tế bào, khả năng tồn tại và phát triển ở các cơ quan và tổ chức lạ. Các ung thư thường phát triển từ một tế bào ban đầu và phải mất nhiều năm cho tới khi có một kích thước đủ lớn để có thể nhận thấy được. Quá trình phát triển từ một tế bào duy nhất thành một khối ung thư trải qua nhiều giai đoạn. Thông thường, các tế bào lành có một tuổi thọ nhất định và tuân thủ theo một qui luật chung là phát triển – già - chết. Các tế bào chết đi lại được thay thế bằng các tế bào mới. Cơ thể có một cơ chế kiểm soát qui luật một cách chặt chẽ và duy trì số lượng tế bào ở mỗi cơ quan, tổ chức ở mức ổn định. Còn khối u, về cơ bản là do sự phát triển và phân chia tế bào bình thường trở nên quá mức, do đó các tế bào phân chia liên tục và mất kiểm soát. Phân chia tế bào bình thường là quá trình tích cực cần thiết, nó khiến tóc mọc, da tự đổi mới và hàng loạt những điều quan trọng cho sức khoẻ khác. Quá trình phân chia xảy ra theo nhu cầu. Đôi khi có điều gì khiến đó khiến các tế bào sinh sản nhanh hơn như tổn thương hoặc phẫu thuật mà quá trình liền vết thương đòi hỏi các tế bào phân chia nhiều hơn bình thường. Vấn đề then chốt là sự phát triển tế bào để khoẻ mạnh hoặc để thay thế bất cứ là theo nhịp bình thường hay tăng tốc trong lúc khẩn cấp đều được kiểm soát. Ngoài 3 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 ra, mọi tế bào già đi và sẽ chết ở một thời điểm ấn định. Trong ung thư, sự phát triển nói chung mất điều tiết và sự chết của tế bào bị chậm lại, hậu quả là các tế bào ung thư cứ tiếp tục phát triển. Ngoài sự phát triển mất kiểm soát, các tế bào ung thư còn có thể phát triển lan sang các cơ quan xa hơn trong cơ thể và quá trình này gọi là di căn và đây cũng là lý do chính mà ung thư gây ốm và cuối cùng là tử vong. Khi các dòng tế bào ung thư phát triển khắp cơ thể chúng trở thành vật ký sinh sử dụng tất cả chất dinh dưỡng, glucose, và oxy của cơ thể để tiếp tục phát triển. Đó là những lý do giải thích tại sao ung thư giai đoạn cuối thì lại sụt cân và trông rất suy mòn: Tất cả các chất dinh dưỡng đều bị tế bào ung thư sử dụng. Tuỳ thuộc vào cơ quan nào bị ung thư mà chúng nhanh chóng cản trở một số cấu trúc hoặc chức năng sống cònvà dẫn đến tử vong.Bệnh ung thư bắt đầu khi có một tế bào vượt qua cơ chế kiểm soát này của cơ thể, bắt đầu phát triển và sinh sôi không ngừng nghỉ, hình thành một đám tế bào có chung một đặc điểm phát triển vô tổ chức, xâm lấn và chèn ép vào các cơ quan và tổ chức xung quanh. Các tế bào ung thư có liên kết lỏng lẻo, dễ dàng bứt ra khỏi khối u mẹ, theo mạch máu và mạch bạch huyết di cư đến các tổ chức và cơ quan mới, bám vào và tiếp tục sinh sôi nảy nở ( quá trình này gọi là “di căn”). Các ung thư chèn ép hoặc di căn vào các cơ quan giữ chức năng sống của cơ thể như não, phổi, gan, thận . bệnh nhân sẽ tử vong. Chìa khoá để hiểu ung thư là chỉ ra gene kiểm soát sự phát triển, xâm nhập và di căn của tế bào. Cái gì khiến cho các tế bào phát triển? Cái gì khiến chúng ngừng phát triển? Cái