Nghiên cứu ly trích curcumin từ củ nghệ vàng

Nghiên cứu ly trích curcumin từ củ nghệ vàng

1 MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa i Lời cam ñoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục PHẦN MỞ ðẦU CHƯƠNG 1: CƠ SỞ LÝ THUYẾT 1.1 Tìm hiểu nghệ 1.1.1 Mô tả thực vật 1.1.2 Thành phần hóa học .6 1.1.3 Dược tính .7 1.2 Tìm hiểu curcumin 1.3 Phương pháp tách biệt tinh chế hợp chất hữu 11 1.3.1 Phương pháp chiết 11 1.3.2 Phương pháp kết tinh lại .14 1.4 Tìm hiểu HPLC (sắc kí lỏng hiệu cao) 17 1.4.1 Giới thiệu phương pháp HPLC .17 1.4.2 Tìm hiểu hệ thống HPLC 17 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Chuẩn bị dụng cụ, hóa chất, nguyên liệu .22 2.1.1 Dụng cụ 22 2.1.2 Hoá chất .22 PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com 2.1.3 Nguyên liệu 22 2.2 Thực nghiệm .23 2.2.1 Chiết curcumin .23 2.2.2 Kết tinh curcumin .24 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết tinh cồn 900 25 3.2 Kết tinh ñietylete 25 PHẦN KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 PHỤ LỤC PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com PHẦN MỞ ðẦU Lý chọn ñề tài: Nhiều cơng trình nghiên cứu thử nghiệm nước phát triển giới ñã khẳng ñịnh từ lâu curcumin có tác dụng hủy diệt tế bào ung thư vào loại mạnh Tại Mỹ, ðài Loan,… người ta ñã tiến hành thử lâm sàng dùng curcumin ñiều trị ung thư kết luận: curcumin kiềm hãm phát tác tế bào ung thư da, dày, ruột, vòm họng,… curcumin chất bổ cho dày, ruột, gan, mật, lọc máu, làm máu, ñiều trị vết thương, chống viêm khớp, dị ứng, nấm, chống vi khuẩn có hiệu lực Cách 5000 năm củ nghệ ñược biết ñến loại gia vị, thuốc gia truyền chữa ñược nhiều bệnh, chữa liền sẹo,… Tác dụng kiềm hãm phát triển tế bào ung thư ñiều trị nhiều bệnh nghệ hoạt chất củ nghệ gọi curcumin Curcumin thành phần ñặc biệt hoạt chất tạo nên màu vàng đặc trưng cho củ nghệ Trong lượng curcumin chiếm khoảng 0,3 - 1% khối lượng củ nghệ Chỉ có curcumin tự nhiên củ nghệ có khả phịng chống lại phát triển tế bào ung thư bệnh khác cao Việt Nam nước nơng nghiệp nhiệt đới nóng ẩm vùng ðơng nam Châu Á, điều kiện phù hợp với loại lấy củ như: gừng, nghệ, tỏi, hành,… Trong ñó nghệ ñược cấy trồng rộng rãi số nước Châu Á Ấn ðộ, Trung Quốc Việt Nam không ngoại lệ Ở nước ta nói chung tỉnh ðồng Tháp nói riêng nghệ ñược trồng phổ biến với nhiều chủng loại ña dạng phong phú Với nguồn nguyên liệu dồi phong phú nói với mục đích vận dụng kiến thức ñã học cộng thêm thao tác thí nghiệm học mơn thực nghiệm hóa học Do tơi tiến hành ly trích curcumin từ củ nghệ vàng với tên đề tài khóa luận tốt nghiệp là: “Nghiên cứu ly trích curcumin từ củ nghệ vàng” Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu ly trích curcumin từ củ nghệ vàng thành phố Cao Lãnh tỉnh ðồng Tháp Nhiệm vụ nghiên cứu Tìm hiểu thành phần, ứng dụng củ nghệ hoạt chất curcumin PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com Nghiên cứu ly trích curcumin Tìm hiểu HPLC ðịnh danh định lượng curcumin HPLC Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tài liệu có