Trình tự DNA được xác định bằng phương pháp enzyme của Sanger.
Cơ sở của phương pháp: dựa vào sự tổng hợp mạch bổ sung với đoạn DNA mạch đơn cần xác định nhờ enzyme DNA-polmerase. Đồng thời, đoạn DNA bổ sung sẽ được tổng hợp gián đoạn do sử dụng thêm bốn loại diđeoxynucleoti là những deoxynucleotid trong đó nhóm OH ỏ vị trí 3’ được thay bằng H. Điều này khiến cho các diđeoxynucleotid khôngn còn khả năng hình thành các cầu nối photphodiester và do đó làm ngừng quá trình tổng hợp.
- Thực hiện phản ứng PCR ngoài các thành phần thông thường còn bổ sung bốn loại dideoxynucleotid: ddATP, ddCTP, ddGTP và ddTTP đã được đánh dấu bằng thuốc nhuộm huỳnh quang.
- Điện di sản phẩm PCR trên gel polyacrylamid
- Dùng tia laze quét để phát hiện dideoxynucleotid đánh dấu
- Xử lý kết quả bằng các chương trình phần mềm máy tính.( máy xác định
III
KẾT LUẬN
- Trong thời gian thực tập vừa qua tại Viện công nghệ sinh học – Trung tâm
công nghệ và khoa học quốc gia, em đã làm quen và thao tác với các thiết bị sử dụng trong sinh học phân tử để có thể tiến hành làm đề tài của mình : “
Tách dòng và xác định trình tự gene mã hoá cho kháng thể tái tổ hợp kháng tế bào lympho bệnh ung thư vú”.
- Hướng làm việc:
+ Tiến hành biến nạp phagemide mang vector pHEN2 có chứa đoạn gene mã hoá cho kháng thể kháng tế bào lympho ở bệnh ung thư vú vào tế bào E.coli chủng TG1.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
1. Hồ Huỳnh Thuỳ Dương – Sinh học phân tử. NXB Giáo Duc, 1997.
2. Lê Đình Lương - Kỹ thuật di truyền và ứng dụng, NXB Khoa học Kỹ thuật, 2001.
3. Võ Thị Phương Lan – Sinh học phân tử, NXB ĐHQGHN, Hà nội, 2000. 4. Bộ môn ung thư - Đại học Y Hà nôi, Bài giảng ung thư học, NXB Y học, Hà
nội, 1999.
5. M.D.DR Susan M.Love, Karen Lindsay - Cẩm nang vú & Bệnh ung thư vú, NXB Y học,1997.
6. PGS-TS Nguyễn Bá Đức - Bệnh ung thư vú, NXB Y học,2004. 7. PGS- TS Lê Đình Roanh - Bệnh học ung thư vú, NXB Y học,2004. 8. Trường Đại học Y Hà nội - Miễn dịch học, NXB Y học, Hà nội, 2003.
9. Ts. Khuất Hữu Thanh – Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuật gen, NXB KHKT, Hà nội, 2003.
TÀI LIỆU TIẾNG ANH.
1. Kang, A.S.,C.F.Barbas, K.D. Janda, S.J. Benkovic, and R.A.Lerner. 1991b. Lingkage of recognition and replication functions by assembling
combinatorial antibody Fab libraries along phage
surfaces.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:4363- 4366.
2. Bernard R. Glick, Jack J. Pasternak (1994), Molecular Biotechnology, ASM Press, Inc. Washington DC, USA.
3. Cedric Mims, Derek Wakelin, John Playfair, Rosamund Wiliams, Ivan M. Roitt (1998). Medecal Microbiobiology (Second edition), Mosby publishing,
Harcourt publishing Ltd, Inc. London, Phyladenlia, St Louis, Sedney and Tokyo.
4. Collet, T. A., P. Roben, R. OÕKennedy, C. F. Barbas, D. R. Burton, and R. L. Lerner. 1992. A binary plasmid system for shuffling combinatorial antibody libraries. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10026-10030.
5. Coloma, M. J., J. W. Larrick, M. Ayala, and J. V. Gavilondo-Cowley. 1991. Primer design for the cloning of immunoglobulin heavy-chain leader- variable regions from mouse hybridoma cells using the PCR. BioTechniques 11(2):152-156.
Mục lục
Trang
MỞ ĐẦU...1
I.TỔNG QUAN TÀI LIỆU... 2
1.1. Sơ lược về bệnh ung thư...3
1.2.Ung thư vú...5
1.2.1. Nguyên nhân ung thư vú...5
1.2.2. Tiến triển của bệnh...6
1.2.3. Phân loại ung thư vú...7
1.2.4. Điều trị ung thư vú...9
1.3. Kháng nguyên và kháng thể...10 1.3.1. Kháng nguyên...10 1.3.2. Kháng thể...11 1.3.2.1. Kháng thể đơn dòng...13 1.3.2.2. Kháng thể tái tổ hợp và ứng dụng...14 1.3.2.3. Các phương pháp tạo kháng thể...15 1.4. Vector tách dòng...15
1.4.1. Khái niệm vector tách dòng...15
1.4.2. Plasmid pCR 2.1....16
II.NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU...20
2.1. Nội dung nghiên cứu...20
2.2. Vật liệu...20
2.2.1. Sinh phẩm...20
2.2.2. Hoá chất...21
2.2.3. Trang thiết bị...21
2.3. Các phương pháp nghiên cứu...21
2.3.1. Phương pháp PCR...21
2.3.2. Gắn sản phẩm PCR vào vector tách dòng pCR2.1....22
2.3.3. Biến nạp DNA Plasmid vào tế bào E.coli DH5α...24
2.3.4. Tách chiết DNA Plasmid từ các khuẩn lạc trắng...26
2.3.5. Phương pháp điện di DNA trên gel agarose...26
2.3.6. Cắt DNA Plasmid với enzyme giới hạn E.coRI...27
2.3.7. Tinh sạch DNA Plasmid...29
2.3.8. Xác định trình tự nucleic...29