gì khiến chúng xâm nhập và di căn? Môi trường ảnh hưởng như thế nào đến sự phát triển của các tế bào? Tất cả các điều này đều được định sẵn trong gene. Ngày nay, người ta đã biết rằng sự phát triển không bình thường của tế bào trong cơ thể được kiểm soát bằng ba nhóm gene: - Nhóm gene sinh trưởng (oncogenes): chịu trách nhiệm về sự phát triển và biệt hoá của tế bào. Nếu nhóm gene này bị tổn thương (biến dị), nó hoạt 4 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 động không theo đúng qui luật và sẽ khiến các tế bào phân chia liên tục và phát triển một cách không kiểm soát được. - Nhóm gene ức chế (oncogene supressors): chịu trách nhiệm ức chế gene sinh trưởng, không cho các tế bào tham gia tuỳ tiện vào chu kì sinh trưởng, Nếu gene này bị mất hoặc bị tổn thương, các gene sinh trưởng bị mất kiểm soát và hoạt động một cách bất thường khiến cho các tế bào sẽ sinh sản bất bình thường. - Nhóm gene sửa chữa: là nhóm gene chịu trách nhiệm điều chỉnh những sai sót trong hoạt động của hai loại gene trên. Nếu loại gene này bị tổn thương thì những biến dị của hai loại gene trên sẽ không được khắc phục và sẽ dẫn đến sự sinh trưởng bất bình thường của tế bào. 1.2.UNG THƯ VÚ Ung thư vú được định nghĩa là bất cứ một u (bướu) ác tính nào có trong vú. Sự phát sinh của ung thư vú, cũng giống như các dạng ung thư khác, là hậu quả của sự rối loạn trong quá trình tái sản xuất tế bào. Tế bào trong cơ thể chúng ta sản xuất và tái sản xuất một cách liên tục. Thông thường, các tế bào “lành mạnh” phân chia và sao chép khi nhận một tín hiệu hoá học. Qui trình phân chia và sao chép này được tiến hành một cách chính xác, với một chu kì gần như bất biến. Nhưng một khi chu kì này bị làm cho rối loạn, cấu trúc DNA bị thay đổi, và các tế bào đột biến bắt đầu không tuân theo qui trình phân chia và sao chép như đã định, và sau cùng là hỗn loạn hệ thống tái sản xuất tế bào. Hậu quả của sự rối loạn sản xuất và sao chép dẫn đến ung thư. Dấu hiệu chính của ung thư vú là một chỗ lồi trong vú. Đôi khi dấu hiệu khác đáng chú ý là một chỗ lồi trong nách, do ung thư lan đến hạch máu trắng. U có thể lan đến xương, phổi, gan. 1.2.1. Nguyên nhân ung thư vú 5 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 Ngun nhân của ung thư vú khơng thể được cắt nghĩa bởi một yếu tố bệnh căn đơn độc. Hơn nữa, tạo ung thư vú có thể coi là hậu quả của sự tích luỹ các tổn thương qua nhiều năm với các tế bào trong một vú. Nói một cách ngắn gọn, có hai loại chấn thương phân tử gây nên ung thư vú: đột biến của DNA và kích thích tăng sinh tế bào. Các đột biến xảy ra trong các gene quan trọng chịu trách nhiệm điều hồ phát triển, chết, biệt hố và phiên mã nhiễm sắc thể của tế bào. Các đột biến có thể được hoạt hố hoặc làm mất hoạt hố các gene bị ảnh hưởng. Mặt khác, tăng sinh làm tăng hiệu quả tạo thành u của các tế bào bằng cách khởi động sự bành trướng của một quần thể tế bào. Kích thích tăng sinh và hoạt động theo hai cơ chế. Các tác nhân sinh phân bào tác động trực tiếp đến sự phân chia và tăng sinh trong khi các tác nhân độc gây tăng sinh trên các tế bào sống để tạo lại quần thể tế bào trong một mơ bị tổn thương. 