liên quan đến đề tài Tự tìm tịi, tự nghiên cứu Nghiên cứu thực nghiệm ðối tượng nghiên cứu Củ nghệ thu ñược từ nghệ vàng trồng ñịa bàn thành phố Cao Lãnh, tỉnh ðồng Tháp Lịch sử nghiên cứu Hiện có nhiều đề tài nghiên cứu curcumin tác dụng curcumin đến đến việc phịng chống bệnh ung thư bệnh tim mạch khác,… Tuy nhiên chưa có đề tài nghiên cứu ly trích curcumin từ củ nghệ vàng địa bàn thành phố Cao Lãnh tỉnh ðồng Tháp Ở nước có số đề tài tổng hợp thành cơng curcumin từ vanilin curcumin tự nhiên củ nghệ có tác dụng cao sức khỏe người PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com PHẦN NỘI DUNG CHƯƠNG 1: CƠ SỞ LÝ THUYẾT 1.1 Tìm hiểu nghệ.[1], [2], [4], [6] - Nghệ cịn có tên uất kim, khương hồng, safran des Indes - Tên khoa học Curcuma longa L (Curcuma domestica Lour) - Thuộc họ Gừng Zingiberaceae - Ta dùng thân rễ gọi khương hoàng (Rhizoma Curcumae longae) rễ củ gọi uất kim (Radix Curcumae longae) 1.1.1 Mô tả thực vật Nghệ loài cỏ cao 0.60m ñến 1m Thân rễ thành củ hình trụ dẹt, bẻ cắt ngang có màu vàng cam sẫm Lá hình trái xoan thon nhọn hai đầu, hai mặt ñều nhẵn dài tới 45cm, rộng tới 18cm Cuốn có bẹ, cụm hoa mọc từ lên, thành hình nón thưa, bắc hữu thụ khum hình máng rộng, đầu trịn màu xanh lục nhạt, bắc bất thụ hẹp hơn, màu tím nhạt Tràng có phiến, cánh hoa ngồi màu xanh lục vàng nhạt, chia thành ba thùy, thùy to hơn, phiến cánh hoa chia thành ba thùy, thùy hai bên ñứng phẳng, thùy hõm thành máng sâu Quả nang ngăn, mở van Hạt có áo hạt ðược trồng khắp nơi nước ta ñể làm gia vị làm thuốc ngồi cịn mọc trồng nước Ấn ðộ, Inđơnêxia, Campuchia, Lào, Trung Quốc, nước nhiệt ñới Nghệ thường ñược thu hoạch vào mùa thu PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com Hình 1.1: Thân, hoa, củ nghệ 1.1.2 Thành phần hóa học Trong nghệ, người ta phân tích được: - Chất màu curcumin 0,3%- 1%, tinh thể nâu đỏ ánh tím, khơng tan nước, tan rượu, ete, clorofoc, dung dịch có huỳnh quang màu xanh lục Cơng thức curcumin xác ñịnh sau: + Các chất màu vàng gọi chung curcumin Vào ñầu kỉ XIX người ta ñã chiết curcumin tinh thể khơng tan nước, tan cồn, ete, dầu béo Nhưng năm 1953 Srinivasan K R chứng minh sắc kí cột silic ñó hỗn hợp: PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com + Curcumin thức (cịn gọi curcumin I) chiếm 60% ñây ñixeton đối xứng khơng no coi diferuloyl-metan (axit ferulic axit hydroxy-4-metoxy-3-xinamic) + Curcumin II hay demetoxy-curcumin chiếm 24% curcumin III hay bisdemetoxy-curcumin chiếm 14% ñó hay hydroxyxinamic thay cho axit ferulic Nếu dùng sắc kí giấy thấy chất curcumin khác với lượng nhỏ + Năm 1977, Nguyễn Khang (ðại học Dược Hà Nội) ñã chiết từ bột củ nghệ sau ñã cất lấy hết tinh dầu bezen, sau thu hồi dung mơi áp lực giảm kết tinh cồn etylic có độ chảy khơng thay đổi vết sắc kí lớp mỏng thu 0,76 – 1,1% curcumin I tinh khiết, ñộ chảy 182 -183oC Nếu chọn củ nghệ thu vào tháng 1, tháng đạt tới 1,5% curcumin - Tinh dầu – 5% có màu vàng nhạt, thơm Trong tinh dầu gồm có 25% cacbua tecpenic, chủ yếu zingiberen 65% xeton sespuitecpenic, chất