1.2.2. Tiến triển của bệnh Lúc đầu là sự phát triển mất kiểm sốt của các tế bào giới hạn hồn tồn ở ống dẫn hoặc các tiểu thuỳ của vú ( tổn thương tiền ung thư). Sau đó, có thể thêm đột biến hoặc những thay đổi di truyền học biểu sinh mà những tế bào này có thể phá vỡ ống hoặc tiểu thuỳ vú vào mơ mỡ và mơ xung quanh. Có thể chỉ là do một tế bào gây phá vỡ nhưng một khi nó bắt đầu phân chia và nhân lên thì nhanh chóng trở thành khối u xâm nhập. Trong khi đang phát triển, khối u cần các chất dinh dưỡng, do đó no phát ra những thơng điệp protein gọi là các yếu tố mạch khối u. Những protein này gây hình thành các mạch máu mới để mang chất dinh dưỡng tới cho khối u phát triển. Đó là cách tồn tại hợp lý nhất. Nếu tất cả các bước này xảy ra, khối u sẽ xuất hiện ở vú và hình thành nguồn cấp máu mới. Và những thay đổi về sau khiến các tế bào có thể phá vỡ thần khối u vào mạch máu. Khi đó, tế bào có thể bị chết hoặc tồn tại trong dòng máu và bị hệ 6 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 miễn dịch tiêu diệt. Cuối cùng, nó có thể có những thay đổi khác cho phép nó trốn tránh được hệ miễn dịch. Những tế bào này đi khắp cơ thể và xâm nhập, phát triển ở các cơ quan khác nhau. Tuy nhiên, chúng không xâm nhập vào bất kỳ cơ quan nào mà có những yếu tố ở nội mạc mạch máu, ở những cơ quan nhất định thu hút các tế bào (ung thư vú đặc biệt thu hút tới phổi, gan và xương). Một khi tế bào gắn vào mạch máu ở cơ quan (như phổi) và xuyên qua thành mạch vào cơ quan đó thì có thể hình thành nguồn cấp máu mới dẫn đến các tế bào phát triển nhiều hơn ở phổi và tiếp tục gửi thông điệp mới đến mô phổi xung quanh. Cuối cùng, ung thư vú đã di căn đến phổi. Trong thời gian nhất định, khối u chiếm gần hết không gian cần thiết của phổi và cuối cùng con người sẽ chết. Do vậy, việc ung thư xâm nhập và gây tử vong thực sự không dễ vì phải qua các bước, mỗi bước lại mất một thời gian dài tương đối. 1.2.3. Phân loại ung thư vú 1.2.3.1. Phân loại dựa vào cấu trúc Mỗi vú có khoảng 15 đến 20 “ khu vực”, gọi là “ thuỳ” ; mỗi thuỳ được chia thành nhiều vùng nhỏ, gọi là tiểu thuỳ. Thuỳ và tiểu thuỳ liên kết với nhau bằng những ống dẫn nhỏ. Dựa vào cấu trúc này, ung thư vú được phân thành nhiều loại khác nhau, chủ yếu là: Ung thư ống dẫn sữa có giới hạn ( ductal carcinoma in situ hay còn gọi là DCIS). Như tên gọi, loại ung thư này chỉ giới hạn trong các ống dẫn sữa và không lan sang các mô chung quanh. Loại ung thư này rất khó phát hiện bằng mắt thường, mà chỉ có thể phát hiện qua quang tuyến X. Khoảng 20% các trường hợp ung thư vú là thuộc dạng “ ung thư hiền” này. Ung thư ống dẫn sữa lan rộng ( invasive ductal cancer). Đây là loại ung thư vú thường thấy nhất. Khoảng 70% các trường hợp ung thư vú là thuộc dạng này. Nó thường được biểu hiện dưới hình thức một cục bướu cứng, và thường thấy trong tế bào của các ống dẫn sữa. 7 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 Ung thư miu – xin ( Mucinous carcinoma) cũng là một dạng bướu ác tính, nhưng ung thư này có chứa các tế bào sản xuất chất nhầy, và chất nhầy làm cho cục bướu có màu lóng lánh. Chỉ có khoảng 3% trường hợp ung thư vú thuộc dạng này. Ung thư tiểu thuỳ lan rộng ( invasive lobular carcinoma). Đây là một dạng ung thư hiện diện trong hai đầu ống dẫn sữa hay trong các tiểu thuỳ. Loại ung thư này chiếm khoảng 5% trong các trường hợp ung thư vú. 1.2.3.2. Phân loại mô bệnh học. Những cố gắng để có được một hệ thống phân loại mô bệnh học ung thư biểu mô tuyến vú vừa đơn giản, dễ áp dụng trong chẩn đoán vừa phản ánh bản chất của tổn thương, được thừa nhận rộng rãi luôn luôn là mục tiêu của các nhà giải phẫu bệnh học. Chính vì vậy mà phân loại ung thư biểu mô tuyến vú đã được đề nghị. Từ năm 1968 đến nay, Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) đã đưa ra nhiều bảng phân loại khác nhau có bổ sung và sửa chữa chi tiết hơn và dễ áp dụng trong lâm sàng. Ở đây, tôi xin trích dẫn bảng phân loại ung thư biểu mô tuyến vú của Tổ chức Y tế Thế giới vào năm 1981. Bảng phân loại như sau: Phân loại mô học các ung thư biểu mô vú theo TCYTTG năm 1981. 1. Ung thư biểu mô không xâm nhập. Ung thư biểu mô nội ống. Ung thư biểu mô tiểu thuỳ tại chỗ. 2. Ung thư biểu mô ống xâm nhập Ung thư biểu mô ống xâm nhập Ung thư biểu mô ống xâm nhập với thành phần nội ống trội Ung thư biểu mô tiểu thuỳ xâm nhập Ung thư biểu mô nhầy xâm nhập Ung thư biểu mô tuỷ xâm nhập Ung thư biểu mô nhú xâm nhập Ung thư biểu mô ống nhỏ 8 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 Ung thư biểu mô tuyến nang Ung thư biểu mô chế tiết ở thanh niên 2.10. Ung thư biểu mô chế tiết rụng đầu 2.11. Ung thư với thành phần dị sản - Loại vảy (dạng biểu bì) - Loại tế bào thoi - Loại dạng sụn và dạng xương - Loại hỗn hợp 2.12. Các loại khác 3. Bệnh Paget vú. 1.2.4. Điều trị bênh ung thư vú Có rất nhiều tiến bộ trong việc xác định sớm và trị liệu ung thư vú thành công. Khi tìm thấy khối u trong vú, người phụ nữ có cơ hội lựa chọn về cách trị bệnh cho thích hợp với tình trạng của mình. Đối với mỗi người bệnh có những phương pháp trị liệu thích hợp. Các phương pháp điều trị chính cho bệnh ung thư vú là: Giải phẫu: tuỳ từng giai đoạn của bệnh mà bác sĩ có thể giải phẫu cắt bỏ một phần (lumpectomy , Partical Mastectomy, Segmental Mastectomy) hay phải giải phẫu cắt bỏ toàn thể vú ( Total or Simple Mastectomy, Modified Radical Mastetomy). Cũng có trường hợp phải giải phẫu hạch bạch huyết (lymph Node Dissection) để cắt bỏ các hạch bạch huyết ở dưới nách. Quang tuyến trị liệu ( radiation therapy): sử dụng năng lực quang tuyến X cao độ để giết chết tế bào ung thư. Cách trị liệu này được dùng để ngăn chặn ung thư tăng trưởng trước khi giải phẫu, hay tiêu diệt tế bào ung thư còn sót lại sau cuộc giải phẫu. Quang tuyến trị liệu thường được sử dụng sau lumpectomy hay