tumeron, curcumen C15H24 cacbon khơng no Tumeron - Ngồi cịn tinh bột, canxi oxalat, chất béo Củ nghệ chứa – 10% nước, – 8% chất vô cơ, 40 – 50% tinh bột nhựa 1.1.3 Dược tính Củ nghệ biết đến với nhiều cơng dụng khác nhau, đặc biệt Ấn ðộ nhiều nước, phương ðông lẫn phương Tây, sử dụng loại dược liệu trị bách bệnh Theo hội đồng nghiên cứu Trung ương, củ nghệ chữa nhiều bệnh Củ nghệ chữa bệnh hen suyễn, ho, trị cảm, nghiện rượu, mụn bệnh ngồi da, củ nghệ giảm viêm nhiễm, trị to gan nhiễm trùng bàng quang, rối loạn kinh PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com nguyệt, tăng cường sức khỏe cho tim Củ nghệ ngâm với nước mật ong giúp lợi tiểu, nghiền nghệ với bơ ñã qua lọc chữa hiệu bệnh tiểu đường Ngồi củ nghệ cịn giúp trị đau ngừa sâu răng, giảm đau bao tử, giúp tiêu hóa tạo cảm giác thèm ăn Nhỏ nước nghệ đun sơi vào mũi giúp chữa ñau ñầu chứng ngủ Củ nghệ khơng có cơng dụng giúp liền sẹo nhiều người biết, mà cịn mang lại nhiều tác dụng hữu ích, đặc biệt sức khỏe người Giúp giảm cân, lưu thông lọc máu; giúp thể chống lại vi khuẩn sống ký sinh ruột, ñặc biệt tốt cho hệ tiêu hóa; người ta chứng minh sử dụng nghệ để chống ung thư nghệ có khả kháng viêm, giảm nguy nhiễm trùng; dùng nghệ để khử trùng làm mau lành vết thương Khi gặp rắc rối tiêu hóa, nghiên cứu cho thấy, nghệ kích thích tiêu hóa giải phóng enzim tiêu hóa, phá vỡ liên kết cacbonhydrat chất béo Chính thế, trường hợp bị ñau bụng, cốc trà nghệ giúp ích nhiều Chất curcumin có tự nhiên củ nghệ ñược nhà khoa học chứng minh chất chống oxy hóa cực mạnh có lợi cho sức khỏe, có lợi cho tim mạch, chống cholesterol ung thư Nghệ làm giảm hàm lượng cholesterol độc hại máu có khả chống lại chứng xơ vữa động mạch, curcumin có nghệ cho phép giảm nguy mắc bệnh nhồi máu tim, ñặc biệt người hay ngáy ngủ Nếu chất curcumin ứng dụng thành cơng ñối với người, mở hướng ñi cho cách phòng ñiều trị bệnh nhồi máu tim ñồng thời bảo vệ sức khỏe tim mạch Khác với hầu hết hợp chất tự nhiên khác với hiệu hạn chế, chất curcumin có tác dụng trực tiếp lên nhân tế bào cách ngừa ngừa việc sản sinh nhiều protein bất thường Tuy nhiên, chuyên gia khuyên nên ăn nghệ mức độ vừa phải có ăn nhiều không giúp tăng hiệu trị bệnh nghệ Curcumin có tác dụng kháng ung thư, cô lập tiêu hủy tế bào ung thư Curcumin thành phần ñặc biệt làm nên màu vàng ñặc trưng nghệ có khả tiêu diệt hai loại protein tế bào ung thư, protein nguồn trì tồn PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com chúng Nghệ giúp ngăn chặn không cho tế bào ung thư lan tràn ñi khắp nơi thể (chống di căn) Ngoài nghệ an tồn khơng có phản ứng phụ Các bác sĩ bệnh viện University of Texas MD Anderson Cancer Center, bệnh viện chuyên chữa trị bệnh ung thư vào bậc lớn giới, sau ñã bỏ nhiều năm nghiên cứu thử nghiệm, ñều ñồng xác nhận rằng: thuốc bào chế củ nghệ có tác dụng trực tiếp giết chết tế bào ung thư, ñồng thời củ nghệ loại chống oxi hóa cực mạnh cơng hiệu để chống lại phá hoại gốc tự giúp tăng cường hệ thống miễn nhiễm họ ñã khuyên bệnh nhân ung thư nên dùng nghệ ngày Tuy nhiên, khơng nên xem thần dược, có tác dụng uống đặn vừa phải thời gian dài 1.2 Tìm hiểu curcumin [8], [9], [10], [11] - Tên IUPAC: (1E, 6E) -1,7-bis (4-hydroxy-3-metoxyphenyl) -1,6-heptadien3,5-dion - Công thức phân tử: C21H20O6 - Phân tử khối: 368,38 g / mol - Nhiệt độ nóng chảy: 183°C (361 K) - Curcumin tinh thể màu nâu ñỏ, hoạt chất ñược chiết từ nghệ vàng thuộc họ gừng Hiện người ta tìm thấy curcumin tồn dạng hợp chất: + Curcumin hợp chất chiếm 60%: Curcumin + Demetoxy-curcumin chiếm 24% có cơng thức cấu tạo sau: PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com 10 Demetoxy curcumin + Bis-demetoxy-curcumin chiếm 14%: Bis-demetoxy curcumin + Và hợp chất phát xiclocurcumin chiếm khoảng 1%: Xiclocurcumin - Curcumin polyphenol sắc tố tạo nên màu vàng ñặc trưng củ nghệ - Curcumin phản ứng với axit boric tạo nên hợp chất có màu đỏ cam nên ñược ứng dụng dùng ñể nhận biết muối ngun tố bo - Chính curcumin sắc tố tạo nên màu vàng sáng nên curcumin ñược dùng làm chất phụ gia thực phẩm Trong chất phụ gia thực phẩm curcumin kí hiệu ám số E100 - Dược tính: + Curcumin chất hủy diệt ung thư vào loại mạnh theo chế hủy diệt bước tế bào ác tính Chúng làm vơ hiệu hóa tế bào ung thư ngăn chặn khơng cho hình thành tế bào ung thư Trong đó, tế bào lành tính khơng bị ảnh hưởng Curcumin ñược coi chất tiêu biểu cho hệ chất chống PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com 14 thuộc nhiều vào ñộ hịa tan chất vào dung mơi lựa chọn bề mặt tiếp xúc chất rắn với dung mơi nhiệt độ ðể tăng khả chiết, người ta thường phải nghiền nhỏ chất rắn ngâm chiết nhiệt độ thường nhiệt độ sơi dung mơi Trong phịng thí nghiệm thường chiết chiết Soklet ñể chiết liên tục Chất rắn ñịnh chiết ñã nghiền nhỏ gói giấy lọc (túi vải) đặt vào phần hình trụ bình cầu máy chiết Cho dung mơi vào bình cầu (tùy thuộc vào lượng chất chiết mà cho lượng dung môi khoảng 1/2 thể tích bình cầu), lắp ống sinh hàn hồi lưu đun cho sơi dung mơi Hơi dung mơi bay lên hòa tan chất rắn bọc giấy lọc rơi xuống bình cầu ống dẫn ngưng tụ Cứ nồng ñộ chất tan dung mơi tăng dần theo thời gian đun hồi lưu Nếu chất tinh chế hịa tan vào dung mơi thu dung dịch chất tinh chế bình cầu, quay đuổi dung mơi kết tủa lại chất rắn Nếu hỗn hợp chất rắn, chất bẩn hòa tan vào dung mơi phần chất rắn chất Nếu chất tan chất phụ chất tinh chế cịn lại bình chiết việc lấy chất rắn giấy lọc ra, làm khô thu ñược chất 1.3.2 Phương pháp kết tinh lại 1.3.2.1 ðịnh nghĩa ðây phương pháp quan trọng để tinh chế chất rắn Cơ sở lí thuyết phương pháp dựa vào khác độ tan chất dung mơi hay hệ dung mơi nhiệt độ khác nhau, khác ñộ tan vào dung môi chất tinh chế chất bẩn nhiệt độ Q trình chung hịa tan chất rắn thành dung dịch bão hịa nhiệt độ sơi dung mơi để lạnh chất rắn kết tinh lại dạng tinh khiết 1.3.2.2 Chọn dung môi Người ta phải chọn dung môi hay hệ dung mơi thích hợp để hịa tan chất tinh chế nhiệt độ sơi khơng hịa tan hịa tan nhiệt độ lạnh, cịn tạp chất tượng ngược lại Sau lọc nóng loại bỏ tạp chất chất rắn kết tinh lại Việc lựa chọn dung