partical mastectomy, nhưng đôi khi cũng được dùng sau khi làm total masectomy hay 9 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 modified radical mastectomy nếu ung thư quá lớn hay có nhiều hạch ở nách bị ung thư. Quang tuyến trị liệu được chia làm nhiều ngày, bệnh nhân ung thư vú thường được chiếu quang tuyến khoảng từ sáu đến bảy tuần. Hoá chất trị liệu (chemotherapy): sử dụng các dược liệu đặc biệt để tiêu diệt những tế bào ung thư. Hoá chất trị liệu thường được dùng thêm với với việc giải phẫu, quang tuyến trị liệu hay dùng để chống ung thư khi nó tái phát hay lây lan. Nhiều loại hoá chất được dùng trị ung thư vú, thông thường nhất là chất adriamycin, epirubucin, cytoxan, 5-FU, taxol. Taxotere, xeloda, navelbine . có thể dùng riêng rẽ hay tổng hợp. Trị liệu qua kích thích tố (hormonal therapy): trị ung thư bằng cách ngăn chặn hay thêm kích thích tố vào cơ thể. Rất nhiều ung thư vú tăng trưởng dưới sự kích thích của các kích thích tố nữ. Nếu chế ngự được các kích thích này, các tế bào ung thư có thể ngưng phát triển hay bị tiêu huỷ. Một phương pháp điều trị mới đối với bệnh nhân ung thư nói chung và bệnh ung thư vú nói riêng là sử dụng các kháng thể, đặc biệt là kháng thể đơn dòng và kháng thể tái tổ hợp. Kháng thể không chỉ được sử dụng để chẩn đoán sớm bệnh ung thư thông qua việc phát hiện kháng nguyên cuả tế bào ung thư mà còn được sử dụng để tạo ra các phân tử tái tổ hợp có tác dụng làm tan các khối u giúp điều trị hiệu quả bệnh ung thư. 1.3.KHÁNG NGUYÊN VÀ KHÁNG THỂ 1.3.1. Kháng nguyên Thuật ngữ kháng nguyên (antigen – Ag) dùng để chỉ một chất có khả năng gây ra đáp ứng miễn dịch khi được đưa vào cơ thể của một động vật thích hợp hoặc một chất có khả năng phản ứng với một kháng thể hoặc một tế bào của hệ thống miễn dịch. Như vậy, tất ca những chất tự nhiên hoặc tổng hợp được hệ thống miễn dịch nhận biết đều được gọi là kháng nguyên. 10 [...]... để có thể tiến hành làm đề tài của mình : “ Tách dòng và xác định trình tự gene mã hoá cho kháng thể tái tổ hợp kháng tế bào lympho bệnh ung thư vú - Hướng làm việc: + Tiến hành biến nạp phagemide mang vector pHEN2 có chứa đoạn gene mã hoá cho kháng thể kháng tế bào lympho ở bệnh ung thư vú vào tế bào E.coli chủng TG1 + Tách dòng và xác định trình tự gene 33 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn... 0918.775.368 II NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Tách lớp tế bào: Từ mẫu bệnh phẩm đã có (biết chính xác mắc bệnh ung thư vú) , tiến hành tách lớp tế bào chỉ lấy những tế bào bạch cầu và tinh sạch - Sử dụng kĩ thuật Phage Display để chọn lọc các dòng mang kháng thể tái tổ hợp đặc hiệu tế bào lympho từ bệnh ung thư vú - Tách dòng và xác định trình tự gene đoạn kháng thể đã chọn lọc... Là thư viện kháng thể phage có khoảng 10 10 dòng tế bào mang các gene mã hoá các kháng thể tái tổ hợp Thư viện này có thể kháng lại bất kì kháng nguyên nào Để thu nhận mẫu kháng thể kháng lại tế bào tách từ máu bệnh nhân ung thư vú, Phòng