môi kết tinh quan trọng Dung mơi kết tinh phải khơng tương tác hóa học với chất kết tinh nhiệt ñộ thường nhiệt độ sơi Dung mơi phải có nhiệt độ sơi thấp nhiệt độ nóng chảy chất tinh chế 100C PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com 15 lại phải giải phóng lọc rửa Việc lựa chọn dung môi hay hệ dung môi phải dựa vào mối quan hệ cấu tạo phân tử chất kết tinh dung mơi, thường thường chất phân cực hịa tan tan vào dung môi phân cực ngược lại Khi chất kết tinh chưa rõ cấu tạo phải thử hịa tan dung mơi từ khơng phân cực ñến dung môi phân cực Cách làm sau: lấy vài tinh thể vào ống nghiệm, nhỏ dung mơi vào đun sơi, quan sát độ tan cho ñến tinh thể tan hết, ñảm bảo yêu cầu chất kết tinh lại lạnh Dung mơi xem tốt 0,1g chất kết tinh tan 1ml dung mơi nóng Khi khơng chọn dung mơi bắt buộc phải chọn hệ dung mơi Ngun tắc: Lấy dung mơi hịa tan chất kết tinh nhiệt ñộ thường, sau chọn dung mơi khơng hịa tan hay hòa tan chất tinh chế phải tan dung môi Cách làm sau: Lấy vài tinh thể vào ống nghiệm, thêm dung mơi tan hết, ghi lấy thể tích dung mơi Nhỏ từ từ dung môi không tan chất tinh chế vào hỗn hợp cho ñến ñục, ghi lấy thể tích dung mơi, đun hỗn hợp cho tan hết, lọc nóng để nguội, chất rắn kết tinh lại Tỉ lệ hai thể tích đo coi tỉ lệ thể tích dung mơi chọn Thường chọn hệ dung môi etanol – nước, etanol – benzen, axeton – ete dầu hỏa, axit axetic – nước,… Nếu có nhiều chất có độ tan khác nhiệt độ khác vào dung dịch, người ta dùng phương pháp kết tinh phân ñoạn Ở nhiệt ñộ xác ñịnh, chất tan q bão hịa kết tinh lại để lạnh, cịn chất chưa bão hịa lại dung dịch Nếu dung mơi hịa tan chất kết tinh, cịn chất bẩn khơng tan, người ta lọc nóng để loại bỏ chất bẩn, chất kết tinh lại dung dịch kết tinh ñể lạnh 1.3.2.3 Các thao tác kết tinh - Chuẩn bị dung dịch kết tinh hay dung dịch nước Cho lượng chất cần kết tinh vào bình cầu hai cổ có lắp ống sinh hàn hồi lưu phễu chiết đựng dung mơi vào bình tam giác có sinh hàn hồi lưu, thêm đá bọt cho dung mơi vào lượng theo lượng tính tốn, đun sơi Nếu sơi mà PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com 16 chưa tan hết thêm dung mơi vào chất tan hồn tồn, chất bẩn không tan Nếu dùng hỗn hợp dung môi cho dung mơi tan tốt vào trước chất rắn tan hoàn toàn thêm dần dung mơi hịa tan vào chất rắn kết tủa tan nhiệt độ sơi Nếu dung dịch có màu, phải thêm chất tẩy màu than hoạt tính, than xương hay silicagel với tỉ lệ 1/20 hay 1/50 Khi cho chất khử màu phải ñể dung dịch lạnh, khơng thêm chất khử màu dung dịch nóng để tránh dung dịch bị trào ngồi Sau đó, đun sơi lại dung dịch – phút - Lọc nóng dung dịch Lọc dung dịch nóng để loại bỏ chất bẩn, chất phụ khơng tan khỏi dung dịch Cần lọc nóng phễu lọc nóng, lọc nhanh để tránh chất kết tinh phễu - Thực kết tinh chất Dung dịch nước đậy miệng khơng nút chặt, để nguội hay làm lạnh nước lạnh hay nước ñá tinh thể chất kết tinh Chú ý dung dịch chưa kết tinh, chưa đạt đến bão hịa phải đuổi bớt dung mơi làm lạnh Kích thước tinh thể phụ thuộc vào tốc ñộ kết tinh làm lạnh Nếu làm lạnh nhanh thu tinh thể nhỏ hấp thụ dung môi chất bẩn Tinh thể lớn làm lạnh để kết tinh chậm Nếu khơng thấy kết tinh gây mầm kết tinh cách cho vào dung dịch vài tinh thể chất tinh chế lấy đũa thủy tinh cọ vào thành bình Những chất có nhiệt độ nóng chảy thấp thường tách dạng dầu nên phải làm lạnh chậm sâu ñể tinh thể kết tinh chậm - Tách lọc tinh thể Tinh thể tinh khiết ñược lọc nhanh phễu Bucsne áp suất thấp Khi lọc cần rửa lại kết tủa dung môi lạnh Một số trường hợp người ta gạn, lắng Trong trường hợp chất háo nước dễ bị oxi hóa dùng phương pháp riêng - Làm khô tinh thể PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com 17 Có thể làm khơ khơng khí hay tủ sấy thường tủ sấy chân không Chú ý làm khô tủ sấy cần ñể nhiệt ñộ thấp nhiệt ñộ nóng chảy chất khoảng 200C Cũng làm khơ tinh thể gió máy sấy tóc - Xác định nhiệt độ nóng chảy chất thu ñược Khi xác ñinh nhiệt ñộ nóng chảy thấy cố định sai khác ±10C coi chất 1.4 Tìm hiểu HPLC (sắc kí lỏng hiệu cao).[5], [7], [8] 1.4.1 Sơ lược HPLC HPLC chữ viết tắt chữ ñầu tiếng Anh phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography), trước gọi phương pháp sắc kí lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography) Phương pháp ñời năm 1967 – 1968 sở phát triển cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ ñiển Hiện phương pháp HPLC ngày phát triển ñại hóa cao nhờ phát triển nhanh chóng ngành chế tạo máy phân tích Hiện áp dụng lớn nhiều ngành kiểm nghiệm ñặc biệt ứng dụng cho ngành kiểm nghiệm thuốc cơng cụ đắc lực phân tích thuốc đa thành phần cho phép định tính ñịnh lượng Khái niệm: Sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp chia tách pha động chất lỏng pha tĩnh chứa cột chất rắn ñã ñược phân chia dạng tiểu phân chất lỏng phủ lên chất mang rắn, hay chất mang ñã ñược biến ñổi liên kết hóa học với nhóm chức hữu Quá trình sắc ký lỏng dựa chế hấp phụ, phân bố, trao đổi ion hay phân loại theo kích cỡ (rây phân tử) 1.4.2 Tìm hiểu hệ thống HPLC: Máy HPLC gồm phận tóm tắt sơ ñồ sau: PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com 18 Degasse Pump Column Tiêm mẫu Detector Hình 1.2: Sơ đồ thiết bị HPLC Trong đó: 1: Bình chứa dung mơi pha động 2: Bộ phận khử khí 3: Bơm cao áp 4: Bộ phận tiêm mẫu (bằng tay hay Autosample) 5: Cột sắc ký (pha tĩnh) 6: Detector (nhận tín hiệu) 7: Hệ thống máy tính gắn phần mềm nhận tín hiệu, xử lí liệu ñiều khiển hệ thống HPLC 8: In liệu Bình đựng dung mơi - Hiện máy HPLC thường có đường dung mơi vào đầu bơm cao áp cho phép sử dụng bình chứa dung mơi lần để rửa giải theo tỉ lệ mong muốn tổng tỉ lệ dung môi ñường 100% PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com 19 - Tuy nhiên theo kinh nghiệm sử dụng đường dung môi lúc mà sử dụng tối ña ñường ñể cho hệ pha động ln pha trộn đồng hơn, hệ pha động đơn giản để q trình rửa giải ổn định - Hiện đường dung mơi phục vụ chủ yếu cho việc rửa giải Gradial dung môi theo thời gian công tác xây dựng tiêu chuẩn Lưu ý: + Tất dung môi dùng cho HPLC phải dung mơi tinh khiết có ghi rõ nhãn dùng cho HPLC hay dung môi tinh khiết phân