thí nghiệm Công nghệ Tế bào động vật đã sử dụng thư viện này để sàng lọc với các lympho bào tách từ máu bệnh nhân mắc bệnh ung thư vú Vì vậy, ở đây chúng tôi chỉ trình. .. đây chúng tôi chỉ trình bày phần tách dòng và xác định trình tự nucleotid của gene mã hoá kháng thể tái tổ hợp kháng lại lympho bào tách từ bệnh nhân ung thư vú Để tách dòng và xác định trình tự gene mã hóa kháng thể tái tổ hợp này, chúng tôi tiến hành nhân bản PCR với cặp mồi LABF/LABR 21 Website: http://www.docs.vn Email : lienhe@docs.vn Tel : 0918.775.368 Vector tách dòng TA- TOPO cloning Kit, Enzyme... 1.3.2.2 Kháng thể tái tổ hợp và ứng dụng Công nghệ kháng thể tái tổ hợp bao gồm việc thu nhận các gene kháng thể từ các tế bào nguồn, nhân bản và tách dòng các gene trong các vector thích hợp, biến nạp các vector vào tế bào chủ để biểu hiện một lượng kháng thể đủ lớn có hoạt tính kháng thể mong muốn Các kỹ thuật bổ trợ như việc sàng lọc các dòng tế bào mang các kháng thể mong muốn từ một thư viện”... đó tiến hành tách plasmid chọn dòng và xác định trình tự nucleotid 2.2.3 Biến nạp DNA Plasmid vào tế bào E.coli DH5α Vector pCR 2.1 sau khi được gắn đoạn gene kháng thể tái tổ hợp được biến nạp vào tế bào vi khuẩn E.coli chủng DH5α có trong bộ kít tách dòng “TA cloning kit” của hãng Invitrogen Sau khi được biến nạp, nhờ sự trợ giúp của bộ máy tổng hợp của tế bào vi khuẩn, plasmid tái tổ hợp tạo ra được... I.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2 1.1 Sơ lược về bệnh ung thư 3 1.2 .Ung thư vú 5 1.2.1 Nguyên nhân ung thư vú 5 1.2.2 Tiến triển của bệnh 6 1.2.3 Phân loại ung thư vú 7 1.2.4 Điều trị ung thư vú 9 1.3 Kháng nguyên và kháng thể 10 1.3.1 Kháng nguyên 10 1.3.2 Kháng thể 11 1.3.2.1 Kháng thể đơn dòng 13 1.3.2.2 Kháng. .. cũng có thể nối kết với các trình tự có các đặc tính khác, đó là các phân tử kháng thể - độc tố sử dụng trong việc điều trị các tế bào khối u Vì các đoạn Fab và Fc nhỏ hơn nhiều so với toàn bộ phân tử kháng thể nên chúng rất thích hợp trong y học và các ứng dụng khác Một ưu thế khác là các kháng thể tái tổ hợp có thể biểu hiện trong cơ thể chủ mới Một trong cơ thể chủ để tổng hợp kháng thể tái tổ hợp là... vitro, và thư ng gây ra phản ứng dị ứng khi sử dụng cho người vì các kháng thể này đều có bản chất từ động vật Sự quan tâm tới việc tách và biểu hiện các gene kháng thể đã được chú trọng sau khi Kohler và Milstein tạo kháng thể đơn dòng bằng kĩ thuật dung hợp tế bào năm 1975 Kỹ thuật tạo kháng thể tái tổ hợp dựa trên những hiểu biết về cấu trúc và chức năng của kháng thể, đặc tính sinh học của quá trình. .. nghệ gene Có thể tóm tắt các phương pháp tạo kháng thể như sau: • Tách từ huyết thanh (serum) • Sản xuất kháng thể từ các tế bào lympho B trong điều kiện in vitro • Kỹ thuật dung hợp tế bào ( kháng thể đơn dòng, hybridoma method) • Kỹ thuật bộc lộc trên thực thể khuẩn (phage display) • Sản xuất kháng thể đơn dòng bằng động, thực vật chuyển gene 1.4 VECTOR TÁCH DÒNG 1.4.1 Khái niệm vector tách dòng