tích + Tất hóa chất dùng ñể pha mẫu pha hệ ñệm phải ñược sử dụng hóa chất tinh khiết phân tích Sử dụng hóa chất tinh khiết nhằm mục đích tránh hỏng cột sắc ký hay nhiễu ñường nền, tạo nên peak tạp q trình phân tích Bộ khử khí Degasse Mục đích khử khí nhằm loại trừ bọt nhỏ cịn sót lại dung mơi pha động Nếu q trình phân tích mà dung mơi pha động cịn sót bọt khí số tượng sau ñây xảy ra: + Tỷ lệ pha động đường dung mơi khơng ñúng cho thời gian lưu Peak thay ñổi + Trong trường hợp bọt nhiều khử khí khơng thể loại trừ hết bơm cao áp khơng hút dung mơi áp suất khơng lên máy sắc ký ngừng hoạt ñộng Trong trường hợp nêu cho kết phân tích sai Bơm cao áp Mục đích để bơm pha động vào cột thực trình chia tách sắc ký Pump phải tạo ñược áp suất cao khoảng 250 at – 500 at (1at = 0,98 bar) pump phải tạo dòng liên tục Lưu lượng bơm từ 0,1 – 9,999 ml/phút Máy sắc ký lỏng thường có áp suất tối đa 412bar (khoảng 420at) Tốc độ dịng 0,1 – 9,999 ml/phút PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com 20 Tốc ñộ bơm ñịnh theo thơng số cài đặt Hiện bơm có Pisstone để thay phiên đẩy dung mơi liên tục Bộ phận tiêm mẫu ðể ñưa mẫu vào cột phân tích theo phương pháp khơng ngừng dịng chảy với dung tích -100µl Có cách lấy mẫu vào cột: tiêm mẫu thủ công tiêm mẫu tự ñộng (Autosample) Cột sắc ký Cột chứa pha tĩnh ñược coi trái tim hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao Cột pha tĩnh thông thường làm thép không rỉ, chiều dài cột khoảng 10 – 30cm, đường kính – 10mm, hạt chất nhồi cột cỡ φ = – 10µm, ngồi cịn số trường hợp đặc biệt kích thước kích cỡ hạt,… Với chất nhồi cột cỡ φ = 1,8 – 5µm dùng cột ngắn (3 – 10cm) nhỏ (đường kính từ – 4,6mm) loại cột có hiệu tách cao Chất nhồi cột tùy theo loại cột kiểu sắc ký Thông thường chất nhồi cột Silicagel (pha thuận) Silicagel Silan hóa bao lớp mỏng hữu (pha đảo), ngồi người ta cịn dùng loại hạt khác như: Nhơm oxit, Polyme xốp, chất trao ñổi ion * ðối với số phương pháp phân tích địi hỏi phải có nhiệt độ cao thấp nhiệt độ phịng cột ñược ñặt phận ñiều nhiệt Detector Là phận phát chất chúng khỏi cột cho tín hiệu ghi sắc đồ để định tính định lượng Tùy theo tính chất chất cần phân tích mà người ta sử dụng loại Detector thích hợp phải thỏa mãn ñiều kiện nồng ñộ ñịnh chất phân tích A = k.C Trong đó: A tín hiệu đo C nồng độ chất phân tích PDF Created with deskPDF PDF Writer - Trial :: http://www.docudesk.com ... hành ly trích curcumin từ củ nghệ vàng với tên ñề tài khóa luận tốt nghiệp là: ? ?Nghiên cứu ly trích curcumin từ củ nghệ vàng? ?? Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu ly trích curcumin từ củ nghệ vàng. .. định lượng curcumin HPLC Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tài liệu có liên quan đến đề tài Tự tìm tịi, tự nghiên cứu Nghiên cứu thực nghiệm ðối tượng nghiên cứu Củ nghệ thu ñược từ nghệ vàng trồng... sử nghiên cứu Hiện có nhiều đề tài nghiên cứu curcumin tác dụng curcumin đến đến việc phịng chống bệnh ung thư bệnh tim mạch khác,… Tuy nhiên chưa có đề tài nghiên cứu ly trích curcumin từ củ nghệ